脉冲电场电泳系统的发展及在大DNA分子研究中的应用(文献综述)

脉冲电场凝胶电泳是近年发展起来的一种新技术,用于分离常规电泳所不能分离的大 DNA 分子,本文介绍了这种电泳系统的发展类型和特点、影响参数以及在大DNA 分子研究中的应用。     

胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 ,成功地得到了胃粘膜组织的双向凝胶电泳图谱     

转铁蛋白多态性的研究及其在养马生产中的应用

转铁蛋白(Tf)是指能结合铁成分的β-球蛋白。应用电泳法进行分析时,发现它不但在不同种类的动物之间有不同的区带,而且在同种动物中也能区分出有个体差异的区带,这种现象被称为多态性。有关马匹Tf多态性的研究始于1958年,Ashton首先用淀粉凝胶电泳法对79匹马的球蛋白进行了分析,发现Tf受两个等位基因的控制,各     

一种基于双重PCR结合毛细管电泳验证转录组测序结果的新方法

目的：将双重PCR与毛细管电泳技术相结合,建立一种验证转录组测序结果的新方法。方法根据前期进行转录组测序的分析结果,挑选8个差异基因作为靶基因,分别使用双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳、双重PCR结合毛细管电泳以及实时荧光定量PCR进行验证,比较三者的验证率。结果双重PCR结合琼脂糖凝胶电泳的验证率为50％;双重PCR结合毛细管电泳和实时荧光定量PCR的验证率均为100％。结论双重PCR结合毛细管电泳可作为转录组测序结果验证的一种有效方法。     

小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究

目的 提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离. 方法 提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点. 结果 成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱. 结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

无胶筛分毛细管电泳与琼脂糖电泳检测ApoB100基因点突变？…

目的：无胶筛分毛细管电泳与琼脂糖电泳两种方法检测ＡｐｏＢ１００基因点突变的比较。方法：聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡｐｏＢ１００基因的２６号外显子,ＢｂａⅠ酶切后,分别用常规琼脂糖电泳和无胶筛分毛细管电泳对比检测了４３例标本。结果和结论：毛细管电泳的突变检出率明显高于琼脂糖凝胶电泳,是一种研究基因突变与高脂血症关系更有效的分析手段。     

聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳凝胶的干膜制作法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作简单,分辨率高,是生物化学技术和医学检验中常用的一种电泳方法。为便于电泳毕标本保存,一般将电泳毕凝胶制成干膜。具体制作方法文献中未见介绍。若制作不当,膜易发生皱缩、干裂。本人在工作中试验出一种凝胶干膜制作法,操作简单易掌握。制成的膜美观、光滑、平整。现介绍如下。     

无胶筛分毛细管电泳与琼脂糖电泳检测ApoB_100基因点突变的比较

目的：无胶筛分毛细管电泳与琼脂糖电泳两种方法检测ＡｐｏＢ１００基因点突变的比较。方法：聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡｐｏＢ１００基因的２６号外显子，ＸｂａⅠ酶切后，分别用常规琼脂糖电泳和无胶筛分毛细管电泳对比检测了４３例标本。结果和结论：毛细管电泳的突变检出率明显高于琼脂糖凝胶电泳，是一种研究基因突变与高脂血症关系更有效的分析手段。     

WD-Ⅱ微型多用途交直流两用电泳仪简介

在常用电泳技术中,自1948年Wieland等开创纸上电泳起,电泳分析技术中就存在无功拥耗现象,罕见有人研究,以致大量生产功率消耗与体积庞大的电泳仪供临床常规应用。这在制造中会消耗大量原材料,应用中会消耗大量药品与电能;且最大功率长期很少发挥作用,而成为摆设,以致电泳成本高,价格贵,     

亲和毛细管电泳法分离去甲万古霉素对映体

目的 :以人血清白蛋白 (HSA)为手性选择剂 ,采用亲和毛细管电泳法分离去甲万古霉素对映体。方法 :磷酸缓冲溶液 (pH5 .5)为运行缓冲液 ,以含 40 0 μmol·L- 1 HSA的运行缓冲液为分离缓冲液 ,利用部分灌注技术消除高浓度人血清白蛋白对被分析物检测的干扰 ,灌注分离缓冲液时间为 30s。结果 :在此条件下 ,去甲万古霉素两对映体得到了很高的分离度。结论 :本方法简便 ,在毛细管电泳中 ,人血清白蛋白是一种很好的手性选择剂。     

2-D电泳结合ECL Western杂交分离鉴定大鼠肝82kD蛋白

２－Ｄ电泳结合ＥＣＬＷｅｓｔｅｒｎ杂交分离鉴定大鼠肝８２ｋＤ蛋白６１００８３成都成都军区总医院雷士泽刘晓波林万芳①关键词电泳；Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交；蛋白质分离中国图书资料分类号Ｒ３６２２－Ｄ电泳是分离粗提蛋白强有力的手段。它能根据分子量和等电点（ＩＥＰ...     

一种快速鉴定核糖核酸质量的方法

目的：建立一种快速鉴定RNA完整性的方法。方法：在常规琼脂糖电泳的基础上,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果：提取的总RNA用此方法电泳后可得到28S、18S、5.8s(5s)三条清晰的RNA条带。结论：此方法可用于对RNA完整性进行快速鉴定。     

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较张津辉蒋中华陈惠鹏军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和非解离聚丙烯酰胺凝胶电泳（非解离ＰＡＧＥ）在实验室中常用于制备少量天然或重组蛋白质以供研究其理化性质和...     

