小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01);小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.     

马钱苷调节UVB诱导的表皮黑素单位黑素生成的实验研究

目的:探讨不同浓度马钱苷对中波紫外线(UVB)诱导该模型中黑素生成及其作用的影响。方法:常规体外共培养人黑色素瘤A375、人皮肤角质形成细胞(HaCaT),以UVB20 m J/cm~2照射后加含马钱苷的培养液作用24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;采用多巴氧化法研究酪氨酸酶活性的变化;比色法测定黑素含量,免疫印迹法测定P38通路蛋白表达。结果:马钱苷0.01μm/L可抑制UVB诱导的表皮黑素单位中酪氨酸酶活性增高,减少黑素生成,其机制可能是通过抑制P38蛋白表达减弱信号通路作用,抑制酪氨酸酶活性而实现的。结论:高浓度马钱苷可明显抑制P38MAPK通路,进而抑制酪氨酸酶活性和黑素生成。     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

驱白艾力勒思亚散对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的:观察驱白艾力勒思亚散提取物对酪氨酸酶活性的作用,并进行其动力学研究,探讨其治疗白癜风的作用机理。方法:分别测定驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶的激活率,Matsuda法测定多巴色素自动氧化生成的黑素量,计算黑素生成上调率,并对酪氨酸酶激活作用进行动力学观察。结果:驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶均有明显的激活作用,其激活作用随着药量的增加而增强,黑素生成的上调率也呈剂量依赖性;动力学研究证实此激活作用显著,且醇提液效果优于水提液。结论:驱白艾力勒思亚散是治疗白癜风的有效药物,激活酪氨酸酶是其作用机制之一。     

宣肺汤对小鼠B16黑素瘤细胞代谢的影响

目的：观察宣肺汤对：B16黑素瘤细胞的作用,探讨其关白作用的机理及安全性。方法：测定宣肺汤对体外培养的B16黑素瘤细胞细胞活力、酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与熊果苷作对照比较。结果：25、50、100μg／ml宣肺汤对黑素瘤细胞的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的抑制作用,并呈剂量依赖性,且优于同浓度熊果苷,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论：宣肺汤有较强的抑制黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素瘤细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物。     

复色2号方对鼠黑素瘤B16细胞酪氨酸酶的影响

目的:探讨复色2号方治疗白癜风的分子学作用机制。方法:采用MTT法测定复色2号方对B16细胞增值的影响,在酶标仪下测定并记录B16细胞增殖情况;采用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定复色2号方对酪氨酸酶活性的影响;采用NaOH裂解法测定B16细胞黑素含量。结果:复色2号方药物浓度在1～1000g/L对黑素瘤B16细胞增殖无统计学意义(P0.05),但对酪氨酸酶活性和黑素合成有统计学意义(P0.05),呈浓度依赖性。结论:复色2号方对黑素瘤B16细胞增殖无影响,但对酪氨酸酶活性和黑素合成有较强的剂量相关性促进作用,可以达到治疗白癜风的目的。     

不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素生成的影响

目的:观察疮灵液对鼠永生化细胞(ATCC~?CRL-2770TM)黑素细胞黑素生成的作用。方法:应用MTT法测鼠永生化黑素细胞增殖、多巴氧化法测鼠永生化黑素细胞内酪氨酸酶活性、NaOH裂解法测鼠永生化黑素细胞黑素含量。结果:疮灵液在100～1 600μg/mL剂量,对小鼠永生化黑素细胞增殖具有增进作用,400μg/mL剂量促进作用最明显(P0.05)。疮灵液为800μg/mL～3 200μg/mL剂量,可显著激活鼠永生化黑素细胞酪氨酸酶活性(P0.01)。疮灵液于100μg/mL～3 200μg/mL剂量,对鼠永生化黑素细胞黑素合成均有增进作用(P0.05)。结论:疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素的合成具有显著增进作用,并且在治疗诸如白癜风的色素疾病中具有潜在的应用。     

加味七白膏对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成影响的实验研究

目的 研究加味七白膏的美白作用机理及对酪氨酸酶活性、黑素合成的影响.方法 体外培养黑素瘤细胞,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,490nm比色法测定黑素含量.结果 中药水煎液对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,或P<0.01).结论 加味七白膏美白作用机理之一可能为通过抑制酪氨酸酶活性达到减少黑素合成的目的 而起到美白作用.     

浮萍紫丹参对体外培养的黑素细胞生长的影响

目的 :研究中药对体外培养的人黑素细胞生长的影响。方法 :通过测定黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素含量及细胞增殖情况 ,了解药物浓度和生长的关系。结果 :浮萍、紫丹参提取物浓度在 0 - 2 0 0 μg/ml时对黑素细胞促生长作用明显 ,且呈剂量依赖关系 ,而药物浓度高于 2 0 0 μg/ml时并未见生长促进作用增加。结论 :中药浮萍、紫丹参对黑素细胞体外促增殖作用显著 ,这将为此类中药作为治疗白癜风的组方成份提供理论依据     

