酶消化对培养脐静脉内皮细胞的影响

体外培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)是体外研究血管内皮细胞的结构、功能及与内皮细胞有关疾病的发病机制的重要方法之一。酶消化对脐静脉内皮细胞培养的成功与否有重要影响。我们用不同浓度的胰酶,在37℃下,作用不同时间,观察酶消化作用对脐静脉内皮细胞分离培养的影响,总结出最佳的酶消化条件,为培养内皮细胞的成功奠定基础。1　材料和方法1.1　用无氯化钙的PBS缓冲液配制胰蛋白酶(美国DiFco产),使其浓度分别为0.1%、0.125%和0.25%。1.2　新生儿脐静脉,恒温水溶锅,培养皿,三通注射器。1.3　配制常规培养,10.4gRPMI1640(美国R.Sclentifi…     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁（3、30、300 ng/ml）刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义（P〈0.05）;此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义（P〈0.05）。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关（r=0.675）。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。     

材料表面化学和流体剪切力共同刺激对人脐静脉内皮细胞的影响

背景:组织工程骨内缺乏完善的脉管系统,其中血管化是限制其广泛应用的关键,适当的基质化学和流体剪切力刺激能促进血管内皮细胞增殖分化和发挥功能,指导支架材料的设计制作。目的:探究不同化学官能团和流体剪切力对人脐静脉内皮细胞的影响,以期找到材料化学与流体剪切力对人脐静脉内皮细胞调控的高效组合。方法:在玻片表面分别制备以OH、CH₃和NH₂为末端化学官能团的自组装单分子膜,以空白玻片作为对照;将人脐静脉内皮细胞分别接种于4组玻片表面,培养15 min内检测ATP的释放量,培养1 h内检测NO的释放量,培养1 h后Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶的表达,培养48 h后激光共聚焦显微镜观察黏着斑及F肌动蛋白的形成。将人脐静脉内皮细胞分别接种于4组玻片表面,当细胞融合至80%时给予加载1.5 N/m²流体剪切力1 h(分别为OH-FSS组、CH₃-FSS组、NH₂-FSS组和FSS组),加载15 min内检测ATP的释放量,加载1 h内检测NO的释放量,加载1 h后We...     

尼古丁促人脐静脉内皮细胞凋亡

目的研究不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用及作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,根据尼古丁浓度分组为10-6、10-7和10-8mol/L组及对照组。尼古丁作用24 h后,用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC荧光双染色法检测细胞凋亡。Western blot检测Bax、Bcl-2和PARP-1蛋白表达,对其作用机制进行研究。结果与对照组相比,10-6、10-7mol/L尼古丁组细胞增殖活性下降(P0.05);凋亡数目增多(P0.01)。促凋亡蛋白Bax的表达量增加(P0.01);抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P0.01);PARP-1表达增加(P0.01)。结论一定浓度的尼古丁对血管内皮细胞具有促凋亡作用,加速动脉粥样硬化性疾病的发生发展。     

剪切力对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

内皮细胞的炎症反应和凋亡是动脉粥样硬化过程中的关键环节，因此通过建立HUVEC(人脐静脉内皮细胞)体外培养模型，以LPS(脂多糖)刺激，观察其损伤效应。并在此基础上施加两种大小剪切力，以探讨流体动力学对血管内皮细胞凋亡的影响。同时，观察此过程中IL-6及IL-8的变化。结果显示，LPS加入细胞培养中可明显诱导HUVEC的凋亡，并随着作用时间的延长，细胞凋亡率也相应增加。在此基础上，将两种大小剪切力与LPS共同作用于细胞，发现剪切力(15dyn/cm^2)可以抑制LPS诱导凋亡，而剪切力(4dyn／cm^2)效果则不明显。同时，剪切力与LPS这两种均能单独诱导IL-6及IL-8分泌的刺激因素并不能协同作用，剪切力会抑制LPS诱导的IL-6分泌。且剪切力(15dyn／cm^2)比剪切力(4dyn／cm^2)时的抑制作用要强。     

地塞米松对HUVEC表达粘附分子的影响

研究地塞米松、ｒＩＬ－１ｒａ对内皮细胞表达粘附分子的影响,为炎症反应的病理过程提供理论依据。用ｒＴＮＦα、ｒＩＬ－１和ＬＰＳ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）,以地塞米松或ｒＩＬ－１ｒａ处理ＬＰＳ或ｒＩＬ－１诱导的ＨＵＶＥＣ,采用Ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ法检测粘附分子ＩＣＭＡ－１和ＥＬＡＭ－１的表达。结果：ｒＴＮＦα、ｒＩＬ－１和ＬＰＳ提高ＨＵＶＥＣ表达ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１;地塞米松、ｒＩ     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为（29.07±1.48）%,RPMI-1640培养基组S期细胞为（17.58±3.49）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

