敲除TBRG4对肺癌H1299细胞增殖的影响及其机制研究

目的 探讨敲除转化生长因子β调节因子4（TBRG4）对肺癌H1299细胞增殖的影响及其机制。方法 培养肺癌H1299细胞、TBRG4敲除阴性对照及TBRG4敲除H1299细胞,分别命名为对照组、阴性对照组、TBRG4敲除组。采用细胞计数（CCK）-8试剂盒检测各组细胞的增殖情况。采用还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒检测各组细胞GSH的含量。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞TBRG4、沉默信息调节因子2相关酶4（SIRT4）、c-Myc和谷氨酰胺酶1（GLS1）mRNA的表达。采用Western blot检测各组细胞TBRG4、SIRT4、c-Myc和GLS1蛋白的表达水平。结果 CCK-8和GSH含量检测结果显示,对照组、阴性对照组、TBRG4敲除组H1299细胞的吸光度值分别为1.025±0.021、1.032±0.019、0.726±0.018,GSH的含量分别为（20.836±0.367）、（21.167±0.460）、（15.091±0.241） μmol/L,与对照组和阴性对照组相比,TBRG4敲除组的吸光度值、GSH含量均降低,差异均有统计学意义（P值均<0.001）。与对照组和阴性对照组相比,TBRG4敲除组TBRG4、c-Myc、GLS1基因mRNA和蛋白的相对表达水平均减少,SIRT4基因mRNA和蛋白的相对表达水平均增加,差异均有统计学意义（P值均<0.001）。结论 敲除TBRG4可抑制肺癌H1299细胞增殖,其作用机制可能与促进SIRT4的表达、抑制c-Myc和GLS1的表达、阻断谷氨酰胺代谢有关。     

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌H1299细胞凋亡机理研究

目的:研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及细胞周期阻滞对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法:MTT法检测细胞活性、Hoechst 33258染色法计数凋亡细胞、流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布。结果:与未处理的对照组相比,DADS可诱导H1299细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,并呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;较高浓度的DADS能诱导G2/M期细胞百分率显著升高。结论:DADS能诱导H1299细胞发生细胞凋亡,并诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞。     

STAT5、VEGF和EGFR在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的:检测信号转导与转录激活因子5(STAT5)、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,探讨三者与NSCLC临床病理特征之间的关系及三者彼此的关系。方法:采用免疫组化(SP法)检测STAT5、VEGF和EGFR在68例NSCLC及26例癌旁正常对照组织中的表达情况。结果:(1)STAT5、VEGF及EGFR在NSCLC组织中的阳性表达明显高于肺正常组织(P<0.05);(2)STAT5的阳性表达与NSCLC组织学类型有关,在腺癌中的表达明显高于鳞癌,与组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移无关;(3)VEGF的阳性表达与NSCLC的分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01),与NSCLC的组织学类型无关(P>0.05);(4)EGFR的阳性表达与NSCLC的TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.01),与NSCLC的组织学类型和分化程度无关(P>0.05);(5)Spearman相关分析显示STAT5、VEGF和EGFR在NSCLC中的阳性表达两两比较(秩和检验方法)均呈正相关。结论:STAT5、VEGF、EGFR可能在肺癌的发生、侵袭和转移中起重要的作用,抑制STAT5信号通路可望成为非小细胞肺癌的治疗靶点。     

敲减STAT3基因表达对胰腺祖细胞增殖的影响

目的:探讨敲减信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因的表达对胰腺祖细胞增殖的影响。方法:将靶向STAT3基因的小干扰RNA(siRNA)转染胰腺祖细胞,采用qPCR和Western blot验证STAT3基因表达下调,通过光学显微镜、活细胞计数法和CCK8法检测STAT3基因沉默对胰腺祖细胞增殖和活力的影响,流式细胞术检测细胞周期进程的变化,Western blot检测细胞周期蛋白D2(CCND2)的表达水平。结果:干扰片段有效沉默STAT3基因的表达,STAT3的蛋白表达水平降低了(78.62±0.08)%,与对照组相比,敲减STAT3基因的表达使胰腺祖细胞数量减少了(45.62±0.03)%,活力降低了(43.68±0.05)%,细胞周期阻滞在G 0/G 1期,CCND2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:敲减STAT3基因表达通过抑制CCND2蛋白表达,阻滞细胞周期在G0/G1期,抑制胰腺祖细胞的增殖和活力。     

晚期非小细胞肺癌中β-tubulin Ⅲ表达水平对化学治疗敏感性的影响

目的:分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者[β-tubulin Ⅲ的表达水平与化学治疗(化疗)敏感性的关系.方法:经病理确诊的晚期NSCLC患者以1:2随机分配至对照组和基因型组:对照组使用吉西他滨联合顺铂化疗;基因型组根据ERCC1及RRM1的表达情况进行个体化治疗.检测病理标本中 β-tubulin Ⅲ的表达水平,比较β-tubulin Ⅲ蛋白表达水平与临床疗效之间的关系.结果:基因型组最终有118例NSCLC病例可评价,均可成功检测 β-tubulin Ⅲ的表达情况.对照组有效率(37.5％)与基因型组有效率(47.5％)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).基因型组中各组间有效率比较,差异无统计学意义(p＞0.05);但β-tubulinⅢ低表达组有效率(55.1％)显著高于β-tubulin Ⅲ高表达组(36.7％,P＜0.05).结论:在晚期NSCLC腺癌亚型中,β-tubulin Ⅲ低表达患者疗效较好,β-tubulin Ⅲ高表达可能意味着对多西他赛耐药.     