当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

三叶青脂溶性提取物对A375细胞增殖及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青三氯甲烷提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量;采用光学显微镜法观察其对细胞形态的影响。结果三叶青三氯甲烷提取物在6～500μg/ml浓度范围内对A375细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01),且呈时间-剂量依赖性;浓度小于50μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;在100～500μg/ml时,对A375肿瘤细胞有较强的抑制作用;光学显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。结论三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成具有抑制作用。     

木槿提取物抑制黑素生成的作用(2)

曾报道,体外试验显示木槿(Hibiscussyriacus)花的30%乙醇提取物(HS)具有抑制黑素生成的作用。此次以紫外线(UVB)照射小鼠、人皮肤三维模型,探讨了HS对黑素生成的抑制作用,并以酪氨酸酶活性抑制作用为指标分离活性物质,分析其结构。方法:①体内黑素生成抑制试验:小鼠照射UVB后,立即涂抹受试物的生理盐水溶液,反复涂抹5d,摘取耳廓皮肤表皮,进行DOPA染色,在显微镜下计数DOPA阳性黑素细胞数。②人皮肤三维模型的黑素生成抑制试验:将受试物注入皮肤模型杯内,培养20d后,将皮肤模型匀化测定黑素量。以渗到培养液上清中LDH的活性评价细胞毒…     

马钱苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：探讨马钱苷对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养模型黑素合成的影响。方法：将A375细胞和Hacat细胞构建共培养模型,以不同浓度马钱苷进行干预,通过MTY法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定共培养模型的细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果：与阴性对照组相比,马钱苷10-mol／L、1016moL／L和10-7mol／L组对共培养细胞增殖率无显著性差异（P〉0．05）。马钱苷10-mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成及酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）。与阳性对照组相比,马钱苷10。moL／L组对共培养模型酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）,马钱苷10山mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成无显著差异（P〉0．05）。结论：马钱苷可能通过抑制酪氨酸酶活性减少共培养模型黑素合成。     

驱虫斑鸠菊对人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及其基因表达水平的调节作用研究

目的:探讨驱虫斑鸠菊对人 A375黑素瘤细胞株分泌酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶基因表达水平的影响。方法:采用酶学方法研究驱虫斑鸠菊对酪氨酸酶活性的影响;采用475 nm 比色法测定黑素含量;采用 TRIzol 试剂盒提取总 RNA,再用半定量逆转录聚合酶链反应扩增 cDNA,检测酪氨酸酶基因表达水平。结果:驱虫斑鸠菊可以增强 A375人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑色素合成能力,还可增强酪氨酸酶基因表达。结论:驱虫斑鸠菊可能从基因水平增强酪氨酸酶活性,促进黑素合成。     

中药调控酪氨酸酶活性的现状分析

酪氨酸酶是黑素生成途径中的主要限速酶[1],体现在酪氨酸生成多巴和多巴醌的过程均需酪氨酸酶的参与。近年来,色素性皮肤病防治的研究热点趋向于中药对酪氨酸酶的抑制或激活作用,并有望通过这一途径取得突破性的进展。现对目前国内外有关中药调控酪氨酸酶活性的实验报道分析如下。 1 酪氨酸酶与色素性皮肤病 色素性皮肤病可分为色素减退和色素增加两大类,分别表现为皮肤颜色变白和变黑。白癜风是最常见的色素减退性皮肤病[2],发病率为0.5%～2%[3],发病原因复杂。而其发病机制则是由于人体皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶的活性减低或消…     

养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的影响

 目的：研究养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响及对细胞内酪氨酸酶的影响。 方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定养颜青娥丸对细胞增殖的影响；酶学方法研究养颜青娥丸对酪氨酸酶活性的作用；470 nm比色法测定合成黑素含量A值。结果：研究发现养颜青娥丸对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；组方单味药中杜仲、沙苑子、制首乌对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；补骨脂、核桃肉对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有促进作用，对合成黑素含量有增加作用。结论：养颜青娥丸对黄褐斑可能有一定的治疗作用，但治疗机制不能单纯用生化学、酶学改变来解释。     

依提菲力白热斯蜜膏对A375黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性、黑色素合成的影响

目的:研究维吾尔医经典方剂依提菲力白热斯蜜膏(简称蜜膏)对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗白癜风的配伍组成含义。方法:蜜膏按维吾尔医拆方,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响;比色法测定对黑素含量的影响。结果:蜜膏全方组(主药+辅助药+调解药)对A375细胞的增殖促进作用最强,其次为主药组;主药组对酪氨酸酶活性上调作用最强,其次为(主药+调节药)组;主药组对黑素合成具有较强的促进作用,其次为(主药+调解药)组。结论:依提菲力白热斯蜜膏对A375人黑素瘤细胞株促进细胞增殖、酪氨酸酶活性增强和黑素含量增加作用。     

生发片通过激活PKA信号通路促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成实验研究

目的:探讨生发片组方水提物对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响及作用机制。方法:采用MTT法筛选合适的药物浓度,L-多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素生成,Western blotting检测MITF、TYR及p-CREB蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,在0.25~1g·L-1浓度范围内,生发片组方水提物可明显促进酪氨酸酶活性和黑素合成,上调MITF、TYR及p-CREB蛋白的表达。结论:生发片水提物可能通过PKA信号通路促进黑素的合成。