Caspase-8在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的 研究caspase-8(胱天蛋白酶-8)在中耳胆脂瘤上皮的表达,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的作用.方法 分别采用免疫组化法和Western Blot(蛋白质印迹法)技术检测caspase-8在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况.结果 caspase-8在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达,而正常外耳道皮肤表达较弱,caspase-8在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较正常外耳道皮肤显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 胆脂瘤上皮中caspase-8表达较外耳道皮肤显著增高,其可能参与了中耳胆脂瘤上皮细胞的过度凋亡及增殖的调控.     

凋亡抑制蛋白Livin及Survivin在中耳胆脂瘤上皮的表达及意义

目的探讨凋亡抑制蛋白Livin、Survivin在中耳胆脂瘤上皮的表达及与细胞凋亡的关系。方法应用免疫组织化学二步法检测25例中耳胆脂瘤标本(实验组)及15例外耳道正常皮肤组织(对照组)中Livin及Sur-vivin的表达;采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记染色(TUNEL)技术检测Livin及Survivin在两种组织中的表达及细胞的凋亡情况。结果与正常外耳道皮肤组织相比,Livin及Survivin蛋白在胆脂瘤上皮的表达均明显下调(P<0.01),细胞凋亡显著高于正常上皮组织(P<0.01);Livin及Survivin的表达与凋亡呈负相关。结论 Livin及Survivin在中耳胆脂瘤中的表达明显下调,可能与胆脂瘤上皮细胞凋亡有关。     

中耳胆脂瘤上皮PTEN基因的表达及意义

目的探讨PTEN基因在中耳胆脂瘤形成机制中的作用。方法应用免疫组化染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测32例中耳胆脂瘤组织和10例正常外耳道皮肤组织中PTEN的表达情况。结果中耳胆脂瘤组织和正常外耳道皮肤组织均有PTENmRNA和蛋白的表达,且两组间无统计学差异(P>0.05)。结论在胆脂瘤形成过程中,PTEN的作用更趋向于维持上皮细胞的正常生理状态,而不是发生基因异常导致细胞非正常增殖。     

HGF在中耳胆脂瘤中的表达和意义

目的 研究肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)在中耳胆脂瘤上皮中的表达及与中耳胆脂瘤的血管形成的关系和对胆脂瘤侵蚀行为的影响.方法 采用免疫组织化学SP法检测HGF、微血管计数(Ⅳ型胶原蛋白染色)在34例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道组织中的表达.结果 HGF主要表达于胆脂瘤上皮层和上皮下基质细胞,在正常外耳道皮肤中仅表达于上皮基底层;胆脂瘤基质周围微血管计数均数高于正常外耳道皮肤,二者差异具有显著性(P＜0.05).结论 HGF在中耳胆脂瘤中高表达且与炎症程度呈正相关;微血管计数随着胆脂瘤基质周围炎症程度的增加而增加.HGF诱导的新生血管形成可能是中耳胆脂瘤侵蚀性行为的主要原因之一.     

