高血小板浓度在采集和冷冻干浓缩血小板中的影响

采用5％或6％二甲基亚砜(DMSO)冷冻保存血小板是浓缩血小板(PC)长期保存的最佳方法，这个浓度的DMSO对血小板没有毒性。虽然冷冻和融化过程由于血小板膜完整性丧失，引起血小板激活和细胞溶解，但冷冻保存血小板能被安全地输注，其止血功能优于22C保存5天的PC，且回收率相似。     

血小板冷冻保存的研究

用终浓度4％二甲基亚砜(DMSO)作为防冻剂,于—30℃和—80℃冷冻保存血小板以开展低温保存血小板的输注。体内外研究结果表明:DMSO对血小板粘附和单一诱聚剂所致的聚集有可逆性抑制作用;洗涤去除DMSO后,粘附、聚集可以恢复。联合诱聚剂所致的聚集不受DMSO影响。冻存后的血小板粘附、聚集和低渗休克反应较冻前有所降低,与保存时间(1和3个月)无关。—80℃保存的血小板质量优于—30℃保存者。输注—80℃保存的血小板可提高患者的血小板数,因而能有效地预防和控制因血小板减少导致的出血。     

二甲亚砜与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护作用

本研究观察二甲亚砜（DMSO）与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护效果。实验分设空白组、海藻糖组、DMSO组、5％DMs0加海藻糖联用组、2．5％DMSO加海藻糖联用组。各组血小板置-80℃冰箱保存,37℃水浴融化。采用血细胞计数仪测定血小板回收率和MPV值、电子显微镜观察血小板超微结构变化和流式细胞仪测定血小板的CD41、CD42b、CD61及CD62p的表达水平。结果表明：海藻糖单独应用对提高回收率的保护作用不强,但海藻糖处理后冷冻保存的血小板的形态接近正常。DMSO在保证冷冻保存血小板的回收率和血小板整体完好性方面作用较为突出,但其血小板形态偏向于肿胀,仍有部分血小板呈异形性改变。DMSO和海藻糖合用对维持血小扳外部形态和内部结构接近正常稳态方面具有保护作用,同时保证冷冻保存血小板具有理想的回收率和较高的CD41、CD42b、CD61、CD62p表达水平。结论：DMSO和海藻糖联合应用对冷冻保存血小板具有协同保护作用,但DMSO和海藻糖单用或合用都较难抑制冷冻保存血小板的活化,两者合用作为血小板冷冻保护剂有望促使冷冻保存血小板临床输注效果的进一步提高。     

冷冻保存血小板的研究进展

冷冻保护剂和添加液的正确选择是保证冷冻血小板质量的重要因素。冷冻血小板体内即刻止血功能明显优于液体保存血小板。为更好地保证冷冻血小板的质量,了解二甲亚砜(DMSO)在冷冻血小板保存过程中的作用及其作用机理、DMSO冷冻血小板止血功能增强的机理及不同因素对冷冻保存血小板的影响具有重要意义。本文就冷冻血小板的长期保存及质量标准、DMSO引起冷冻血小板分子改变及抑制激活作用的机理、不同因素对冷冻血小板保存效果的影响、保存效果的检测、冷冻血小板在灾害救援和军事行动中的应用及犬冷冻血小板的研究进行综述。     

加入第二信使效应剂,降低二甲亚砜浓度的单一供者血小板的低温保存提高血小板体外机能活性

背景 细菌污染的可能性限制了血小板在22℃5天后的保存,这问题能通过低温贮存而允许血小板长期保存来解决。已经证实了含第二信使效应剂的混合液(血小板保存液)的血小板,冷藏保存后血小板保持良好的体外功能活性。分析第二信使效应混合液在冷藏期间保护血小板和减少低温保护剂的需要量应进行认真分析。方法 将新鲜单一供血者血小板单位(n=8)分成3个样本,并分别加入6％的二甲亚砜(DMSO),2％的DMSO,或血小板保存液和2％DMSO,将样本直接放入-80℃的冷藏箱中保存一个星期,待融化后分析他们的体外功能活性。结果用血小板贮存液和2％DMSO低温保存的血小板在统计学上显示在保持功能活性和存活力——包括细胞数,盘状细胞     

