1株汉坦病毒的分离及其S基因片段的克隆和序列分析

目的对浙江省肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)疫区-龙泉,新分离到的毒株的S基因片段进行克隆并进行序列测定及分析,以确定毒株的型别和基因变异程度,为进一步研究病毒进化和变异提供了有利条件。方法采用直接免疫荧光检测疫区鼠肺HV抗原。将HV抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞,分离病毒。参考GenBank发表的汉坦病毒核蛋白基因序列,设计合成一对引物,提取分离株细胞培养物的总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增新毒株S片段基因,并克隆入载体,纯化后进行核苷酸序列测定及分析。结果成功分离到的新毒株S片段的全基因序列共1 700个核苷酸,只有一个开放读码框架,共编码429个氨基酸。新毒株与HTN型毒株比较,核苷酸同源率为85.7%~91.9%。与SEO型毒株比较,核苷酸同源率为71.2%~75%,表明该毒株为HTN型毒株。结论浙江HFRS疫区新分离汉坦病毒株可以定型为HTN型毒株,可能为新的亚型。     

肾综合征出血热R_(22)病毒对孕鼠垂直传播实验

肾综合征出血热（HFRS）垂直传播途径已被证实’‘’，本文特对传播途径进行研究，报告如下。1材料与方法1．1毒株标准毒株R22。1．2实验动物昆明系小鼠。滤纸采尾血IFAT阴性为实验鼠。1．3感染方式以取毒株R。。制成10‘悬液，于孕鼠颈后皮下接种0．05ml，接种后7日内死亡为非特异性死亡。发病孕鼠于濒死解剖，14天尚存活的孕鼠解剖。1．4标本的采集胎鼠采用组织印片”‘，无菌取胎鼠脏器组织，用定性滤纸吸去血液及渗出液，以切面压印于经60oC预热的载玻片上，每张玻片压印三个点，自然干燥，以冷丙酮固定，凉于，做病毒抗原检测。尿…     

辽宁省鼠类感染肾综合征出血热的病原学及分子生物学检测比较

目的了解辽宁省鼠间带毒、鼠密度及鼠种构成与汉坦病毒的分子特征。方法采用夹夜法对鼠密度、鼠种构成及鼠带毒率进行监测,用间接免疫荧光方法检测HFRS抗原,用Vero-E6细胞对病毒进行传代分离,RT-PCR方法对阳性毒株进行基因分型及测序分析。结果鼠密度在春秋季各出现一个高峰,村内鼠密度高于村外鼠密度,褐家鼠为优势鼠种。带毒率无显著性差异,各鼠种间带毒率无显著性差异。5株病毒,有2个遗传分支,4株为HV的SEO型,1株为HTN型,4株SEO型HV基本位于系统发生树的同一进化枝上;1株HTN型HV,与汉滩病毒标准株76-118接近。结论辽宁省每年存在春秋季两个鼠密度高峰,带毒率同季节及鼠种无关。辽宁省是以SEO型HV为主的SEO和HTN混合型疫区,且SEO型汉坦病毒变异较小。     

原位分子杂交检测厩真厉螨经叮刺传播姬鼠型和家鼠型HFRSV的研究

目的用分子生物学方法进一步证明革螨在传播两型HFRS中的作用。方法将叮刺感染姬鼠型（76—118株）HFRSV乳鼠后第10天厩真厉螨270只和家鼠型（UR株）HFRSV后第10天厩真后螨200余只,分别制成组织悬液接种正常乳鼠,用Dig标记HFRSVCDNA探针原位分子杂交检测接种后第9天鼠肺;将叮刺感染乳鼠后螨在适宜条件下饲养至100天以上,分别叮刺4～5日龄正常乳鼠,于第3天取鼠肺冰冻切片,经Dig标记HFRSVCDNA探针原位分子杂交检测。结果叮刺76一118株病毒感染乳鼠螨悬液接种4只乳鼠,3只阳性,UR株接种6只,全部阳性;76—118株组饲养至132天,UR株组102天的螨叮刺正常乳鼠后,也从鼠肺中检出病毒RNA。结论首次用分子生物学方法证明该螨可通过叮刺获得姬鼠型和家鼠型HFRSV,螨群体不但维持76—118株病毒132天以上、UR株102天以上,而且均能经叮刘传播,说明此螨能作为姬鼠型和家鼠型HFRSV的适宜传播媒介和贮存宿主,这一发现为我国的HFRS疫区保存和演变提供了一定的实验依据,有流行病学意义;原位分子杂交可缩短用敏感动物分离革螨体内HFRSV的时间,可用于革螨等媒介昆虫传HFRSV的实验研究和流行病学调查。     

