维生素K3和三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的协同作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合维生素K3对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞生长抑制及诱导凋亡作用机制。方法:采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合VK3对RPMI8226细胞生长抑制作用、DNA电泳、流式细胞术Annexin V/PI标记法检测凋亡,观察As2O3联维生素K3对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;同时通过RT-PCR检测VEGF表达来观察VK3、As2O3对RPMI8226细胞的凋亡诱导作用及两者是否有协同作用。结果:VK3和As2O3二者均可明显抑制RPMI8226细胞系的增殖,其作用机制可能通过降低Bcl-2mRNA的表达、诱导调亡,这种效应具有时间与剂量依赖性;二者间具有协同作用。经VK3和As2O3作用后的RPMI8226细胞出现凋亡细胞的特征;维生素K3(VK3)、As2O3单独及联用作用于RPMI8226细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带。与单用As2O3相比,As2O3联合VK3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高,S期细胞减少。RT-PCR检测表明RPMI8226细胞经VK3、As2O3单独及联合作用后血管内皮生长因子VEGF表达明显降低。结论:VK3、As2O3单用及联用对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且具有一定的量效和时效关系。可能通过VEGF表达降低而起作用。VK3和As2O3在诱导RPMI8226细胞凋亡中具有明显的协同作用。     

维生素K_3和三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的协同作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合维生素K3对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞生长抑制及诱导凋亡作用机制。方法：采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合VK3对RPMI8226细胞生长抑制作用、DNA电泳、流式细胞术Annexin V/PI标记法检测凋亡,观察As2O3联维生素K3对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;同时通过RT-PCR检测VEGF表达来观察VK3、As2O3对RPMI8226细胞的凋亡诱导作用及两者是否有协同作用。结果：VK3和As2O3二者均可明显抑制RPMI8226细胞系的增殖,其作用机制可能通过降低Bcl-2mRNA的表达、诱导调亡,这种效应具有时间与剂量依赖性;二者间具有协同作用。经VK3和As2O3作用后的RPMI8226细胞出现凋亡细胞的特征;维生素K3（VK3）、As2O3单独及联用作用于RPMI8226细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带。与单用As2O3相比,As2O3联合VK3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞减少。RT-PCR检测表明RPMI8226细胞经VK3、As2O3单独及联合作用后血管内皮生长因子VEGF表达明显降低。结论：VK3、As2O3单用及联用对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且具有一定的量效和时效关系。可能通过VEGF表达降低而起作用。VK3和As2O3在诱导RPMI8226细胞凋亡中具有明显的协同作用。     

和厚朴酚联合三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡的作用机制

〔摘 要〕 目的：探究和厚朴酚（HNK）联合三氧化二砷（As2O3）诱导人多发性骨髓瘤 RBMI8226 细胞株的凋亡作用机制。 方法：不同浓度的 HNK、As2O3 单药作用于细胞 24 h、48 h、72 h 后，采用 CCK–8 法检测细胞增殖抑制率；应用 Annexin V–FITC/PI 双染及 PI 单染法流式细胞术检测各处理组细胞凋亡和周期分布情况；采用 Western blot 法检测细胞中 Bcl–2、 Bax、Caspase–3 蛋白表达水平。结果：HNK 与 As2O3 单药对 RBMI8226 细胞增殖具有抑制作用，呈时间和剂量依赖性； HNK 与 As2O3 单药能有效诱导细胞凋亡，两药联合后对细胞的诱导凋亡作用较单药显著，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）； HNK 和 As2O3 单药可使骨髓瘤细胞阻滞在 S 期，两药联合可增强诱导细胞分化作用，使细胞由 G1、G2 期进入 S 期，差异 具有统计学意义（P ＜ 0.01）。联合用药时能够降低细胞的 Bcl–2 水平、增加 Caspase–3 以及 BAX 水平表达。结论：HNK 及 As2O3 联合对人多发性骨髓瘤 RBMI8226 细胞株具有协同杀伤作用，该作用可能通过激活凋亡相关信号通路来诱导凋亡。     

丹参酮诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡并降低其VEGF表达

目的 观察丹参酮抑制多发性骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞生长及其对VEGF表达的影响.方法 将丹参酮与RPMI8226细胞共培育,采用MTT法观察细胞生长,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞膜表面VEGF的表达.结果 丹参酮对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效关系;丹参酮诱导8226细胞凋亡,丹参酮作用于RPMI8226细胞48 h导致VEGF表达减少.结论 丹参酮抑制RPMI8226细胞的生长诱导其凋亡,同时降低VEGF表达.     

