急性疼痛应激状态下SD大鼠睾丸内膜联蛋白A5的表达变化

目的 观察急性疼痛应激状态下,睾丸中annexin 5表达变化.方法 福尔马林注射建立急性疼痛模型,分别在注射后1 h,6 h,24 h,72 h取睾丸,免疫组织化学和western b10t分析annexin 5免疫定位和蛋向表达,荧光定量PCR方法检测annexin 5 mRNA水平变化.结果 免疫组化显示,annexin 5在急性应激组和对照组中定位在间质细胞、支持细胞,应激组与对照组相比定位无明显的变化.Westem b1ot分析发现疼痛应激1 h和6 h后,annexin 5的表达分别降低16.9%和12.8%,而在疼痛应激24 h和72 h后,annexin 5的表达分别升高33.7%和25%.组间比较发现,在l h和24 h时annexjn 5表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05).荧光定量方法检测annexin 5 mRNA水平变化,发现疼痛应激1h和6 h annexin 5 mRNA相对含量降低,随后在24 h和72 h升高,但各组间差异均无统计学意义.结论 急性疼痛应激主要影响annexin 5蛋白的表达,而不影响annexin 5的转录.Annexin 5作为睾丸应激因子之一可能介导了应激对生殖功能的抑制作用.     

Annexin5对雄性SD大鼠生殖相关指标和睾酮分泌的影响

目的 探讨膜联蚩白5(annexin5)对雄性SD大鼠体重、睾丸系数、附睾系数、精子相对计数和睾酮水平的影响.方法 给雄性SD大鼠腹腔注射3个不同剂量(7.5μg/kg、15μg/kg、30μg/kg)的annexin5,对照组腹腔汴射等晕的pH 8.0 Tris-HCI,1次/d,连续20d.分别称重对照组和实验组SD大鼠体重、睾丸、附睾,并对附睾尾进行精子计数.HE染色观察睾丸组织结构.运用化学发光法检测对照组和各实验组SD大鼠血清中睾酮浓度.结果 与对照组相比,15 μg/kg实验组大鼠附睾系数与精子相对计数均显著提高,分别提高了12.5%(131.8±9.6vs 117.2±5.9)(P<0.01)和31.4%(36.8±5.6vs 31.7±5.3)(P<0.05);其它剂量组与对照纰相比差异均无统计学意义(P>0.05).HE染色显示各剂量实验组与对照组相比,睾丸的形态结构没有发牛明显改变.7.5 μg/kg组和15 μg/kg组大鼠血清睾酮含量显著高十对照组,分别提高了35.5%(36.33±3.89vs26.82±3.75)(P<0.01)和82.8%(49.04±5.17vs26.82±3.75)(P<0.01),30 μg/kg组大鼠睾酮含量虽也有升高,但与对照组比较,结果无统计学意义(P>0.05).结论 腹腔注射annexin5能影响大鼠睾丸生精、附睾功能及睾酮水平,并与剂量有关.     

GnRH抑制剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD蛋白表达水平的影响

目的 探讨西曲瑞克(GnRHant)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3 β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响.方法 体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,用不同终浓度的GnRHant(分别为10-6、10-7和10-8mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达情况.结果 间质细胞经GnRHant处理后,Western Blot结果显示,当GnRHant的终浓度为10-6mol/L和10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5的表达量都显著地降低,分别降低了62.35%和40.82%,两者比较,差异具有统计学意义(P<0.05):当GnRHant的终浓度为10-6mol/L和10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达量也降低,分别降低了53.33%和23.85%(P分别<0.01和<0.05),当GnRHant的终浓度为10-8mol/L时,与对照组比较,差异均没有统计学意义(P>0.05).结论 GnRH抑制剂在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5和3β-HSD的表达具有一定调控作用.     

Annexin 5刺激大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白的研究

目的:研究annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,1 nmol/L的annexin 5处理Leydig细胞24 h,提取细胞蛋白用二维电泳分离蛋白并进行比较。选择与对照组有明显差异表达的蛋白点,进行质谱分析。结果:获得了分辨率和重复性均很好的差异蛋白图谱。筛选出的显著差异表达的50个蛋白点,共有36个蛋白点被成功鉴定,其中annexin 5处理组中高表达的为23个,低表达的为13个。结论:初步建立了annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异蛋白谱,筛选并鉴定出的这些蛋白质可能是影响睾丸Leydig细胞合成睾酮过程中的关键蛋白,研究结果为阐明annexin 5调控大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的具体机制奠定了基础。     

右美托咪定对丙泊酚增强创伤后应激障碍大鼠恐惧记忆效应的影响

目的:评价右美托咪定对丙泊酚增强创伤后应激障碍(PTSD)大鼠恐惧记忆效应的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠220只,体重300~400 g,12~16周龄,行条件性恐惧记忆训练,建立PTSD模型。取120只大鼠,采用随机数字表法分为6组( n＝20)：对照组(C组)、PTSD组、丙泊酚组(P1组)、丙泊...     

