神经碎片联合NGF在自体神经外膜小间隙修复周围神经损伤

目的 研究神经碎片联合神经生长因子在自体神经外膜小间隙桥接法中修复周围神经损伤中的作用.方法 SD大鼠150只,体重200 ～ 250 g,随机分成5组,每组30只.对照组:传统端端吻合法缝合;单纯自体神经外膜小间隙组:自体神经外膜小间隙桥接法缝合;神经碎片组:小间隙中加入神经碎片;神经生长因子(Nerve Growth Factor NGF)组:小间隙中加入NGF;神经碎片联合NGF组:小间隙中加入神经碎片和NGF.术后4,6,8周,各组随机选取2只大鼠,观察肢体自主活动、足底溃疡愈合情况和神经断端吻合处形态.术后8周,各组随机抽取8只大鼠,进行组织学观察和神经电生理检测.结果 实验组大鼠开始自主活动,足底溃疡开始愈合时间早;实验组神经生长良好,小间隙外膜仍然保持完整,无神经瘤形成,无明显塌陷破裂,可见到均匀分布的再生神经纤维,神经纤维数目和神经传导速度有差异.结论 自体神经外膜小间隙桥接法修复周围神经损伤要优于传统神经外膜吻合法.在自体神经外膜小间隙加入神经碎片和NGF对周围神经的修复有显著促进作用,神经碎片与NGF的联合效果要明显优于单独使用.     

大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)-雪旺细胞(Schwann cell,SC)-细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly(DLlactide-co-glycolide acid),PLGA]桥接体对大鼠坐骨神经缺损后外周靶器官及脊髓神经元的保护作用.方法 建立SD大鼠右侧坐骨神经15 mm缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管,构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植对照组.在术后1,3,6,9周行腓肠肌湿重恢复率及运动终板检测,并于术后9周行CM-Dil和霍乱毒素B亚单位-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行示踪检测.结果 术后各组动物术侧腓肠肌湿莺和运动终板数量下降,3周后除ECM-PLGA组和PLGA组外,腓肠肌湿重和运动终板数量逐渐增加.9周时OEC-SC-ECM-PLGA组腓肠肌湿重、运动终板数量及运动终板长轴长度与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).9周时CM-DiI和CB-HRP逆行示踪结果显示,OEC-SC-ECM-PLGA组标记的脊髓前角运动神经元数量与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损后的外周靶器官及脊髓神经元具有一定的保护作用.     

联合应用神经生长因子和睫状神经营养因子治疗大鼠坐骨神经损伤

目的 探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。方法 切除120只大鼠左侧6mm长坐骨神经，随机分为4组，每组30只，分别行NGF CNTF、CNTF、NGF、等渗盐水(NS)靶肌肉注射。伤后行坐骨神经功能指数(SFI)、形态学和S—100α、神经中丝200(NF200)免疫组化检查。结果 联合应用NGF和CNTF组SFI有髓神经纤维直径、数目和S—100α、NF200阳性轴突计数均明显优于单独用药组。结论 联合应用NGF和CNTF可明显促进大鼠坐骨神经损伤后的再生与功能恢复。     

人工神经制备修复兔长段神经缺损的实验研究

目的：研究静脉（V）、基底膜（BM）、雪旺细胞（SC）和神经生长因子（NGF）制备人工神经桥接15mm兔坐骨神经缺损的作用。方法：用日本大耳白兔70只，分为7组（A、B、C、D、E、F、H），每组10条坐骨神经。各组均修复坐骨神经15mm缺损，以自体神经移植作为对照组（A）。术后观察3d,2,4,8和12周肢体运动，肌电图动作电位波幅，潜伏期和传导速度，记录电生理结果。术后12周取材，肉眼观察标本。比较近侧吻合口段（a)，移植体中段（b)，远侧吻合口段（c)神经再生情况，随机半数组织行HE染色，免疫组化髓磷脂碱性蛋白（MBP）染色，另半数组织做Cajar吡啶神经银染色，镜下观察神经再生情况，断端连接情况，并对各组再生神经束面积，有髓神经纤维密度，有髓神经纤维直径和轴突直径进行测量分析。结果：在实验组中以H组（V＋BM＋NGF＋SC组）修复情况最佳，上述各指标与自体神经移植组比较，差异无显著性意义（P＞0．05）。结论：V＋BM＋NGF＋SC组修复神经缺损，效果最好，符合神经组织学结构，能达到自体神经移植的效果，很有可能成为周围神经缺损修复的一种新的方法。     