Toll样受体在慢性化脓性中耳炎和中耳胆脂瘤中的差异表达及其意义

目的 检测Toll样受体2( toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在慢性化脓性中耳炎、中耳胆脂瘤中的表达,探讨其在慢性化脓性中耳炎和中耳胆脂瘤发病中的作用.方法 选取耳硬化症患者(对照组)、慢性化脓性中耳炎患者(化脓性中耳炎组)、中耳胆脂瘤患者(中耳胆脂瘤组)各30例,应用实时定量聚合酶链反应( real-time PCR)、蛋白质印迹法( Western blot)、免疫组化检测TL R2/TLR4在正常外耳道皮肤,慢性化脓性中耳炎黏膜、肉芽组织,中耳胆脂瘤患者黏膜、肉芽组织及胆脂瘤囊壁中的表达,并比较表达程度的差异.结果 ①TLR2/TLR4mRNA及蛋白质在正常外耳道皮肤,慢性化脓性中耳炎中耳黏膜、肉芽组织,胆脂瘤的中耳黏膜、肉芽组织及胆脂瘤囊壁均有表达.②TLR2/TLR4 mRNA及其蛋白质在慢性化脓性中耳炎及胆脂瘤黏膜中的表达均高于正常外耳道皮肤(P值均＜0.05),在胆脂瘤囊壁中的表达低于正常外耳道皮肤(P值均＜0.05),两组黏膜中TLR2/TLR4的表达差异无统计学意义(P值均＞0.05).③TLR2/TLR4mRNA及蛋白质在两组中耳炎肉芽组织中的表达均高于正常外耳道皮肤(P值均＜0.01),且TLR2mRNA在中耳胆脂瘤肉芽组织中的表达高于慢性化脓性中耳炎(P＜0.05).④TLR2/TLR4阳性细胞主要分布在肉芽组织中,且明显多于正常外耳道皮肤,但胆脂瘤囊壁中的阳性细胞少于正常外耳道皮肤.结论 TLR2和TLR4在正常外耳道皮肤、慢性化脓中耳炎及中耳胆脂瘤中均有表达,提示中耳具有TLR2、TLR4参与调节的固有免疫系统,但二者的差异性表达也提示其在慢性化脓性中耳炎和中耳胆脂瘤的发病中所起的作用不同.     

两种基质金属蛋白酶在胆脂瘤和中耳癌中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP)的MMP－2和MMP－9的胆脂瘤和中耳癌中的表达差异及其在骨浸润作用。方法 采用免疫组织化学方法检测36例胆脂瘤上皮，10例胆脂瘤外耳道皮肤、16例中耳癌组织及正常组织中MMP－2和MMP－9的表达。结果 ①MMP－2和MMP－9在胆脂瘤上皮染色最强。而且在上皮组织的各层细胞均有表达，基底膜染色最强。②胆脂瘤上皮中的MMP－2和MMP－9的表达明显高于其对应的外耳道皮肤和正常外耳道上皮。MMP－2阳性表达在胆脂瘤上皮中为83％，胆脂瘤外耳道上皮为50％，正常外耳道皮肤2例有微弱表达。③16例中耳鳞癌组织中，MMP－9的阳性达率为50％（8／16），MMP－2的阳性表达率为56.25%(9/16)，表达水平与肿瘤的病理分级和临床分期有关。④中耳癌组织中MMP－2的表达与MMP－9表达不致，而胆脂瘤组织中MMP－2和MMP－9的表达密切相关。结论 胆脂瘤向周围骨质侵袭的特性与中耳癌相似，MMPs家族及其抑制剂之间的平衡紊乱所致的蛋白水解酶活性增高是引起中耳胆脂瘤骨吸收的原因之一。     

慢性中耳疾病的炎性细胞

采用免疫过氧化物酶技术和单克隆抗体研究感染和非感染耳的耳道皮肤、鼓膜、胆脂瘤上皮及中耳和鼓窦肉芽组织等活检标本的淋巴细胞亚型,并探索其在不同类型中耳炎中的意义。包括辅助/诱导性 T 细胞(Th/i)、抑制/细胞毒性 T 细胞(Ts/c)的比率,自然杀伤细胞(NK)及 B 细胞的百分数。结果认为非感染外耳道皮肤、鼓膜和胆脂瘤膜淋巴细胞少,无特征性炎性反应;感染的外耳道皮肤、鼓膜、胆脂瘤膜和乳突手术后腔内皮肤的 Th/i 减少,淋巴细胞亚型比率始终较低,是长期慢性感染     