大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响

目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得具有活性的大鼠annexin5重组蛋白,并观察其对人精子运动功能的影响。方法:化学合成法合成大鼠annexin5的编码基因序列,将该基因插入组氨酸标签(HIS)融合表达载体pET28a中,在T7启动子控制下,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HIS融合蛋白;以亲和层析法纯化表达融合蛋白并用活化部分凝血激酶时间(APTT)交叉试验法验证该蛋白的抗凝血活性。15例供精者的精液标本一式2份,1份加重组蛋白annexin5(终浓度为10-8mol/L),1份做对照,分别处理20和60min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力、活动率;处理20min后,做精子爬高试验。结果:合成的目的基因产物长度为974bp,插入序列与annexin5的序列完全一致。在IPTG诱导下,BL21(DE3)重组菌高效表达出相对分子质量为36000的融合蛋白,经纯化获得95%纯度的融合蛋白,纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。Annexin5处理20min后精子活动率提高了21%(P<0.05),活力提高了40%(P<0.01),而处理60min后精子活力、活动率与对照组比较均无显著性差异;精子爬高高度与对照组比较具有极显著差异[(37.84±6.35)mmvs(49.5±12.27)mm,P<0.01]。结论:成功构建了大鼠annexin5重组表达载体并在大肠埃希菌中高效表达annexin5蛋白,且该蛋白体外处理精子20min时提高精子的运动能力。     

慢性束缚应激小鼠海马神经元5-羟色胺1A受体表达的变化

目的 探讨慢性束缚应激小鼠海马神经元5-羟色胺1A(5-HT1A)受体表达的变化.方法 BALB/c种系雄性小鼠40只,6～9月龄,体重25～35 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=20):正常对照组(C组)和慢性束缚应激组(S组).S组慢性束缚应激模型制备成功后1d,依次进行悬尾实验、明暗穿箱实验和水迷宫实验,悬尾实验中记录静止时间,明暗穿箱实验中记录明亮箱中停留时间,水迷宫实验中记录逃避潜伏期和穿过平台次数.然后处死小鼠,取海马组织,采用免疫组化法测定CA1区和CA3区神经元5-HT1A受体的表达.结果 与C组比较,S组静止时间和逃避潜伏期延长,明亮箱中停留时间缩短,穿过平台次数减少,海马神经元5-HT1A受体表达下调(P＜0.05或O.01).结论 慢性束缚应激诱发小鼠认知功能障碍的机制与下调海马神经元5-HT1A受体表达有关.     

Ces5a基因在大鼠睾丸中的表达

目的:分析羧酸酯酶5a (Ces5a)基因在大鼠睾丸发育过程中的表达情况。方法:选取3组不同窝别出生后2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65 d 21个时间点的大鼠,采用RT-PCR、Western印迹、免疫组化、HE染色分别检测大鼠睾丸组织中Ces5a基因在mRNA转录水平和蛋白表达量及定位。结果:①Ces5a mRNA在大鼠出生后的第2～65天均有表达,大鼠出生后2～12 d Ces5a mRNA的表达量较低;与2～12 d相比,14～16 d的表达量下降至最低水平(P0.05);与14～16 d相比,20～35 d该表达量有显著升高(P0.05);与20～35 d相比,40～65 d的表达量有显著升高,达到高峰(P0.05)。②Ces5a蛋白在大鼠出生后第2～65天均有表达,在大鼠出生后2～12 d Ces5a蛋白的表达量较低;与2～12 d相比,14～16 d Ces5a蛋白的表达量无显著变化(P0.05);与14～16 d相比,20～35 d的表达量有显著升高(P0.05);与20～35 d相比,40～65 d的表达量无显著变化(P0.05)。③Ces5a蛋白表达于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。结论:①Ces5a基因可能参与了大鼠精原细胞增殖过程及减数分裂过程;②Ces5a基因可能在圆形精子发生和精子变形过程中发挥特殊的作用。     

