低氧诱导因子1在骨肉瘤组织细胞中的表达及其调控机制

实体瘤中低氧普遍存在,而骨肉瘤作为骨骼组织中实体瘤的一种具体表现形式,其肿瘤组织内亦应存在低氧状态。低氧诱导因子1是组织细胞在低氧条件下一系列基因转录和级联反应的重要调控因子。在实体瘤中,低氧诱导因子1可通过调控肿瘤细胞血管生成、凋亡、能量代谢、pH值、反转录端粒酶活性及侵袭和转移,从而抑制肿瘤细胞生长和调控肿瘤细胞适应性反应。     

低氧诱导因子1α在骨损伤修复中的研究进展

骨损伤时,局部组织或细胞常处于低氧状态,骨损伤修复是一个复杂的受多种细胞因子调控的修复过程。低氧导致一系列转录诱导因子的表达,其中低氧诱导因子(HIF-1α)是调节细胞低氧反应的关键因子,它所调控的一些因子在骨修复过程中作用十分广泛,主要涉及血管化和骨再生。现就HIF-1α的成血管作用,及其对成骨细胞、破骨细胞的调控作用予以综述。     

低氧诱导因子1α在膀胱移行细胞癌中表达及其临床意义

目的观察低氧诱导因子1α(HIF1α)在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱癌分级、复发的关系。方法采用免疫组织化学染色CD34观察肿瘤组织中微血管密度(MVD)以及血管内皮生长因子(VEGF)、HIF1α的表达情况。结果G1级、G2级、G3级膀胱癌中HIF1α阳性率分别为27.8%、40%、63.2%,G1级与G3级膀胱癌间差异有统计学意义(P<0.05);膀胱癌复发组及未复发组HIF1α阳性率分别为61.5%、30.6%(P<0.05);G1级、G2级、G3级膀胱癌中VEGF阳性率分别为50%、48%、68.4%,差异无统计学意义(P>0.05);膀胱癌复发组及未复发组VEGF阳性率分别为76.9%、38.9%(P<0.05)。G1级、G2级、G3级膀胱癌MDV分别为44.3±11.6、53.5±10.6、71.9±15.3,G1级与G3级膀胱癌间差异有统计学意义(P<0.05);膀胱癌复发组及未复发组MDV分别为41.7±10.9、77.2±15.3(P<0.05)。结论膀胱癌HIF1α表达与肿瘤分级复发相关,对膀胱癌复发有预测价值。     

低氧诱导因子-1α在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α).在不同病理级别人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其与病理级别问的关系.方法 收集67例人脑胶质瘤标本以及10例行内减压术切除的正常脑组织标本,采用免疫组织化学方法研究HIF-1α在不同病理级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况.结果 HIF-1α阳性表达率在Ⅲ、Ⅳ胶质瘤中显著高于Ⅱ级胶质瘤,分别为72.7%、80.0%、36.0%,在正常脑组织中未见阳性表达,随着病理级别的增高,HIF-1α的表达阳性强度也相应增加(r=0.518).结论 HIF-1α在人脑胶质瘤中存在高度表达,其阳性表达率及表达阳性强度随着病理级别增加而上升.     

低氧诱导因子-1α在溃疡性结肠炎中的表达

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在溃疡性结肠炎(UC)组织中的表达及与疾病活动性的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测47例UC患者(活动期35例、缓解期12例)和20例正常对照组中HIF-1α的表达.结果 溃疡性结肠炎患者活动期HIF-1α表达显著高于正常人,差异有显著性(152.27±16.26)vs(193.28±16.65)(P＜0.01),缓解期HIF-1α表达与正常人差异无显著性(185.93±11.80)vs(193.28±16.65)(P＞0.05),溃疡性结肠炎中HIF-1α的表达与Walmsley评分标准有相关性,且呈正相关.结论 HIF-1α作为一种转录因子可能参与了UC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

血管内皮生长因子、低氧诱导因子1α和生长抑制因子4在胃癌组织中的表达

目的探讨胃癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)和生长抑制因子4(ING4)的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测62例胃癌组织和28例正常胃组织中VEGF、HIF-1α和ING4的表达及微血管密度(MVD),分析VEGF、HIF-1α和ING4的表达与胃癌临床特征的关系。结果 62例胃癌组织中VEGF、HIF-1α和ING4的阳性表达率分别为59.7%(37/62)、72.6%(45/62)和51.5%(34/62),28例正常胃组织中VEGF、HIF-1α和ING4的阳性表达率分别为14.3%(4/28)、7.1%(2/28)和89.3%(25/28),胃癌组织中VEGF和HIF-1α的阳性表达率显著高于正常胃组织(P<0.01),而ING4的阳性表达率显著低于正常胃组织(P<0.01)。胃癌和正常胃组织中MVD分别为31.3±7.4和6.2±1.8,胃癌组织中MVD显著高于正常胃组织(P<0.01)。VEGF、HIF-1α的表达与胃癌的临床分期、淋巴结转移及浸润深度显著相关(P<0.05),ING4的表达与胃癌的临床分期、浸润深度及患者性别显著相关(P<0.05)。结论 ING4可能在胃癌的发生、发展过程发挥一定的抑制作用,HIF-1α和VEGF在胃癌发展过程中可能起促进作用。     

