甘草素调控WIG-1 基因对肺癌细胞增殖、细胞凋亡以及放疗敏感性影响的研究

目的:探讨甘草素(LQ)对肺癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:体外培养肺癌细胞株H1299,采用MTT细胞实验检测不同浓度LQ对H1299细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测H1299细胞凋亡率变化情况。Western blot检测各组H1299细胞中WIG-1蛋白表达情况,克隆形成实验检测不同剂量照射的H1299细胞存活分数。结果:不同浓度LQ处理后可抑制H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡;LQ作用H1299细胞后经X线照射可降低H1299细胞存活分数并促进细胞凋亡;LQ可抑制H1299细胞中WIG-1蛋白表达;沉默WIG-1后经X线照射H1299细胞存活分数明显降低并可诱导细胞凋亡;WIG-1过表达可逆转LQ对H1299细胞凋亡及放疗敏感性的作用。结论:LQ通过调控WIG-1基因表达进而抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡及增强放疗敏感性。     

GSK3β抑制非小细胞肺癌细胞自噬增强放疗敏感性

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在非小细胞肺癌中对自噬的调节及调节自噬对放疗敏感性的影响。方法通过Western blot检测正常支气管上皮细胞HBE和肺癌细胞A549,H460,H292,H1299,Calu1和SK-MES-1中GSK3β的表达情况。转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后,通过Western blot检测磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK),自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)和自噬降解底物p62的蛋白表达水平。应用集落形成实验检测转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后的细胞增殖能力,促进或抑制自噬并经X射线照射后的细胞增殖能力。结果在H460细胞中分别转染野生型GSK3β-WT,激酶激活型GSK3β-S9A,激酶失活型GSK3β-K85R并经X射线照射,下调AMPK和LC3表达水平,上调P62表达水平,抑制肺癌细胞的增殖能力,其中转染激活型GSK3β-S9A的作用最显著。在A549细胞中抑制GSK3β并X射线照射,上调AMPK和LC3表达水平,促进肺癌细胞的增殖能力。在H460细胞中施加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)并经X射线照射,3-MA抑制细胞自噬水平,抑制细胞增殖能力,细胞存活能力下降更显著。结论GSK3β抑制细胞自噬,抑制细胞自噬水平可以增强非小细胞肺癌的放射敏感性。     

集缩素NCAPG对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响及其可能机制

目的 探讨非小细胞肺癌细胞中集缩素NCAPG表达对A549与H1299细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 构建shRNA-NCAPG慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,实时定量PCR法(qRT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)验证两种细胞中NCAPG表达情况.应用CCK-8方法检测对照组及下调组的细胞增殖差异,明确NCAPG表达对细胞增殖的抑制作用.Annexin V/PI双染法流式细胞术检测两组细胞中早期凋亡及晚期凋亡细胞比例.Western blot法比较两组细胞中Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达水平.结果 shRNA-NCAPG转染组细胞的NCAPG表达量低于对照组.下调NCAPG表达抑制A549及NCI-H1299细胞增殖,增加早期凋亡及晚期细胞凋亡比例,增加肺癌细胞促凋亡相关蛋白Caspase-3及Bax的表达、抑制Bcl-2蛋白表达.结论 下调NCAPG表达诱导非小细胞肺癌A549及H1299细胞增殖,通过线粒体通路抑制其细胞凋亡.     

miR-195靶向调控CHEK1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭的作用

目的研究miR-195靶向调控细胞周期检测点激酶1(CHEK1)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。方法选取非小细胞肺癌A549、H1299、H197细胞株为研究对象,分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195的表达水平; MTT检测转染miR-195对肿瘤细胞分裂增殖能力的影响; Transwell侵袭实验分析miR-195对细胞侵袭能力的作用;细胞划痕实验检测miR-195对细胞迁移能力的作用;流式细胞仪检测并评价转染miR-195对肿瘤细胞分裂周期的影响; Western blot探究miR-195对肿瘤细胞CHEK1表达的调节;采用Spearman相关分析法分析miR-195及CHEK1表达的相关性。结果 MTT实验表明高表达miR-195可明显抑制肺癌A549、H1299、H1975细胞的体外增殖能力; Transwell侵袭实验结果提示转染miR-195可导致肺癌A549、H1299、H1975细胞侵袭能力明显降低;流式细胞术结果表明,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞系的G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;划痕实验结果表明,转染miR-195可以抑制细胞的迁移能力;Western blot结果显示,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞中CHEK1蛋白水平显著降低,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。Spearman相关分析显示细胞miR-195 mRNA水平与CHEK1蛋白含量呈负相关(r=-0. 464 8,P=0. 00)。结论miR-195可靶向调控CHEK1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭。     