两种基质金属蛋白酶在胆脂瘤和中耳癌中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）的MMP-2和MMP-9在胆脂瘤和中耳癌中的表达差异及其在骨浸润作用。方法采用免疫组织化学方法检测36例胆脂瘤上皮,10例胆脂瘤外耳道皮肤、16例中耳癌组织及正常组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果①MMP-2和MMP-9在胆脂瘤上皮染色最强。而且在上皮组织的各层细胞均有表达,基底膜染色最强。②胆脂瘤上皮中的MMP-2和MMP-9的表达明显高于其对应的外耳道皮肤和正常外耳道上皮。MMP-2阳性表达在胆脂瘤上皮中为83%,胆脂瘤外耳道上皮为50%,正常外耳道皮肤2例有微弱表达。③16例中耳鳞癌组织中,MMP-9的阳性表达率为50%（8/16）,MMP-2的阳性表达率为56.25%（9/16）,表达水平与肿瘤的病理分级和临床分期有关。④中耳癌组织中MMP-2的表达与MMP-9表达不一致,而胆脂瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达密切相关。结论胆脂瘤向周围骨质侵袭的特性与中耳癌相似,MMPs家族及其抑制剂之间的平衡紊乱所致的蛋白水解酶活性增高是引起中耳胆脂瘤骨吸收的原因之一。     

PTEN、 P-Akt和NF-кB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt (P-Akt)及核转录因子- κB (NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K (phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)- Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用.方法 采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin - peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF- kB蛋白的表达.结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7％,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3％ (P＜ 0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0％,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7％ (P＜0.01);NF- κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3％,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0％ (P＜ 0.01).在30例中耳胆脂瘤上皮组织中,PTEN分别与P-Akt、NF-κB蛋白的表达之间呈显著负相关(P＜0.01),而P-Akt和NF- κB蛋白的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 PTEN、P-Akt和NF- κB在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用.胆脂瘤上皮中PI3K-Akt信号通路的激活可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制.     

角化细胞生长因子在中耳胆脂瘤的表达及意义

目的研究角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）在中耳胆脂瘤中的表达,探讨KGF对胆脂瘤上皮增殖能力的影响及其在中耳胆脂瘤发生、发展中的作用。方法20例胆脂瘤上皮标本及配对的正常外耳道皮肤标本制成石蜡切片,应用免疫组化SP染色法检测上述两组标本中KGF和Ki67的表达,对染色结果进行定量分析。结果KGF在胆脂瘤上皮中呈强阳性表达,且从基底层向角质层染色有逐渐增强的趋势,间质中可见散在的阳性细胞;正常外耳道皮肤标本主要表现为间质中稀疏不均的弱阳性表达,在上皮细胞不表达。胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤的KGF阳性表达率之间差异有显著性意义（P〈0.01）。在胆脂瘤上皮中KGF与Ki67表达呈正相关（r=0.609,P〈0.01）。结论KGF和Ki67表达与中耳胆脂瘤的增殖能力有高度相关性,局部炎症通过调控KGF的表达促进胆脂瘤上皮的异常增殖,其中KGF的自分泌机制可能与胆脂瘤的发生、发展密切相关。     

肿瘤坏死因子受体1在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在中耳继发性胆脂瘤上皮的表达，探讨其在胆脂瘤型中耳炎的发病机制中的作用。方法 分别采用免疫组化法和Western blot技术检测TNFR1在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况。结果 TNFR1在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达，定位于胞膜和胞质，而外耳道皮肤表达较弱甚至没有表达，TNFR1在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较外耳道皮肤显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 胆脂瘤上皮中TNFR1表达较外耳道皮肤显著增高，肿瘤坏死因子可能通过与TNFR1相结合而导致胆脂瘤上皮细胞的过度增殖及凋亡。     

MMP-9和EGFR在中耳胆脂瘤中的表达及作用

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和表皮生长因子受体(epi-dermal growth factor receptor,EGFR)在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用及相互关系。方法采用免疫组织化学技术和计算机图像定量分析法,检测MMP-9、EGFR在22例中耳胆脂瘤上皮组织、10例中耳肉芽组织及22例外耳道深部正常皮肤中的表达,分析二者在中耳胆脂瘤上皮组织的表达与骨质破坏程度的相互关系。结果 MMP-9、EGFR均表达于中耳胆脂瘤上皮组织、中耳肉芽组织及外耳道深部正常皮肤,但中耳胆脂瘤上皮组织中二者的含量显著高于中耳肉芽组织及外耳道深部正常皮肤,MMP-9在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达高于EGFR,二者的表达具有相关性,且与骨质破坏的程度有关,骨质破坏范围越广,二者的表达越高(P<0.05)。结论 MMP-9和EGFR在中耳胆脂瘤组织中的表达与中耳胆脂瘤的骨质破坏密切相关,且二者的表达与骨质破坏程度呈正比,二者之间可能存在协同作用;MMP-9在中耳胆脂瘤的骨质破坏中可能具有重要作用。     

