低温春化对菘蓝体内碳氮代谢的影响

目的:探索菘蓝在低温春化过程中碳、氮代谢的变化.方法:以云南菘蓝和北京菘蓝6叶龄幼苗为实验材料,4℃条件下进行低温处理25 d,并测定碳氮代谢相关指标.结果:低温春化使菘蓝体内的可溶性糖、还原糖、可溶性蛋白质含量呈上升趋势,春化完成时达到最大值,然而低温春化使菘蓝体内的淀粉、全氮含量呈下降趋势,春化完成时降至最低.结论:低温春化过程中,高的C/N值才能促进菘蓝春化.     

菘蓝不同种质生长特性及其与单株产量的相关性分析

目的:通过对菘蓝种质生长特性及其与单株产量相关性进行分析,明确构成菘蓝根及叶产量的关键性状,以期为菘蓝高产栽培及育种提供理论依据.方法:采用田间小区试验,定期采样测定,结合相关及通径分析方法对菘蓝种质主要形态学性状与单株产量的关系进行统计分析.结果:菘蓝种质生长特性基本趋于一致;以根长、单株叶片数对单株产量影响较大;各种质叶及根部产量存在一定差异.结论:对菘蓝种质进行丰产选育时,应重点考虑根长及单株叶片数,同时兼顾对叶长较长和叶宽较窄株系的选择.     

菘蓝春化机理的初步研究

目的　探明菘蓝春化作用的机理 ,寻找预防菘蓝提早开花的有效方法。方法　将萌动的菘蓝种子和菘蓝幼苗分别低温处理 ,观察菘蓝生长后期的抽薹情况 ;用 ABA浸泡菘蓝种子后再进行低温春化 ,研究ABA浸种处理对菘蓝的萌发及后期抽薹开花的影响 ;用 ABA叶面喷施已通过春化作用的菘蓝幼苗 ,观测ABA对已春化菘蓝后期抽薹的抑制作用。结果　菘蓝可通过种子或幼苗进行春化 ,春化效果与春化时间在一定范围内呈正相关系 ;用低浓度的 ABA浸泡菘蓝种子对其发芽率无显著影响 ,且对菘蓝的后期春化无显著的抑制作用 ;用 ABA喷施已通过春化作用的菘蓝幼苗 ,可在一定程度上抑制菘蓝提前抽薹开花。结论　菘蓝属于种子和绿体春化类型 ;用 ABA喷施已春化的菘蓝幼苗 ,可以预防菘蓝提前抽薹开花。     

四倍体菘蓝基因组DNA甲基化的甲基化敏感扩增多态性分析

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式.方法 采用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析.结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1733条清晰的条带.二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05％,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70％.检测到83个(4.86％) CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个(2.13％)位点发生了超甲基化,36个(2.08％)位点发生了去甲基化.结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变.     

氮素形态对菘蓝氮代谢、光合作用及生长的影响

目的:研究氮素形态对菘蓝生长、相关酶活性及光合特性的影响,为菘蓝氮肥的合理施用提供一定依据.方法:采用砂培方法栽培菘蓝,测定同一氮素水平不同氮素形态处理下,菘蓝生物量、硝酸还原酶(NR)和谷氨酰胺合成酶(GS)活性及光合相关参数.结果:菘蓝生物量随铵硝比的降低先增加后下降,全铵营养(NH_4~+-N/NO_3~--N=100:0)下最小,当NH_4~+-N/NO_3~--N为50:50时最大;提高硝态氮的比例,菘蓝叶片中硝酸还原酶(NR)和谷氨酰胺合成酶(GS)活性呈现先升后降的抛物线状变化规律;铵硝比为75:25时,菘蓝净光合速率最大,全铵营养下最低.结论:适量增硝有利于促进菘蓝的生长、提高相关酶活性和净光合速率.     

转双价抗虫基因Bt-CpTI提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因CrylA(c)和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性.方法 构建了以CaMV 35S为启动子,新霉素磷酸转移酶(Npt-Ⅱ)为选择标记,带有CrylA(c)基因和CpTI基因的植物表达载体pGBI121S4ABC并转入根癌农杆菌LBA4404.采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝.转基因再生植株经PCR和Southern杂交检测,并进行抗小菜蛾实验.结果 T0代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到16.67%.Southern杂交检测结果表明外源CrylA(c)基因和CpTI基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中.与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性.结论 转双价抗虫基因Bt-CpTl是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段.     

