经门静脉肝内胰岛细胞移植

为了探讨胰岛细胞移植的最适宜部位，利用四氧嘧啶诱发的糖尿病鼠，以经门静脉肝内移植为实验组，腹腔内和肌肉内移植为对照组，移植用胶原酶消化提取的乳鼠胰岛细胞．结果，实验组治愈率为６０％，与对照组相比有有显著性差异．移植后第８周，未形成肝门静脉高压症，肝脏苏木素 伊红染色切片上，未见病理变化，再经胰岛素抗体过氧化物酶 抗过氧化物酶法证实肝脏内有散在的胰岛细胞分泌的胰岛素颗粒．实验结果认为，肝脏是特殊免疫器官，排斥反应小，肝内移植易于诱发免疫耐受或免疫无反应性，其特殊的血运和生理功能是胰岛细胞移植的最佳部位．     

同种异体胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的护理

目的：总结同种异体胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的护理研究。方法按JDRF标准筛选3例1型糖尿病患者(T1DM),并实施同种异体胰岛细胞移植。在GMP实验室内以Liberase 酶消化胰腺器官、COBE 2991细胞分离机分离、连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞。培养12h后,检测其达到移植标准,再经皮穿刺肝脏门静脉主干,经门静脉将胰岛细胞匀速移植到肝脏内。术后应用各种护理方法,密切观察病情变化和各种并发症的变化。结果2例完全脱离胰岛素治疗,1例胰岛素用量较术前减少60%以上。术后血糖稳定,C肽、糖化血红蛋白在正常范围,肾功能得以改善,无移植并发症、以及低血糖发作,患者掌握了术后自我管理的方法,总结出了个体化的护理经验。结论患者护理效果满意,初步建立同种异体胰岛细胞移植治疗1型糖尿病一整套护理方法。     

成人胰岛细胞移植临床研究

目的建立新型成人胰岛细胞分离纯化方法,观察成人胰岛细胞移植的安全性与有效性。方法PFC与UW液双层冷藏胰腺,Liberase酶消化,COBE2991型专用胰岛细胞分离机分离及连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞。采用外科方法,将短期培养的胰岛细胞经门静脉移植到肝脏内。术后监测血糖与胰岛素用量、C肽与糖化血红蛋白水平以及肝肾功能,并与术前比较。结果42个胰腺成功分离胰岛细胞,平均数量28.5万IEQ、纯度95.7%、活率93.2%、刺激指数2.43,病原学结果均阴性。11例1型糖尿病患者实施成人胰岛细胞移植20次,每次移植平均胰岛数量为11200 IEQ/kg。采用无激素免疫抑制治疗。随访7个月~4年,7例完全撤除胰岛素,4例胰岛素用量较术前减少60%以上。术后血糖稳定维持在正常水平,C肽均超过0.5nmol/L,糖化血红蛋白基本正常,肝肾功能稳定维持正常,无胰岛移植并发症。结论新型成人胰岛细胞分离纯化方法可靠,成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病临床疗效较好,手术简捷,安全性好。     

胰腺干细胞和胰岛细胞在糖尿病 大鼠治疗中的疗效观察

目的 探讨大鼠胰腺干细胞与胰岛细胞移植在大鼠糖尿病治疗中的疗效。方法 通过链脲菌 素复制1 型糖尿病大鼠模型并随机分为胰岛细胞组和胰腺干细胞组。用胶原酶V 分别消化新生和成年大鼠 胰腺,Percoll 梯度离心分离胰岛细胞和胰腺干细胞。采用Bonner-Weir 法诱导胰腺干细胞分化,DTZ 染色 检测移植物纯度,AO/PI 检测移植物活性。分别记录手术前后大鼠血糖水平、胰岛素水平及移植物存活时 间;高糖刺激实验和腹腔糖耐量评价移植物功能;取各组大鼠移植部位标本行HE 染色和免疫组织化学染 色,观察组织形态学变化。结果 胰岛细胞组和胰腺干细胞组血糖分别在术后3 和5 d 恢复正常（P <0.05）, 两组大鼠术后不同时间点的血糖有差异（P <0.05）,胰腺干细胞组的降糖能力强于胰岛细胞组（P <0.05）。 两组大鼠移植后7 d 血清胰岛素水平均较术前升高（P <0.05）。高糖刺激实验表明,各组移植后15 和65 d 高糖刺激后的C 肽水平较刺激前升高（P <0.05）,胰岛细胞组移植后65 d 高糖刺激后C 肽水平低于胰腺 干细胞组（P <0.05）,胰岛素和C 肽水平监测结果表明胰腺干细胞组移植物胰岛素分泌维持时间长于胰岛 细胞组。移植后腹腔糖耐量实验结果表明移植物均功能良好。胰岛细胞组和胰腺干细胞组移植物的中位 存活时间分别为73 和88 d,Kaplan-Meier 曲线分析提示胰腺干细胞组移植物生存时间较胰岛细胞组延长 （P <0.05）。HE 染色提示肝脏门静脉移植区域可见新生血管包绕的胰岛细胞团,免疫组织化学染色证实细 胞团胰岛素阳性。结论 胰腺干细胞分化后经门静脉移植能安全有效地发挥降糖作用,疗效优于胰岛细胞 移植。     