PTEN、P-Akt和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt(P-Akt)及核转录因子-κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)-Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin-peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF-κB蛋白的表达。结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7%,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3%(P<0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0%,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7%(P<0.01);NF-κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3%,...     

肿瘤坏死因子-α在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用

目的 :研究肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)在中耳胆脂瘤组织中的表达 ,探讨其在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用。方法 :采用免疫组织化学 SABC染色法和计算机图像定量分析法 ,对 2 5例中耳胆脂瘤和 10例正常外耳道皮肤中 TNF- α的表达情况进行观察。结果 :TNF- α不仅在胆脂瘤上皮的各层细胞胞浆中 ,而且在皮下组织的炎性细胞中都有高度表达。定量分析显示胆脂瘤上皮中 TNF- α的含量显著高于外耳道皮肤 (P <0 .0 5 )。结论 :TNF-α可能是胆脂瘤引起骨质破坏的一个因素。     

中耳胆脂瘤上皮细胞增生与凋亡状态的研究

目的 :研究中耳胆脂瘤上皮细胞增生和凋亡的状态。方法 :应用免疫组化染色 SABC技术及原位凋亡细胞标记技术 (TU NEL 法 ) ,对 2 0例中耳胆脂瘤上皮组织和 10例外耳道正常上皮组织样本进行研究。结果 :在中耳胆脂瘤上皮中 ,增殖细胞核抗原 (PCNA )阳性细胞大量存在于基底细胞层、棘细胞层及颗粒细胞层 ,而在正常外耳道上皮中 PCNA阳性细胞仅存在于基底层 ;在胆脂瘤上皮中 PCNA阳性细胞率和平均光密度分别为(36 .91± 2 2 .77) %和 0 .2 4 2 7± 0 .0 5 86 ,明显高于正常外耳道上皮中的 PCNA阳性细胞率 (10 .2 5± 2 .6 5 ) %及平均光密度 (0 .1340± 0 .0 36 3) ,其差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。同时 ,在胆脂瘤上皮中 ,凋亡细胞存在于棘细胞层及颗粒细胞层 ,而外耳道正常上皮与之相似 ,但两者的凋亡率分别为 (2 7.5 0± 12 .5 0 ) %和 (9.96± 3.86 ) % ,其差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :中耳胆脂瘤上皮具有高度增生和凋亡的能力 ,并因上皮细胞的增生、分化、凋亡导致角化碎片累积而形成胆脂瘤     

核转录因子κ-Bp65在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的检测核转录因子-κBp65（nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65）在中耳胆脂瘤上皮中的表达和活化,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中NF-κBp65蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白阳性表达定位于上皮细胞核。NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中阳性表达率为63.3%,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0%（P〈0.01）。结论NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用。胆脂瘤上皮中NF-κBp65的活化可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制。     

热休克蛋白70在中耳胆脂瘤中的异常表达

目的研究热休克蛋白(HSP70)在中耳胆脂瘤组织中的异常表达,探讨HSP70与胆脂瘤的关系及其作用.方法采用免疫组化SABC染色法、计算机图像定量分析法,对25例中耳胆脂瘤和10例正常外耳道皮肤中HSP70的表达情况进行观察.结果在25例胆脂瘤上皮组织的全层及上皮下结缔组织中炎性细胞和成纤维细胞的胞浆中均有HSP70强表达,部分核中也有强表达.10例正常外耳道皮肤中HSP70为弱表达.计算机图象分析仪定量分析,结果显示胆脂瘤上皮中HSP70阳性细胞的平均光密度为0.3309±0.0070,正常外耳道上皮为0.1798±0.0020,胆脂瘤上皮中HSP70的含量显著高于外耳道皮肤(P＜0.001).结论HSP70可能参与了胆脂瘤的形成和发展.     

