过量碘对甲状腺细胞组织蛋白水解酶的作用研究

目的探讨甲状腺蛋白水解酶在过量碘性甲状腺损伤中的作用。方法选取FRTL细胞系为研究对象,正常组培养基内不加碘,高碘组分别含碘(碘化钾)1、5、10、50、100mmol/L,培养6、12、24、48、72h,荧光分光光度法测定蛋白酶B(CB)活性,Lowry法测定蛋白酶D(CD)活性,荧光定量PCR法测定CB和CD的mRNA水平。结果50mmol/L碘作用12h开始出现CB活性的下降,但是需作用24h始出现CD活性的下降。50mmol/L碘作用24h,高碘组CB、CDmRNA水平均较正常组显著下降。结论CB和CD活性的下降是过量碘导致的甲状腺胶质潴留的重要原因之一。     

短期碘缺乏和碘过量对大鼠甲状腺细胞凋亡和增殖的影响

目的 检测碘缺乏和碘过量对甲状腺细胞凋亡和增殖的影响,以期为防治碘致性甲状腺疾病提供理论依据.方法 将断乳后1个月Wistar大鼠随机分为低碘组、适碘组、5、10、50倍碘组,各组大鼠分别以0.6、6.15、30.75、61.5、307.5μg/d进行饮水染毒.在实验第7、14、28天,处死动物并分离甲状腺.采用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因fas、fasL mRNA表达,免疫组化方法检测细胞Fas、FasL蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果 与适碘组比较,各时间段低碘组大鼠甲状腺fas和fasL mRNA的表达均无明显变化,5、10、50倍碘组有随碘摄入量增加而增强的趋势.Fas和FasL蛋白在各时间段,低碘组和适碘组稳定的表达为阴性或弱阳性,5、10、50倍碘组阳性强度随碘摄入量和摄入时间增加而增强.在各时间段,与适碘组比较,低碘组大鼠甲状腺PCNA表达阳性细胞率较高;5、10、50倍碘组无显著变化.各组大鼠各时段均未发现阳性凋亡细胞.结论 短期碘缺乏未引起细胞凋亡,但促进细胞增殖;短期碘过量对甲状腺细胞凋亡和增殖活性均无影响;机体对碘过量有较强的适应能力.     

有机碘和无机碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的 研究有机碘和无机碘对体外培养的人甲状腺细胞形态和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 取正常人甲状腺细胞进行培养,分别设对照(培养液)组和KI组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L)及3,5-二碘酪氨酸(DIT)组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L),分别加入相应浓度用培养液稀释的DIT和KI溶液,继续培养48 h.采用免疫组织化学技术测定细胞凋亡相关蛋白表达的情况.结果 与对照组相比,10-5、10-3 mol/L KI组和10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较低,10-5、10-3 mol/L KI及DIT暴露甲状腺细胞Bax表达量较高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着KI或DIT暴露浓度的升高,甲状腺细胞Bcl-2表达量呈下降趋势,Bax表达量呈上升趋势.与相同剂量KI组相比,10-5、10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较高,Bax表达量较低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 高碘可引起甲状腺细胞形态的改变并增强其细胞凋亡的发生,且DIT对甲状腺细胞的影响弱于KI.     

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。     

硒干预过量碘致甲状腺滤泡上皮细胞组织蛋白酶活性下降的作用

目的:探讨硒干预过量碘对甲状腺滤泡上皮细胞组织蛋白酶活性下降与胶质潴留的作用及其机制。方法:FRTL细胞培养于Kaighn’s改良的Ham’sF-12培养基。①测定组织蛋白酶B和D(CB、CD)活性。细胞分组:正常对照组:培养基内不加碘或硒;过量碘组:培养基内加入50mmol/L碘化钾(KI);过量碘加硒组:培养基内加入50mmol/LKI和硒浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0μmol/L的亚硒酸钠(Na2SeO3)。②测定CB和CDmRNA的水平。细胞分组同上,但过量碘补硒组只加0.1μmol/L的硒。收集细胞,荧光定量PCR测定CB和CDmRNA水平。结果:0.1～0.5μmol/L补硒组CB、CD活性较过量碘组显著升高(p﹤0.05)。补充硒可以升高由50mmol/L碘导致的CB、CDmRNA水平下降。结论:补充0.1～0.5μmol/L剂量范围的硒可使过量碘导致的CB、CD损伤好转,这也是硒可缓解胶质潴留的原因之一。     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