低氧诱导因子-1α的基因克隆

目的克隆低氧诱导因子-lα(HIF-1α)cDNA,为进一步研究HIF-1α基因在肿瘤基因治疗中的作用提供依据。方法从健康成人外周血液中提取总的RNA,利用特异性引物,用两步法进行RT-PCR扩增出约2500 bp的HIF-1αcDNA,与T载体连接后转化感受态细胞DH5α,建立HIF-1α的cDNA克隆。结果RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,可见一条清晰特异扩增带,长2500 bp;cDNA经酶切鉴定证实为人低氧诱导因子1α基因。结论成功克隆HIF-lαcDNA,为进一步研究HIF-1α奠定了基础。     

低氧诱导因子-1α在糖尿病肾病中的表达及其意义

目的 探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在实验性糖尿病肾病中的表达.方法 将30只健康Wister大鼠适应性喂养1周后随机分为模型组和对照组各15只,其中模型组于左下腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病模型,对照组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液.两组均自心脏取血,采用全自动生化分析仪测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,并计算内生肌酐清除率（Ccr）;采用免疫组化及westerblot分析法测定肾脏组织中HIF-1α表达.结果 模型组血清BUN显著高于对照组,Ccr显著低于对照组,HIF-1α表达显著高于对照组.结论 HIF-1α在糖尿病肾病发生、发展中起重要作用,此为糖尿病肾病防治及预后判定提供了依据.     

低氧诱导因子-1α在小鼠次级骨化中心形成中的表达

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在小鼠肢体次级骨化中心形成阶段的时空表达规律,并探讨其在长骨次级骨化中心发生和发育过程中的作用。方法解剖镜下整体观察股骨次级骨化中心的发生、发展过程;以地高辛标记的HIF-1αcRNA为探针,采用组织切片原位杂交技术,观察HIF-1αmRNA在次级骨化中心形成阶段的时空表达规律;通过免疫组织化学法观察HIF-1α蛋白在次级骨化中心形成中的表达及分布。结果出生6d,在股骨髁部见到不透光的骨化影,提示次级骨化中心开始出现;其后不透光影在股骨髁内不断膨大。原位杂交显示,出生6d时股骨髁中心出现小片状荧光增强区,出生8d时荧光增强区呈放射样扩大,表示HIF-1αmRNA有大量表达。免疫组织化学法显示,出生6d时股骨髁中心少量HIF-1α蛋白表达,出生8d时次级骨化中心的细胞核内出现大量HIF-1α蛋白表达,之后很快消失。结论HIF-1α在次级骨化中心发育中呈规律性的时空表达,提示其可能参与小鼠长骨次级骨化中心形成的骨发育过程。     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...     

血管内皮生长因子和低氧诱导因子1α在颈动脉粥样硬化性狭窄患者血清中的表达及临床意义

目的探讨颈动脉粥样硬化性狭窄患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)的变化及临床意义。方法采用酶连免疫吸附反应(ELISA)方法检测92例颈动脉粥样硬化性狭窄(CAS)患者和30例健康查体者血清中VEGF、HIF-1α水平。将92例患者根据颈动脉粥样硬化性狭窄程度分为轻度狭窄、中度狭窄、重度狭窄、极重度狭窄,记录患者一般临床资料,并分析CAS发生的危险因素。结果 CAS组高血压、糖尿病发生率显著高于对照组(P0.05),随颈动脉狭窄程度的加重SBP和FPG水平逐渐升高。CAS组VEGF、HIF-1α均显著高于对照组,相比较有显著性差异(t=6.807、7.500,P0.01)。CAS患者按照颈动脉粥样硬化性狭窄标准进行分级后发现血清VEGF、HIF-1α水平随着颈动脉狭窄程度的加重而逐渐上升,CAS患者的VEGF与HIF-1α水平呈正相关性。结论VEGF和HIF-1α在颈动脉粥样硬化性狭窄患者血清中呈高表达,其表达水平随着颈动脉狭窄程度的加重而升高,并且血清VEGF水平随着HIF-1α的变化而改变。血清VEGF和HIF-1α高水平可能成为CAS发生和发展的危险因素。     

