膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用

宫颈癌是一种常见的恶性肿瘤，世界范围内每年浸润性宫颈癌新发病例50万例。HPV与宫颈癌关系密切，研究发现99％以上的宫颈癌有HPV感染，HPV是宫颈癌的主要致病因子。世界上发现的HPV已有110余种亚型，其中20余种与宫颈癌相关，但研究表明与宫颈癌发病密切相关的是HPV16和HPV18型．而对其他亚型的分析研究甚少。本文应用膜杂交多重检测技术对4419例临床妇女标本进行了HPV基因分型检测。     

液基细胞学和HPV原位杂交检测及其联合应用在子宫颈癌筛查中的作用

目的评价液基细胞学检测和HPV DNA检测在子宫颈癌筛查中的应用价值及临床意义。方法收集2008年3月～2009年5月间在武汉市江夏区第一人民医院妇科门诊接受子宫颈病变筛查的597例患者,所有病例均进行液基细胞学检测、高危型HPVDNA原位杂交检测,同时进行子宫颈活检组织病理学检查。结果以组织病理学结果做为判定标准,液基细胞学检测方法的灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为86.5%、93.9%、93.3%、57.7%、98.7%、0.805;HPV DNA原位杂交检测法的灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为78.8%、85.7%、85.1%、34.5%、97.7%、0.645。联合使用液基细胞学检测和HPV DNA检测方法的灵敏度为96.2%,特异度为80.4%,准确性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为81.7%,31.8%,99.6%,0.765。结论液基细胞学检测法筛查子宫颈癌及癌前病变的灵敏度超过了85%,降低了筛查的假阴性率,综合评价较好;原位杂交HPV DNA检测灵敏度较低,但其特异度相对较高。并联使用液基细胞学及HPV DNA检测灵敏度提高,但特异度下降。应根据不同的实际情况,制定最佳的子宫颈病变筛查策略。     

300例妇科宫颈病变患者石蜡切片HPV基因分型结果分析

探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒(HPV)和不同宫颈病变的关系及HPV检测在宫颈癌防治方面的应用价值.对阴道镜活检病理诊断的300例不同的宫颈病变患者进行HPV-DNA检测(同时检测5种低危型和18种高危型HPV亚型).结果显示,慢性宫颈炎组HPV阳性87例,阴性48例,阳性率64.5%;子宫颈上皮内瘤变(CIN)组(C...     

HPV mRNA检测在宫颈癌诊断中的研究

根据国际癌症研究机构(IARC)报道,仅在2012年全世界就有超过25万女性死于宫颈癌,这是女性相关癌症的第四大死因[1].不管是生物学研究还是流行病学研究都已经证实宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)感染息息相关[2]l.单独的HPV感染可能会引起大约5％的病毒相关的癌症发生,但是却是宫颈癌发病的全部因素[3].目前已经有120多种不同基因型的HPV,根据其临床表现可分为低风险型和高风险型,然而只有少数的HPV能够导致癌症的发生[4].本文就HPV致宫颈癌的发生和HPV的实验室检查以及HPV mRNA的相关进展做一些简要论述.     

液基细胞学与人乳头瘤病毒检查用于宫颈癌筛查的意义研究

目的：探讨液基细胞学与人乳头瘤病毒检查用于宫颈癌筛查的临床意义。方法选取来我院进行宫颈癌癌前病变和宫颈癌筛查的女性1820例,将进行筛查的女性进行随机分组,分为观察组和对照组两组,每组各910例。两组筛查者首先都进行液基超薄细胞学检查进行阳性筛查,观察组在此基础上再进行高危型人乳头瘤病毒检查,结合两种检查方式的结果,进行阳性筛查。结果观察组患者经筛查检出高危型人乳头瘤病毒与液基超薄细胞学检查同时阳性共61例,经病理检查为阳性者共51例,临床诊断符合率为83.61%,对照组患者经筛查检出阳性者共116例,经病理检查为阳性者共68例,临床诊断符合率为58.62%,两组患者的阳性符合率比较差异具有统计学意义(2=11.923,<0.01)。结论液基超薄细胞学检查与高危型人乳头瘤病毒检查,在宫颈癌筛查中,两种方式互为补充,能够显著提高临床诊断符合率,降低漏诊率。     