经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞治疗糖尿病的实验研究

目的 :探讨经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞后 ,移植物生理功能以及副反应的特点。方法 :化学药物诱导制作犬的糖尿病模型后 ,将分离、纯化及微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内 ,测定移植前后糖尿病犬的胰岛素用量、血糖水平以及葡萄糖刺激血清C肽、肝功能及CD4 /CD8的变化 ,并于移植 6月后对移植受体肝、胰进行病理学检查。结果 :移植后模型犬血糖逐步下降至正常水平 ,胰岛素用量减少 ,移植 6月后 2犬停用胰岛素 ,并维持血糖正常达 180d之久 ;移植后肝检查无明显变化 ,胰腺检查见凋亡胰岛无再生现象。结论 :微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内 ,能纠正异种动物犬糖尿病模型的高血糖状态 ,不发生明显副作用     

经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞治疗糖尿病的实验研究

目的：探讨经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞后，移植物生理功能以及副反应的特点。方法：化学药物诱导制作犬的糖尿病模型后，将分离、纯化及微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内，测定移植前后糖尿病犬的胰岛素用量、血糖水平以及葡萄糖刺激血清C肽、肝功能及CD4／CD8的变化，并于移植6月后对移植受体肝、胰进行病理学检查。结果：移植后模型犬血糖逐步下降至正常水平，胰岛素用量减少，移植6月后2犬停用胰岛素，并维持血糖正常达180d之久；移植后肝检查无明显变化，胰腺检查见凋亡胰岛无再生现象。结论：微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内，能纠正异种动物犬糖尿病模型的高血糖状态，不发生明显副作用。     

Information

活体移植可治愈糖尿病据英国《独立报》4月19日报道,一名27岁的妇女成为世界上首位通过从在世捐献者身上移植胰岛细胞“治愈”糖尿病的患者。这名妇女15岁便染上了糖尿病,为了减轻痛苦,她过去每天都要注射胰岛素,这使她经常出现暂时昏厥的现象。但在从母亲身上移植了胰岛细胞后,她已摆脱了对胰岛素的依赖,两个月来从未注射过胰岛素。这为医疗工作者寻找治疗糖尿病的有效途径开辟了新领域。在手术过程中,医生先切除了患者母亲的部分胰腺,并将能产生胰岛素的胰岛细胞分离,在洗净后通过一根插入患者门静脉的管子输送到她的肝脏内。据悉,患者及…     

经门脉肝内移植胰岛细胞治疗糖尿病鼠的实验研究

为了探讨胰岛移植部位对移植效果的影响，本实验利用四氢嘧啶诱发的糖尿病鼠，以肝脏为胰岛细胞移植部位，经门脉肝内移植用胶原酶消化提取的乳鼠胰岛细胞。结果，实验组治愈率８０％，与对照组差异有显著性，且无明显并发症，认为，肝脏具有特殊解剖、生理功能，是胰岛移植的理想部位。     

