成都市91株副溶血性弧菌血清型、 耐药性及毒力基因检测

摘要:目的　了解成都市副溶血性弧菌食物中毒疫情分离菌株和生鲜冻水产品分离菌株血清型分布、耐药性及毒力基因携带状况,为成都市副溶血弧菌疾病防治提供科学依据。方法　对检出的91株副溶血性弧菌采用血清凝结实验血清分型;采用E-test药敏试验进行耐药性检测;用荧光PCR检测菌株的tdh、trh、tlh毒力基因。结果　91株菌分属于8个群26个血清型,主要为O1群（36.26%）,其次是O4群（23.07%）和O2群（16.48%）;46株疫情患者肛拭分离株O4群（48.71%）、O1群（35.89%）为主;22株鲜冻海产品分离株O1群（45.45%）为主;18株生鲜淡水产品分离株O2群（55.55%）为主。91株副溶血性弧菌均检出tlh,检出tdh基因均为食物中毒患者肛拭菌株,仅有1株食物中毒患者肛拭菌株检出trh基因。E-test实验结果显示,除青霉素和氨苄西林外的其他12种试验抗生素均敏感。结论　成都市引起食物中毒疫情的副溶血性弧菌主要为携带tdh基因的O4、O1群菌株。     

合肥市2014-2019年副溶血性弧菌临床分离株病原学特征及耐药研究

目的 了解2014-2019年合肥市副溶血性弧菌临床分离株所属的血清群、毒力基因和耐药特征,为副溶血性弧菌感染的预防和控制提供科学依据.方法 采用玻片凝集法对107株副溶血性弧菌进行血清分群,Real-time PCR方法检测tlh、tdh和trh毒力基因,K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验.结果 107株副溶血性弧菌分属6个血清群,以O3群为主,占83.2％(89/107);其次为O4群,占13.1％(14/107).tlh、tdh和trh毒力基因检出率分别为100％(107/107)、99.1％(106/107)和0(0/107).107株副溶血性弧菌对氨苄西林和头孢唑啉的耐药率较高,分别达到84.1％(90/107)和82.2％(88/107).对头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟耐药率为0.9％(1/107),对哌拉西林、诺氟沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、甲氧苄啶/磺胺异恶唑、四环素、氯霉素和呋喃妥因完全敏感.结论 近几年来,合肥市副溶血性弧菌临床分离株以O3群为主,tdh毒力基因携带率非常高,已有菌株耐药情况存在,临床应规范用药.     

应用多重实时荧光PCR方法检测副溶血性弧菌及其毒力基因

目的应用多重实时荧光PCR方法检测113株食物中毒副溶血性弧菌分离株多种毒力基因携带情况。方法用水煮法提取菌株DNA后,利用四重实时荧光PCR方法对DNA同时进行4种基因的检测。结果所有的菌株均携带tlh基因,96株菌株(84.96%)携带tdh基因,9株菌株(7.96%)携带trh基因及62株菌株(54.87%)携带orf8基因的菌株同时tdh基因检测为阳性,无同时携带trh基因和orf8基因的菌株。trh、tdh基因和orf8基因阳性的菌株分布在O1~O4血清群。结论本市大部分食物中毒菌株携带除tlh基因外的1种或1种以上的毒力基因,一半以上的菌株为大流行株;四重实时荧光PCR方法可以同时鉴定和检测副溶血性弧菌及毒力基因,建议作为食源性暴发事件的常规检测方法,获得更快速、准确、完整的结果。     

温州市瓯海区腹泻患者副溶血性弧菌的病原学特征研究

目的 了解温州市瓯海区腹泻患者副溶血性弧菌的血清型分布、毒力基因特点和耐药性状况,为防治副溶血性弧菌引起的感染性腹泻提供科学依据。方法 对2016年5月-2017年10月分离的182株副溶血性弧菌进行药敏试验、血清分型及用荧光PCR检测菌株的tdh、trh、tlh毒力基因。结果 182株副溶血性弧菌血清型以O3∶K6为主,占51. 65%; O4∶KUT其次,占19. 21%。毒力基因PCR检测显示94. 51%(172/182)的菌株为tlh+/tdh+/trh-; 4. 95%(9/182)的菌株为tlh+/tdh-/trh-;仅1株携带tlh+/tdh+/trh+基因。药敏结果显示对氨苄西林79. 12%耐药,头孢唑啉4. 95%敏感,其他常用抗菌药物敏感。结论 温州市瓯海区副溶血性弧菌优势血清型为O3∶K6,其次是O4∶KUT。菌株对多数抗菌药物高度敏感,多数菌株携带tlh+/tdh+/trh-基因。加强对副溶血弧菌的监测,为本地区副溶血性弧菌种群的流行趋势及传染源的可能变迁提供早期预警。     