地方株肾综合征出血热病毒生物学特性研究

肾综合征出血热(HFRS)分为4个血清型,目前国内已证实存在Hantaan型(HTN),Seoul(SEO)2个血清型.根据单克隆抗体的抗原分析认为,出血热病毒有复杂的抗原决定簇,毒株间存在明显的抗原差异.我们选择肾综合征出血热疫区抗原阳性鼠肺组织,现症病人外周静脉血及尿液,分离出11株出血热病毒.用McAb对其抗原性进行分析,同时测定毒株毒力.     

新疆维吾尔自治区1966～1990年克里米亚-刚果出血热病毒分离记录

自从1966年在巴楚县阿克沙克马拉勒地区的出血热病人和亚洲璃眼蜱成虫标本中,成功分离到新疆出血热病毒以来,除了在巴楚县及其周围地区持续进行流行病学监测并开展防治工作外,还在天山南北广泛地进行了流行病学调查。1966~1990年的25年间共分离到克里米亚-刚果出血热病毒87株。兹将这些病毒株的分离概况记录如下。1病毒的分离和鉴定方法绝大多数是采用新生小白鼠(乳鼠)脑内和腹腔联合接种的标准方法分离的。北疆地区的2个病毒株是接种LLc-MK2传代系细胞分离的。1966年从出血热患者和亚洲璃眼蜱中分离的病毒,均经过生物学和免疫学的系统鉴定。其后,凡在新的地区和不同宿主中分离的病毒株亦经过系统鉴定。在已分离到病毒的地区,陆续分离的病毒株仅做血清学鉴定。2出血热患者标本的分离时间病人的标本除个别者外,均在采集后立即进行病毒分离。从发病当日至病程第9天都可以分离出病毒,多数是在发病第2~7天内分离的。表明患者的病毒血症可持续9天之久。3分离病毒时间在1966~1990年期间共16个年份。分离病毒的概况见表1。4在乳鼠中的初代潜伏期接种乳鼠的初代潜伏期范围在4~11天之间,多数在5~9天之间(85%)。出血热患者血液或脏器标...     

免疫抑制剂对宫崎并殖吸虫在大鼠体内生长的影响

本文作者观察了免疫抑制剂氢化考的松、地塞米松和强的松龙对宫崎并殖吸虫在大鼠体内生长的影响。实验动物分为5组:第1组,地塞米松(每5天2毫克/鼠);第2组,强的松龙和地塞米松(每5天10毫克和2毫克/鼠);第3组,氢化考的松和地塞米松(每5天10毫克和2毫克/鼠);第4组,强的松龙(每5天10毫克/鼠);第5组,未给药对照组,每组用鼠6～7只,均为200克左右的成年鼠。每鼠经口感染宫崎并殖吸虫囊蚴20只。在接种囊蚴前一天开始于鼠的腿部交替肌肉注射氢化考的松、地塞米松和强的松龙,每5天给药1次,直到解剖为止。在感染后30天,各组杀死一部分鼠,其余在63天时解剖。     

小肠结肠炎耶氏菌引起小白鼠关节炎的报告

<正> 我们从病人阑尾组织中分离到一株0:3型Nilehn生物4型耶氏菌,腹腔、皮下注射小白鼠各4只。经8天观察,腹腔、皮下感染鼠的肝、脾、肺和肠道均有明显化脓病变; 第5天开始腹腔感染鼠有2只出现关节水肿,切开关节从渗出液中分离到纯试验菌株,病理切片检查关节组织有明显化脓性感染形成的     