云南小耳猪胰岛细胞肝内移植对糖尿病猴的治疗作用

目的探讨云南小耳猪胰岛细胞经门静脉肝内异种移植的可行性,观察其对恒河猴糖尿病的治疗作用.方法 STZ诱导法复制恒河猴糖尿病模型,经胃网膜右静脉输注分离纯化的云南小耳猪胰岛细胞,移植在糖尿病猴肝内,移植后使用小剂量无激素免疫抑制方案,监测移植前后胰岛素用量、血糖以及血清C肽水平和肝肾功能的变化,评价猪-猴异种胰岛细胞移植对恒河猴糖尿病的治疗作用.结果 STZ能成功诱导恒河猴糖尿病模型;移植后第3天实验组糖化血红蛋白较术前降低,而对照组糖化血红蛋白一直呈上升状态;实验组外源性胰岛素用量较术前明显减少(P<0.05),对照组胰岛素用量无明显变化;实验组C肽水平较术前升高(P<0.05),对照组C肽一直维持在较低水平;无栓塞、感染、出血,肝肾功能无明显异常改变.结论云南小耳猪-恒河猴异种胰岛细胞移植能够降低糖尿病猴的高血糖状态,改善糖尿病症状,无明显副作用.     

胰腺干细胞对移植胰岛的保护作用

目的探讨胰腺干细胞对胰岛体外存活时间及保持胰岛功能的作用,为胰岛移植治疗1型糖尿病提供更多高质量胰岛。方法分离纯化培养SD大鼠胎鼠胰腺干细胞;不连续密度梯度分离纯化SD大鼠胰岛;实验分组:单纯胰岛培养组(以下简称单纯培养组)、胰岛与胚胎胰腺干细胞联合培养组(以下简称联合培养组),体外观察胰岛形态变化,AO/PI法观察胰岛存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测胰岛素分泌量及刺激指数。体内实验分别取两组培养7d的胰岛600个移植于糖尿病大鼠左肾包膜下,术后监测血糖变化情况。结果联合培养组的胰岛存活率显著高于单纯培养组,培养7d存活率分别为70%,40%;14d时为40%,5%;均P<0.01;高糖刺激下联合培养组胰岛分泌量及刺激指数均高于单纯培养组,培养7d时高糖刺激下胰岛素分泌量分别为(571.4±42.5)ng/L和(392.8±20.2)ng/L(P<0.01),刺激指数1.95±0.24和1.51±0.13(P<0.01)。联合培养后的胰岛左肾包膜下移植大鼠血糖可于第5天降至正常,而单纯培养后的胰岛移植血糖没有降至正常。结论胎鼠胰腺干细胞与胰岛联合培养可以明显延长胰岛体外存活时间并保持良好的活性,对胰岛具有良好的保护作用。     

胰岛移植治疗糖尿病

1967年Lacy和Kostianovsky创立了从胰腺中分离胰岛的技术，开辟了胰岛移植的新时代。胰岛移植是将分离的胰岛注入门静脉（肝内移植）、肾囊或腹腔。胰岛移植比全胰腺移植简单、危险小并且费用低。1972年在大鼠的同种胰岛移植取得了令人鼓舞的结果，移植后的糖尿病大鼠血糖和尿糖水平有所下降。以后这一方法应用于临床治疗胰岛素依赖型糖尿病（IDDM），移植后一部分患者胰岛素注射的剂量减少，但是不能完全停用，效果不够理想。1980年开始有所突破，当时有人移植200000个胰岛于1例IDDM患者，取得了逐步停用胰岛素而血糖正常的良好效果。1…     

同种胰岛细胞移植的最佳移植数量研究

目的 探讨同种胰岛移植最低胰岛细胞有效数量,为临床高效利用有限的胰岛细胞提供实验依据. 方法 同种胰岛来自SD大鼠,原位灌注切取胰腺,用胶原酶Ⅴ消化胰腺组织,Ficoll400密度梯度离心纯化得到胰岛细胞,DTZ染色进行胰岛细胞计数及纯度鉴定、AO-PI荧光染色进行活性鉴定,采用体外胰岛素释放试验鉴定胰岛功能.大鼠一次性静脉注射STZ 60 mg/kg诱导Ⅰ型糖尿病模型,然后按照移植的胰岛细胞数量不同随机分为:A组(6 000 IEQ/kg)、B组(9 000 IEQ/kg)、C组(12 000 IEQ/kg) 、 D组(15 000 IEQ/kg).经门静脉途径进行胰岛移植.观察移植后连续10 d的血糖变化,移植3 d后血液中胰岛素分泌水平的变化. 结果纯化后胰岛细胞收获量为(3.49±0.23)×105IEQ/kg,纯度为86%,活性为90%.体外胰岛素释放实验显示胰岛功能良好,胰岛细胞移植后,A组、B组血糖未降至正常.C、D组血糖降至正常范围,最早出现时间分别为22 h、25 h.胰岛移植3 d后,随着胰岛数量增多,受体大鼠血液中的胰岛素量随之升高. 结论 每次以12 000IEQ/kg的数量进行胰岛移植可以作为大鼠胰岛细胞移植的最低有效浓度,可以达到胰岛移植的最佳效果也可以最大程度地利用有限的胰岛细胞.     