壳聚糖神经支架复合免疫性脱髓鞘剂修复长节段神经缺损研究

目的探讨壳聚糖神经支架复合免疫性脱髓鞘剂修复长节段神经缺损临床效果。方法选取成年SD雌性大鼠48只,将其分为神经支架+免疫脱髓鞘剂注射组、神经支架组及自体神经修复组,每组各16只。使用壳聚糖神经支架复合抗半乳糖神经酰胺抗体(Gal-C抗体)及豚鼠补体脱髓鞘剂治疗大鼠坐骨神经12 mm缺损。于第8、12周,观察各组大鼠的NF-200和S-100免疫组化染色情况、坐骨神经指数(SFI),以及再生神经的面积、神经元数量、有髓神经的平均直径。结果第8、12周时,神经支架+免疫脱髓鞘剂注射组的S-100、NF-200标记物的走形和分布明显优于神经支架组,但稍差于自体神经修复组(P<0.05)。透射电镜显示出同样的趋势,神经支架+免疫脱髓鞘剂组的再生神经面积、有髓神经数量、有髓神经平均直径在12周时均优于神经支架组(P<0.05)。SFI指数证实神经支架+免疫脱髓鞘剂注射组的患肢运动功能恢复明显优于单纯支架组(P<0.05)。结论采用壳聚糖神经支架复合免疫脱髓鞘剂进行长节段神经缺损治疗能够明显提高神经生长速度,促进神经再生,可成为新型治疗神经缺损的方法。     

肝细胞生长因子修复周围神经损伤研究

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对周围神经损伤修复的作用.方法 以Wistar大鼠坐骨神经挤挫伤为动物模型,神经损伤局部肌肉注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF),与无注射HGF组对照,通过步态分析、肌肉湿重测定、计算机图像分析等指标评价神经损伤后再生效果.结果 术后4周,在坐骨神经指数、肌肉湿重恢复、计算机图像分析等再生指标的比较中,注射HGF组明显强于对照组(P<0.05).结论 HGF能促进大鼠坐骨神经损伤后的有髓纤维再生和功能恢复,是一种有效的治疗周围神经损伤的神经营养因子.     

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的　用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法　SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果　伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论　Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。     

动脉套管联合聚乙二醇在大鼠周围神经损伤中的应用

目的 观察应用动脉套管联合小间隙缝合聚乙二醇(PEG)冲洗法修复大鼠周围神经损伤的效果.方法 建立大鼠坐骨神经离断后神经重建模型,144只大鼠平均分为4组,每组36只,均选用雄性SD大鼠,体重200～250g.其中坐骨神经断端采用小间隙缝合盐水冲洗修复为A组,小间隙缝合PEG冲洗修复为B组,动脉套管联合小间隙缝合盐水冲洗修复为C组,动脉套管联合小间隙缝合PEG冲洗修复为D组.评估神经功能恢复时,采用行为学坐骨神经功能指数(SFI)及电生理神经冲动传导与复合肌肉动作电位(CMAP)对4组数据进行分析.评估神经再生情况时,应用苏木精-伊红染色法(HE染色)和透射电子显微镜(TEM)对4组数据进行采集.所有数据在各组术后1、4和8周进行检测.结果 D组行为学SFI值显著优于其他组;电生理学示各组在术后所有时间点均产生混合肌肉运动电位CMAP,但D组运动电位峰值高于其他组;组织病理学HE染色示D组下肢肌肉萎缩程度小于其他组且在对坐骨神经进行染色时发现D组再生神经纤维排列有序,具有正常直径和施万细胞,成纤维细胞较少;TEM示D组再生神经纤维数量最多、轴突最厚、髓鞘外观正常.结论 在对大鼠坐骨神经损伤模型中应用动脉套管联合小间隙缝合PEG冲洗修复效果显著优于其他方法,通过后期的临床转化,有望为临床上周围神经损伤的修复提供一种新的思路.     