经二甲基亚砜冷冻保存的血小板粘附率观察

目的研究采用二甲基亚砜(DMSO)冷冻保存血小板的制备技术以及制备效果。方法按常规进行DMSO富含血小板血浆悬液制备、冷冻保存与复温;抽样进行质控检测;作血小板粘附功能测定。结果质控检测结果:血小板计数≥2.5×1011个/袋,红细胞混入量≤8.0×109个/袋,白细胞混入量≤5.0×108个/袋。无细菌生长。抗丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗人类免疫缺陷病毒(H IV)、梅毒特异性抗体检测均为阴性。血小板粘附试验结果:加入DMSO血小板的粘附率低于未加DMSO的血小板(P<0.05);洗涤后的血小板粘附率与未加DMSO的血小板相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论血小板的DMSO冷冻保存技术值得推广应用。     

经二甲基亚砜冷冻保存的血小板粘附率观察

目的 研究采用二甲基亚砜(DMSO)冷冻保存血小板的制备技术以及制备效果.方法 按常规进行DMSO富含血小板血浆悬液制备、冷冻保存与复温;抽样进行质控检测;作血小板粘附功能测定.结果 质控检测结果血小板计数≥2.5×1011个/袋,红细胞混入量≤8.0×109个/袋,白细胞混入量≤5.0×108个/袋.无细菌生长.抗丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗人类免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒特异性抗体检测均为阴性.血小板粘附试验结果加入DMSO血小板的粘附率低于未加DMSO的血小板(P＜0.05);洗涤后的血小板粘附率与未加DMSO的血小板相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血小板的DMSO冷冻保存技术值得推广应用.     

血小板冷冻保存的实验研究

本研究研制新型的血小板冷冻保存液,观察血小板在不同保存液冻存前、后的形态改变,以及体外受凝血酶作用下的活化状态,同时比较添加UDP-Gal对保存液保存效果的影响。在以往单一应用较高浓度的DMSO为血小板低温保存液的基础上,自行研制新型保存液：2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal,在不同时间分别观察血小板形态及测定血小板膜表面糖蛋白CD62P的表达。结果显示,在圆形、树突形、不规则形态的百分比方面冷冻保存对血小板形态有显著影响,2%DMSO＋thrombosol组和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal组保护作用优于5%DM-SO组;与新鲜血小板相比,冻存后血小板表达CD62P明显下降,保存1月与3月时CD62P表达无明显差异,3种保存液组之间CD62P表达无明显差异。结论：3种冷冻保存液中2%DMSO＋thrombosol和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal对血小板形态的保持效果相似,均优于5%DMSO组。冷冻保存后血小板对凝血酶的反应下降,3种保存液组之间无明显差异。在保存液中添加UDP-Gal对保存效果没有明显影响。     

低浓度二甲基亚砜冰冻血小板的个性化研究

目的 探讨血小板(PLT)冰冻保存时保护剂二甲基亚砜(DMSO)的最佳浓度.方法 计算机随机选择2009年6月至2011年9月本血站机采室采集的120袋PLT作为研究对象.将不同质量浓度的DMSO作为保护剂加入PLT中,在-80℃条件下进行冰冻保存.检测冰冻前、后及不同离心条件下PLT计数、血浆中PLT第3因子(PF3)、PLT第4因子(PF4)、PLT体积分布宽度(PDW)及P-选择素(CD62P)的含量,并分析PLT的聚集、黏附、血块收缩功能的变化情况.结果 质量浓度为2％与5％的DMSO作为保护剂时,对冰冻PLT的各项功能指标影响不大,差异无统计学意义(P＞0.05).但1％的DMSO作为保护剂时,对PLT的各项功能指标影响较大.结论 PLT为无核细胞,结构简单,可用2％的DMSO作为保护剂进行冷冻保存.     