碘过量对人甲状腺细胞的损伤作用及机制研究

目的探讨碘过量对人正常甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1)的损伤作用及机制。方法用0(对照)、1、10、50mmol/L的碘化钾(KI)作用于体外培养的Nthy-ori 3-1细胞24 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)比色法检测细胞存活率和LDH漏出率,利用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平、细胞周期构成比及凋亡率。结果与对照组相比,50 mmol/L碘染毒组细胞存活率明显下降(P<0.05),LDH漏出率明显上升(P<0.05)。各剂量组之间ROS产生水平差异无统计学意义。50 mmol/L碘染毒组G0/G1期细胞百分比明显增多(P<0.05),但S期百分比明显减少(P<0.05),且细胞凋亡率明显上升(P<0.05)。结论一定剂量的碘能降低甲状腺细胞存活率,增加LDH漏出率,细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡,碘对甲状腺的损伤作用可能与碘对细胞周期的影响有关。     

IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的作用

目的 观察IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的特征,进一步分析高碘诱导甲状腺细胞凋亡的作用机制.方法 用0(对照)、1、10、50 mmol/L的碘化钾(KI)染毒体外培养的Nthy-ori 3-1细胞,24h后采用流式细胞术检测Nthy-ori 3-1细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、肌醇需求酶-1(IRE1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因蛋白的表达水平.结果 与0(对照)、l、10 mmol/L KI染毒组相比,50 mmol/L KI染毒组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组相比,各染毒组GRP78、IRE1 mRNA表达水平均无统计学差异(P＞0.05),CHOP mRNA表达水平升高(P＜0.05),GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内质网应激中IRE1通路可能没有参与高碘诱导的Nthy-ori 3-1细胞凋亡过程.     

高碘和/或高氟致人甲状腺细胞凋亡与内质网应激的关系

目的研究内质网应激在高碘和/或高氟致人甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1)凋亡中的作用,探索高碘和/或高氟致甲状腺细胞凋亡的机制。方法用碘化钾(KI)1、10、50mmol/L,氟化钠(NaF)1mmol/L及高碘高氟联合(50mmol/L KI+1mmol/L NaF)作用于人甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1)24h,利用噻唑蓝(MTT)法、比色法检测细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,利用逆转录PCR法、Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需要酶(IRE1)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的mRNA和蛋白及切割的X盒结合蛋白(sXBP-1)mRNA表达情况。结果 50mmol/L KI组、1mmol/L NaF组及50 mmol/L KI+1 mmol/L NaF组细胞活性[(73.54±8.37)%、(84.54±7.55)%、(72.62±7.15)%]低于对照组细胞活性[(100.00±0.00)%](P0.05),LDH漏出率[(38.00±2.04)%、(36.43±0.82)%、(38.73±1.36)%]高于对照组[(32.86±2.32)%](P0.05),凋亡率[(15.53±1.26)%、(12.42±2.05)%、(16.42±1.35)%]也高于对照组[(7.87±1.40)%](P0.05)。高氟和高碘高氟联合可诱导GRP78、IRE1和CHOP的mRNA和蛋白及sXBP-1mRNA表达上升(P0.05)。结论高碘和/或高氟可通过诱导细胞凋亡对甲状腺细胞造成毒性作用,高碘诱导的凋亡可能与IRE1途径无关,但高氟、高碘高氟联合诱导的甲状腺细胞凋亡可能与IRE1途径有关。高碘高氟共存作用于甲状腺时存在拮抗效应。     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3:F=23.33,P<0.001;Bax:F=60.31,P<0.001;Bcl-2:F=577.8,P<0.001;Cyt-c:F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。     