小泛素样修饰蛋白1假基因3通过蛋白激酶B信号通路影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化.在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA(siRNA),Real-time PCR方法测定下调...     

下调Girdin基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的研究

目的:探讨下调微丝附着梁蛋白(Girdin)基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的影响。方法:以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,RT-PCR及Western blot分别检测Girdin在PC9、SPC-A-1、H322、H1299、A549肺癌细胞中的表达; SPC-A-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、Girdin-siRNA组、顺铂组和Girdin-siRNA+顺铂组,各组细胞培养48 h,Western blot检测Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞的效果; MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; RT-PCR检测IL-8和TNF-α的mRNA表达; Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:肺癌细胞中Girdin的mRNA及蛋白表达均明显高于在MRC5细胞表达(P0. 05); Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞后Girdin的表达显著降低(P0. 05);与空白对照组比较,Girdin-siRNA组和顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著升高(P0. 05); Girdin-siRNA+顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著低于Girdin-siRNA组和顺铂组,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著高于Girdin-siRNA组和顺铂组(P0. 05)。结论:抑制肺癌细胞Girdin表达可通过降低癌细胞增殖、诱导细胞凋亡和提高免疫增强乳腺癌顺铂化疗敏感性,对细胞增殖凋亡的机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

BCYRN1 调控miR-503 通过Notch1 信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨BCYRN1 调控miR-503 通过Notch1 信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:qPCR 检测不同肺癌细胞株中BCYRN1 和miR-503 的表达情况;免疫荧光和qPCR 检测慢病毒BCYRN1+siRNA 转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1 与miR-503 的相互作用;Transwell 侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1 后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot 检测沉默BCYRN1 后Notch1 信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:在肺癌细胞H1299 中BCYRN1 表达水平最高,miR-503 的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA 水平证明BCYRN1+siRNA 慢病毒可以有效转染进入H1299 细胞内;BCYRN19 能与miR-503 的3’-UTR 特异性结合;沉默BCYRN1 可以抑制肺癌H1299 细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1 后Notch1 通路蛋白表达情况相应下调;与NC 组相比,BCYRN1-siRNA 组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小。结论:BCYRN1 可以靶向调节miR 503 通过Notch1 信号通路影响肺癌H1299 细胞的侵袭和迁移能力。     

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

目的:探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞;运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平;运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性;MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率;Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果:与NCsiRNA转染组的细胞比较,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA和蛋白水平(P0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P0.05)。MTT实验结果显示,培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P0.05)。与NCsiRNA细胞相比,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的克隆形成能力(P0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P0.01)。Western blot实验结果显示,下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达,MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低,TIMP-1的蛋白表达增高。结论:siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。     