人三突变型低氧诱导因子1α真核表达载体的构建及鉴定

目的：为了深人研究人低氧诱导因子1α（HIF-1α）基因对冠心病患者的血管新生作用，构建人三突变型HIF-1α真核表达载体（pShuttle2-HIF-1α-A1a4O2-Ala564-Ala803）。方法：双酶切pShuttle2-HIF-1α-Ala402-A1a564、pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803，胶回收前者酶切片段中300bp的小片段及后者6300bp的大片段，并将两者连接，重组成三突变型穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803，并进行酶切和PCR鉴定。结果：经酶切鉴定及基因测序证实，重组三突变型穿梭质粒构建成功。结论：成功构建重组人三突变型HIF-1α真核表达载体pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803，为进一步促进基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。     

环加氧酶2、缺氧诱导因子1α在肿瘤血管生成中的作用机制

研究肿瘤血管的生成机制,探索抑制肿瘤血管的生成,可以为肿瘤的预防、诊断和治疗方法的改进提供新的理论支持。环加氧酶(COX)2的过表达参与了肿瘤的发生、发展、浸润和转移的整个过程,这一过程可能与其能够促进肿瘤血管生成的作用密切相关。缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在多种肿瘤组织中过表达,并能调节肿瘤组织的生物学行为,对维持肿瘤细胞的生理代谢功能,促进肿瘤组织及新生血管的生长发挥了重要作用。它们的过表达与肿瘤组织新生血管高度相关,表明肿瘤血管的生成有COX-2和HIF-1α的参与。     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子的表达与胃癌血管生成的关系

目的:分析胃癌患者中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,探究其与胃癌血管生成的关系。方法:选取收治的60例胃癌患者作为研究对象,另选取12例正常胃黏膜组织标本作为对照组。采用免疫组化二步法对HIF-1α、VEGF水平进行检测,用CD34对血管内皮细胞计数并进行标记,分析HIF-1α、VEGF表达与血管内皮生成的相关性。结果:正常黏膜组织和胃癌组织HIF-1α、VEGF水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α、VEGF二者之间的表达趋于一致,呈显著正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌患者中,缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子与血管生成有着密切的关系,二者参与到了血管生成中,诱导了疾病进展。     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2 培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况. 结果 与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强. 结论 在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能.     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况。结果与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强。结论在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能。     

分化抑制因子1通过调控VEGF-A表达促进骨肉瘤血管生成

目的 观察分化抑制因子1(inhibitor of DNA binding 1,ID1)通过调控血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)表达对骨肉瘤143B细胞血管生成影响,并验证人骨肉瘤组织中ID1与血管生成和VEGF-A表达相关性.方法 收集33例...     

低氧诱导因子-1α在糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞中的表达及意义

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞(EPC)中的表达及其意义.方法 将36例糖尿病患者分为周围血管病组(A组)和无周围血管病组(B组)各18例.对照组(C组)14例为来院体检的健康人.分离培养外周血EPC,采用MTT法检测EPC增殖率,RT-PCR法检测HIF-1α的基因表达,Western blot法检测其蛋白表达,并加以比较.结果 A组和B组EPC增殖率[分别为(13.3±5.1)%和(17.7±4.8)%]低于C组(23.7±5.2)%,差异均具有统计学意义(均P<0.05),而A组低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).HIF-1α的mRNA水平由低到高分别为A组、C组和B组[其mRNA相对表达强度分别为(0.57±0.12)、(0.925±0.15)和(1.25±0.21)],差异具有统计学意义(均P<0.05).A组与B组HIF-1α蛋白表达水平均高于C组,且A组低于B组,差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 HIF-1α表达减低可能在糖尿病周围血管病的发生中起一定作用.     

低氧诱导因子-1α对毛囊细胞的作用

目的探讨外源性人低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在成纤维细胞中表达的可行性及其对毛囊周围细胞活性的影响。方法通过脂质体将含有HIF-1αcDNA的真核表达载体pcDNA3.0稳定转染成纤维细胞,应用RT-PCR及Westernblot方法检测HIF-1α在成纤维细胞中的表达,ELISA法检测转染细胞上清液中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达,RT-PCR方法检测转染后细胞中成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。将该上清加入成纤维细胞及真皮鞘细胞中,MTT法检测加入上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。结果RT-PCR及Westernblot可检测出转染后细胞中HIF-1α的表达,MTT检测加入转染上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性增强（P〈0.05）,并且该上清液VEGF的表达显著高于未转染组（P〈0.01）。转染后成纤维细胞的bFGF的mRNA表达显著高于未转染组（P〈0.01）。结论应用脂质体能够成功地将外源性人HIF-1α基因转染成纤维细胞,并进行有效表达,其表达的HIF-1α可增强细胞活性且可诱导转染细胞上清液中VEGF的表达,并增加bFGF的mRNA表达,且转染细胞上清可增强成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。推测HIF-1α通过其下游因子VEGF及bFGF促进毛囊相关细胞的活性,为HIF-1α对毛囊作用的进一步研究打下了基础。