低氧对大鼠睾丸组织死亡受体5和FLIP抑制蛋白表达的影响

目的:检测常氧与模拟海拔4 000 m低氧条件下大鼠睾丸组织中死亡受体5(DR5)和FLIP抑制蛋白(c-FLIP)表达水平,以及c-FLIP在睾丸组织中的分布。方法:40只10周龄雄性SD大鼠随机分为常氧组,低氧3、15、30 d组。低氧各组分别置模拟海拔4 000 m低压舱中减压3、15、30 d;常氧组在平原(海拔300 m)喂养;减压结束后取睾丸组织,Western印迹检测睾丸组织中DR5与c-FLIP蛋白表达,免疫荧光法检测睾丸组织中c-FLIP分布。结果:低氧3、15、30 d组大鼠睾丸DR5表达量分别为2.04±0.11、1.97±0.12、2.34±0.11,均显著高于常氧组DR5的表达(1.78±0.09,P均<0.05)。低氧15、30 d组大鼠睾丸c-FLIP表达量分别为0.87±0.03、0.74±0.07,均显著低于常氧组c-FLIP的表达(1.03±0.02,P均<0.05)。结论:模拟海拔4 000 m低氧促进睾丸组织凋亡蛋白DR5表达,抑制睾丸组织抗凋亡蛋白c-FLIP表达。     

氯胺酮对应激大鼠脑组织不同区域c-fos mRNA表达的影响

目的检测氯胺酮对应激大鼠c-fos基因表达的影响,从基因水平探讨药物防治应激反应的分子机制。方法21只Wistar大鼠随机分成3组对照组(C组)、单纯电刺激组(S组)腹腔分别注入生理盐水2ml、氯胺酮处理组腹腔分别注入氯胺酮lOOmg·kg     

尿道下裂仔鼠阴茎蛋白质组学分析及膜联蛋白A3的表达变化研究

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎期暴露对仔鼠阴茎组织蛋白表达谱的影响,分离并鉴定差异表达蛋白质。验证膜联蛋白A3在仔鼠阴茎中的表达变化,初步探讨其在尿道下裂发生中的作用。方法:SPF级SD孕鼠20只,妊娠14～18d(GD14～GD18),随机均分为2组,实验组给予DBP按800mg/kg染毒孕鼠,对照组按大豆油5ml/kg,2组孕鼠均每天灌胃1次连续5d。出生后3d取出实验组尿道下裂雄性仔鼠阴茎和对照组正常雄性仔鼠阴茎,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定,并运用Western印迹和免疫组化法分析膜联蛋白A3在仔鼠阴茎中的表达变化。结果:共筛选出31个差异表达蛋白,其中17个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,包括丙酮酸激酶M2、α烯醇化酶、膜联蛋白A3等。膜联蛋白A3相对表达量在尿道下裂组为1.851±0.014(n=10),正常对照组为2.603±0.012(n=10),两组的差异具有显著性(P<0.05)。膜联蛋白A3主要定位于仔鼠尿道上皮细胞。结论:运用蛋白质组学方法,建立了DBP孕期暴露致尿道下裂雄性仔鼠与正常仔鼠阴茎蛋白质差异表达谱系。膜联蛋白A3的表达变化可能在尿道下裂尿道沟融合障碍过程中发挥重要作用。     

膜联蛋白5对人精子膜及DNA完整性的影响

目的:研究膜联蛋白5(Annexin5)对人精子细胞膜及DNA完整性的影响。方法:①精子膜完整性测定:按精子浓度>20×106/ml;活率>60%选取标准收集精液标本53份,分为3组,实验组为47.5μl精液中加入2.5μl10-6mol/L的Annexin5;阴性对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl1mol/L的Tris-HCl(pH8.0,25℃);空白对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl0.01mol/L的PBS(pH7.4),作用20min后,通过精子低渗肿胀试验(HOS)检测精子膜的完整性。②DNA完整性测定:同方法①,3组实验标本作用20min后,每份标本加入2.5μl0.02mol/L的H2O2,作用60min,通过吖啶橙(AO)荧光染色检测精子核DNA的完整性。结果:An-nexin5处理20min后低渗肿胀精子百分率与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(66.17±12.02)%vs(58.13±13.08)%,P<0.01;(66.17±12.02)%vs(59.94±11.91)%,P<0.01];空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。加入H2O2后,Annexin5组的DNA碎片指数与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(6.39±1.07)%vs(11.16±1.16)%,P<0.01;(6.39±1.07)%vs(10.86±1.05)%,P<0.01],空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。结论:Annexin5蛋白能在体外提高低渗肿胀精子百分率,对精子膜的完整性具有保护作用,同时对HO作用引起的精子核DNA破坏起保护作用。     