肠道病毒71 型通过下调IRF9 的蛋白水平抑制干扰素的抗病毒作用

目的:初步探讨肠道病毒71 型抑制干扰素(IFN)信号通路的具体机制,为以后EV71 的治疗提供理论基础。方法:采用EV71 感染人横纹肌肉瘤细胞(RD 细胞)模型,实验组分正常对照组(Control)、EV71 病毒对照组(EV71 组)、仅有IFN-β处理组(IFN-β组)、EV71+IFN-β处理组(EV71+IFN-β组)。采用Real-time PCR 法检测IFN 诱导基因(ISGs)的表达。细胞核蛋白和胞浆蛋白分离后应用免疫印迹法检测p-STAT1 在细胞中的分布。采用免疫印迹法检测STAT1、IRF9 的表达。结果:EV71+IFN-β组与IFN-β组相比,OAS1、MX1、ISG54 mRNA 表达水平明显降低,分别降低约47%、50%、48%,差异有统计学意义(P<0.05),提示EV71 感染抑制了IFN-β诱导的ISGs mRNA 的表达。EV71 感染并不影响STAT1 的蛋白水平和磷酸化过程。IFN-β组,p-STAT1 主要定位在胞核中,而EV71+IFN-β组的p-STAT1 主要定位在胞浆中,提示EV71 可能抑制了p-STAT1 的核转位。检测细胞总裂解液中IRF9 的蛋白水平,结果发现,在IFN-β处理的细胞中,IRF9 的表达明显上调;而与IFN-β组相比,EV71+IFN-β组IRF9 的蛋白水平明显降低,提示EV71 感染抑制了IFN-β诱导的IRF9 的表达。结论:EV71 通过降低IRF9 来抑制ISGF3 的核转位,进而阻断IFN 的抗病毒作用。     

CXCR4 siRNA通过抑制STAT3信号通路抑制肺癌细胞活力

目的:初步探索CXC趋化因子受体4(CXCR4)与人肺癌NCI-H292细胞活力和凋亡的关系及其作用机制。方法:采用RNA干扰技术沉默肺癌细胞中CXCR4基因的表达,将CXCR4小干扰RNA(siRNA-CXCR4)转染至NCI-H292细胞中,分为空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染无关序列RNA)和siRNA-CXCR4组(转染siRNA-CXCR4),使用信号转导子及转录激活子3(STAT3)抑制剂NSC 74859作用于已转染肺癌细胞48 h,观察细胞的活力、凋亡及磷酸化STAT3(p-STAT3)水平的变化,用CCK-8实验检测干扰CXCR4基因表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用Western blot检测CXCR4、STAT3、p-STAT3、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cleaved caspase-3和多聚ADP-核糖聚合酶1(PARP-1)的蛋白水平。结果:Western blot检测结果显示siRNACXCR4组细胞中CXCR4蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05)。干扰CXCR4表达显著抑制细胞的活力(P0.05),促进其凋亡(P0.05),显著增加cleaved caspase-3和PARP1的蛋白水平。siRNA-CXCR4组细胞中STAT3、p-STAT3和cyclin D1的蛋白水平显著降低(P0.05);加入STAT3抑制剂后细胞中p-STAT3蛋白水平和细胞活力显著低于siRNA-CXCR4组(P0.05),凋亡率显著增加(P0.05)。结论:CXCR4通过调控STAT3信号通路介导下游靶基因的表达,参与肺癌细胞的生长、凋亡。这一结果为肺癌的治疗提供了新的治疗靶点。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

小干扰RNA阻断信号转导子和转录激活子3信号对人食管鳞癌细胞株增殖的抑制作用

目的探讨信号转导子和转录激活子3（STAT3）小干扰RNA（siRNA）对食管鳞状细胞癌细胞株（EC9706和Eca109）中持续性激活STAT3信号的阻断情况及阻断STAT3信号对细胞增殖的影响。方法将化学合成的100nmol／L的STAT3 siRNA转染EC9706和Eca109细胞,逆转录聚合酶链反应检测转染前后STAT3mRNA的表达,WeStern blot检测转染前后STAT3及磷酸化STAT3（P—STAT3）蛋白的表达,凝胶电泳迁移率检测转染前后活化STAT3蛋白的核结合情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测转染前后细胞增殖能力的改变,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的改变。结果STAT3 siRNA以时间依赖方式特异性地抑制STAT3 mRNA及STAT3、P-STAT3蛋白的表达,并且STAT3蛋白的核结合活性下降,使细胞周期阻滞于G0／G1期,细胞增殖受到明显的抑制。与对照组相比EC9706细胞转染后72hG0／G1期的细胞增加了16．1％,同时S期细胞减少11．1％;Eca109细胞转染后72hG0／G1期的细胞增加了11．8％,同时S期细胞也较对照组明显减少。结论STAT3 siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中STAT3信号的持续性激活并抑制肿瘤细胞的增殖。     