R5嗜性的人类免疫缺陷病毒-1在疾病不同阶段的生物学特性

目的 研究HIV-1感染者不同时期分离的R5毒株的生物学特性.方法 采用传统的共培养方法分离并培养HIV-1,用表达CD4和CC趋化因子受体5(CCR5)或CXC趋化因子受体4(CXCR4)的GHOST细胞系,通过流式细胞仪测定病毒辅助受体的利用和感染性,从而判断所分离毒株的CCR5嗜型(R5型毒株);使用2 ng P24病毒量感染正常人分离的外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测第1、3、5、7、10、15天的HIV-1 P24抗原,反映病毒复制能力;采用HIV-1核酸荧光定量检测试剂盒测定血浆病毒载量.数据分析采用t检验.结果 HIV-1B'亚型感染者22例,其中CD4+细胞>0.2×109/L和CD4+细胞≤0.2×109/L各11例;所分离的病毒仅利用CCR5辅助受体,均为R5型毒株,感染性的结果显示,来自CD4+细胞≤0.2×109/L的11株R5毒株的感染性为(7.392 7±4.584 2)%,而CD4+细胞>0.2×109/L的为(2.613 6±1.610 5)%,差异有统计学意义(t=3.262,P<0.05);两组病毒复制滴度在第7天开始明显上升,培养第7、10、15天,两组病毒复制动力学差异有统计学意义(t值分别为3.771、2.509和2.260;P<0.05),CD4+细胞≤0.2×109/L的R5毒株的复制能力较CD4+细胞>0.2×109/L的明显增强;CD4+细胞≤0.2 × 109/L R5型毒株的病毒载量的对数值为(5.606 8±0.815 1)拷贝/mL,CD4+细胞>0.2 × 109/L的为(4.729 8±0.431 6)拷贝/mL,两组差异有统计学意义(t=3.771,P<0.05).结论 疾病进展过程中,即使病毒的辅助受体利用未从CCR5转变为CXCR4,但病毒的感染性和复制能力已有明显改变.     

中国大陆地区柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析

目的 分析中国大陆地区柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CV-A4)流行毒株基因特征和进化规律。方法 利用Mega6.0软件对GenBank核苷酸数据库收录的分离于中国大陆地区CV-A4毒株VP1区基因序列进行分析,构建系统进化树,并计算分离毒株核苷酸和氨基酸同源性。结果 纳入中国大陆地区CV-A4毒株合计116株,中国大陆地区16个省份CV-A4流行毒株潜在的优势基因型为F。与原型株High Point相比,中国大陆地区CV-A4毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为79.9%~84.1%和92.5%~98.7%,收录中国大陆地区CV-A4毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为82.6%~100.0%和91.5%~100.0%。结论 针对中国大陆地区CV-A4毒株流行特征和进化规律,采取有效措施防控手足口病。     

CODEHOP RT-PCR方法在汉坦病毒基因型别鉴定和分子溯源中的应用

分析CODEHOP RT-PCR方法对于汉坦病毒(HV)基因型别鉴定和分子溯源中的应用效果。方法 选取实验室保存的汉滩型病毒阳性鼠肺样品DX0901和汉城型病毒阳性鼠肺样品DX1101,用CODEHOP RT-PCR扩增HV病毒L基因片段并测序,进行Blast同源性比对和系统发生分析。结果 两份样品均获得478 bp大小的RT-PCR扩增产物,汉滩病毒DX0901与汉滩病毒株Nc167同源性最为接近,遗传距离为0.142。汉城病毒DX1101与汉城病毒株ZT10,ZT71,Z37同源性最为接近,遗传距离为0.049。结论 CODEHOP RT-PCR方法可以有效的用于对汉坦病毒进行基因型别鉴定和分子溯源。     

原位分子杂交检测厩真厉螨经叮刺传播姬鼠型和家鼠型H …

目的 用分子生物学方法进一步证明革螨在传播两型ＨＦＲＳ中的作用。方法 将叮刺感染姬鼠型（７６－１１８株）ＨＦＲＳ Ｖ乳鼠后第１０天厩真厉螨２７０只和家鼠型（ＵＲ株）ＨＦＲＳ Ｖ后第１０天厩真厉螨２００余只，分别制成组织悬液接种正常乳鼠，用Ｄｉｇ标记ＨＦＲＳＶ ｃＤＮＡ探针原位分子杂交检测接种后第９天鼠肺；将叮刺感染乳鼠后螨在适宜条件下饲养至１００天以上，分别叮刺４￣５日龄正常乳鼠，于第３天取鼠肺冰     