局部持续分泌神经生长因子促周围神经再生作用的研究

目的探讨以微囊化基因修饰细胞为载体,在局部持续分泌神经生长因子(nerve growth factor,NGF)促周围神经再生的作用。方法NGF基因修饰3T3细胞(3T3-NGF),采用微胶囊制备技术制备微囊化的3T3-NGF细胞;体外培养后分别检测活性和生物活性。选取SD大鼠制备坐骨神经横断损伤模型后,随机分微囊化3T3-NGF细胞移植组(A组)、裸3T3-NGF细胞移植组(B组)、空胶囊移植组(C组)和阴性对照组(D组)。术后不同的时间采用组织形态学检查分别观察各组坐骨神经恢复情况。结果3T3-NGF细胞在微胶囊内保持正常活性和增殖能力,可以持续分泌NGF。移植术后A组的患肢恢复情况好于B,C和D组。移植术后4,8及12周时,各组动物行组织形态学检查,显示A组的损伤远端神经纤维密度、轴突直径和髓鞘厚度等评价神经再生的指标均优于B,C和D组(P<0.05),而B,C和D三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论体外培养的3T3-NGF细胞,在微胶囊内可保持正常的增殖能力和生物活性;微囊化3T3-NGF细胞移植到大鼠周围神经损伤的局部,在微胶囊的免疫保护下,可持续分泌NGF,有促进周围神经再生修复的作用。     

神经干细胞移植联合FK506对脊髓损伤病理和超微结构变化的影响

目的 探讨脊髓损伤后神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植对大鼠损伤脊髓病理和超微结构的影响,以及免疫抑制剂他克莫司( FK506)对神经再生的保护作用. 方法 采用成年SD大鼠,制作T8节段脊髓压迫损伤模型.动物按随机数字表法分为对照组、FK506组、NSCs组和NSCs+FK506组.伤后7,14,28,56 d应用运动诱发电位(motor - evoked potential,MEP)监测、HE染色、免疫组织化学染色、超微结构观察及有髓纤维图像分析比较各组神经再生差异. 结果 伤后28 d NSCs+ FK506组MEP潜伏期与其他各组比较明显缩短(P＜0.05).HE染色显示,56 d时NSCs+ FK506组只出现灶性坏死.与对照组比较,BrdU和NF - 200免疫组织化学染色示各组阳性细胞数增多,且NSCs+ FK506组阳性细胞数高于其他两组.电镜扫描结果显示,56 d时对照组仍可见大的神经髓鞘轴膜下水肿,NSCs+ FK506组可见典型的新生髓鞘和轴索,神经纤维再生效果均比其他各组好(P＜0.01). 结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs后,早期联合应用FK506可改善神经再生纤维的病理和超微结构,具有良好的促神经再生作用.     

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复作用的实验研究

目的：研究外源性给予江浙蝮蛇毒提取的神经生长因子（sNGF)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法：建立大鼠坐骨神经钳夹模型，局部滴加药物和术后肌注sNGF，通过展爪反射，趾间距，自切及脊髓诱发电位（SEP），运动诱发电位（MEP）评定，观察坐骨神经修复情况。结果 sNGF治疗可使伤后SEP，MEP提早出现，减轻自切，改善后肢运动功能。结论：蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用。     

神经生长因子对大鼠爆震性听力损伤的保护作用

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠爆震性听力损伤的保护作用。方法 制作强脉冲噪声致聋大鼠模型30只，10只肌肉注射NGF4周(爆震前l周至爆震后3周)，10只注射等量的生理盐水作对照，10只作正常对照，测定爆震前后脑干听觉诱发电位(auditory brain-stem response,ABR)阈值及扫描电镜观察耳蜗毛细胞变化。结果 爆震后3dNGF组ABR反应阈恢复较生理盐水组显著快，2ld后，NGF组ABR已恢复正常水平，而生理盐水组未能恢复正常水平。扫描电镜示：爆震后3h：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛排列扭曲、倒伏、紊乱、融合及部分缺失，NGF组大鼠外毛细胞静纤毛有轻度紊乱及松散；爆震后3d：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛病变无明显恢复，NGF组大鼠外毛细胞静纤毛病变已不明显；爆震后lld：生理盐水组病变减轻，NGF组病变基本恢复；爆震后2ld：生理盐水组病变减轻，但有部分病变没有完全恢复，NGF组病变完全恢复。结论 NGF能防止受损的毛细胞进一步变性坏死，对听觉有明显的保护作用。     