LncRNA HEIH通过miR-98-5p调节肺癌细胞增殖和凋亡

目的探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P<0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高。因此,后续实验选择A549细胞为研究对象。沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P<0.05)(MTT法);升高凋亡率(P<0.05);抑制CCND1蛋白表达(P<0.05),促进caspase-3蛋白表达(P<0.05)。并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响。结论沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

干扰HDAC1通过调控STAT3信号通路影响皮肤鳞癌细胞凋亡

目的:探讨干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对皮肤鳞癌细胞凋亡的影响。方法:皮肤鳞癌细胞A431分别转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 si RNA)和小干扰RNA阴性对照(si RNA NC),RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中HDAC1的表达水平,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时用STAT3信号通路抑制剂作用于转染HDAC1 si RNA的A431细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3、p-STAT3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:HDAC1 si RNA能够抑制A431细胞中HDAC1的m RNA和蛋白表达。干扰HDAC1表达后细胞活力和细胞中p-STAT3水平下降,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3水平升高。STAT3信号通路抑制剂作用后,转染HDAC1 si RNA的A431细胞活力及p-STAT3水平下降,细胞凋亡率及细胞中cleaved caspase-3水平升高。结论:干扰HDAC1表达可能通过调控STAT3信号通路抑制皮肤鳞癌细胞活力,促进皮肤鳞癌细胞凋亡。     

STAT3通过上调GLUT2的表达促进转化的肝卵圆细胞WB-F344的Warburg效应

目的:探讨信号转导与转录活化因子3(STAT3)对恶性转化的肝卵圆细胞WB-F344的作用及其机制。方法:用N-甲基-N’-亚硝基胍(MNNG)和过氧化氢(H2O2)制备WB-F344肝卵圆细胞恶性转化模型,通过流式细胞术检测非整倍体细胞数量、Western blot检测甲胎蛋白(AFP)表达水平和软琼脂集落形成实验测定克隆形成率评价细胞的恶性转化,用葡萄糖氧化酶法检测细胞葡萄糖水平,用比色法检测细胞乳酸水平,用Western blot实验检测STAT3、p-STAT3和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的蛋白水平,并通过WST-1法、活细胞计数法、流式细胞术测定细胞周期的S期细胞比例和增殖指数,以及Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平来评价细胞增殖能力。结果:与对照组比较,转化的肝卵圆细胞克隆形成率增加(P0.05),非整倍体细胞增多(P0.01),AFP表达增强(P0.05);葡萄糖消耗增多(P0.05),乳酸产生增多(P0.01);GLUT2表达上调(P0.01),STAT3的活化增强(P0.01);细胞活力增强(P0.01),S期细胞比例增多(P0.01),细胞增殖指数增加(P0.01),PCNA表达上调(P0.01)。与模型组比较,STAT3的抑制剂stattic明显抑制恶性转化的肝卵圆细胞的克隆形成(P0.01),促使非整倍体细胞显著减少(P0.01)和AFP表达降低(P0.05);减少葡萄糖消耗(P0.05)和乳酸的产生(P0.01);降低GLUT2(P0.01)的表达水平;抑制恶性转化的肝卵圆细胞活力(P0.05),降低S期细胞比例(P0.01)、细胞增殖指数(P0.01)和PCNA表达水平(P0.05)。结论:STAT3可能通过上调GLUT2表达而加快葡萄糖摄取、增强Warburg效应并促进细胞增殖,从而促进肝卵圆细胞的恶性转化。     

转染CRKL蛋白对肺癌细胞系增殖的研究

目的研究CRKL蛋白对肺癌细胞系增殖的影响及其可能机制,探讨CRKL基因在肺癌发病中的作用。方法在转染CRKL的HBE和H1299两种肺癌细胞系中,采用Western blot,流式细胞技术(FCM),集落形成实验和MTT方法检测转染CRKL后,对肺癌细胞增殖的影响。结果转染CRKL基因后,可明显上调Cyclin D1和Cyclin B蛋白在HBE和H1299两种肺癌细胞表达,增加Rb的磷酸化,促进肺癌细胞的增殖、克隆形成能力。结论 CRKL通过调节细胞周期促进肺癌细胞的增殖能力,CRKL可作为非小细胞肺癌的标记物,并可能成为治疗该肿瘤的新靶点。