模拟微重力对人脐静脉内皮细胞血管生成素产生的影响

目的探讨模拟微重力对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）生成血管生成素（ANG）的影响。方法培养HUVEC，分为模拟微重力组、地面静止对照组及剪切力对照组，在培养第24h、48h、72h和96h分别收集培养上清液，用ELISA方法检测ANG的浓度变化；固定一部分细胞，应用免疫细胞化学方法检测ANG在HUVEC中的表达情况。结果无论是应用ELISA方法检测上清液中的ANG，还是应用免疫细胞化学的方法检测ANG在细胞内的表达，均发现与地面静止及剪切力对照组相比，模拟微重力组HUVEC的ANG生成增加（P〈0．05）。结论应用回转器模拟微重力能促进体外培养的HUVEC生成ANG。     

雌激素对人脐静脉内皮细胞HSP27表达的影响

目的：观察人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中热休克蛋白27（HSP27）表达在雌激素（estrogen,E）诱导下的改变。方法：分别用10–9 M、10–8 M、10–7 M雌二醇（estradiol,E2）以及10–6 M雌激素受体拮抗剂他莫昔芬（tamox ifen）处理HUVEC后,采用Western blot法和RT-PCR法检测HUVEC中HSP27蛋白和m RNA的表达水平。结果：与对照组相比,无论是蛋白水平还是m RNA水平,10–9 mol/L E2对HUVEC中HSP27表达没有明显影响;10–8、10–7 mol/L E2诱导HUVEC中HSP27表达逐渐增加（P〈0.05）;而HUVEC与10–6 M他莫昔芬、10–7 M雌二醇共同孵育,其HSP27水平和单纯10–7 M雌二醇处理相比明显减少（P〈0.05）。结论：外源性E2能诱导HUVEC中HSP27的表达,呈剂量依赖性。他莫昔芬能阻断E2的这种上调HSP27的作用,提示雌激素诱导内皮细胞HSP27的表达依赖ER。     

小檗碱对人肺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞粘附的影响

目的 :通过离体实验探讨小檗碱对高转移人肺癌细胞株 (PG)与人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)粘附的影响及其作用机制。方法 :用虎红染色法测定PG与HUVEC的粘附率。用细胞ELISA法测定小檗碱作用HUVEC 12h、2 4h后 ,其表面粘附分子CD4 4及CD5 4的表达。小檗碱的终浓度分别为 2 5mg/L、5mg/L、10mg/L ;LPS终浓度为 1mg/L。结果 :(1)小檗碱处理HU VEC :当小檗碱作用于LPS激活的HUVEC(LPS -HUVEC) 6h、12h后 ,中、高浓度均能抑制其与PG的粘附 ,且有显著差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;药物作用 2 4h后 ,小檗碱各浓度均能…     

Leucocyte Endothelial Cell Adhesion: a Study comparing Human Umbilical Vein Endothelial Cells and the Endothelial Cell Line EA-hy-926

EA-hy-926 is a cell line produced by hybridizing human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and the epithelial cell line A549. To establish whether EA-hy-926 could be used as a model for endothelial cells (EC) in leucocyte-EC adhesion interactions, the effect of interleukin-4 (IL-4), tumour necrosis factor (TNF) or interferon-γ (IFN) stimulation on their adhesiveness and expression of E-selectin, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) was compared with that of HUVEC and A549. Although HUVEC exhibited increased adhesiveness and adhesion molecule expression with IL-4, TNF or IFN, EA-hy-926 exhibited these responses only with TNF. CD11/CD 18-dependent binding accounted for a significant component of basal binding to HUVEC and EA-hy-926, but did not account for the increased binding of T cells, JY, J6, ICH-BJ or ICH-KM cell lines to TNF-stimulated monolayers. At least part of the CD1l/CD18-independent adhesion was attributable to VCAM-1 induction on HUVFC and FA-hy-926. TNF-stimulation also induced F-selectin expression on EA-hy-926 and HUVEC and an accompanying increase in neutrophil (PMN) binding. The EA-hy-926 cells used in this study, therefore, showed responses similar to HUVEC when stimulated with TNF but not when stimulated with IL-4 or IFN.     

异常血流动力对人脐静脉内皮细胞影响

目的研究异常血流动力对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)分泌ET-1、NO以及ET-1、eNOS、VCAM-1、ICAM-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平的影响,初步探讨异常血流动力致动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的机制。方法按照HUVECs所受作用力的不同分为应力组、壁面压力组和正常组。3组在各自作用力持续作用下培养24 h,收集细胞备用。采用酶法和放免法检测ET-1、NO分泌水平,采用qPCR检测ET-1、eNOS、VCAM-1、ICAM-1和MCP-1 mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1、ICAM-1和MCP-1蛋白表达。结果壁面压力组ET-1分泌和mRNA表达水平较正常组明显升高,应力组NO分泌和eNOS mRNA表达水平较正常组明显升高;应力组和壁面压力组VCAM-1、ICAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达较正常组明显增高。结论应力或壁面压力单独作用于HUVECs能够导致其分泌功能和基因、蛋白表达功能紊乱,异常血流动力导致AS的机制与HUVEC功能紊乱有关。     

