检测细胞角蛋白19和20对结直肠癌微转移的诊断意义

目的探讨检测细胞角蛋白19（CK19）和CK20的表达对结直肠癌微转移的诊断意义。方法采用RT-PCR方法检测44例结直肠癌患者（结直肠癌组）及18例非恶性病变腹部手术患者（良性病变组）门静脉血和外周血CK19和CK20的表达。结果良性病变组患者门静脉血和外周血均无CK19或CK20阳性表达。结直肠癌组患者外周血和门静脉血中CK19和（或）CK20均阳性表达者34例（77．3％）。与良性病变组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结直肠癌组外周血CK19和CK20的阳性表达率分别为36．4％和52．3％．门静脉血则分别为59．1％和72．7％,高于外周血的阳性表达率（P〈0．05）：Ⅲ期结直肠癌患者CK19和（或）CK20的阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P〈0．05）。外周血CK19和（或）CK20阳性表达者术后转移或复发率61．5％,明显高于仅在门静脉血中CK19和（或）CK20阳性者的25．0％（P〈0．05）。结论外周血和门静脉血中CK19和CK20的RT—PCR检测是判断结直肠癌患者有无血行微转移的敏感和特异性诊断方法之一。     

结直肠癌患者血液中CK20mRNA的表达

目的探讨结直肠癌患者血液中CK20 mRNA表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法检测61例结直肠癌患者术前外周血和术中门静脉血以及20例健康自愿者与10例结直肠息肉患者外周血中CK20 mRNA表达。结果 61例结直肠癌患者术前外周血CK20 mRNA表达阳性率为41.0%(25/61),术中门静脉血中CK20mRNA表达阳性率为45.9%(28/61),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结直肠癌患者外周血和门静脉血中CK20 mRNA表达均与肿瘤TNM分期?浸润深度?远处转移和区域淋巴结转移有关(P<0.05)。20例健康自愿者和10例结直肠息肉患者外周血中均无CK20 mRNA表达。结论 CK20是结直肠癌患者血液中反映微转移较为特异的肿瘤标志物,结直肠癌患者血液中CK20 mRNA表达与肿瘤的分期、浸润和转移有关。     

结直肠癌患者淋巴结微转移与其免疫功能的关系

目的以细胞角蛋白20（CK20）mRNA为标志物检测结直肠癌患者淋巴结微转移情况,并探讨其与患者免疫功能的关系。方法对21例结直肠癌患者的281枚淋巴结,分别采用病理切片常规HE染色检测转移癌灶及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测淋巴结CK20mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4^＋、CD8^＋及NK细胞活性,ELISA法检测外周血IL-2、sIL-2R及IL-12水平。结果21例患者281枚淋巴结中,HE染色法检出有淋巴结转移者为2例16枚（5.7%,16/281）,RT-PCR法检出有淋巴结转移（CK20mRNA表达阳性）者10例140枚（49.8%,140/281）,2种方法在淋巴结转移检出率及检出阳性病例数方面差异均有统计学意义（P〈0.01）。11例淋巴结CK20mRNA表达阴性患者术前CD4^＋及NK细胞活性、CD4^＋/CD8^＋比值、IL-2及IL-12水平高于8例HE染色无法检出而CK20mRNA表达阳性（即存在微转移）患者（P〈0.05）,而前者术前CD8^＋细胞活性及sIL-2R水平低于后者（P〈0.05）;且CK20mRNA的表达与CD4^＋（r=-0.769）及NK（r=-0.532）细胞活性、CD4^＋/CD8^＋比值（r=-0.755）、IL-2（r=-0.834）及IL-12（r=-0.819）水平间均呈负相关（P〈0.05,P〈0.01）,与CD8^＋细胞活性（r=0.562）及sIL-2R水平（r=0.751）之间呈正相关（P〈0.01）。结论结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能低下关系密切。     

CD4+、CD8+和NK在结直肠癌中的表达及其与淋巴结微转移的关系

目的 检测不同Dukes分期结直肠癌患者淋巴结细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与NK细胞活性表达,探讨两者间关系.方法 采用常规苏木素.伊红(HE)染色病理切片检测21例结直肠癌患者281枚淋巴结转移癌灶及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者淋巴结CK20 mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞活性表达.结果 HE染色法检出有淋巴结转移者为16枚(6%,16/281),RT-PCR法检出有淋巴结转移者140枚(50%,140/281);按有淋巴结微转移重新Dukes分期后,手术前,A、B期患者血CD4+、CD4+/CD8+高于c期(P<0.05);A期患者血CD8+低于C期(P<0.05);B期患者血NK细胞活性高于C期(P<0.05).新Dukes分期与血CD4+呈负相关(r=-0.497,P<0.01);与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.714,P<0.01);与CD8+呈正相关(r=0.945,P<0.01).结论 RT-PCR方法对淋巴结微转移的检出率明显优于HE染色切片法,结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能明显低下密切相关.     