宫颈癌组织中survivin和CD44v6的表达及其与HPV16/18感染的相关性

目的研究survivin、CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制。方法用免疫组化方法进行survivin和CD44v6的检测,用PCR检测HPV16/18感染情况。结果survivin和CD44v6的阳性率在宫颈癌组织中远高于CIN和正常宫颈组织,差异显著(均P<0.01),其表达率与淋巴结转移有关(均P<0.05)。CD44v6随着临床分期、病例分级的升高阳性率升高(P<0.05),survivin的阳性率则随着病例分级的升高而增加(P<0.05)。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高(P<0.01),但与临床分期、病理分级、淋巴转移无关。survivin与HPV16/18感染有相关性(P<0.05)。结论宫颈癌组织中survivin的异常表达与HPV16/18感染有关。survivin和CD44v6与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查预后判断的有利指标。     

湖北地区9058例女性人乳头瘤病毒基因分型分析

目的:分析湖北地区人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及基因型分布。方法:2012-03-2015-11在本院体检、门诊或住院9 058例女性宫颈脱落细胞,采用流式点阵仪/液态芯片分析系统检测其HPV基因分型,分析所有受检者HPV基因型分布及单一、多重感染分布,比较不同年龄、不同就诊途径及不同疾病组间HPV感染特点。结果:所有受检者中共检出HPV阳性2 524例,感染率27.86%。湖北地区最常见的四种HPV亚型为HPV16(7.37%)、52(5.05%)、58(4.03%)、18(2.27%)。单一基因型感染率最高(20.51%,1 858/9 058),二重-六重及以上感染逐渐减少。各年龄组HPV中低危型及高危型感染率差异有统计学意义(P<0.01),混合感染率差异无统计学意义(P>0.05)。中低危型感染以≤20岁组最高,高危型感染率以41-60岁组最高,同一年龄组内均以高危型感染为主。不同就诊途径受检者HPV各型感染率组间差异有统计学意义(P<0.01),各组中低危型感染率在体检组最高,明显高于其它两组(P<0.01);门诊组和住院组以高危型为主,明显高于体检组(P<0.01)。住院患者不同疾病组间中低危型HPV感染率差异无统计学意义(P>0.01);高危型HPV感染率差异有统计学意义(P<0.01),恶性肿瘤组高危型感染率最高,其它组最低(P<0.01);各组高危型HPV感染率均明显高于中低危感染率(P<0.05)。结论:应加强湖北地区女性HPV的筛查力度,特别是HPV16、52、58、18四种最常见基因型的筛查,尤其针对41-60岁年龄组人群,可有效降低宫颈癌和由HPV引发的其它肿瘤或疾病发生率。     

41751例女性宫颈细胞中HPV基因分型的回顾性分析

目的：分析女性宫颈上皮细胞人乳头状瘤病毒HPV感染状况和基因分布情况,为预防HPV感染和防治宫颈癌提供科学依据。方法：收集2013年1月至2015年8月中国人民解放军北京军区总医院宫颈癌筛查自愿接受宫颈HPV检查者宫颈标本41751例,年龄为14~95岁。采用凯普的导流杂交方法对宫颈上皮细胞标本进行15种高危HPV和6种低危HPV基因型检测,分析女性宫颈HPV感染状况。结果：41751例女性宫颈上皮细胞标本HPV总阳性率为17.485%,高危HPV型别前4位的分别是16、52、53和58,低危HPV型别前4位的分别是6、11、42和43。结论：凯普的导流杂交膜HPV各基因亚型位点分布对女性宫颈HPV感染分子流行病学调查研究具有重要意义。     

HPV-DNA与TCT联合检测在宫颈早期病变筛查中的相关性研究

目的 探讨新柏氏液基薄层细胞学(TCT)技术联合HPV- DNA检测在宫颈早期病变筛查中的相关性.方法 对2008年9月至2011年7月来我院妇科门诊就诊的375例HPV- DNA阳性患者行TCT检测,采取TBS报告方式,将TCT与HPV- DNA结果对进行照分析.结果 375例HPV- DNA阳性患者TCT检查者,结果良性反应性改变273例(72.8％),ASC阳性者84例(22.4％),LSIL阳性6例(1.6％),HSIL阳性12例(3.2％),HPV高危亚型感染率分别为69.23％、92.86％、100％、100％.结论 TCT联合HPV- DNA检测可提高宫颈早期病变的诊断率.     

高通量人乳头瘤病毒分型检测方法与序列分析和杂交捕获法的性能比较研究

选取HCII试剂检测的样本500例,比较自主研发的HPV高通量分型检测方法(HPG)对13种高危型HPV的检测结果,用L1特异性PCR结合DNA测序法进行验证.高通量HPV分型检测方法与HCII,总符合率94.4％(95％置信区间(CI):92.4％-96.4％),Kappa值=0.870(95％置信区间:0.782-0.958),两者几乎完全一致.用DNA测序法对分型结果进行分析验证,HPG方法的灵敏度和特异度分别为96.2％和98.5％,HCII的灵敏度和特异度分别为93.7％和97.4％.高通量HPV分型检测的灵敏度和特异度略高于HCII,而且具有检测通量高、操作简便、成本低等特点,为HPV的临床分型检测提供了可靠的高效率检测方法.     