龙葵总碱诱导骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察龙葵总碱对骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡的作用,确定龙葵总碱抑制RPMI8226细胞生长的最适浓度和最适时间。方法:培养RPMI8226细胞,加入龙葵总碱,设置800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125mg/L共9个浓度梯度,另设立空白对照组(0mg/L),分别于24、48、72h以MTT法测定龙葵总碱对细胞生长活性的影响。AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡,获得细胞凋亡数据后用Mod Fit LT软件进行细胞凋亡相对定量分析。结果:龙葵总碱可抑制RPMI8226细胞株的增殖,其细胞增殖抑制率呈剂量-时间依赖性;25mg/L龙葵总碱处理RPMI8226细胞48h为最适作用浓度和时间。AnnexinⅤ/PI法证实了龙葵总碱可以诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。结论:龙葵总碱可抑制人骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞增殖,在一定范围内呈时间和剂量依赖性,龙葵总碱可以诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。     

白花蛇舌草诱导骨髓瘤8226细胞凋亡的研究

目的:通过对白花蛇舌草(hedyotis diffusa,HD)在体外抑制骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖作用的观察,探讨HD治疗骨髓瘤患者的作用机制。方法:以多发性骨髓瘤细胞株(RPMI8226)为研究对象,应用MTT法观察不同浓度HD对RPMI8226细胞增殖的影响作用,用AV/PI流式细胞检测术观察细胞凋亡,Hoechst染色观察形态学改变。结果:HD在1~4mg/mL浓度范围内对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达到了92.68%,呈时间、剂量依赖关系。以1、2、3mg/mL的HD分别作用RPMI8226细胞24h后,AV/PI流式细胞仪分析结果显示早期凋亡率分别为:22.52%、62.31%、69.94%,高于空白对照组8.93%。HD诱导RPMI8226细胞凋亡时,细胞核可见凋亡小体,且凋亡小体数量随HD浓度增加而增加。结论:HD在一定浓度下可抑制骨髓瘤细胞增殖,其作用机理可能是诱导细胞凋亡。此实验研究结果为HD作为治疗多发性骨髓瘤的辅助药物提供实验依据。     

白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株增殖的抑制作用

目的 探讨白花蛇舌草注射液(HDI)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226、U266增殖抑制作用及机制. 方法 将RPMI 8226、U266细胞以1×106/ml的浓度接种于含10％胎牛血清RPMI 1640培养液中,取对数生长期的细胞进行实验.检测HDI对RPMI 8226、U266抑制作用并筛选研究浓度;观察不同浓度HDI对RPMI 8226、U266细胞凋亡、细胞周期、细胞因子及细胞株相关基因mRNA表达的影响. 结果 筛选出0、20、40、60 μl/ml HDI作用于RPMI 8226、U266细胞株,HDI可抑制RPMI 8226、U266增殖,诱导RPMI 8226凋亡,且有G1/S期阻滞作用.HDI可下调RPMI 8226、U266上清液血管内皮生长因子(VEGF)水平,且呈浓度依赖,同时上调RPMI 8226白细胞介素-6(IL-6)水平、下调U266 IL-6水平(P＜0.05或P＜0.01).经40 μl/ml HDI处理后,RPMI 8226及U266细胞株相关基因除Bax、Caspase-3外其余基因mRNA表达均有改变(P＜0.05或P＜0.01). 结论 HDI可抑制MM细胞株RPMI 8226、U266增殖,其作用机制可能促进细胞凋亡、阻滞细胞周期及改变细胞因子及细胞株相关基因mRNA表达有关,但途径不尽相同.     