2006年-2013年四川省副溶血性弧菌毒力基因及耐药分析

目的研究四川省副溶血性弧菌毒力基因携带及抗生素的耐药情况,为副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据。方法运用多重荧光定量PCR对2006年-2013年共计290株副溶血性弧菌,进行耐热直接溶血素基因(tdh)和相关溶血素基因(trh)检测,用肉汤稀释法测定8种抗生素的耐药性。结果 290株菌中有22.4%的菌株仅携带tdh基因,0.7%的菌株仅携带trh基因,0.3%的菌株同时携带tdh和trh毒力基因。59株临床分离株中57株均仅携带tdh基因,检出率为96.6%。290株副溶血性弧菌仅有11株(3.8%的菌株)出现耐药。结论四川省副溶血性弧菌临床分离株多携带tdh毒力基因,食品分离株毒力基因携带率低,副溶血性弧菌分离株对抗生素敏感性较高,大多数现行临床使用的抗生素药物都是有效的,菌株的毒力基因携带与否和耐药无必然联系。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析及分子分型溯源研究

目的对1起食物中毒事件分离的副溶血性弧菌进行病原学检测及分子分型溯源研究。方法按照《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》GB 4789.7—2013对事件中病例的粪便/肛拭子、可疑食物等10份样本进行副溶血性弧菌的分离和鉴定。利用荧光PCR对分离出的副溶血性弧菌特异的ToxR基因进行检测,并采用多重荧光PCR对其进行不耐热性溶血毒素(tlh)、耐热直接溶血素(tdh)毒力基因和耐热相关溶血素(trh)毒力基因进行检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行电泳获得指纹图谱,并经Bio Numerics软件对其进行聚类分析。结果从4例病例的粪便/肛拭子和2份可疑食物样本中共分离出6株副溶血性弧菌,含5种血清型,分别为O1:KUT、O1:KUT、O3:K6、O4:KUT、OUT:KIII、O3:KUT。6株副溶血性弧菌均扩增出副溶血性弧菌特异的ToxR基因。所有菌株tlh基因均为阳性,分离自病例的粪便/肛拭子的4株菌株tdh毒力基因均为阳性;分离自可疑食物的2株菌株中有1株为tdh毒力基因阳性,另1株为阴性;所有分离菌株trh毒力基因均为阴性。聚类分析显示,菌株间相似系数为62.3%~100.0%。分离自可疑食物的菌株与病例的菌株带型不一致,为不同菌株,分离自病例的同一血清型的菌株同源,不同血清型为不同克隆。结论这是1起由携带tdh毒力基因的O1、O3、O4等多种血清型的不同克隆副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒事件。     

TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌毒力基因

目的建立同时检测副溶血性弧菌毒力基因tdh和trh的双重荧光PCR方法。方法筛选副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因的特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度实验,并对本实验室保存的54株副溶血性弧菌进行tdh、trh毒力基因的检测,以了解不同来源的副溶血性弧菌携带毒力基因的状况。结果建立的双重荧光PCR方法特异度强(100%),最低检测浓度达到20 cfu/ml,对本实验室保存的副溶血性弧菌进行毒力基因的检测结果显示,从临床分离的10株副溶血性弧菌和海产品样品中分离的1株副溶血性弧菌均为tdh扩增阳性,trh扩增阴性。结论所建立的方法特异性好,灵敏度高,适用于副溶血性弧菌的毒力基因检测。     

不同来源副溶血性弧菌血清群和毒力基因及其耐药性

目的了解副溶血性弧菌水产品分离株和食物中毒患者分离株的血清群、毒力基因及其耐药性,为预防控制溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。方法对副溶血性弧菌分离株利用血清凝聚试验进行分群,应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测耐热直接溶血素(TDH)和耐热直接溶血素相关毒素(TRH)毒力基因,采用纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株水产品分离株分布于O4、O3、O2、O11、O5、O1共6个血清群,无优势菌群,TDH与TRH毒力基因均阴性。22株食品中毒分离株分布于O3、O4、O1共3个血清群,以O3群为主,占81.8%,TDH阳性率77.3%,TRH阳性率13.6%。药敏试验结果显示副溶血性弧菌对青霉素类、头孢类、磺胺类抗生素部分耐药或完全耐药,对其他类抗生素敏感。结论副溶血性弧菌水产品分离株与食物中毒分离株的血清群、毒力基因存在较大的差异,所分离菌株对多种常用药物敏感性高。     