骨髓与外周血中角蛋白19与乳腺癌微小转移的关系

目的探讨骨髓与外周血中角蛋白19与乳腺癌微小转移的关系。方法对26例乳腺癌患者的骨髓及外周血采用RT-PCR方法检测角蛋白19（keratin,KT19）mRNA的表达,同时以免疫组化法检测其骨髓涂片中上皮膜抗原（epithelial membrane antigen,EMA）。结果 26例患者KT19 mRNA表达中,外周血阳性4例（15.4%）,骨髓阳性10例（38.4%）,其中3例外周血与骨髓同时阳性,二者之间差异具有显著性意义（P＜0.05）。免疫组化结果显示26例患者骨髓中有7例（26.9%）EMA阳性,其KT19 mRNA均为阳性,有3例（11.5%）免疫组化结果阴性而KT19 mRNA表达阳性。结论 RT-PCR方法检测KT19 mRNA是一种比较敏感的方法,同时免疫组化还是一种比较可靠的检测方法。外周血中KT19 mRNA的检测结果还不能完全取代骨髓的微小转移情况。     

定量RT-PCR检测结肠癌患者门静脉血CK20 mRNA的表达

目的 检测结肠癌患者门静脉血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达水平,并探讨其临床价值。方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测31例病理学确诊的结肠癌患者门静脉血和20例健康对照者外周血CK20mRNA的表达水平。结果 结肠癌患者中CK20mRNA阳性率为25.81%,而对照组阳性率为5%,两者相比差异有统计学意义（P〈0.025）。随着临床分期的具体化,患者门静脉血中CK20mRNA表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义（P〉0.05）。DukesLC期与D期患者中〉10拷贝/ml者高于A期与B期患者。结论 术中检测结肠癌患者门静脉血CK20mRNA表达水平,对判断肝脏微转移有一定的提示意义。     

结直肠癌早期肝转移的预测

目的研究CK20 mRNA、CD44v6、血管内皮生长因子（VEGF）与结直肠癌肝转移的关系,探讨临床预测结直肠癌早期肝转移的有效的客观指标。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测50例结直肠癌患者回流门静脉血中CK20 mRNA,并同时应用免疫组织化学方法测定结直肠癌癌组织中CD44v6、VEGF的表达;并与良性病变对照组10例和正常组织对照组10例比较。结果结直肠癌患者门静脉血CK20 mRNA;癌组织中CD44v6、VEGF表达阳性率明显高于良性病变对照组（P〈0．01）和正常对照组（P〈0．01）;结直肠癌组织中CIM4v6及VEGF的表达与门静脉血中CK20 mRNA的表达有显著相关性（r．=0．933,r2=0．906,P〈0．05）;同时肝转移组CK20 mRNA、CD44v6、VEGF阳性表达率均高于非肝转移组（P〈0．05）。结论联合检测CD44v6、VEGF及CK20 mRNA预测结直肠癌肝转移,可提高预测的灵敏度及特异性,对于结直肠癌早期肝转移监测具有较高的临床价值。     

乳腺癌患者CK19mRNA表达的意义及辅助化疗对骨髓微转移的影响

目的探讨乳腺癌患者外周血、淋巴结和骨髓的微转移情况,以及辅助化疗对骨髓微转移的影响。方法采用RT-PCR技术同时检测可手术的69例乳腺癌患者的外周血、淋巴结和骨髓中CK19 mRNA的表达,并观察辅助化疗对骨髓微转移的影响。结果骨髓微转移24例(34.8%),外周血CK19mRNA阳性11例(15.9%)。淋巴结微转移阳性40例(58.0%),其中淋巴结病理学检查阳性的35例中,32例(91.4%)淋巴结微转移阳性,在淋巴结病理学检查阴性的34例中,8例(23.5%)淋巴结微转移阳性。淋巴结微转移阳性的40例中,18例(45.0%)骨髓微转移阳性。24例骨髓微转移阳性的患者在接受6个周期的CAF方案辅助化疗后,有7例骨髓微转移转阴(29.2%)。结论CK19 mRNA的表达可作为评价乳腺癌微转移的指标。外周血微转移的检测,其敏感性和特异性较骨髓差;骨髓微转移的检测可作为评价辅助化疗敏感性的指标之一。     