用琼脂区带电泳切割法分离纯化小鼠血清IgG

采用DEAE纤维素离子交换法进行分离纯化小鼠血清IgG不易获得理想的结果。为此参照我室工作经验利用电内渗作用使IgG向阴极移动的特点,采用琼脂区带电泳切割分离纯化,获得了纯度较好的小鼠血清IgG。免疫电泳琼脂板按常规方法制备,如图1,孔内加经50%饱和(NH_4)SO_4盐析小鼠血清粗制样品50微升,缓冲液为0.05MTris-HClpH8.0,电压4—6伏/厘米,电泳2小时左右,电泳后按图1切割和收集IgG部分的琼脂     

细胞裂解物的O''''Farrell电泳

本实验室建立了O'Farrell 1975年提出的一种新型双向电泳(2-DE)技术,采用含脲与中性去污剂的等电聚焦技术(IEF)为第一向,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)为第二向.此技术将上述两种分离方法的特点结合起来,显著提高了对蛋白质多肽的电泳分辨率.O'Farrell电泳技术已成为现今所有蛋白质多肽分离分析技术中分辨率最高的一种,在基因表达、遗传变异、癌变过程的研究中应用日益广泛.     

不同地理株白纹伊蚊的同功酶和可溶性蛋白的比较研究

采用生化技术进行蚊虫分类学和亲缘关系的研究,国外已有不少报道。国内,80年缪建吾等人也报告了对蚊虫酯酶同功酶的研究结果,并认为用电泳技术不仅能区别蚊虫的种属,也能区分蚊虫的不同虫期。但目前尚未见到用聚焦电泳方法对不同地理株蚊虫的生化分析结果。为了进一步对不同地理株白纹伊蚊,在分类学和亲缘关系上的探讨,我们使用圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析的同时,又建立了等电点聚焦电泳(IFE)的蚊虫同工酶及可溶性蛋白分析技术。先后对我所饲养的三属六种十二株伊蚊、库蚊和按蚊作了酯     

毛细管电泳高频电导法检测游离氨基酸的条件考察

目的:建立毛细管电泳高频电导法分离检测游离氨基酸的优化分离条件.方法:将18种游离氨基酸经自由区带电泳分离后,进行高频电导检测.结果:18种氨基酸能在9 min内较好地分离,线性在5.00×10-5～5.00×10-3 mol/L范围,最低检出限在16.4～74.8μmol/L范围.结论:毛细管电泳高频电导法有望成为一种临床上快速、直接、准确、低成本的氨基酸检测方法.     

放射线影响研究所(RERF)进行的遗传生化学调查——原子弹爆炸的遗传学效应

为了了解广岛长崎的原子弹爆炸后辐射对遗传的影响,放射线影响研究所进行了广泛而长期的研究。本文报告了自1976年至1983年遗传生化学的调查结果。观察对象分为两组: 1.近爆心受照(调查)组:父母亲(或一方)在广岛长崎受照射时位于距爆心2000米以内,在1946年5月以后所生的全部子女,达12岁时进行检查。双亲所受剂量合计平均为γ线76拉德,中子11拉德。2.远爆心受照(对照)组:父母亲(或一方)在广岛长崎原子弹爆炸时位于距爆心2500米以外与第一组同时期所生的子女,按第一组对象的性别、年龄匹配选出。双亲所受剂量合计在1拉德以下。对两组人员用ACD抗凝采血,分离血浆与红细胞。用淀粉凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法及等     

非水毛细管电泳拆分抗胆碱能药物对映体

目的建立非水毛细管电泳拆分体系拆分抗胆碱能药物。方法以有机溶剂甲醇为分离介质,磷酸和氢氧化钠为支持电解质,采用带负电荷的环糊精作手性选择剂,对几种抗胆碱能药物进行了毛细管电泳拆分,并探讨了影响拆分的因素。结果以带负电荷的环糊精HDMSβCD为手性添加剂,在含有20mmol·L-1H3PO4和10mmol·L-1NaOH的甲醇介质中,成功分离了6种抗胆碱能手性药物。结论该方法具有操作简单、重现性好、分析时间短等优点,值得推广应用。     

温和条件下分离马胶鲨皮胶原蛋白的方法及其部分特性研究

目的探讨分离马胶鲨皮胶原蛋白的方法以及马胶鲨皮胶原蛋白的部分生物化学特性。方法马胶鲨皮经清洗、浸泡、匀浆、离心得上清液。沉淀重复上述的提取过程，合并上清液，加硫酸铵沉淀胶原蛋白，回收的沉淀溶于磷酸盐缓冲液，经葡聚糖凝胶过滤后，蛋白溶出液被冷冻干燥。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法、差示扫描量热仪法、圆二色谱仪法表征了通过上述磷酸盐缓冲液溶胀分离法获得的胶原蛋白的特性。结果用磷酸盐缓冲液溶胀分离法从马胶鲨皮分离得到胶原蛋白，胶原蛋白的回收率为鲜重的3．2％～3．4％；分离的胶原蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现清晰的三条谱带，分子质量分别为205000、134000、118000；马胶鲨皮胶原蛋白的最高热变性温度为47℃；分离的马胶鲨皮胶原蛋白在空间结构上以β-折叠为主，并包含有大量的无规卷曲。结论本研究所制备的高纯度胶原蛋白可用于生物医学材料的进一步研究。