宁波地区海产品中副溶血性弧菌分布与研究

目的了解宁波地区海产品中副溶血性弧菌的分布,菌株血清型、PFGE型别及产毒基因等特征,为防控副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法用PCR筛检与GB法相结合方法分离细菌;用标准血清和PFGE对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;用K-B法进行耐药性测定。结果从3 525份海产品中检出1460株副溶血性弧菌,检出率为41.42%;象山、宁海检出率分别为73.72%和70.69%,与其他县(市)区差异有统计学意义(χ2=42.694,P<0.01);560株副溶血性弧菌分出10个血清群,0∶6群和0∶5群为流行优势血清群;菌株对氨苄西林耐药率达92.64%,但对常用抗生素均敏感;450株副溶血性弧菌检出5株带tdh的,阳性率为1.11%,未检出trh毒力基因。依据PGFE带型差异将330株副溶血性弧菌分为29个型。结论在海产品中副溶血性弧菌带菌率较高,是引发疾病的高危食品;菌株的流行优势群型较分散;可用常用抗生素治疗;菌株带tdh和trh毒力基因较低,根据该特征可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类。     

2011-2014年北京市副溶血性弧菌血清型 及毒力基因特征分析

摘要:目的　了解2011-2014年北京市引起腹泻的副溶血性弧菌血清分型及主要毒力基因特点。方法　对561株副溶血性弧菌进行生化鉴定和血清学分型试验,应用实时荧光PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh。结果　561株副溶血性弧菌有9个O群和23个K型,共34个血清型,以O3∶K6血清型为主,占67.6%（379/561）。2011-2014年血清型分布存在差异。561株副溶血性弧菌tlh、tdh和trh基因阳性率分别为100.0%（561/561）,97.1%（545/561）和1.1%（6/561）。3种毒力基因分成4种类型,tlh+tdh+trh-为优势基因型,占96.4%（541/561）。结论　2011-2014年北京市引起腹泻的副溶血性弧菌有多种血清型,多为产毒株,以携带tlh 和tdh基因的O3∶K6为优势血清型。通过对生化、血清分型和毒力基因检测结果进行综合分析,有助于提高副溶血性弧菌鉴定的正确性。     

甬沪两地海产品中副溶血性弧菌携带与分型

目的:了解宁波和上海两地市售海产品中副溶血性弧菌污染情况以及菌株的流行优势型和毒力等.方法:用PCR快速筛检与GB法相结合方法分离海产品中副溶血性弧菌;用血清学和PFGE方法对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;结果:从3 740份海产品中分离出1 507株疑似副溶血性弧菌,检出率为40.29％,其中宁波地区检出率为41.42％,上海地区检出率为21.86％;菌株的生化反应典型,560株副溶血性弧菌分出10个血清群,有30株VP未被分型,分型率为95.06％,377株副溶血性弧菌分出29个PFGE型;497株副溶血性弧菌检出7株带tdh毒力基因的副溶血性弧菌,均未检出trh毒力基因,检出率为1.41％.结论:宁波、上海海产品中副溶血性弧菌携带率较高,是诱发副溶血性弧菌疾病的原因食品.菌株的血清型和PFGE型较分散,其流行优势群与致病性副溶血性弧菌的相关性不明显;菌株带tdh和trh毒力基因较低,与病人分离株有明显差别,根据该特征,可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类,便于分析和检测.     

金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染状况及PFGE分型研究

目的 了解金华市淡水产品中副溶血性弧菌的污染状况,运用脉冲场凝胶电泳技术对分离到的副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采集金华市具有代表性的农贸市场和超市出售的淡水产品,进行副溶血性弧菌的分离与鉴定;应用荧光定量PCR的方法检测毒力基因tdh和trh并进行PFGE聚类分析。结果 150份淡水产品中共检出受到副溶血性弧菌污染的样品64份,阳性率为42.7%;64株副溶血性弧菌分成9个血清群,流行优势血清群为O1、O11;分离到的菌株均没有检测到毒力基因tdh和trh;PFGE共分为54个带型,呈多态性,菌株相似度在52.3%～100%。结论 金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染较为严重,应加强淡水产品的监测;PFGE分子分型结果表明,不存在当地淡水产品溶血性弧菌流行趋势。     