细胞角蛋白20在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌淋巴结微转移患者中的表达及意义

目的通过免疫组化方法检测Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者细胞角蛋白20（CK20）的表达对淋巴结微转移及预后的影响。 方法选择2010年1月至2011年12月中山市人民医院收治的137例Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者,获取根治性手术切除的淋巴结组织学标本945枚,采用免疫组织化学SP法和单克隆抗体检测淋巴结标本中CK20表达情况,结合临床和随访资料进行生存分析。 结果（1）10例（7.3%）结直肠癌的15枚（1.6%）淋巴结出现微转移,CK20表达阳性。（2）淋巴结CK20的表达情况与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、手术方式、原发灶CEA表达情况、组织学类型、有无脉管神经浸润无相关性。（3）5年内复发转移的患者淋巴结CK20的阳性率为16.7%（4/24）,远高于未发生复发转移患者的5.3%（6/113）,但差异无统计学意义（χ²=2.282,P=0.131）。生存分析发现,CK20表达阴性组5年生存率高于表达阳性组（84.3% vs 60.0%,P=0.025）。（4）COX回归分析结果显示性别（P=0.359）、年龄（P=0.917）、肿瘤大小（P=0.547）、组织学类型（P=0.106）、原发灶CEA表达情况（P=0.069）、肿瘤位置（P=0.760）、分期（P=0.069）、手术方式（P=0.350）与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者预后无明显的相关性;而CK20表达与患者预后密切相关（P=0.033）,存在淋巴结微转移的患者死亡的风险是无转移的3.224倍（95% CI=1.100~9.451）。 结论CK20检测结直肠癌淋巴结微转移可以改善结直肠癌患者的临床分期,影响治疗方案,且与患者预后相关。     

骨髓与外周血中角蛋白19与乳腺癌微小转移的关系要

目的：探讨骨髓与外周血中角蛋白19与乳腺癌微小转移的关系。方法：对26例乳腺癌患者的骨髓及外周血采用RT－PCR方法检测角蛋白19（keratin,KT19)mRNA的表达,同时以免疫组化法检测其骨髓涂片中上皮膜抗原（epithelial membrane antigen,EMA)。结果26例患者KT19mRNA表达中,外周血阳性4例（15．4％,骨髓阳性10例（38．4％）,其中3例外周血与骨髓同时阳性,二者之间差异具有显著性意义（P＜0．05）。免疫组化结果显示26例患者骨髓中有7例（26．95）,EMA阳性,其KT19mRNA均为阳性,有3例（11．5％）,免疫组化结果阴性而KT19mRNA表达阳性。结论：RTPCR方法检测KT19mRNA是一种比较敏感的方法,同时免疫化还是一种比较可靠的检测方法,外周血中KT19mRNA的检测结果还不能完全取代骨髓的微小转移情况。     

大肠癌患者门静脉血癌细胞的检测及临床意义

目的 探讨门静脉血管癌细胞与大肠癌肝转移的关系。方法 以非核素ＲＴ－ＰＣＲ方法,对５４例大肠癌患者门静脉血中结肠癌细胞的标志物细胞角质蛋白２０（ＣＫ２０）进行了检测。结果 ５４例中,４１例门静脉血中检出ＣＫ２０阳性表达,阳性率７５．９％,ＣＫ２０阳性检出与Ｄｕｋｅｓ分期,肝转移存在显著性相关,随着Ｄｕｋｅｓ分期的进展ＣＫ２０阳性率显著增加,随访发现,门静脉血ＣＫ２０扩增阳性者,术后发生肝转移机会增     

大肠癌术后血路播散的动态追踪监测

目的 研究大肠癌血路播散在监测大肠癌患者术后复发转移中的意义。方法 使用靶向ＣＫ２０的ＲＴ－ＰＣＲ技术,对５８例大肠癌患者外周血和骨髓微转移癌细胞在术前和术后不同时间进行了动态检测。结果 术后肿瘤无复发转移的大肠癌患者ＣＫ２０的阳性率（１６.３％）显著低于复发转移者（８８.９％）。血路播散有四种情况：①术后ＣＫ２０检测曾有一度转阴;②ＣＫ２０检测持续阳性;③ＣＫ２０在术后才转阳;④ＣＫ２０术后一直阴性。死亡的６例患者术前ＣＫ２０检测均为阳性。结论 大肠癌血路播散在术后复发转移中起重要作用,动态追踪检测大肠癌ＣＫ２０的变化有助于预测肿瘤的复发转移、术前存在血路播散者预后差。     

