大鼠肾小球系膜细胞的培养与鉴定

培养及鉴定大鼠肾小球系膜细胞。方法首先提取大鼠肾小球并用Ⅳ型胶原酶消化处理,然后体外培养大鼠肾小球,对生长的细胞定期行光镜及免疫化学色等鉴定。结果培养的肾小球３ｄ后可见细胞生长,１４ｄ时镜下细胞多呈星状或纺锤状们有不规则的突起。     

猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定

目的 探索一种简单方便、重复性好的非人灵长类动物原代肾小球系膜细胞(GMCs)体外提取、培养及鉴定的方法。方法 在无菌条件下取出猕猴肾脏,利用两种不同孔径的纱网(介于100目到200目之间)分离出肾小球,设置不同浓度(0.1、0.2 mg/ml)Ⅵ型胶原酶消化肾小球,同时在这两个浓度基础上设置不同消化时间(10、15 min),将消化后的肾小球接种到细胞瓶中,观察不同消化条件下GMCs的生长状况。显微镜下观察GMCs的结构,免疫荧光和Western blot法检测GMCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nephrin蛋白的表达。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后观察GMCs生物学特性,CCK-8法和高内涵细胞成像系统法分别检测GMCs活力和增殖情况;Transwell法和细胞划痕实验检测GMCs迁移能力。结果 利用0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min搜集到的肾小球贴壁较多,肾小球细胞生长状态较好。原代培养的肾小球3 d贴壁,7 d开始移出不规则形状或星状的细胞,经21～35 d GMCs逐渐铺满瓶底。GMCs中α-SMA蛋白阳性,Nephrin蛋白阴性。10 ng/m...     

肾小球系膜细胞培养及鉴定

肾小球系膜细胞（GMC）具有多种功能，如分泌细胞基质，产生细胞因子，并具有吞噬清除大分子物质以及类似平滑肌纫胞的收缩功能，是肾小球中功能最活跃的一类细胞。因此GMC的体外培养是研究肾功能、肾小球疾病的发生发展必不可少的手段之一。本中心近年来成功地进行了大鼠、成人以及胎儿肾系膜细胞的培养，现总结如下。     

大鼠肾小球系膜细胞体外培养及鉴定的实验研究

目的:探索一种重复性好、传代次数多的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)体外培养和鉴定的方法.方法:麻醉状态、无菌条件下取得大鼠的肾脏,用3种不同目数的不锈钢筛网提取肾小球,搜集到的肾小球分别加入2.5 g/L、0.5异/LⅣ型胶原酶及2 g/L Ⅱ型胶原酶各5 mL,分别在37 ℃水浴箱中振荡消化20 min、30 min、25min,然后接种肾小球,比较不同培养条件下肾小球系膜细胞的生长状况.结果:Ⅱ型、Ⅳ型胶原酶3种不同浓度作用不同的消化时间,细胞的生长速度及生长状况不同,Ⅳ型胶原酶(2.5 g/L)消化20 min的为最佳.结论:培养的细胞为肾小球系膜细胞,用Ⅳ型胶原酶(2.5 g/L)消化20 min的肾小球系膜细胞生长状态最佳.     

大鼠肾小球系膜细胞体外培养及鉴定的实验研究

目的:探索一种重复性好、传代次数多的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)体外培养和鉴定的方法.方法:麻醉状态、无菌条件下取得大鼠的肾脏,用3种不同目数的不锈钢筛网提取肾小球,搜集到的肾小球分别加入2.5 g/L、0.5异/LⅣ型胶原酶及2 g/L Ⅱ型胶原酶各5 mL,分别在...     

肾小球系膜细胞的培养及其吞噬功能的测定

经筛网及酶消化方法分离大鼠肾小球，在体外培养，１５￣２０ｄ出现系膜细胞生长高峰。运用具有吞噬功能的细胞在吞噬刺激物的同时能释Ｈ２Ｏ２的原理来测定膜的吞噬功能。结果表明：经胰蛋白酶消化的肾小球容易贴壁、生长良好，系膜细胞在体外具有吞噬功能。采用的测定方法具有简便、稳定、灵敏度高的特点。     

肾小球系膜细胞体外培养方法的改进

肾小球系膜细胞体外培养方法的改进Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ１０ｖｉｔｒｏ辛榕，卞修武，谯怡然（第三军医大学基础部病理教研室）６３００３８肾小球系膜细胞的体外培养有一定难度。１９７５年Ｆｉｓｈ...     