2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究

目的 了解四川地区2009年副溶血弧菌食物中毒疫情分离株和监测食品样品分离菌株菌型分布、致病力及分子分型特征,为四川地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用血清玻片凝集试验对2009年从食物中毒疫情和常规监测食品中分离的副溶血孤菌菌株进行血清分型、应用PCR方法进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测、小鼠腹腔注射进行致病力实验和进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析等.结果 40株菌分属于5个血清群,疫情分离株分属于O3和O4群,监测分离株主要为O1群占43.75％ (7/16),其中2起疫情分离到多个血清型的菌株;所有菌株trh基因均为阴性,其中20株携带tdh毒力基因,携带tdh毒力基因和不携带tdh、tlh毒力基因的菌株均有致病力.40株菌通过PFGE分型,共得到29个带型,同一疫情分离株具有多个PFGE型别..结论 四川省食品分离株和暴发疫情无太多联系,食品分离株血清型和PFGE型别呈多样性.对于从同一起暴发疫情中检出的不同血清型和不同PFGE型别的副溶血性弧菌需要确认各菌株与暴发的关系.     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析

目的对一起食物中毒事件分离的菌株进行病原学分析。方法参照《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》(GB 4789.7—2013)等标准对29份样本进行副溶血性弧菌检测,对分离的菌株进行血清学试验和tdh毒力基因检测,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 16份样本检出副溶血性弧菌20株,分属5个血清群:7株O1,5株O4,3株O5,4株O10,1株O11。分离自患者水样便和肛拭的6株菌株tdh均为阳性,分离自食品和加工环节的14株菌株tdh均为阴性。PFGE分子分型显示:分离自患者的同一血清群的菌株同源,不同血清群为不同克隆;分离自加工环节的与分离自患者的同一血清群的菌株为不同克隆。结论这是一起由O4和O10血清群副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。     

义乌市市售水产品副溶血性弧菌污染状况调查

目的了解义乌市2011—2013年市售水产品副溶血性弧菌污染状况。方法采集义乌市具有代表性的农贸市场、大型超市和餐饮单位的561份常见水产品进行副溶血性弧菌分离培养,采用血清凝集试验进行血清分群;应用PCR方法检测直接耐热溶血素(TDH)的基因tdh和耐热直接相关溶血素(TRH)的基因trh。结果561份水产品中检出副溶血性弧菌281株,阳性检出率50.09%;其中贝类阳性检出率最高为76.85%,其次是蟹类和虾类,分别为65.71%和64.63%。281株副溶血性弧菌分成9个血清群,流行优势血清群为O1、O5和O2,分别占21.71%、18.15%和14.59%。281株副溶血性弧菌tdh基因阳性率为3.20%,trh毒力基因全部阴性。结论义乌市市售水产品中副溶血性弧菌污染较为严重,应加强食品安全管理。     

2021年浙江省湖州市食源性腹泻病例中副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解湖州市食源性副溶血性弧菌的血清型别、毒力基因、抗生素耐药以及分子分型情况。方法 收集食源性腹泻病例中分离的副溶血性弧菌，对分离株进行血清分型、tlh/tdh/trh毒力基因检测、分子分型和药敏试验。结果 88株副溶血性弧菌血清型别成多样性，主要血清型为O10:K4(81.82%)、O3:K6(5.69%)、O4:Kut(3.41%)。毒力基因类型包括tdh⁺trh^-(92.05%)、tdh^-trh⁺(5.68%)、tdh⁺trh⁺(2.27%)。31株副溶血性弧菌对氨苄西林的耐药率为83.9%,对四环素、氯霉素、头孢噻肟、头孢唑林、庆大霉素、环丙沙星、阿奇霉素和萘啶酸100.0%敏感。52株副溶血性弧菌可分为15个PFGE带型，相似度达到100%以上的克隆系有4个。结论 O10:K4副溶血性弧菌在湖州市腹泻患者中首次出现且逐渐成为流行优势株；菌株以携带tdh基因为主，菌株之间相似度高。     

2014-2015年烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株的生物学特征及分子分型研究

目的 了解烟台市副溶血性弧菌临床分离株的耐药特性、毒力基因分布情况以及分子分型特征。方法 对2014-2015年的副溶血性弧菌临床分离菌株按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行14种抗生素的药敏试验;通过实时荧光PCR检测tlh、trh、tdh、orf8 4种毒力基因;采用脉冲场凝胶电泳对菌株基因组DNA进行分子分型。结果 (1)20株副溶血性弧菌仅对头孢唑啉耐药或处于耐受敏感之间,耐药率为5.0%,对其他13种抗生素100.0%敏感。(2)20株副溶血性弧菌均携带特异性基因tlh,其他3种毒力基因trh、tdh、orf8的阳性率分别为30.0%(6/20)、100.0%(20/20)、65.0%(13/20),毒力基因组成以orf8-tdh型为主,占60.0%(12/20)。(3)20株菌被限制性内切酶NotⅠ切出6个PFGE types(PT),带型相似度60.7%～100.0%,根据PT相似系数大于80.0%的菌株,可以分成A群和B群2个聚类群。结论 烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株耐药较轻,毒力基因tdh、orf8的携带率较高,PFGE带型聚类群内相似度较高且存在优势明显的分子型别。     