The human papillomavirus (HPV) vaccine,HPV related diseases and cervical cancer in the post-reproductive years

Prophylactic HPV vaccines have demonstrated high efficacy against a range of HPV related diseases. They have been widely adopted as population health interventions in many jurisdictions and their routine use has been endorsed by the WHO. The development of these vaccines comes after an increased understanding of the natural history and epidemiology of HPV infection and disease in both males and females. Persistent HPV infection with oncogenic types induces malignant transformation in a range of epithelia including the cervix, anogenital regions, the penis and a number of head and neck sites. In relation to HPV disease prevention in the post-reproductive years, most infections occur soon after commencement of sexual activity but new infections do occur throughout the age spectrum. This reduces the likely impact of prophylactic vaccines in this population. The major impact on HPV related disease in this age group will come from advances in screening and early detection of HPV and neoplastic precursors. The most appropriate prevention for any individual man or women in this age group will be an individualised combination of vaccination, screening and early detection depending on the individual's own circumstances.     

宫颈上皮内瘤样病变患者高危型HPV感染基因分型分析

目的了解宫颈上皮内瘤变患者的高危型HPV的感染及其分型和不同程度宫颈病变的主要感染型别情况。方法应用型特异PCR检测宫颈癌前病变的患者的主要高危型HPV-16、18、33、58的感染及其分型情况的相关性研究。结果在本研究宫颈上皮内瘤变患者98例中,4种高危型HPV的总阳性例数为73例,HPV总的感染率为74.5%,存在多重感染。其中HPV-16、18、33、58的总感染率分别为53.1%、38.7%、17.3%和30.6%。CIN的Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ3组患者的4种高危型HPV的感染率分别为42.9%、61.1%和93.2%。结论主要高危型HPV在宫颈上皮内瘤变患者中感染的主要型别依次为HPV16、HPV18、HPV58、HPV33,主要为HPV16和HPV18型;不同程度CIN的高危型HPV的总感染率不同,随病变程度的加重而增加。     

Comparing triage algorithms using HPV DNA genotyping,HPV E7 mRNA detection and cytology in high-risk HPV DNA-positive women

BackgroundHigh-risk human papillomavirus (hrHPV) DNA positive women require triage testing to identify those with high-grade cervical intraepithelial neoplasia or cancer (≥CIN2).ObjectiveComparing three triage algorithms (1) E7 mRNA testing following HPV16/18/31/33/45/52/58 genotyping (E7 mRNA test), (2) HPV16/18 DNA genotyping and (3) cytology, for ≥CIN2 detection in hrHPV DNA-positive women.Study designhrHPV DNA-positive women aged 18–63 years visiting gynecology outpatient clinics were included in a prospective observational cohort study. From these women a cervical scrape and colposcopy-directed biopsies were obtained. Cervical scrapes were evaluated by cytology, HPV DNA genotyping by bead-based multiplex genotyping of GP5+6+-PCR-products, and presence of HPV16/18/31/33/45/52/58 E7 mRNA using nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) in DNA positive women for respective HPV types. Sensitivities and specificities for ≥CIN2 were compared between E7 mRNA test and HPV16/18 DNA genotyping in the total group (n = 348), and E7 mRNA test and cytology in a subgroup of women referred for non-cervix-related gynecological complaints (n = 133).ResultsSensitivity for ≥CIN2 of the E7 mRNA test was slightly higher than that of HPV16/18 DNA genotyping (66.9% versus 60.9%; ratio 1.10, 95% CI: 1.0002–1.21), at similar specificity (54.8% versus 52.3%; ratio 1.05, 95% CI: 0.93–1.18). Neither sensitivity nor specificity of the E7 mRNA test differed significantly from that of cytology (sensitivity: 68.8% versus 75.0%; ratio 0.92, 95% CI: 0.72–1.17; specificity: 59.4% versus 65.3%; ratio 0.91, 95% CI: 0.75–1.10).ConclusionFor detection of ≥CIN2 in hrHPV DNA-positive women, an algorithm including E7 mRNA testing following HPV16/18/31/33/45/52/58 DNA genotyping performs similar to HPV16/18 DNA genotyping or cytology.     