人肾小球系膜细胞原代培养及鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法。方法：取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取最下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞。同时采用形态学观察和免疫荧光技术,对鼠抗人结蛋白,鼠抗人角蛋白进行鉴定,采用MTT、 流式细胞仪技术对不同来源肾脏的系膜细胞生长状况进行比较。结果：形态学、免疫荧光法鉴定表明培养细胞为肾小球系膜细胞,胎肾原代培养后8～10d即可传代,而成年肾脏原代培养后需15～16d方可传代。成年肾脏培养细胞至第4代细胞生长缓慢,贴壁能力减弱,出现死亡。而胎肾培养细胞则可继续培养至第7～10代。结论:三层滤网法分离人肾小球系膜细胞, 方法简单、高效,培养的原代肾小球系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特性,且进一步证明胚胎组织比成年个体肾脏原代细胞培养容易成功。     

SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外原代培养

目的：建立原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞体系.方法：取新生24 ～48 h的SD大鼠,无菌操作取出大脑皮层,剪碎后用胰酶消化、机械吹打制成分散细胞悬液,网筛过滤,将细胞悬液接种培养7～9d;置于摇床（37℃、250 r/min振摇6h）,弃掉含脱离细胞的细胞悬液,去除小胶质细胞及少突胶质细胞,细胞传代,进行GFAP细胞免疫荧光鉴定.结果：成功分离和培养原代星形胶质细胞,GFAP免疫荧光鉴定星形胶质细胞比例在95％以上.结论：采用该培养方法能够成功的建立原代SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞体系,为研究神经系统疾病及其相关疾病提供了可靠的细胞模型.     

多球壳菌素对激活的大鼠肾小球系膜细胞增生的抑制作用

目的 探讨多球壳菌素（ISP-Ⅰ）对体外激活的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的调控作用。方法 分别采用MTT法及流式细胞术检测IL-1、IL-6对GMC的激活作用及ISP-Ⅰ对激活后GMC增生的抑制作用。结果 MTT法结果显示10U／ml IL-1及1000U／ml IL，6刺激GMC24、48h后，反映细胞增生程度的吸光度（A）值较对照组增高（P〈0．05）；激活的GMC在25～500μg／ml ISP-Ⅰ作用24、48h后的A值较对照组低（P〈0．05）。流式细胞术检测的结果与MTT法一致，即GMC被激活12、24、36h时的细胞增生率高于对照组（P〈0．05）；激活的GMC在100μg／ml ISP-Ⅰ作用下，细胞增生率低于对照组（P〈0．05）。结论 ISP-Ⅰ对激活后的GMC有明显抑制作用。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境下黄芩苷对肾小球系膜细胞株HBZY- 1增殖和凋亡的影响。方法 采用MTT法观察高糖环境下3种接种浓度的肾小球系膜细胞株HBZY- 1的生长情况,确定该细胞的最佳接种浓度和用药时间点,继而采用MTT法检测黄芩苷对肾小球系膜细胞增殖的影响;运用倒置荧光显微镜观察黄芩苷对肾小球系膜细胞形态的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度黄芩苷对肾小球系膜细胞凋亡的影响。结果 高糖环境下,肾小球系膜细胞的最佳接种浓度是2×103/mL,最佳用药时间是细胞培养48 h后。随着浓度升高,黄芩苷抑制HBZY- 1细胞增殖的作用增强。流式细胞仪检测结果显示,高糖环境下,肾小球系膜细胞总凋亡率随着黄芩苷作用剂量的增大而升高,黄芩苷浓度为6.25 μmol/L时,HBZY- 1细胞的总凋亡率与模型对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;当黄芩苷浓度增至12.5 μmol/L时,HBZY- 1细胞的总凋亡率开始显著大于模型对照组（P<0.05）。结论 黄芩苷能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株HBZY- 1的增殖,在一定浓度范围内呈现明显的量效关系。     