菘蓝有效成分抗流感病毒作用的实验研究

目的研究菘蓝有效成分在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法体外用MTT法检测菘蓝有效成分对传代狗肾细胞(MDCK)的毒性浓度,观察菘蓝有效成分抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT法检测菘蓝有效成分对流感病毒的抑制率;建立在体流感病毒感染小鼠肺炎模型,通过观察小鼠肺病变程度指标,测定肺组织内流感病毒血凝滴度判定菘蓝有效成分对小鼠肺炎的治疗作用。结果菘蓝有效成分在体外主要抑制甲型流感病毒在细胞内的复制,其对病毒的半数抑制率浓度为64μg.mL-1,治疗指数达28.88;口服菘蓝有效成分能明显减轻小鼠肺组织病变程度,对肺组织内病毒的增殖有明显抑制作用。结论菘蓝有效成分具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且呈剂量效应关系。     

播种期对板蓝根形态学特征、产量及质量的影响

目的:研究不同播种期对板蓝根形态学特征、产量及质量的影响,以期为菘蓝适宜播种期的选择提供科学依据.方法:采用大田随机区组试验,调查菘蓝各物候期进程情况,收获时随机采集样品,测定板蓝根形态学指标、小区根产量及活性成分含量,并进行方差及相关性分析.结果:各播种期明显影响菘蓝的物候期进程;播种期与菘蓝根部性状、产量及质量呈负相关;不同播期对板蓝根形态学特征、产量及内在质量形成存在显著差异.结论:安徽阜阳地区菘蓝以3月下旬至4月上旬为适宜播种期;如采用麦药轮作的复种制度,也可将播种期适当延迟至5月下旬至6月上旬.     

小叶菘蓝与大叶菘蓝性状比较研究

目的：比较目前小叶菘蓝和大叶菘蓝性状差别,明确菘蓝种质差异,为品种选育提供参考。方法：通过植株形态特征、种子形态特征、农艺性状以及药用成分含量等进行比较研究。结果：在相同种植密度下,小叶菘蓝根产量和大叶菘蓝根产量持平,无明显差异;浸出物均符合《中国药典》板蓝根项下标准,小叶菘蓝根浸出物高达34．3％,明显高于大叶菘蓝的25．3％;小叶菘蓝叶中靛玉红的含量为0．059％,大叶菘蓝叶中靛玉红含量为0．036％,但小叶菘蓝的大青叶产量明显低于大叶菘蓝。     

菘蓝叶肉原生质体游离与纯化研究

目的:探讨菘蓝原生质体分离的最佳条件.方法:用纤维素酶和离析酶的混合酶液提取菘蓝无菌苗幼叶原生质体,对影响原生质体提取得率及活力的因素进行分析.结果:适宜菘蓝叶片原生质体游离的条件为:CPW+0.5%PVP+3 mmol/L MES+1.0% Cellulase R-10+0.1% Macerozyme R-10+0.4 mol/L甘露醇,pH 5.6,25 ℃黑暗条件下酶解6 h.在此条件下原生质体产量达1.5×10个/g FW,活力达79.14%,用"过滤-离心-漂浮法"进行纯化,蔗糖浓度21%时纯化效果最好.结论:用混合酶系统处理,能够获得大量有活性的菘蓝原生质体,为建立高效的菘蓝原生质体再生体系及其遗传操作奠定了基础.     