天津市滨海新区汉沽市售麻蚶中副溶血性弧菌的分离与分子特征

目的监测市售贝壳类海产品中副溶血性弧菌的带菌状况、了解副溶血性弧菌的血清型别分布、耐药性特点及基因型别特征。方法随机采集15份汉沽海鲜市场麻蚶,按照GB4789.7-2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行分离鉴定,荧光定量PCR对耐热直接溶血素(tdh)和相关溶血素(trh)进行了毒力基因检测,K-B纸片扩散法对分离的菌株用15种抗生素进行耐药性监测,玻片凝集法进行血清分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)用BioNumerics软件,进行聚类分析。结果 15份麻蚶样品分离出副溶血性弧菌108株,毒力基因检测tdh和trh均为阴性。耐药性监测,79株(79/108)呈现单一耐药、22株(22/108)双重耐药、4株(4/108)为多重耐药,分别占73.15%,,20.37%,和3.7%。血清分型O群3个,其中O1群(78株)、O5群(24株)和未定型6株;K抗原定型12个,72株,未定型2个36株。PFGE分出102个不同的带型。结论汉沽区市售麻蚶中副溶血性弧菌检出率高,但菌株均未携带毒力基因。耐药性监测,97.22%的菌株至少对单一抗生素耐药,血清型别分布呈多样性,PFGE图谱呈多态性。     

35株引起食物中毒的副溶血性弧菌病原学特征分析

目的了解广东省部分地区近年发生的副溶血性弧菌食物中毒菌株血清分型、毒力基因及耐药状况,为预防和控制由副溶血性弧菌引起的食物中毒提供科学依据。方法对35株由湛江、东莞、中山、惠州市疾病预防控制中心从食物中毒病例中分离获得的副溶血性弧菌进行血清分型;采用PCR检测副溶血性弧菌的耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接相关溶血素基因（trh）;采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株从食物中毒病例中分离到的副溶血性弧菌菌株分属6个血清群,分别为O1、O2、O3、O4、O8及O10群,分别占20.0%、2.9%、62.9%、8.6%、2.9%、2.9%,其中O3：K6血清型共检出18株,占51.4%（18/35）。tdh携带率为88.6%（31/35）,trh携带率为8.6%（3/35）。35株副溶血性弧菌对链霉素、氨苄西林和阿米卡星的耐药率分别为100.0%、80.0%（28/35）和74.3%（26/35）,而对四环素、环丙沙星、复方新诺明、磺胺复合物S3、氯霉素、头孢曲松的敏感性均达80%以上（82.9%～94.3%）。结论在广东省部分地区引起食物中毒的副溶血性弧菌血清型主要是O3群,其中又以O3：K6为主,主要携带tdh基因,对大多数抗生素敏感。     

深圳市龙岗区副溶血性弧菌检出情况及血清型分析

目的了解深圳市龙岗区水产品、外环境水体及食物中毒样品中副溶血性弧菌的污染状况、血清型分布及携带耐热直接溶血素(tdh)毒力基因情况。方法于2009年6—10月间采集深圳市龙岗区水产品、外环境水体及期间发生的5起食物中毒病人粪便样品共548份,通过实时荧光PCR法对副溶血性弧菌初筛后进行常规分离培养,并对分离株进行血清学分型及携带tdh产毒基因情况进行分析。结果 548份样品分离到223株副溶血性弧菌,其中42份食物中毒样品中分离到35株且均携有tdh产毒基因,21株血清型为O3∶K6,其余14株为O4∶K8。506份水产品和外环境水体中分离到副溶血性弧菌188株,其血清群呈多样化,最主要的为O2(25.0%),其次为O3(10.1%)、O1(6.4%)、O10(6.4%)。结论在深圳市龙岗区引起食物中毒的主要病原体是带有tdh基因的O3∶K6或O4∶K8血清型的副溶血性弧菌。该区水产品和外环境水体中副溶血性弧菌的带菌率较高且血清型呈现多样性,并与食物中毒分离株血清型存在差异。