稳定表达饰胶蛋白聚糖基因的大鼠肾小球系膜细胞株的建立

目的 研究将饰胶蛋白聚糖（decorin,DCN）基因转染大鼠肾小球系膜细胞的可行性。方法 RT-PCR法扩增大鼠DCN基因,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1A-DCN,采用脂质体将其转入大鼠MsC,经G418筛选阳性克隆,Western blot及RT-PCR法鉴定。结果 成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1A-DCN,转染MsC并筛选出2个阳性克隆株。结论 构建载有DCN基因的MsC载体,为其开展对肾小球疾病模型的基因治疗提供了良好的实验基础。     

肾小球系膜细胞三维立体培养方法的构建

建立一种肾小球系膜细胞三维立体培养系统，该系统可以模拟肾小球系膜细胞在肾小球系膜区的生长环境，并证实在三维立体培养系统中．肾小球系膜细胞在24、48和72h的增殖作用比传统贴壁培养时明显缓慢。     

内皮素—1对肾小球系膜细胞内游离钙浓度影响

ET－1激发肾小球系膜细胞（glomerularmesangialcell，GMC）内［Ca2 ］i；升高作用分2个时相，即瞬时峰值升高和缓慢持久升高，对峰值升高呈剂量依赖方式，＜10－10mol／L不引起峰值升高，≥10－10mol／L引起峰值升高，且随着剂量增加，幅度增大。维拉帕米对ET－1激发GMC内［Ca2 ］i峰值升高和持久升高均无抑制作用；细胞内储存钙释放抑制剂TMB－8明显抑制峰值升高，但对持久升高无作用；无钙缓含冲液（1mol／LEGTA处理）对峰值升高无作用，但可完全阻止持久升高作用。结果表明ET－1激发GMC内［Ca2 ］i浓度峰值升高是由细胞内储存钙释放介导的，而持久升高是由细胞外钙流入增加引起的。     

[Ca2+]i与阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤的研究

目的 探讨阻塞性黄疸大鼠胞浆钙活性的变化及其致肾损伤的作用机制.方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组(再分为胆总管结扎后15 d和21 d两个亚组),每组15只.胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,激光共聚焦显微镜法测定细胞胞浆钙离子浓度.结果 肾小球系膜细胞胞浆钙离子浓度明显升高(P＜0.05).结论 TNFa致阻塞性黄疸大鼠肾脏系膜细胞线粒体损伤中细胞浆内钙离子超载起着重要的作用.     

中药复方益肾蠲湿合剂抑制肾小球系膜细胞增殖及机理的研究

目的:观察自拟中药复方"益肾蠲湿合剂"对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖的影响,并进一步探讨其作用机理。方法:将1×10-3、1×10-2和1×10-1mg/mL的"益肾蠲湿合剂"提取液作用于体积分数10%血清的DMEM培养的GMC,分别用MTT和Western Blot方法检测细胞的增殖和磷酸化ERK1/2的表达。结果:1×10-2和1×10-1mg/mL"益肾蠲湿合剂"可显著抑制GMC的增殖,抑制率在12、24和36 h分别为13.4%、为9.6%。细胞总ERK的表达在各组间无明显差别。但不同浓度的"益肾蠲湿合剂"能显著地抑制血清所诱导的ERK1/2的磷酸化,最高抑制率达68%。结论:"益肾蠲湿合剂"可通过抑制ERK1/2的磷酸化来抑制GMC的增殖。     

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖（LPS）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组：对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR（RT-PCR）法检测ECM中层黏连蛋白（LN）β2 mRNA表达的变化。结果（1）LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义（P〈0.05）;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义（P〈0.01）;（3）正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义（P〈0.01）。结论从蛋白和mRNA两个水平同时观察到ECM成分（如FN、LN和ColⅣ）的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。