联合检测大肠癌组织中血管内皮生长因子与门静脉血细胞角蛋白20mRNA的临床意义

目的探讨大肠癌病人肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）蛋白和门静脉血细胞角蛋白20（cytokeratin,CK20）mRNA作为血行播散标志物的临床意义。方法RT-PCR技术检测63例大肠癌病人门静脉血CK20mRNA表达阳性率,免疫组织化学方法检测肿瘤标本VEGF蛋白的表达。结果随着病情由Dukes A、B期向Dukes C、D期进展,门静脉血CK20 mRNA表达的阳性率由64．9％升高到96．2％（P〈0．01）。高、中分化肿瘤组织VEGF蛋白阳性率为50．0％,低、未分化时升高到92．3％（P〈0．01）。CK20 mRNA与VEGF作为单项指标测定时,阳性率分别为77．8％和58．7％,联合检测时阳性率显著升高（92．1％）。结论大肠癌病人门静脉血中CK20 mRNA和肿瘤组织VEGF作为衡量大肠癌浸润能力的指标,二者表达分别与Dukes分期和肿瘤恶性程度的关系密切。联合检测二者时,敏感性显著提高,可弥补单项指标检测的不足,值得在临床上推广。     

Dukes A、B期大肠癌淋巴结微转移的检测及其对预后的影响

目的：探讨Dukes A、B期大肠癌淋巴结微转移的检测和淋巴结微转移对预后的影响.方法：于前瞻性研究31例行根治性手术的Dukes A、B期大肠癌病人,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测所清除的398枚淋巴结中细胞角蛋白（cvtokeratin,CK）20 mRNA的表达以检出微转移;经5年以上的随访,探讨淋巴结微转移对预后的影响和术后复发的可能原因.结果：在31例Dukes A、B期大肠癌病人的398枚淋巴结中,有15例（48.39%）共46枚（11.56%）淋巴结检出微转移.单因素分析提示微转移的淋巴结数量、位置及肿瘤生长方式与术后复发有关;Logistic多元回归模型提示,3枚以上淋巴结发生微转移与复发紧密联系.结论：CK20 RT-PCR是检测Dukes A、B期大肠癌淋巴结微转移灵敏而特异的方法.3枚以上淋巴结发现微转移是预示复发的独立因素.     

大肠癌术中门静脉血CK20 mRNA检测临床意义的探讨

目的检测大肠癌患者门静脉和外周血中细胞角蛋白(CK20)mRNA,探讨它作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志的临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测63例大肠癌患者术中抽取的门静脉和外周血中CK20 mRNA和癌胚抗原(CEA)表达的阳性率,并对所测结果进行分析和比较。结果Ducks A,B期和Ducks C,D期患者门静脉血CK20 mRNA阳性表达均明显高于外周血,差异有统计学意义。随着病情进展,门静脉和外周血中CK20 mRNA表达均显著提高(65% vs 96%;33% vs 54%),但仅门静脉结果差异有统计学意义(P<0.005,χ2=8.65)。比较不同时期不同部位CK20 mRNA与CEA表达差异时,除Ducks A,B期患者门静脉血中CK20 mRNA阳性率较CEA阳性率为高且具有统计学意义外,Ducks C,D期门静脉组和各期外周血组中CK20 mRNA阳性率和CEA阳性率差异无统计学意义。结论大肠癌患者门静脉中CK20 mRNA含量高于外周血,门静脉和外周血中CK20 mRNA的阳性表达可随病情进展而增加,因此可作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志,应用于手术后预后判断。     

大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达及其意义

目的　探讨大肠癌患者外周血CK2 0mRNA的表达及其意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌患者术前、术后外周血及 2 0例大肠癌患者新鲜癌组织标本中CK2 0mRNA的表达 ,另以 2 0例健康成年自愿者作对照。结果　 4 2例大肠癌患者外周血CK2 0mRNA呈阳性表达者术前为 19例(45 .2 4 % ) ,术后为 14例 (33.33% ) ;2 0例大肠癌患者新鲜癌组织中CK2 0mRNA表达均为阳性。而正常对照组2 0例外周血CK2 0mRNA表达均为阴性。且大肠癌外周血CK2 0mRNA阳性表达与组织学类型无关 (P >0 .0 5 ) ,但与有无淋巴结转移、肝转移及Dukes分期有关 (P<0 .0 5 )。结论　检测外周血中CK2 0mRNA表达将有助于大肠癌的早期诊断、预后的判断及治疗方案的制定。