高三尖杉酯碱联合三氧化二砷诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株凋亡的实验研究

目的通过体外实验阐述高三尖杉酯碱（HHT）单药及联合亚砷酸（ATO）用药对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226作用及其机制。方法应用四甲基偶氮唑（MTT）比色法,检测HHT、ATO单药及两者联合用药对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的影响,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞早期凋亡比率。Western blot 检测药物处理后凋亡关键蛋白（Caspase-3、9及PARP）、Bcl-2家族蛋白（Bcl-2、Mcl-1、Bcl-xl）及AKT蛋白的表达。结果HHT、ATO单药可显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,其作用呈时间及浓度依赖（P<0.05）,且两药联合具有协同作用（CI<1）。HHT、ATO单药可诱导RPMI 8226细胞凋亡且呈浓度依赖,出现细胞凋亡形态学改变及早期凋亡比率增高,两药联合可加强诱导凋亡作用。HHT可呈浓度依赖性激活Caspase-3、PARP表达;HHT（40 ng/mL）与ATO（8.5 μmol/L）联合用药可显著激活Caspase-3、9,下调抗凋亡蛋白Mcl-1及Bcl-xl的表达,呈时间依赖性降低AKT磷酸化水平。结论HHT、ATO单药或联合用药可诱导RPMI 8226细胞凋亡,其机制可能和激活Caspase通路、调节Bcl-2家族蛋白表达、抑制AKT磷酸化等有关。     

积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞增殖活性的影响及其机制探讨

目的探讨积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测积雪草酸对肿瘤细胞的抗增殖作用;Hoechest33258染色法检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR法检测细胞survivin和bcl-2 mRNA表达水平的变化。结果积雪草酸在浓度10~70μmol/L显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,呈时间及浓度依赖性,作用24、487、2 h的IC50值分别为(42.25±4.57)(、24.88±3.51)(、19.83±2.88)μmol/L。积雪草酸可诱导细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体。积雪草酸诱导细胞发生早期凋亡,并呈浓度依赖性。积雪草酸25~40μmol/L能将RPMI 8226细胞阻滞在G2期,G2期细胞比例随积雪草酸浓度增大而逐渐增高。积雪草酸使survivin和bcl-2 mRNA表达下降,并与细胞的凋亡程度呈负相关。结论积雪草酸能通过调控细胞周期的进程和诱导细胞凋亡从而抑制RPMI8226细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能与下调survivin和bcl-2的转录水平有关。     

龙葵总碱对骨髓瘤细胞凋亡及NF-KB表达的影响

目的：探讨龙葵总碱对人骨髓瘤RPMI-8226细胞的凋亡作用以及对NF-KB表达的影响。方法：选用人骨髓瘤RPMI-8226细胞株为研究对象,以龙葵总碱为被试对象,采用MTT法检测细胞增殖活性,AnnexinV-FITC/PI双标记法分析细胞凋亡的改变;免疫荧光细胞化学染色分析NF-KB的表达情况。结果：在25mg/L龙葵总碱处理RPMI-8226细胞48h后,RPMI-8226细胞的生长出现明显的抑制作用,且随着浓度加大及时间延长,其抑制作用逐步增强;药物浓度〈25mg/L时,诱导凋亡作用不明显,当药物浓度达到25mg/L时,早期凋亡明显增多;当药物浓度达25mg/L（此时细胞凋亡明显）时,NF-KB表达水平的降低具有统计学意义。结论：龙葵总碱可抑制骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖,促进骨髓瘤细胞凋亡,并且表现为剂量和时间依赖性;NF-KB表迭量在人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞株随龙葵总碱的药物浓度增大而降低。     

白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的影响

目的探讨白花蛇舌草注射液（HDI）抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑（Mar）比色法检测HDI对RPMI8226抑制作用并筛选研究浓度;通过流式细胞技术使用AnnexinV-PI检测细胞凋亡、PI单染检测细胞周期分布、FITC．CD44、PE—CD49d双标检测黏附分子表达;ELISA检测细胞上清IL-6、VEGF含量;RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin、IL-6、VEGFmRNA的表达。结果HDI可抑制RPMI8226增殖,同时诱导该细胞株早期凋亡,将细胞周期阻滞于G1期,且呈浓度依赖。经0、20、40、60μL／mLHDI作用后RPMI8226上清VEGF含量降低且呈浓度依赖（P〈0．01）,IL-6含量增高（P〈0．01）,细胞表面CD44、CD49d表达水平呈浓度依赖上调。经40μL／mLHDI作用后,该细胞株SurvivinmRNA表达显著下调（P〈0．01）,Bcl-2、IL-6、VEGFmRNA显著上调（P〈0．01）,Bax、Caspase-3mRNA则上调不明显（P〉0．05）。结论HDI可抑制RPMI8226增殖,其机制可能和诱导细胞早期凋亡,细胞周期C1期阻滞,降低VEGF分泌,下调Survivin转录水平等有关。     