猪链球菌2型新基因岛SSGI4的发现

目的通过比较猪链球菌2型强毒株与弱毒株和无毒株的基因组差异,发现新的基因岛,探讨猪链球菌的基因群水平转移及其与致病性之间的关系。方法在已知猪链球菌2型强毒株全基因组序列和对可能基因岛的分析基础上,通过DNA测序和生物信息学分析,对基因岛的结构进行分析鉴定,并预测其功能。结果发现了一个只存在于猪链球菌2型中国强毒株,而在弱毒株和无毒株中整体缺失的新基因岛,命名为SSGI4。基因岛全长11 269bp,G+C含量(36.8%)明显低于基因组总G+C含量(41.1%),基因岛两端均有10bp的正向重复序列,并且末端携带有噬菌体整合酶基因,显示很可能是通过溶原性噬菌体整合入基因组。基因岛包含11个编码基因,部分基因推测为可能的膜表面蛋白基因或氨基酸结合蛋白基因。结论新发现的基因岛SSGI4具有致病性基因岛的各项典型特征,可能与猪链球菌2型强毒株的致病性有关,具有深入研究的价值。     

用四种方法评价亚周期型马来丝虫实验感染大鼠的结果

本文用病媒接种诊断试验、组织化学染色、幼虫肛板和成虫交合刺测量等四种方法对亚周期型马来丝虫感染大鼠的结果进行评价。同时采用彭亨丝虫感染大鼠进行对比。实验用的亚周期型马来丝虫取自南加里曼丹猫体,经转种入长爪沙鼠后,感染东乡伊蚊取得Ⅲ期幼虫。以每鼠50—100计数,按Ash和Riley(1970)的方法经腹股沟皮下接种SD株雄性大白鼠15只和LE株雄性黑白鼠36只。于接种后10周开始,每周从尾静脉采血,用薄膜过滤法查微丝蚴。结果指出,SD和LE鼠微丝蚴阳性率分别为20%(3/15)和11%(4/36)。前者平均潜隐期106天,后者143天。LE鼠的平均显性期438天,SD鼠355天,两者微丝蚴密度相似(17.5条/20cmm和16条/20cmm)。6只SD鼠,3只     

HIV-1辅受体的配体细胞内双表达对病毒感染的阻断作用

目的　观察Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1)辅受体的配体———RANTES和SDF 1α双表达于人淋巴细胞对各种嗜性HIV 1毒株感染的阻断作用。方法　用 pLNCX R K S K重组逆转录病毒液感染原代人外周血淋巴细胞 (PBLs) ,抗神经生长因子受体 (NGFR) 免疫磁珠法分离转化成功的PBLs,流式细胞仪检测筛选效率 ;HIV 1M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击转化PBLs ,检测HIV 1逆转录酶活性和 p2 4抗原分泌 ,以观察抗HIV 1感染的作用 ;同时进行转化PBLs表面CD3、CD4、CCR2、CCR5和CXCR4表达及破伤风毒素刺激后3 H 胸苷 (thymidine)掺入量检测 ,观察HIV 1辅受体配体的双表达对人PBLs正常生物学功能的影响。结果　抗 NGFR 免疫磁珠法获得了转化成功的PBLs,流式细胞仪检测发现pLNCX R K S K转染组 92 %以上的PBLs鼠抗NGFR标记物为阳性 ;HIV 1M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击后 ,pLNCX R K S K转化PBLs可以见到明显的逆转录酶活性和 p2 4抗原分泌抑制 ,并且在感染后第 12～ 2 0天时抑制作用最强 ;pLNCX R K S K转化PBLs表面CD3、CD4和CCR2表达水平无明显变化 ,而CCR5和CXCR4表达水平降低 ;破伤风毒素刺激后的转化PBLs仍具有主动增殖的能力。结论　HIV 1辅受体的配体通过在人PBLs内双表达 ,使HIV 1两类主要辅受体表型剔除 ,基本阻断了     

汉坦病毒基因分型方法的建立及其核苷酸序列特征分析

目的使用RT—nested PCR分型检测方法及核苷酸序列测定技术，对来源于福建省内HFRS监测点的鼠肺标本及病人血清进行基因分型并对部分标本的核苷酸序列进行分析比较。结果24份阳性鼠肺标本中检出率为95．8％；20份病人血清标本中仅11份扩增阳性，检出率分别为：83％（≤1周），12．5％（〉1周）。扩增阳性标本中仅1份RT—PCR分型为HTN型，其余均为SEO型。这与核苷酸序列分型结果相一致。结论近年福建省流行的汉坦病毒仍以SEO型为主。核酸序列比较分析发现，福建省内同一地区流行的SEO型汉坦病毒核苷酸的同源性很高，大于99％，而不同地区病毒间核酸序列变异比较大。尤其是永春和松溪这两个地区的毒株差异达到20％左右，可能是SEO型中两个新的亚型。     