小鼠胰岛分离纯化后肾被膜下胰岛移植动物模型的建立

目的：探讨一种分离纯化小鼠胰岛细胞的优良新型方法,经同种异体糖尿病小鼠肾被膜下胰岛移植建立动物模型.方法：（1）胰岛分离及检测：采用胆总管内胶原酶逆行灌注消化胰腺的方法分离胰岛,淋巴细胞分离液单一密度梯度离心法纯化胰岛.利用双硫腙对胰岛进行特异性染色来计算胰岛产量及纯度,台盼兰染色鉴定胰岛细胞的活性,以葡萄糖刺激胰岛素释放来检测胰岛功能.（2）胰岛移植：空白对照组（n =12）,糖尿病鼠组（n=12）,对糖尿病鼠组行同种异体鼠肾被膜下胰岛移植,观测血糖及生命体征变化.结果：每只小鼠可获得150～200个高质量胰岛,纯度及活性均高于90 ％,葡萄糖刺激后胰岛素释放量明显增加（SI=3）.糖尿病小鼠经胰岛移植后,1～3 d内,血糖均降至11.1 mmol/L以下.结论：采用新改进的分离纯化胰岛方法,可获得高质量、高功能的胰岛细胞.经同种异体糖尿病小鼠肾被膜下胰岛移植动物模型的成功建立,为进行人胰岛小鼠移植及人胰岛同种异体移植提供重要试验价值.     

节段性胰腺移植的进展

尽管胰岛素依赖型(I型)糖尿病患者采用常规治疗有明显改善,但大多数病人仍发生严重的继发性并发症。目前在瑞典I型糖尿病是导致尿毒症的第二位最常见原因,并且是成人失明的最常见原因。估计糖尿病患者的寿命较一般人群短1/3。故需采用移植胰腺组织来恢复正常的胰岛功能(胰腺移植有两种方法:带血管胰腺移植和游离胰岛移植。遗憾的是,到目前为止用胰岛移植治疗人的糖尿病尚不可能)。本文介绍29例I型糖尿病和伴有尿毒症患者接受带血管的肾及胰节段联合移植治疗。     

同种异体胰岛细胞移植在糖尿病小鼠中的实验研究

目的 通过建立糖尿病小鼠模型,观察同种小鼠胰岛细胞移植前后血糖、胰岛功能的变化,探索胰岛细胞分离、纯化、移植的方法及有效性.方法 采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)复制糖尿病小鼠模型,经胆囊注入V型胶原酶水浴消化胰腺并进行密度梯度离心以分离纯化胰岛细胞,并在消化液和Ficoll分离液中加入了大豆胰酶抑制剂(STI)和牛血清白蛋白组份V(BSA),用双硫腙(DTZ)法判定胰岛纯度,锥虫蓝排斥试验评估胰岛存活率;糖尿病小鼠行同种异体胰岛细胞移植后,检测受体血糖、胰岛素及C肽变化,以判定胰岛功能.结果 糖尿病小鼠模型胰腺形态有明显病理变化,同种小鼠胰岛纯化后细胞形态完好,使分离纯化后的胰岛产量由原来方法的(40.7±13.2)个提高到了(263.5±32.I)个(P<0.01),活性在95%以上,胰岛移植后,实验组48 h后血糖明显下降,C肽水平上升.结论 采用加用STI、BSA小鼠胰岛细胞分离纯化方法可增加胰岛细胞产量,同种小鼠胰岛细胞移植能明显降低糖尿病小鼠血糖水平,改善胰岛功能,从而达到治疗目的 .     

胰岛移植

自从2000年胰岛移植的"埃德蒙顿方案"公布后,胰岛移植成为糖尿病及器官移植研究领域的热点.虽然胰岛移植后对外源性胰岛素依赖性的解除率不如胰腺移植后高,但其移植相关并发症的发生率明显低于胰腺移植.     