非小细胞肺癌中hSNF2H的表达及意义

目的探讨人类蔗糖非发酵蛋白2同源物(human sucrose nonfermenting protein 2 homologue,hSNF2H)在非小细胞肺癌(NSCLC,non-small cell lung cancer)中的表达情况,分析其与临床病理学特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测88例NSCLC中hSNF2H的表达和定位,Western Blot检测hSNF2H在正常支气管上皮细胞HBE和肺癌细胞A549、H1299和LET中的表达情况,Transwell的方法检测干扰hSNF2H的表达对肺癌细胞A549和H1299侵袭和转移能力的影响。结果 hSNF2H在NSCLC表达的阳性率(59.1%,52/88)显著高于癌旁肺组织(5.7%,5/88,P0.001);hSNF2H在肺癌细胞中的表达水平显著高于HBE细胞(P0.001),与患者的TNM分期(P=0.014)和淋巴结转移(P=0.008)密切相关。干扰hSNF2H可显著抑制A549和H1299细胞的侵袭和迁移能力。结论 hSNF2H参与非小细胞肺癌的发病机制。     

IL-1β促进nave T细胞向Th22细胞分化及在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)促进nave T细胞向Th22细胞转化的机制及其在非小细胞肺癌患者外周血中表达的相关性和临床意义。方法:采用CD4~+nave T细胞磁珠分选试剂盒分离健康人外周血单个核细胞中的CD4~+nave T细胞,加入转化生长因子β和IL-2促进其分化增殖,分化过程中加入IL-1β诱导其向Th22细胞的分化,流式细胞术检测CD4~+IL-22~+T细胞的比例,ELISA检测IL-22的表达。选择我院确诊为非小细胞肺癌的患者60人,其中Ⅰ期18人,Ⅱ期20人,Ⅲ期13人,IV期9人,同时选择健康人25例,用流式细胞术检测外周血中Th22(CD4~+IL-22~+)细胞的比例,ELISA检测血清中IL-1β和IL-22的水平。结果:IL-1β可以诱导na6ve T细胞向Th22细胞转化并促进IL-22的分泌(P0.05)。非小细胞肺癌患者外周血中Th22细胞比例及IL-22和IL-1β的水平均高于健康人且与临床分期相关(P0.05)。结论:IL-1β可以诱导Th22细胞的分化和IL-22的表达,三者的水平和非小细胞肺癌的进展相关,可能参与免疫抑制并促进非小细胞肺癌的发生。     

噬菌体肽库与NCI-H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究

目的：利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法：以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物信息学分析、比对;利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果：经过三轮减性筛选发现,随机挑选的9个单克隆中,其中1个对〖JP〗NCI-H1299和A549均具有较高亲和力,将其命名为ZS-9,测序结果为CAT AAT AAG CAT CTT CCG TCT ACG CAG CCT CTT GCG,根据测序结果推导出ZS-9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA,生物信息学分析表明ZS-9的氨基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI) GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论：利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞NCI-H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS-9,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。     

HMGB1对大鼠类纤维母细胞样滑膜细胞STAT/SOCS/cyclin D1表达的影响

目的：探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对大鼠滑膜细胞STAT/SOCS信号通路的调控作用。方法: 将常规培养大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞随机分为正常对照组和10 μg/L HMGB1刺激组,分别培养6 h、12 h和24 h后,RT-PCR检测STAT 1/3 mRNA的表达,Western blotting法检测磷酸化STAT（p-STAT）1/3和STAT 1/3蛋白的表达,流式细胞术（FCM）检测p-STAT 1/3、SOCS 1/3和cyclin D1蛋白的表达。 结果: HMGB1呈时间依赖性上调STAT1 mRNA和蛋白的表达,以及cyclin D1蛋白的表达,并能明显增加p-STAT 1的水平（P＜0.01）,但STAT3的表达以及p-STAT3的量与对照相比无明显差异。HMGB1刺激后还能明显增加细胞SOCS1的蛋白水平,但SOCS3蛋白仅于6 h呈一过性增高。 结论: HMGB1能激活STAT1信号转导通路,并上调cyclin D1基因表达,这可能与HMGB1促进滑膜细胞的增殖有关。     

靶向沉默IL-6对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)与人乳腺癌MCF-7细胞生长、侵袭和迁移的关系及其作用机制。方法:合成IL-6小干扰RNA(si RNA),并转染至MCF-7细胞中。实验分为空白对照组、阴性对照组和IL-6 si RNA组。通过MTT实验观察沉默IL-6基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,采用q PCR和Western blot法检测转染后IL-6表达水平的变化,同时采用Western blot法观察上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果:与对照组相比,转染IL-6 si RNA的MCF-7细胞中IL-6的表达量显著下降(P 0. 05)。沉默IL-6表达显著抑制MCF-7细胞的活力(P 0. 05),并降低其侵袭和迁移能力(P 0. 05),显著抑制N-cadherin和vimentin的表达(P 0. 05),细胞中STAT3无明显变化,p-STAT3、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论:沉默IL-6表达可能通过抑制EMT,并降低STAT3的磷酸化水平进而抑制MMP-2和MMP-9的分泌,从而减弱乳腺癌MCF-7细胞的活力,并降低其侵袭和迁移能力。