神经生长因子联合强化铁营养防治大鼠爆震性聋的实验研究

目的 探讨神经生长因子（nerve growth factor，NGF）联合强化铁营养（fortified iron nutition，FIN）防治大鼠爆震性聋的可能性。方法 制作强脉冲噪声致聋大鼠模型40只，于爆震前1周至爆震后2周，8只肌肉注射NGF，8只喂强化铁饲料，8只肌肉注射NGF并喂强化铁饲料，8只注射等量的生理盐水作对照，8只作正常对照。测定爆震前后脑于听觉诱发电位（auditory brain stem response，ABR）阈值，扫描电镜观察耳蜗毛细胞变化。结果 ABR反应阈：爆震后3d：联合用药组恢复较NGF组和FIN组快，较生理盐水对照组明显快，并于14d后已完全恢复正常，NGF组及FIN组明显恢复，而生理盐水对照组恢复不明显；扫描电镜示：爆震后3h：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛排列扭曲、倒伏、紊乱、融合及部分缺失，NGF组及FIN组大鼠外毛细胞静纤毛有轻度紊乱及松散，联合用药组大鼠外毛细胞静纤毛有轻度紊乱；3d后：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛病变无明显恢复，NGF组及FIN组大鼠外毛细胞静纤毛病变已减轻，联合用药组大鼠外毛细胞静纤毛病变已明显减轻；14d后：生理盐水组病变减轻，NGF组及FIN组病变明显减轻，还未完全恢复，联合用药组病变完全恢复。结论 NGF和强化铁营养能防止大鼠受损的毛细胞进一步变性和坏死，两者联合应用有协同作用，效果更明显。     

健侧骶神经根移位修复大鼠骶丛撕脱伤

目的 探讨采用健侧骶神经根移位修复骶丛撕脱伤的可行性.方法 选用体重200～300 g的成年SD大鼠30只,随机分为不吻合组、健侧L6-患侧L6吻合组和健侧L6-患侧L5吻合组,每组10只.大鼠右侧为实验侧,左侧为对照侧.术后观察各组大鼠的存活情况,对受试大鼠进行BBB评分.双侧股二头肌、小腿三头肌及胫骨前肌称重并进行肌肉横截而HE染色的埘比研究;电镜观察吻合口远端神经牛长情况;坐骨神经功能指数(SFI)、肌电图检查评价吻合的可行性.结果 术后12周吻合组BBB评分比不吻合组高(P<0.01).吻合组右侧的股二头肌、小腿三头肌、胫前肌与不吻合组相比均有不同程度恢复.其中L6-L5吻合组效果较L6-L6吻合组好.三组肌群恢复速度在L6-L6吻合组内有差异,其中近侧股二头肌恢复效果相对较好,吻合口远端神经电镜观察可见大量再生有髓神经纤维.肌电图显示于三组肌肉可记录到波幅,其中以近侧股二头肌及小腿三头肌峰值较大,远侧胫前肌峰值较小.结论 健侧骶神经根移位加自体神经移植或健侧骶神经移位与患侧神经根直接吻合均能蕈建截瘫大鼠骶丛神经的部分功能,其中健侧骶神经移位与患侧神经根直接吻合组效果优于健侧骶神经根移位加自体神经移植组.

Abstract：

Objective To evaluate the efficiency of normal sacral nerve root transposition in repair of the sacral plexus root avulsion. Methods A total of 30 adult SD rats were chosen and divided into three groups,ie,group A(the sciatic nerve received no repair),group B(the autologous sacral plexus root nerve was bridged with the right L6 nerve root by the translocation of the left L6)and group C (the right L5 nerve root nerve was bridged by the translocation of the left L6),10 rats per group.The left side of the rats was used as the control side and the right one as the experimental side.Twelve weeks after operation,the rats in each group were selected for the histomorphological observation of the nerves under the microscope and the electron microscope.The models were evaluated by observing the survival rates of the rats,BBB scores,electron microscope weight and muscle fiber CSA(cross section area)of double biceps femoris,triceps surae and tibial muscle. Results Twelve weeks after operation,the BBB scores in groups B and C was higher than that in group A,with statistical difference(P<0.01)between three groups.A remarkable improvement was found in the ratio of weight and muscle fiber CSA of double biceps femoris,triceps surse and tibial muscle.The repair efficiency in the group C was better than that in the group B.In the group B,the biceps femoris,triceps surae and tibial muscle recovered at different degrees.The biceps femoris recovered the best,when a great deal of myelinated nerve fiber regeneration was observed under the microscope and the electromicroscope.Electromyography revealed the volatility in the muscles of three groups,with larger peak value for the proximal biceps femoris and the triceps muscle but smaller peak value for the distal anterior tibial muscle. Conclusions L6 transposition combined with auto-graft of nerve root or without the auto-graft can reconstruct the partial function of the sciatic nerve in the paraplegia rats,when the latter has the better effect.     