地氟醚对内毒素诱导大鼠肺组织氧化应激反应的影响

目的探讨地氟醚对内毒素（LPS）诱导大鼠肺组织氧化应激反应的影响。方法雄性Wistar大鼠48只,体重200～290 g,随机分为4组（n=12）,对照组（C组）股静脉注射生理盐水1.2ml后机械通气4 h;LPS组（L组）股静脉注射LPS 5mg/kg后机械通气4 h;地氟醚1.0MAC组（D1）和地氟醚1.5 MAC组（D2）组：股静脉注射LPS 5 mg/kg后机械通气,分别吸入地氟醚1.0 MAC和1.5 MAC 4 h,机械通气4 h后处死大鼠,测定肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、一氧化氮（NO）含量、总一氧化氮合酶（tNOS）活性、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、iNOS mRNA和iNOS表达水平。结果与C组比较,L组SOD活性下降,MDA含量、NO含量、tNOS活性、iNOS活性、iNOS mRNA和iNOS表达升高（P〈0.01）;与L组比较,D1组上述各项指标差异无统计学意义（P〉0.05）,D2组SOD活性下降,MDA含量、iNOS活性、iNOS mRNA和iNOS表达升高（P〈0.05）;与D1组比较,D2组SOD活性下降,MDA含量、iNOS活性、iNOS mRNA和iNOS表达升高（P〈0.05）。结论吸入地氟醚1.5 MAC 4 h可加重LPS诱导大鼠肺组织氧化应激反应,吸入地氟醚1.0 MAC对其无影响。     

压力接种训练对改善社区留守老年糖尿病患者低血糖恐惧的效果

目的 探讨压力接种训练在社区留守老年糖尿病患者低血糖恐惧中的应用效果。 方法 将长春市6个社区中存在低血糖恐惧的留守老年糖尿病患者126例随机分为对照组与观察组各63例,对照组给予常规心理干预,观察组在常规心理干预的基础上实施压力接种训练。比较两组干预前及干预8周后的低血糖恐惧评分及血糖水平。 结果 干预后观察组低血糖恐惧得分及空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白显著低于对照组（均P＜0.01）。 结论 压力接种训练可降低社区留守老年糖尿病患者低血糖恐惧,改善患者血糖水平。     

Aprotinin reduces oxidative stress induced by pneumoperitoneum in rats

Background

Ischemia–reperfusion injury induced by pneumoperitoneum is a well-studied entity, which increases oxidative stress during laparoscopic operations. The reported anti-inflammatory action of aprotinin was measured in a pneumoperitoneum model in rats for the first time in this study.

Materials and methods

A total of 60 male Albino Wistar rats were used in our protocol. Prolonged pneumoperitoneum (4 h) was applied, causing splanchnic ischemia and a period of reperfusion with a duration of 60 or 180 min followed. Several cytokines and markers of oxidative stress were measured in liver, small intestine, and lungs to compare the aprotinin group with the control group. Tissue inflammation was also evaluated and compared between groups using a five-scaled histopathologic score.

Results

In aprotinin group values of biochemical markers (tumor necrosis factor α, interleukin 6, endothelin 1, C reactive protein, pro-oxidant–antioxidant balance, and carbonyl proteins) were lower in all tissues studied. Statistical significance was greater in liver and lungs (P < 0.05). Histopathologic examination revealed significant difference between control and aprotinin groups in all tissues examined. Aprotinin groups showed mild to moderate lesions, while in control groups severe to very severe inflammation was present. Aprotinin subgroup with prolonged reperfusion period (180 min) showed milder lesions in all tissues than the rest of the groups.

Conclusions

Aprotinin reduced inflammatory response and oxidative stress induced by pneumoperitoneum in liver, small intestine, and lungs.     

Expression profile and distribution of Annexin A1, A2 and A5 in human semen

Annexins (ANXAs) have been identified in different seminal components mainly by proteomic methods. The presence and distribution of Annexin A1, A2 and A5 (ANXA1, ANXA2, ANXA5) in human semen was analysed and the corresponding mRNAs studied in spermatozoa. All three ANXAs were present in prostasomes and spermatozoa, but only ANXA1 in prostasomes‐free seminal plasma. Immunofluorescence showed ANXA1 and ANXA5 in the sperm head, mid‐piece and flagellum. The amount of mRNAs corresponding to ANXA1 and A2 decreased with increasing levels of the corresponding proteins indicating a probable regulation of their expression at the translational level during spermatogenesis. Additionally, DNA fragmentation was assessed by the sperm chromatin dispersion test. Lower amounts of ANXA1 and A2 with higher levels of the corresponding mRNAs were noted in poor quality semen samples. ANXA5 was detected in spermatozoa from all semen samples, but no particular trend was noted. The corresponding mRNA were detected both in excellent and poor quality semen samples. Results showed that ANXA1 and A2 expressions appear to be related with DNA fragmentation suggesting their possible use as new biomarkers for sperm DNA quality. ANXA5’s natural presence in spermatozoa suggest that revision of high‐quality sperm selection by binding to this protein is needed.     