人脐静脉内皮细胞在RGD肽聚酯材料表面的黏附稳定性研究

研究RGD肽对内皮细胞(Endothelialcell,EC)在生物材料表面黏附稳定性的影响。实验材料(聚酯)分为三组:RGD组(表面共价接枝人工合成的RGD三肽)、对照组(表面预衬纤维粘连蛋白)和空白组(表面未作任何处理),然后在三组材料表面种植体外培养的人脐静脉内皮细胞,并在定常流条件下观察比较RGD肽和纤维粘连蛋白对材料表面细胞黏附稳定性的影响。结果显示随着剪切力作用时间延长和剪切力加大,三组材料表面黏附的细胞脱落逐渐增多。空白组PET表面细胞脱落最为明显,8.19dyne/cm2作用4h后,材料表面细胞残留率仅为13.73%。PET表面结合RGD或纤维粘连蛋白后,细胞残留率明显增加,同样剪切力作用下细胞残留率分别为43.33%和40.75%,两组之间无显著性差异。由此得出结论,RGD可以提高EC在材料表面的黏附稳定性。本结果仅是一个体外实验的初步结果,需要进一步的体内实验加以证实。     

重组人钙调素对人脐静脉内皮细胞增殖作用的影响

本文探讨外源性重组人钙调素(recombinant human calmodulin,rhCaM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响。采用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化rhCaM。将HUVEC接种于96孔培养板,加入不同浓度rhCaM,用MTT比色法检测rhCaM对HUEVC细胞增殖作用的影响。结果表明rhCaM在0.04～0.4μg/ml浓度范围内可促进HUEVC的增殖,促增殖作用随细胞培养密度的增加而减弱,也与培养基中新生小牛血清的含量密切相关。故rhCaM对HUEVC增殖具有促进作用。     

流体切应力对内皮细胞粘附分子表达的影响

在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)的发生发展中各种白细胞,包括单核细胞对内皮细胞的粘附可能起着较为重要的作用。在体内,血流切应力对内皮细胞的形态和功能有重要影响。为了阐明流体切应力对内皮细胞表面粘附分子表达的影响,本文研究了流体切应力(2.23～6.08dyne/cm     

PKH26标记脐静脉内皮细胞的实验研究

目的建立一种体外标记脐静脉内皮细胞的方法.方法培养人脐静脉内皮细胞,按PHK26标记程序进行标记后培养,荧光显微镜观察标记效果.结果标记荧光在细胞膜上分布均匀,经传代后仍可观察到细胞轮廓,细胞生长活力无明显影响.结论用PHK26对脐静脉内皮细胞进行荧光标记,追踪细胞转归是一种先进的方法.     

人脐静脉内皮胞在支架上粘附的影响因素研究

目的　研究人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)在支架上的粘附生长的影响因素 ,寻求最佳细胞粘附条件 .方法　HUVEC培养按文献方法进行 .利用免疫组化方法 (Sp法 )检测Ⅷ因子以鉴定细胞纯度 ,分别比较细胞代数、Fibronectin、poly-L -lysine及Ca2 浓度对HUVEC在支架上的粘附率的影响 .结果　 (1)第 2、3、4代HUVEC在裸支架上的粘附率分别为 (2 0 .0 5± 2 .1) %、(16 .12± 4.0 2 ) %、(10 .6 1± 5 .0 1) % (n =4) ;(2 )Fibronectin(n =6 )、poly-L -lysine(n =4)处理支架 ,HUVEC的粘附率分别为 (6 4.3± 6 .19) %、(39.88± 1.31) % ;(3)与 1mM、2mM、3mM、4mM、5mMCa2 相对应的细胞粘附率分别为 (5 9.81± 2 .5 8) %、(6 6 .88± 3.15 ) %、(78.35± 3.43) %、(81.6 7± 1.91) %、(84.83± 1.31) % .结论　 (1)Fibronectin、poly -L -lysine可提高HUVEC在支架上的粘附 .(2 )Ca2 在一定剂量范围内呈剂量依赖性地提高HUVEC在Fibronectin包被支架上的粘附 .     

脱氢表雄酮对人脐静脉内皮细胞血管舒张功能的影响

目的:分析脱氢表雄酮(DHEA)对CD40L刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平及ET-1mRNA和内皮源性NO合酶(eNOS)mRNA表达水平的影响,探讨DHEA对血管舒张的作用。方法:原代培养HUVECs,给予CD40L(1μg/m1)刺激(CD40L刺激组)和不同浓度DHEA(10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L,分别为低、中、高浓度DHEA组)干预,以不作干预的培养细胞为空白对照组。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HUVECs的ET-1、eNOS mRNA表达,采用ELISA和硝酸还原酶法分别检测细胞培养液中NO和ET-1浓度。结果:与空白对照组比较,CD40L刺激组ET-1mRNA和ET-1浓度明显增加,eNOS mRNA和NO水平明显降低(P0.05或P0.01)。与CD40L组比较,不同浓度DHEA组ET-1mRNA和ET-1水平降低,eNOS mRNA和NO水平增加,以高浓度DHEA组变化最明显(P0.05或P0.01)。结论:DHEA能通过抑制ET-1表达和促进NO生成来保护内皮细胞的舒张血管功能。