Tetrandrine and arsenic trioxide synergistically inhibit proliferation of HCC1937 triple negative breast cancer cells

OBJECTIVE: To evaluate the effects of tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells, a triple negative breast cancer cell line, and to explore possible mechanisms.METHODS: The 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide method was used to compare the antiproliferative effects of tetrandrine,arsenic trioxide alone and tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells. The median-effect principle(Chou-Talalay combination index method) was used to examine the interaction between the two drugs. Flow cytometry was used to evaluate effects of treatment with tetrandrine, arsenic trioxide or the combination of both on HCC1937 cell apoptosis. Real-time polymerase chain reaction and western blotting were performed to evaluate changes in apoptosis-related gene expression and protein levels.RESULTS: Tetrandrine and arsenic trioxide each in-hibited HCC1937 cell proliferation in a dose-dependent manner. The cell inhibition rate of HCC1937 cells treated with a combination of tetrandrine and arsenic trioxide was significantly higher than with either compound alone. The two drugs produced a synergistic effect when the inhibition rate was20%-40%. Flow cytometry results showed that treatment with the two drugs increased the proportion of apoptotic cells. In the combination treated group, caspase-3 activation and PARP cleavage were significantly higher than in the other groups.Moreover, Bcl-2 and survivin expression were decreased, whereas that of both Bid and Bax was increased.CONCLUSION: These findings demonstrated that tetrandrine plus arsenic trioxide had synergistic efficacy on induction of apoptosis in HCC1937 cells.     

锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡相关蛋白表达的影响

[目的]探讨锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡的影响以及对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。[方法]①体外培养的RPMI8226细胞加入到不同浓度的锯叶棕提取物(0.5或1.0μL/mL)培养24h,利用流式细胞仪测定位于前G1时期的细胞百分比以检测细胞凋亡;②体外培养的RPMI8226细胞加入到锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,应用Western Blot检测PARP、MCl-1蛋白表达。[结果]①锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡具有剂量依赖性(P<0.05);②RPMI8226细胞暴露于锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,PARP蛋白水平表达明显增加,但不能调整Mcl-1。[结论]锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡。     

锯叶棕提取物与AG490合并应用对MM细胞增殖作用的影响

目的：探讨锯叶棕提取物与AG490合并应用后对MM细胞增殖的影响。方法：将体外培养的U266和PRM182：26细胞与0—2uL／mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育,应用MTT比色法测定细胞增殖活性;同时应用台盼蓝不相容实验检测锯叶棕提取物与AG490单独使用或合并使用时的细胞成活率。结果：锯叶棕提取物抑制U266与RPM18226细胞的增殖,其抑制生长50％（ED50S）的有效剂量分别为1．2和0．7灿L／mL;U266细胞用锯叶棕提取物（0．5uL／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（79．7±1．1）％和（67．2±6．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±12.0）％（P〈0．001）;RP—M18226细胞用锯叶棕提取物（0．5ul／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（74．7±2．1）％和（37．2±5．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±4．1）％（P〈0．001）。结论：锯叶棕提取物与AG490合并应用抑制MM细胞的增殖作用较单独使用效果好。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗白血病的疗效机理。该当以ＨＬ－６０细胞株为体外模型，终浓度为０．２０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３作用２４、４８ｈ后，用ＰＩ／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ双标记，流式细胞术观察Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０细胞凋亡及其对细胞株端粒酶活性的影响。结果：Ａｓ２Ｏ３作用于ＨＬ－６０细胞后ＰＩ阴性／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞性细胞增多，提示细胞发生凋亡，ＤＮＡ周期分析显示主要作用在     

三氧化二砷（As2O3）治疗多发性骨髓瘤机理的研究进展

目的：分析三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的作用机理。方法：综合分析有关三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的文献。结果与结论：三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的机理主要包括：抑制多发性骨髓细胞的增殖,并促进其凋亡;改变多发性骨髓性细胞基因表达并抑制其新生血管;影响其基质细胞增殖和分泌。