菘蓝不同种质活性成分动态积累及其药材品质比较

目的:针对不同菘蓝种质活性成分动态积累及其药材品质进行分析比较,以期为菘蓝规范化种植及其系统选育提供科学依据。方法:采用田间小区试验,定期采样,并对不同菘蓝种质活性成分含量进行测定。结果:菘蓝种质活性成分动态积累基本趋于一致;不同菘蓝种质中活性成分含量存在差异。结论:在安徽阜阳菘蓝规范化种植区内,来自甘肃陇西的菘蓝种质表现出优质丰产特性,可在实际生产中加以改良利用。     

菘蓝种子总多酚提取工艺的优化及抗氧化活性研究

目的研究菘蓝种子总多酚的最佳提取工艺条件,并初步探讨其抗氧化活性。方法采用单因素试验和L9(34)正交试验法,确定菘蓝种子总多酚最佳提取工艺;并考察其对DPPH.的清除能力。结果菘蓝种子总多酚的最佳提取工艺为:料液比1︰10,甲醇质量分数60%,提取温度50℃,提取时间40 min。抗氧化活性评价显示菘蓝种子总多酚清除DPPH.的能力呈浓度依赖效应,当总多酚质量浓度为1.0μg/mL时,与BHT的抗氧化能力基本相当。结论本研究建立了菘蓝种子总多酚的最佳超声提取工艺条件,总多酚得率为(8.92±0.03)mg/g,DPPH.法评价结果显示其具有一定的抗氧化活性。     

菘蓝中咖啡酸氧甲基转移酶IiCOMT的克隆与表达分析

目的 克隆菘蓝Isatis indigotica中咖啡酸氧甲基转移酶(I.indigotica fortune caffeic acid O-methyltransferase,IiCOMT)编码基因,并进行生物信息学及表达分析.方法 采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆菘蓝IiCOMT的全长cDNA,进而通过...     

不同播期菘蓝的生长及结籽差异性研究

目的研究春播和秋播两种不同播期菘蓝生长的差异、生殖生长特性以及这两种播期下菘蓝的结籽情况,为建立科学的规范化栽培技术提供理论依据。方法菘蓝播种出苗之后,定期进行采样,测定根系与苗系生长变化规律,开花后观察测定菘蓝开花结果情况。结果菘蓝经过春化在春季转暖后迅速抽薹,这一时期株高、冠幅等生物量变化非常明显;两种不同播期的菘蓝生长存在明显差异,春播菘蓝开花前生长明显优于秋播菘蓝,但是开花结果后倒伏严重,长势不如秋播菘蓝。结论两种繁殖方式生产的种子千粒质量、单株平均产量、公顷产量均有差异,但种子的发芽率差异不大,不影响来年生产;春播菘蓝生产的种子质量较秋播的高,但是生长后期要注意防倒伏;秋播菘蓝在秦巴山区和秦岭以南可以很好生长,南方地区两种种子繁殖方式均适宜,而北方地区更适宜于春播繁殖方式。     

不同栽培居群菘蓝花粉的扫描电镜观察

菘蓝Isatis indigoticaFort.为十字花科菘蓝属越年生草本植物,作为大宗中药材板蓝根、大青叶的基源植物[1]。菘蓝多为栽培类型,还没有发现野生类型,在全国各地广为栽培,栽培历史悠久,由于地域间隔大,彼此间交配机会少,形成了一些地方繁育居群(local breed ing population),在进     

菘蓝种子质量及种衣剂评价研究

目的 分析不同颜色菘蓝种子的质量差异以及筛选一种适合菘蓝种子包衣的种衣剂,以此提高菘蓝种子的发芽率和利用率。方法 观察并测定6个产区菘蓝种子的外部形态和净度,根据颜色分类考察安国、运城和民乐产地脱翅种子的含水量、千粒重、发芽势、发芽率、发芽指数等指标,并采用5种种衣剂组合包衣进行种子发芽实验,考察其发芽和生物量等指标,以此确定菘蓝种子的颜色分级质量标准,筛选出一种适合菘蓝种子包衣的种衣剂。结果 菘蓝种子分为黄色、黑黄相间色、紫黑色三种颜色,各质量指标大小依次为紫黑色组、黑黄相间色组、黄色组;D种衣剂T2浓度处理的菘蓝种子发芽率和根长、根粗、株高、根冠比等根部生物量均比对照高。结论 菘蓝种子分为黄色、黑黄相间色和紫黑色三种颜色,以紫黑色菘蓝种子为最好;菘蓝种子以D种衣剂T2梯度处理效果最好。     