Bax和Bcl-2在恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘组织中的表达研究

目的:Bax和Bcl-2是重要的凋亡调节因子,本研究主要探讨细胞凋亡与流产的关系。方 法:应用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘、子宫中Bax和Bcl-2的 表达。结果:BaxmRNA在流产胎盘中的表达量明显高于正常妊娠胎盘,在胎盘绒毛滋养层细胞和基 底层蜕膜细胞均有明显表达。Bcl-2mRNA在流产胎盘中的表达量明显低于正常妊娠胎盘,表达模 式与Bax类似。结论:药物可能通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致恒河猴胎盘组织和子宫基 底层凋亡细胞的数量增加,影响胎盘的正常结构和功能,从而增加了流产的危险性。     

二甲基甲酰胺致人肝细胞凋亡及其对Bcl-2及Bax和Caspase-3表达的影响

目的 初步探讨二甲基甲酰胺(DMF)对正常成人肝细胞的致凋亡作用和对Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 以终浓度为0、50、100、150、200mmol/L的DMF作用于正常成人肝细胞12 h后,应用流式细胞术和western blotting法检测细胞凋亡率及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的变化.结果 与阴性对照组比较,各DMF剂量组凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增加,肝细胞凋亡率上升,呈现剂量-反应关系.且染毒后随着DMF剂量的增加,Bcl-2表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,Bax 表达水平无明显变化,Bcl-2/Bax比值随着DMF剂量增加而下降,200mmol/L剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).在DMF150、200mmol/L剂量组可见到Caspase-3切割活化.结论 DMF可诱导肝细胞发生凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值表达下调、Caspase-3发生切割活化有关.     

低剂量亚慢性纳米氧化镍对雄性大鼠的生殖毒性的影响

目的 探讨低剂量亚慢性纳米氧化镍染毒致雄性SD大鼠生殖毒性的机制。方法 将50只雄性SD大鼠按体质重（180～220 g）采用随机数字表分为5组,生理盐水对照组、4 mg/mL Micro-NiO阳性对照组及0.16、0.8、4 mg/mL Nano-NiO,采用非暴露式气管滴注法染毒,1次/3d,60天后,检测大鼠睾丸组织氧化应激指标、凋亡相关靶基因及蛋白的表达。结果 与生理盐水对照组相比,0.8、4 mg/mL Nano-NiO组 SOD活力、CAT活力、GSH-Px活力,均下降（P<0.05）; MDA含量均升高（P<0.05）。与生理盐水对照组和0.16 mg/mL Nano-NiO组相比,0.8、4 mg/mL Nano-NiO组Bax、Caspase-3mRNA的表达水平和Bax/Bcl-2 mRNA表达比值均升高（P<0.05）,而Bcl-2 mRNA表达水平均降低（P<0.05）;与生理盐水对照组和0.16 mg/mL Nano-NiO组相比,0.8、4 mg/mL组睾丸组织Bax、Caspase-3蛋白的表达水平均升高（P<0.05）;而0.8、4 mg/mL Nano-NiO组睾丸组织Bcl-2蛋白的表达水平均下降（P<0.05）。结论 0.8mg/L及以上浓度纳米氧化镍染毒60天可对雄性大鼠产生生殖毒性,Caspase-3和Bax基因和蛋白表达升高, Bcl-2表达下降,这可能是0.8mg/L及以上浓度纳米氧化镍染毒60天导致大鼠睾丸生殖细胞凋亡发生的重要途径     

胞二磷胆碱对神经细胞凋亡保护作用

目的探讨胞二磷胆碱对6-羟基多巴胺所致的神经细胞凋亡的保护作用机制。方法采用流式细胞仪检测神经细胞的凋亡百分比及Bax、Bcl-2蛋白表达。结果将1，0．1，0．01和0．001mmol／L胞二磷胆碱＋6-羟基多巴胺组，与6-羟基多巴胺组比较，凋亡百分比明显降低（P〈0．01）；各组Bax蛋白的表达率明显下降，0．1mmol／L胞二磷胆碱组明显低于对照组；1，0．1和0．01mmol／L胞二磷胆碱组Bcl-2表达率显著升高；Bax／Bcl-2比值下降，0．1mmol／L胞二磷胆碱组Bax／Bcl-2比值低于对照组（P〈0．01）。结论胞二磷胆碱通过减少Bax和增加Bcl-2蛋白的表达。使Bax／Bcl-2比值下降、细胞凋亡减少。发挥其神经保护作用。