Influence of selenium induced oxidative stress on spermatogenesis and lactate dehydrogenase-X in mice testis

Aim: To evaluate the effect of oxidative stress on the spermatogenesis and lactate dehydrogenase-X (LDH-X) activity in mouse testis. Methods: For creating different levels of oxidative stress in mice, three selenium (Se) level diets were fed in separate groups for 8 weeks. Group 1 animals were fed yeast-based Se-deficient (0.02 ppm) diet. Group 2 and Group 3 animals were fed with the same diet supplemented with 0.2 ppm and 1 ppm Se as sodium selenite, respectively. After 8 weeks, biochemical and histopathological observations of the testis were carried out. LDH-X levels in the testis were analyzed by western immunoblot and ELISA. Results: A significant decrease in testis Se level was observed in Group 1 animals, whereas it was enhanced in Group 3 as compared to Group 2. The glutathione peroxidase (GSH-Px) activity was significantly reduced in both the liver and testis in Group 1, but not in Group 2 and 3. A significant increase in the testis glutathione-S-transferase (GST) activity was observed in Group 1,whereas no significant change was seen in Groups 2 and 3. Histological analysis of testis revealed a normal structure in Group 2. A significant decrease in the germ cell population in Group 1 was observed as compared to Group 2 with the spermatids and mature sperm affected the most. Decrease in the lumen size was also observed. In the Se-excess group (Group 3), displacement of germ cell population was observed. Further, a decrease in the LDH-X level in testis was observed in Group 1. Conclusion: Excessive oxidative stress in the Se deficient group, as indicated by changes in the GSH-Px/GST activity, affects the spermatogenic process with a reduction in mature sperm and in turn the LDH-X level. (Asian J Androl 2004 Sep; 6: 227-232)     

射线损伤对睾丸Claudin-11 mRNA表达的影响

目的:Claudin-11为支持细胞紧密连接的组分,在构建血睾屏障及维持生精上皮空间构象中呈现重要作用。本研究拟通过射线局部照射致睾丸氧化应激,观察Claudin-11转录水平变化,探讨氧化应激损伤精子发生的作用机制。方法:48只雄性昆明小鼠随机分配至A、B、C、D 4组,每组12只,A组空白对照,B、C、D 3组分别以2、6、10 Gy剂量60Co-γ射线局部照射实验动物下腹部1次,于4周后处死,测定实验小鼠体重及双睾丸重量;HE染色观察睾丸组织学变化;酶联免疫法检测血清性激素水平;实时荧光PCR监测睾丸组织内抑制素βB及Claudin-11转录水平变化。结果:不同剂量射线致睾丸氧化应激损伤后睾丸重量,A组为(182.9±8.43)mg,B组为(129.4±10.81)mg,C组为(87.5±16.83)mg,D组为(56.1±12.36)mg,呈下降趋势,与A组相比,差异有显著性(P<0.05);睾丸指数A组为(4.28±0.31)mg/g,B组为(3.39±0.57)mg/g,C组为(2.46±0.46)mg/g,D组为(1.63±0.44)mg/g,下降更为明显,与A组相比,差异有显著性(P<0.01);组织学分析示,与A组相比,受射线照射3组生精小管分化指数(TDI)下降明显(P<0.01),生精小管直径减小,生精上皮高度显著降低并层次紊乱。血清FSH,A组为(5.77±1.62)IU/L,B组为(6.74±1.95)IU/L,C组为(8.41±2.44)IU/L,D组为(10.93±3.16)IU/L,逐渐升高,D组较A组升高1.9倍。伴随照射睾丸射线剂量增加,组织内抑制素βB mRNA含量下降,Clau-din11转录水平呈现增高趋势,C、D两组Claudin-11 mRNA水平高于正常对照A组(P均<0.01)。结论:射线局部照射致睾丸氧化应激,组织内抑制素βB mRNA降低、血清FSH升高,支持细胞合成及分泌功能受损;同时,睾丸组织Claudin-11表达量则增加。增加的紧密连接组分同升高的FSH致使血睾屏障重建周期延长,生精上皮内处于减数分裂的精母细胞数量减少,导致不育发生。