登革4型病毒深圳分离株E基因序列测定及其系统发生分析

目的对深圳市2005年从登革热患者急性期血液中分离到的1株登革病毒进行型别鉴定,从分子水平分析分离株的生物学特征,追踪其可能的地域来源。方法用C6/36细胞培养增殖病毒株SZ0524,收集病毒液。用逆转录-半套式PCR(RT-semi-nested-PCR)方法和荧光PCR方法对其进行型别鉴定。扩增病毒E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革病毒株进行同源性比较和进化树分析。结果深圳市登革病毒分离株用4型特异性引物扩增出392bp的特异性条带,荧光PCR进一步证实了分离的病毒株为登革4型病毒。SZ0524与登革病毒4型国际标准株H241株在E基因上核苷酸同源性为99.7%,而与登革病毒1、2、3型国际标准株HAWAII、NGC、H87同源性分别为57.0%、59.2%和56.2%。基因进化树显示SZ0524株与D4-73NIID株和D4-61NIID株亲缘关系最近,其次为H241,在进化树的同一分支上,属基因Ⅰ亚型。结论从分子水平证明从深圳市登革热患者血清中分离到的毒株确为DEN-4型病毒。结合流行病学调查资料,证实此病例为输入性感染病例,该毒株最有可能来源于东南亚一带。     

猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群影响的差异

目的 旨在探究猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群的影响差异.方法 本研究随机将3周龄的雌性BALB/c小鼠分为3组,即空白对照组、猪链球菌2型强毒株SS2-1感染组和弱毒株HA0609感染组.采用Illumina Miseq测序技术,测定了小鼠结肠粪便样品中微生物16S rRNA V3-4区序列,并对其微生...     

GⅡ-4型诺如病毒体外结合唾液HBGAs受体的检测与分析

目的建立诺如病毒（Norovirus,NoV）结合唾液HBGAs受体的实验方法、验证2株GⅡ-4型NoV毒株与我国人群唾液HBGAs的结合方武。方法收集健康志愿者唾液标本,采用凝集抑制实验法检测唾液中HBGAs血型物质,用EIA法检测NoV VLPs、阳性毒株与HBGAs的结合情况。结果63份标本检出O型21例（占33．3％）,B型14例（占22．2％）,A型和非分泌型各13例（分别占20．6％）,AB型2例（占3．2％）。rVA387、2株GⅡ-4型毒株均能结合分泌型,与非分泌型唾液不反应。结论本研究成功建立了NoV结合唾液HBGAs受体的实验方法,通过NoV毒株与HBGAs相互作用的研究有助于了解NoV的宿主适应特性及病毒进化和流行规律;同时为筛选防治我国人群的抗NoV药物提供技术平台。     

1例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊

目的采用实验室检测方法确诊一例特殊的疑似狂犬病病例。方法利用荧光抗体(FA)试验、双抗体夹心ELISA和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对一例死亡的疑似狂犬病人的脑组织和此脑组织经乳鼠脑内接种传代后的鼠脑组织分别进行检测和分析。结果死亡病人脑组织的直接FA试验和双抗体夹心ELISA检测为阴性,但RT-PCR检测结果为阳性。将该病人脑组织经乳鼠传代后对鼠脑组织用上述三种方法检测的结果均为阳性。对该街毒株的RT-PCR产物中的核蛋白基因序列进行测定,用Mega3.1软件进行分子进化关系分析,证实所分离的街毒株为基因Ⅰ型狂犬病病毒,与以往在该地区所分离的街毒株有较近的遗传关系。结论该病例可确诊为狂犬病死亡病例,其主要和决定性的死因为狂犬病,但并发的肺部感染可能加速了死亡的进程。WHO认为FA技术是狂犬病诊断的金标准,但本病例说明,在某些复杂情况下,只有将多种实验室检测方法联合运用才能确诊狂犬病,而且病毒分离和RT-PCR可能比FA试验更敏感。