宫颈癌及其前期病变HPV感染与基因型分布

目的了解宫颈癌及宫颈上皮内瘤变CIN患者的HPV的感染和其基因分型及主要感染型别情况。方法应用型特异PCR检测宫颈癌及其前病变的患者的HPV感染及其主要基因分型情况的分析。结果在本研究宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者中,宫颈癌的HPV感染率为91．0％,CINⅠ／Ⅱ／Ⅲ的HPV感染率为73．3％,主要高危型HPV基因型别依次为HPV16、HPV18、HPV58、HPV33。结论在宫颈上皮内瘤变患者中感染主要高危型HPV基因型别依次为HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV16在宫颈癌和CIN中的构成比随着宫颈病变的增加而明显增加。     

2400例宫颈细胞脱落标本HPV筛查及荧光PCR基因分型和定量

目的建立快速、灵敏的HPV筛查方法及探讨HPV基因型与宫颈癌之间的关系.方法用细胞涂片法和传统PCR对2400例年龄在18～65岁的厦门郊区妇女进行筛查,对PCR阳性标本进一步进行荧光PCR基因分型和定量.结果 2400例宫颈脱落细胞普查中有宫颈原位癌4例、CIN(癌前病变)Ⅰ～Ⅲ级7例;PCR定性筛查这些标本中有84例阳性,阳性率为3.5%.对这84例阳性标本进行荧光基因分型和定量,发现13例HPV-16、18型阳性,其中HPV-16型阳性8例(占9.52%),HPV-18型阳性5例(5.95%),并且HPV-DNA拷贝数在3.6×103到5.6×107之间.在HPV-16、18型阳性的患者中宫颈原位癌3例(占75%)、CINⅠ-Ⅲ级5例(占71%).结论 HPV-16、18型与宫颈癌之间有高度相关性.     

HPV逃避宫颈癌宿主免疫应答的机制

人乳头瘤病毒(HPV)使用不同的方法逃避宿主的免疫识别。近期研究发现宫颈上皮为HPV病毒摧毁宿主免疫应答提供了一个保护的微环境,例如子宫颈缺乏炎性环境使宫颈部位的树突状细胞(DCs)和朗格罕式细胞(LC)对HPV抗原产生耐受;CD4+T细胞在上皮内瘤变的退行中起关键作用,而CD8+T细胞在浸润性癌中其关键作用;CD8+T淋巴细胞中的信号分子TCRzeta链表达减少;宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者表达NKG2D的NK细胞和T细胞数量减少;宫颈癌患者CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞频率增加;Nrp-1+Treg表现出较强的抑制活性;肿瘤细胞中的Treg网络和吲哚胺2,3-双加氧酶使肿瘤细胞易于产生免疫逃逸等。此篇综述阐述了宿主免疫系统在清除HPV感染中的作用及HPV摧毁宿主免疫应答所采取的策略。了解HPV的逃逸机制将有助于分析宫颈癌免疫治疗中的困难并设计出更好的治疗策略。     

妇科门诊518例就诊者宫颈拭子HPV检测结果分析

目的探讨女性HPV DNA检测在宫颈癌防治方面的意义。方法应用DNA杂交技术对518例妇科门诊就诊者基因分型检测。结果518例样本中,HPV感染有267例,阳性率51.54%。检测高危型HPV（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68）218例,占感染病例为81.65%;检出低危型HPV（6,11,42,43,44）42例,占感染病例为15.73%;中国人群常见型HPV（53,66,CP8304）7例,占感染率为2.62%。86例样本中包含了2-5种亚型的感染。结论DNA杂交技术检测HPV基因分型,可1次检测多种亚型,有利于对HPV多重感染的诊断和宫颈癌的防治,可作为宫颈癌筛查的手段。     

太原地区404例女性HPV感染状况及基因分型统计分析

目的探讨太原地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染情况以及基因分型分布及特点。方法采用人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR技术及导流杂交技术)对太原地区404例女性进行21种HPV亚型分析。结果 404例检测者共检测到HPV阳性患者213例,阳性率为52.7%。21种HPV亚型(除HPV 42、43型外)均有检出,其中检出率较高的高危型有HPV 16(34.4%),HPV 58(13.4%),HPV 53(8.7%);检出率最高的低危型是HPV 6(2.2%)。阳性检出者中单一亚型感染占59.6%,多种亚型感染占40.4%;在多重感染中,伴随着合并感染的亚型数增加,比例逐渐下降。结论利用PCR技术和杂交技术检测女性HPV感染情况,对宫颈癌的早期诊断、预防及疗效观察具有重要的应用价值。