四倍体菘蓝体外抗内毒素、抗病毒作用评价

目的 :对四倍体菘蓝的药理作用进行评价。方法 :以同源二倍体亲本为对照 ,以鲎试剂法、鸡胚法分别考察四倍体菘蓝的抗内毒素、抗病毒作用。结果 :四倍体菘蓝的抗内毒素及抗病毒作用显著强于二倍体亲本 ,相同倍性菘蓝的叶的体外药理作用强于根。结论 :四倍体菘蓝是优质高效的新品系 ,具有很大的开发利用价值。     

二倍体及四倍体菘蓝氨基酸含量的测定分析

目的:通过对二倍体菘蓝和四倍体菘蓝根和叶中的水解氨基酸和游离氨基酸含量进行测定分析,了解不同倍性菘蓝的氨基酸含量差异,为菘蓝的药用开发提供参考。方法:利用氨基酸自动分析仪,采用酸水解法进行测定。结果:四倍体与二倍体菘蓝相比,菘蓝根中四倍体游离氨基酸和水解氨基酸的含量均高于二倍体,分别比二倍体的含量高25.7%、40.7%,大多数氨基酸含量上升,少数氨基酸含量下降。菘蓝叶中四倍体总游离氨基酸比二倍体稍有下降(-0.24%),水解氨基酸稍有上升(1.88%),大多数氨基酸含量上升,少数氨基酸含量下降。二倍体和四倍体菘蓝根水解精氨酸和游离精氨酸含量均是叶的3倍以上。结论:四倍体菘蓝与原二倍体相比,氨基酸含量均有提高,尤其根中更为明显。精氨酸可能为菘蓝根中发挥药效的主要氨基酸。     

菘蓝花期靛蓝、靛玉红和多糖分布规律研究

目的 考察菘蓝花期不同部位的靛蓝、靛玉红和多糖的积累分布情况.方法 采用HPLC法测定菘蓝花蕾期及盛花期2个阶段植株不同部位中靛蓝、靛玉红量,并采用苯酚-硫酸法测定各部位的多糖量.结果 靛蓝、靛玉红在叶中分布较多,根、茎、花中较少,其中基部叶的量最高.花蕾期叶中靛蓝、靛玉红量均高于盛花期,花中靛蓝、靛玉红量高于花蕾中的量.多糖在菘蓝全株均有分布,花蕾期根中量最高,盛花期地上部分的上端高于下端.结论 花期的菘蓝体内有靛蓝、靛玉红的分布,且主要分布于叶片内,花蕾期靛蓝、靛玉红总量高于盛花期的总量;多糖在菘蓝中分布有一定的规律,花蕾期根中多糖分布较多,地上部分多糖量有增加趋势.     

菘蓝4-香豆酸：辅酶A连接酶全基因家族的鉴定及表达分析

4-香豆酸：辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase, 4CL)是植物中类黄酮、可溶性酚酯、木脂素和木质素等苯丙烷类化合物上游途径的关键酶。该研究基于菘蓝基因组数据库,以拟南芥Arabidopsis thaliana的13个4CL家族成员为参考序列,获取菘蓝4CL基因家族的候选成员,并进行生物信息学分析、4CL基因表达模式及类黄酮代谢成分积累模式等研究。结果共获得13条菘蓝4CL基因家族成员,分别命名为Ii4CL1～Ii4CL13,分别定位到1、2、3、4、6号染色体上。基因结构与保守结构域分析发现菘蓝4CL基因家族成员的内含子数目为1～12,蛋白结构域具有高度保守性。顺式作用元件分析表明在菘蓝4CL基因家族成员启动子序列中存在多个响应元件,其中茉莉酸反应元件数量最多。共线性分析表明菘蓝4CL基因家族成员与同科植物拟南芥之间存在更近的亲缘关系。qPCR结果显示,菘蓝4CL基因家族表达分析发现10个4CL基因在菘蓝的地上部分相对表达量更高。对菘蓝不同部位类黄酮化合物的含量进行检测,发现菘蓝的类黄酮主要积累在地上部分。该研究为深入探索菘蓝4CL基因家族成员参与菘蓝类黄酮生...