血小板低温保存的初步研究

血小板输注应用的进展,要求体外长期保存血小板,低温保存是目前公认细胞长期保存的最好方法。本研究用体外回收率、血小板聚集试验、血小板低渗休克试验与透射电镜观察等手段,研究了不同降温方法与冻存条件下血小板的活力。结果发现:(1)用自动控温装置降温效果最好。(2)选用5％DMSO低温保护剂与1℃/min降温率为最好冻存条件,此时70％以上血小板活力得以保存。(3)血小板低温损伤主要发生在降温时融合热释放期(-6℃以上)。(4)-20℃冻存是不可取的。(5)血小板聚集功能在冻存后严重下降,有必要进一步研究解决方法。     

血小板在PAS-Ⅱ或Composol中的保存

背景 以前的研究表明,在PAS-Ⅱ中保存的血小板在保存的第5天CD62P的表达(50％)要高于在血浆中保存的血小板(22％)。Fresenius HemoCarer的Composol(R)可在浓缩血小板制备、保存过程中代替血浆,成为除PAS-Ⅱ外又一选择。Com-posol(R)与PAS-Ⅱ的不同在于Composol(R)含有镁和钾。材料和方法 白膜层制备5份PAS-Ⅱ或Composol(R)PC(配对研究),     

生物素-X-N-氢氧化琥珀酰亚胺和~(111)In-oxine-标记的狒狒的自体新鲜及冻干重建血小板的存活

背景及目的按照食品及药品管理局(FDA)的规程,血小板在液态-22C下可以保存5天;在6％的二甲基亚砜 (DMSO)-80C冰冻条件下可以保存2年,5％的二甲基亚砜 -150C条件下可以保存3年。了解冻干对血小板的影响的研     

去除白细胞和保存温度对用6%DMSO冰存3年的血小板的影响

背景 6％的DMSO冰冻PLT能够在-80℃存放2年,而 5％的 DMSO 冰冻血小板能够在-150℃存放 3年。-80℃下的冰冻血小板衰老更快,也许是由于粒细胞的存在。作者考查去除白细胞和保存温度对DMSO冰冻血小板的影响及-80℃和-135℃的保存温度对 PVC塑料袋破损量的影响。研究设计及方法 单采富血小板血浆(PRP)分为等量的 2份,一份去除白细胞,另一份不过滤分为等量的2份。用6％的DMSO冰冻在-80℃和-135℃下用PVC塑料袋存放3年。结果 -     

保存的血小板所含残余的凝血因子量:延长血小板浓缩物保存期的结果

背景新的病原体灭活方法的出现,可延长血小板浓缩物 (PCs)的保存期,但尚不知止血功能如何。研究设计及方法作者分析了延长保存期对PCs中血小板的黏附和促凝血功能的影响。用透射电镜研究血小板与表面相互作用的能力。用流式细胞仪和免疫细胞化学法在超微结构水平上研究血小板表面阴离子磷脂或凝血因子(TF)抗原的暴露。研究6份不同的PC 保存0、3、5、7和11天后的血小板。结果保存5天后,作者观察到血小板的黏附功能逐渐减弱。根据整个保存期的观察,阴离子磷脂的表达逐渐增强,用改良凝血酶原时间(mPT)检测发现凝血酶原被激活(PCA)。用特异性抗-TF与血小板孵育, mPT延长大约10％～15％。流式细胞仪显示,保存后期,TF表达量最低。当置血小板于载玻片上研究时,免疫细胞化学显示 TF标记量最低。当血小板预先经声波处理,标记显著得到改良。结论 PC延长保存周期可能伴有血小板黏着功能降低和 PCA升高。目前的制备程序和保存介质对于保存PC长于1周存在明显的限制。用免疫细胞化学法和功能实验测定时,PCs 中血小板有TF残余,这种TF的起源和止血作用有待进一步研究。     

单采血小板冷冻保存的质量评价

[目的]研究单采血小板冰冻保存。[方法]在单采血小板中加入二甲基亚砜(DMSO)，终浓度为5％，-120℃保存。观察冰冻一周，一个月后血小板聚集功能和回收率的改变、血小板低渗休克反应回复率的变化。[结果]冻存一周，一个月后单采血小板仍具有较高的回收率，血小板聚集功能和低渗休克反应回复率有一定下降。[结论]单采血小板冰冻保存是可行的，具有较好的疗效。贮存期可以延长。     

血小板保存新策略

血小板在常温(22℃±2℃)连续振荡下保存,对细菌生长极有利,从而易使血小板遭受细菌污染,并且因为保存期短,不能适应血小板临床需求量的迅速增加[1].解决这一问题的最好办法就是降低血小板的储存温度,进行血小板冷藏保存 [2].血小板冰冻保存可使血小板的保存期延长,但冻存后的血小板存活率明显降低且冰冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)对受者具有毒副作用,在洗涤去除DMSO的过程中,血小板易激活、损伤[3].     