转化生长因子α在中耳胆脂瘤组织中的表达及意义

目的 :研究转化生长因子 (TGFα)在中耳胆脂瘤中的表达 ,探讨TGFα在胆脂瘤上皮细胞增生中的可能作用。方法 :31例胆脂瘤上皮标本及 10例正常外耳道皮肤组织标本制成石蜡切片 ,应用免疫组化 (S P)染色法检测上述两种标本中TGFα的表达情况 ,并采用多媒体彩色图文分析系统 ,对染色结果进行定量分析。结果 :TGFα阳性表达定位于胞浆 ,胆脂瘤上皮组织均呈中等阳性或强阳性反应 ,2 1例标本呈现从基底层向角质层染色逐渐增强的趋势 ,皮下结缔组织中可见散在的阳性细胞 ,主要为成纤维细胞、单核 巨噬细胞、浆细胞 ,少数为淋巴细胞 ;外耳道皮肤组织的阳性反应集中在表皮层 ,其中 8例标本表现为表皮全层稀疏均一的弱阳性表达。胆脂瘤上皮和正常外耳道表皮的TGFα积分吸光度分别为 2 .4 31± 0 .5 87及 1.4 6 3± 0 .14 7,两者差异有显著性意义(t’ =1.95 ,P <0 .0 5 )。结论 :胆脂瘤组织中TGFα的含量较正常皮肤组织显著增高 ,TGFα可能以自分泌和旁分泌机制参与胆脂瘤上皮增生的调节 ,局部炎症反应可能构成特殊微环境 ,诱发并维持胆脂瘤上皮的高度增生     

晚期糖基化终末产物受体与核因子-κβ在中耳胆脂瘤中的表达

目的研究中耳胆脂瘤中核因子-κβ(NF-κβ)与晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达,探究上皮炎症反应在胆脂瘤的发病机制中的作用,寻找可能的中耳胆脂瘤干预治疗措施。方法中耳胆脂瘤手术中收集中耳胆脂瘤标本23例及正常外耳道皮肤组织18例,采用免疫组化法检验两种标本中NF-κβ和RAGE表达分布。结果胆脂瘤上皮组织中NF-κβ表达强度显著高于正常外耳道皮肤组织,两者NF-κβ阳性平均光密度分别为0.442±0.060及0.293±0.047(t=8.654,P<0.01);胆脂瘤上皮组织中RAGE表达强度显著高于正常外耳道皮肤组织,两者RAGE阳性平均光密度分别0.175±0.017及0.133±0.013(t=8.516,p<0.01)。胆脂瘤上皮NF-κβ与RAGE表达具有弱相关性r=0.546(P=0.034)。结论 NF-κβ与RAGE在中耳胆脂瘤上皮中表达增加,可能在胆脂瘤的发生和持续发展中起重要作用。调控NF-κβ与RAGE信号传导通路可能是中耳胆脂瘤治疗干预的有效靶点之一。     

肿瘤坏死因子-α在中耳胆脂瘤中的表达及其意义

目的 :探讨肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)在中耳胆脂瘤中的表达和引起骨吸收的作用机制。方法 :应用 TNF-α单克隆抗体对 18例中耳胆脂瘤组织和 4例正常外耳道皮肤 ,4例面部皮肤和鼓膜进行免疫组化测定。结果 :TNF-α在胆脂瘤组织上皮及上皮下结缔组织的表达较正常外耳道皮肤及鼓膜的染色强的多。结论 :TNF-α细胞因子在中耳胆脂瘤组织中有较高表达 ,这种细胞因子可能通过两条途径引起骨质吸收 :直接途径 ,TNF-α作为自分泌调节因子引起破骨性骨吸收 ;间接途径 ,作为中间信使激活炎性细胞释放一系列生物酶引起骨组织脱钙 ,骨基质和骨蛋白溶解 ,最终导致骨吸收