泰泽病原体研究现状

泰泽病原体(Tyzzer’s organism或Bacillus piliformis或Clostridium piliformis)是一种带鞭毛、菌毛、芽胞，专营细胞内寄生的革兰阴性杆菌。该菌广泛存在于实验动物、家禽、家畜、宠物及非人灵长类，引起动物的出血坏死性肠炎和粟粒状肝坏死。对人的潜在威胁已经引起了人们的关注。由于不能在无活细胞的人工培养基上生长、繁殖和自溶性，导致目前对该菌的生物学特性、致病机理、遗传学、诊断和检测方法以及泰泽病的预防始终没有突破性进展。本文就泰泽病原体的生物学特性、感染和传播、致病机理和病理变化等方面作一个简要的综述。     

反向斑点杂交检测泰泽病原体

目的 建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体（Tyzzer’s organism）的反向斑点杂交方法（reverse dot blot,RDB）.方法 根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测.结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5 ng/μL.对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.59%（6/79）;与IFA一致性为92.4%（73/79）,IFA阳性率是0%.结论 建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法.     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

反向斑点杂交应用于泰泽病原体检测的研究

【摘要】目的 建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer)的反向斑点杂交方法（Reverse dot blot, RDB）。方法 根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测。结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5ng/µl。对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.95%（6/79）;与IFA一致性为92.4%（73/79）,IFA阳性率是0%。结论 建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备和鉴定

以自由合成的黄曲霉毒素Ｂ１－人血清白蛋白（ＡＦＴＢ１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ１单克隆抗体（ＡＦＴＢ１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为１Ｂ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱产生含特异性抗体的腹水。     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的 研制抗腺病毒载体(Adv)表面蛋白的单克隆抗体(McAb).方法 将Adv以Al(OH)3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠.采用细胞融合技术制备抗Adv McAb;采用ELISA、免疫细胞化学及Western blot法对McAb进行筛选与鉴定.结果 共获得6株可稳定分泌特异性McAb的细胞(A4H11、A8C7、F1H5、G1D2、G4E3、H2G8),其染色体数目为102～106条,所分泌McAb均属IgG1亚类,持续3个月适应培养仍能保持其稳定的抗体分泌能力.腹水抗体的ELISA效价在1∶106～1∶108之间;Western blot结果显示6株McAb均与来自腺病毒载体及野生3、5、7型腺病毒抗原提取物中分子量约为114 kD的多肽反应,据此推测它们均是抗ADV-TK六邻体蛋白的McAb.结论 成功制备出6株抗腺病毒载体六邻体单克隆抗体,为腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的临床前研究提供物质基础.     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

心钠素单克隆抗体的制备及鉴定

将心房肽Ⅲ(APⅢ)与牛血清白蛋白(BSA)偶联成大分子复合物,免疫BALB/C小鼠,制备出三株分泌心房肽Ⅲ单克隆抗体(APⅢ-McAb),行亚类鉴定为IgG_1型,琼脂双向扩散与BSA未出现沉淀线。应用APⅢ-McAb制备的亲和层析柱对心钠素有很高的亲和力,其洗脱峰管,有明显的降压作用。     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

用国人肝癌细胞免疫BALB/c鼠,经三次细胞融合、反复筛选及克隆化,得到了15株杂交瘤;又经正常肝组织及肝癌细胞吸收试验,进一步选出两株杂交瘤。它们分别能持续稳定地分泌特异性抗人肝癌单克隆抗体A-QGY_1和A-QGY_2。此两株单克隆抗体只与体外培养或患者组织中的肝癌细胞产生反应,而不与正常成人和胎儿肝组织及其他多种正常或肿瘤组织发生反应,与乙肝病毒抗原及甲胎蛋白、癌胚抗原等也无免疫交叉反应。     

抗人中性粒细胞单克隆抗体的筛选、鉴定和抑制调理吞噬活性的检测

用淋巴细胞分离液梯度离心法,自健康人血液中分离出中性粒细胞,作为颗粒抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗细胞膜单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞。用调理吞噬抑制试验,初步筛选出1株分泌抑制补体介导的吞噬功能的单抗杂交瘤细胞。单抗亚类检定结果为IgG_(2a)。     

抗RalB单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备抗Ras相关蛋白RalB的单克隆抗体(McAb),探讨RalB蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究RalB功能奠定基础。方法以纯化的原核表达RalB蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗RalB蛋白的McAb的杂交瘤细胞株。通过免疫组织化学方法和Western-blot方法分别对RalB在组织中的表达及特异性进行鉴定。结果获得2株能高效分泌特异性McAb的抗RalB的杂交瘤细胞系F001,F002,其免疫球蛋白亚类均为IgG1。免疫组织化学实验结果表明RalB定位于肝癌细胞的细胞膜,Western-blot显示RalB在不同的肝癌细胞及正常肝细胞中均有表达。结论成功获得抗RalB的特异性的单克隆抗体,为进一步研究RalB与肿瘤的相关功能研究创造了条件。     

单克隆抗体在肾移植免疫抑制治疗中的应用进展

近年来对免疫应答机制和同种异体移植物排斥方面的认识不断深入,使得肾移植免疫抑制有了创新和发展。单克隆抗体作为一种新型免疫抑制剂,在治疗和预防肾移植急性排斥方面取得了较好疗效。Ⅲ期临床试验中已经证实了一些单克隆抗体在预防急性排斥方面的效果,而且已成为免疫抑制治疗方案的一部分;另外一些现在正在试验,而且已经显示在免疫抑制方面的潜能,这些单克隆抗体有望成为促进器官移植特异性抗原耐受的有效制品。     

抗人C1q单克隆抗体检测方法——C1q-ELISA的建立

为检测抗人C1q单克隆抗体,我们建立了固相C1q-ELISA。经取代试验、阻断试验及交叉试验证明本法具有特异性;同时用C1q-ELISA及双向免疫扩散试验检测15份鼠抗人C1q血清抗体滴度,表明C1q-ELISA法较双向免疫扩散法高20156倍,用6份血清试验批内及批间的变异系数范围,分别为1.8～6.5％及6.2～16.5％,说明有较好的重现性。因而,本法适用于杂交瘤细胞上清中抗人C1q单克隆抗体的检测。     

钩端螺旋体澳洲群群特异性McAb的建立、鉴定及群特异性抗原检测

作者成功地获得4株分泌抗澳洲群钩瑞螺旋体的单克隆抗体(McAb)杂交瘤。其中2E_1株能与所选澳洲群的11个型的钩体都发生凝集反应,而不与澳洲群外的20群22个型的钩体、非致病性Patot Ⅰ株钩体和伊利尼细螺旋体3055株发生凝集反应。由此表明,2E_1 McAb具有澳洲群钩体的群特异性。用SDS-PAGE、免疫印迹法对澳洲型620株、赖型601株、七日热型156株、Patoc Ⅰ株及3055株外膜蛋白中McAb识别的抗原成分进行检测,结果2E_1 McAb能特异地识别澳洲型620株34kd外膜蛋白区带。其余3株McAb具有澳洲群钩体部分群特异性。