混合浓缩血小板保存期质量变化研究

目的探讨混合浓缩血小板制剂(PC)保存期质量变化。方法对86例(份)(400 m L/份)新鲜全血采用白膜法制备PC,按相同血型汇集,汇集后血小板数2.7×1011个/治疗量,并经白细胞滤器系统(含混合PC保存袋)过滤,于滤后0、3、5 d观察血小板存活率、p H、PO2、PCO2、GLU、Lac、HSR、聚集率及CD62p表达率。结果 13份混合PC保存0和5 d的血小板计数(×1011个)为2.88±0.28 vs 2.66±0.27(P0.05),保存5 d的PC血小板存活率达89.46%;0和3 d的GLU(mmol/L)为18.75±0.47 vs 17.52±0.54,Lac(mmol/L)为4.30±0.46 vs 7.59±1.22,CD62p(%)为10.90±5.93 vs 32.74±8.12和AGG(%)为91.38±3.10 vs 52.42±21.68(P0.01);0和5 d的p H为7.01±0.13 vs 6.90±0.13(P0.05);3和5 d的AGG(%)为52.42±21.68 vs 36.29±27.46(P0.05)。结论混合PC保存袋保存的混合PC质量在保存期存在下降趋势,但在保存5 d仍符合国家标准,可以供临床输用。     

血小板添加剂对浓缩血小板在保存期间补体活化和细胞因子水平的影响

背景和目的 在保存期间浓缩血小板(PC)中来源于血小板的细胞因子的积聚可能引起非溶血性输血反应(NHTR)。作者研究了保存中的去白细胞血小板对血小板活化、补体活化和细胞因子水平的影响。材料和方法 应用单采法采集超浓缩血小板、以100％血浆稀释成70％PASⅢ或制备成70％或80％含镁和钾的(PASⅢ M)悬液。结果 保存期间转化的生长因子(TGF一)和活化调节,正常的T—细胞表达和分泌(RANTES)浓     

利用SCID小鼠模型评价-80℃冷冻人血小板的体内生存能力

为了评估人血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力,取新鲜机采血小板加入二甲基亚砜（DMSO）,使其终浓度为5％,于～80℃保存10天后,取出立即放置于37℃水浴箱中快速解冻,并离心浓缩10倍。用带有超细针头的胰岛素注射器抽取浓缩血小板1130μl,经尾静脉注入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内,在注入0．5、2、4、6、12、24小时时采集小鼠全血,肝素抗凝,用CD61-PE标记后,流式细胞术计数人血小板,以30分钟时的人血小板计数为100％,计算人血小板存活率。结果表明：冷冻血小板在活体内存活率明显降低,新鲜血小板和冷冻血小板输注SCID小鼠体内4小时时的存活率分别为（79．5±9．1）％和（40．6±6．6）％（P〈0．01）,推算半寿期（T1/2）分别为7小时和2．5小时。结论：血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力降低。     

离心法制备少白细胞血小板的研究

本文采用密闭4联输血袋系统(PVC),用2次离心法制备的浓缩血小板(PC)解聚后,再行第3次离心以去除PC中的白细胞和红细胞;探讨了第3次离心速度对其效果的影响。经第3次450×g离心观察65例,其白细胞残留量为0.07×10~8/L;血小板回收率为全血的52.5％,平均(5.3±1.6)×10~(10)/袋。通过18袋PC对照研究证实,第3次离心对保存期间血小板质量与体外功能无影响。少白细胞PC保存3天、5天的pH值显著高于普通PC,分别为7.2±0.1,6.6±0.4;7.1±0.2,6.3±0.6(P<0.001)。血小板保存5天乳酸脱氢酶释放率显著低于普通PC(P<0.05)。经临床46例对照验证,其发热性输血反应显著下降(P<0.05),具有与普通PC相同的疗效。