复合全氟三丁胺携氧材料的嗅鞘细胞移植促进大鼠周围神经损伤修复的研究

目的探究复合全氟三丁胺（perfluorotributylamine,PFTBA）的嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植能否更进一步促进外周神经损伤后神经再生以及功能恢复。方法从大鼠嗅球分离并纯化OECs并鉴定。制作大鼠坐骨神经缺损模型。将60只坐骨神经缺损大鼠随机分为3组：自体神经移植组,OECs神经导管组,PFTBA-OECs神经导管组。在体内环境下分别测试术后3、7、14、28 d PFTBA对OECs存活率的影响。术后4周,对再生神经进行免疫荧光染色以及超薄切片,确定PFTBA-OECs对再生神经的作用。并在术后2、4、8周分别对各实验组大鼠坐骨神经功能指数值进行测量,以确定神经功能恢复情况。结果分离纯化的原代OECs纯度为(95.8±2.1)%;体内条件下,PFTBA能够大幅提高OECs的存活率（P<0.05）;与OECs神经导管组比较,PFTBA-OECs神经导管组极大地促进了神经轴突的再生（P<0.05）;再生神经透射电镜显示,PFTBA-OECs神经导管组再生神经轴突数量明显多于OECs神经导管组,髓鞘厚度明显优于OECs神经导管组（P<0.05）;术后坐骨神经功能指数值显示,PFTBA-OECs神经导管组大鼠功能恢复情况明显优于OECs神经导管组（P<0.05）。结论PFTBA能够明显提升OECs的促神经修复能力,明显提升神经损伤后的轴突再生能力以及髓鞘化程度,为解决细胞移植后面临的缺氧微环境提供了解决方案。     

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对周围神经再生作用的实验研究

目的:探讨外源性bFGF对周围神经再生的作用。方法:6O只SD大鼠随机分治疗组、对照组各30只,钳夹损伤右侧坐骨神经后每日分别给予bFGF和生理盐水,术后行神经电生理和组织学检查。结果:计量分析治疗组运动神经传导速度、神经纤维密度、轴突直径和髓鞘厚度明显优于对照组。结论:bFGF能促进周围神经再生。     

Nogo-66受体单链RNA干扰对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应

目的 观察Nngo-66受体(NgR)单链RNA干扰(siRNA)对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应. 方法 建立大鼠脊髓半切损伤模型,脑室内注射筛选出的有效NgR siRNA,采用运动功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪、HE染色等方法,评价NgR siRNA对损伤脊髓的治疗效应. 结果 神经功能评分示,从第4周起,siRNA治疗组的运功功能恢复好于等渗盐水组和空白对照组,但差异无统计学意义.HRP逆行神经示踪示,治疗组多数可于脊髓前角见较多的标记细胞,与等渗盐水组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色示脊髓损伤后8周,等渗盐水组和对照组的损伤区纤维排列紊乱,siRNA组部分大鼠损伤区见有较连续的纤维通过.结论NgR siRNA可促进脊髓损伤后的神经再生修复.     

大鼠坐骨神经损伤后神经再生的形态学观察

目的 研究周围神经损伤后的再生情况。方法 切断并原位吻合右侧SD大鼠坐骨神经。左侧不作任何处理、作为对照。手术后不同时间取跨越吻合口两侧的神经段作纵向冰冻切片,行乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学染色,观察神经纤维的变化。同时取左侧一段神经作对照染色。结果 右侧坐骨神经损伤后。术后第1天至第7天无神经纤维通过吻合口。且神经纤维排列杂乱;第14天只有小部分神经纤维通过吻合口;第21天有部分神经纤维通过吻口;第30天有较多神经纤维通过吻合口;第45天有大量神经纤维通过吻合口。但排列不整齐;第60天吻合口神经纤维排列整齐。而左侧的神经纤维排列整齐、均匀。结论 大鼠坐骨神经切断损伤后,神经纤维先发生溃变,1个月后有大量神经能够再生,至2个月,再生神经纤维的排列近似正常。