胰腺移植物静脉回流途径对胰岛素代谢影响的实验研究

本实验在大鼠胰腺移植模型上,探讨移植胰腺下腔静脉或门静脉回流对胰岛素代谢的影响。结果发现:移植物经下腔静脉回流,鼠血清胰岛素水平显著高于正常大鼠,胰岛素释放试验始终处于高水平状态;而移植物经门静脉回流,鼠胰岛素水平及胰岛素释放试验与正常大鼠比较差异不显著。说明异位胰腺移植存在高胰岛素血症,而经门静脉回流的胰腺移植可避免高胰岛素血症。     

胰岛细胞移植治疗糖尿病

胰岛细胞移植包括从供体器官内提取Langerhans细胞的复杂的纯化过程。患有1型糖尿病的病人移植后,血中葡萄糖显示刚好控制在接近完美的水平上,远比注射胰岛素更有效。严格控制血糖有望避免发生糖尿病的长期并发症。移植细胞是在放射成像的指引下经皮通过门静脉被注入肝脏的,因此可避免大的移植手术,90％以上的病人可在移植当日回家。胰岛细胞移植能提供与全胰腺移植同样的益处,但手术的危险性较小。     

金钗石斛总生物碱对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗的影响

目的研究金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl. alkaloids,DNLA)对糖尿病合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠胰岛素抵抗的影响。方法高脂高糖饲料喂养SD大鼠4周后给予腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 40 mg/kg制备糖尿病合并NAFLD大鼠模型。成模大鼠随机分为模型组、DNLA 20 mg/kg组、DNLA 40 mg/kg组、DNLA 80 mg/kg组及二甲双胍100 mg/kg组,每组10只。同步设立10只SD大鼠作为空白对照。灌胃给药4周后腹主动脉取血检测大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),H.E.染色观察肝脏及胰腺组织形态学变化,免疫组化检测胰岛中胰岛素达。结果模型大鼠FPG、FINS、HOMA-IR明显升高(P0.05);与模型组比较,DNLA 40 mg/kg组、DNLA 80 mg/kg组FPG、FINS、HOMA-IR明显下降(P0.05)。糖尿病大鼠肝脏组织发生脂肪变性,胰腺组织H.E.染色镜下见胰岛萎缩,岛内细胞数减少;DNLA 40 mg/kg组、DNLA 80 mg/kg组与模型组比较,肝脏脂肪变性程度减轻,胰岛内细胞数较多,免疫组化检测糖尿病合并NAFLD大鼠胰岛内胰岛素表达明显减少,与模型组比较,DNLA 40 mg/kg组、DNLA 80 mg/kg组胰岛内胰岛素表达有不同程度增加。结论 DNLA可降低糖尿病合并NAFLD大鼠血糖及减轻肝脏脂肪变性,机制与改善胰岛素抵抗有关。     

小鼠胰岛与肝脏脱细胞支架三维共培养的实验研究

目的:观测原代小鼠胰岛在小鼠肝脏脱细胞支架上的生长及功能,探讨组织工程学治疗糖尿病的新方法?方法:运用灌注法制备结构完整的全肝脏脱细胞支架并检测,运用胶原酶P灌注消化法获取小鼠胰岛细胞并行结构和功能完整性分析;将分离纯化的原代小鼠胰岛经门静脉灌入全肝脏脱细胞支架,在三维培养体系培养后进行相关检测?结果:肝脏脱细胞支架检测未见细胞结构,胶原结构保存完整?支架内剩余DNA定量检测结果为(38 ± 11)ng/mg dsDNA,生物相容性良好?双硫腙(dithizone,DTZ)染色胰岛呈现特异性猩红色,葡萄糖刺激实验提示在高糖组中培养的原代小鼠胰岛胰岛素分泌功能明显高于低糖组,差异具有统计学意义(P < 0.01);将胰岛移植入肝脏脱细胞支架培养5 d后胰岛定植,且胰岛素基因表达显示脱细胞支架三维培养中胰岛素表达水平与平面培养相比,差异具有统计学意义(P < 0.01)?结论:肝脏脱细胞支架三维培养体系中的胰岛细胞比传统平面培养具有更佳的细胞活力及更有效的胰岛素分泌功能?