模拟人体尿道插管法行小鼠尿动力学检测

 目的: 国际上传统的小鼠尿动力学检测方法为膀胱造瘘法。该传统方法破坏膀胱连续性,与临床上广泛采用的经尿道法有明显的差异。本研究寻找到合适的小鼠导尿管材,拟探讨模拟人体经尿道插管法行小鼠尿动力学检测的优势和应用价值。方法: 雌性小鼠8只,选择小儿留置针软芯进行导尿,并作为测压管和膀胱灌注管,经三通外接微量泵以及压力感受器。直肠测压采用硬膜外麻醉导管,外套乳胶手套小指末端一截制成球囊,然后导入小鼠直肠。结果: 该方法成功收集到以下尿动力学指标:膀胱基础压力(BBP)、膀胱漏尿点压(BLPP)、最大排尿压(MVP)、膀胱最大容量(MBC)、残余尿量(PVR)、排尿量(VV)、排尿效率(EV)和膀胱顺应性(BC)。结论: 本研究首次成功模拟人体经尿道插管法,实现小鼠尿动力学检测,成功避免膀胱造瘘对小鼠尿动力学的影响,检测后的小鼠能够长期生存,可以顺利进行后续分子和基因实验。     

缩泉丸对膀胱过度活动症大鼠膀胱充盈期盆神经放电的影响

 目的: 研究缩泉丸对膀胱过度活动症(OAB)大鼠膀胱容量、压力及盆神经放电的影响,探讨缩泉丸对OAB大鼠膀胱感觉功能的作用。方法: SD雌性大鼠分别进行膀胱出口梗阻手术以复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和缩泉丸高、中、低剂量组,给药4周后,以尿动力仪观察灌注过程中膀胱容量、压力及非排尿性收缩的变化,以多通道生理记录仪检测灌注过程中盆神经放电的变化。结果: OAB大鼠盆神经放电模式表现为放电频率先于压力达到峰值,而后压力达到峰值时,放电频率趋于平台或下降。OAB模型大鼠膀胱充盈过程中盆神经放电频率明显增强,膀胱压力上升,容量增加,非排尿性收缩增多;缩泉丸的干预能降低盆神经的放电冲动,减少神经放电增强引起的逼尿肌非排尿性收缩,降低膀胱压力,并呈剂量依赖性。结论: 缩泉丸对OAB大鼠膀胱感觉功能的调节可能是其治疗OAB的机制之一。     

输尿管内支架对人肾盂及膀胱压影响的研究

目的　探讨经皮肾取石术 (PCNL)术后 ,留置输尿管内支架对患者的肾盂压及膀胱压的影响 .方法　测定PCNL术后 5天 ,留置内支架患者在非灌流状态下以及在经肾造瘘以 10ml/min的灌流量状态下的肾盂压及膀胱压变化 .结果　留置内支架后 ,肾盂压及膀胱压均较正常明显升高 .反流时 ,膀胱压相对较低 ;反流时的肾盂压最大值很高 .结论　正常的上尿路 ,内支架是一个梗阻因素     

输尿管内支架对人肾盂及膀胱压影响的研究

目的探讨经皮肾取石术(PCNL)术后,留置输尿管内支架对患者的肾盂压及膀胱压的影响.方法测定PCNL术后5天,留置内支架患者在非灌流状态下以及在经肾造瘘以10ml/min的灌流量状态下的肾盂压及膀胱压变化.结果留置内支架后,肾盂压及膀胱压均较正常明显升高.反流时,膀胱压相对较低;反流时的肾盂压最大值很高.结论正常的上尿路,内支架是一个梗阻因素.     

尾加压素Ⅱ对大鼠下丘脑室旁核神经元放电的影响

应用细胞外记录单位放电技术,在大鼠下丘脑脑片上观察了尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ)对下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)神经元放电的影响。实验结果如下:(1)在39个PVN神经元放电单位给予尾加压素Ⅱ(0.3,3.0,30.0,300.0nmol/L,n=39)2min,有32个放电单位(82.05%)放电频率明显降低,且呈剂量依赖性;(2)预先用100μmol/L的GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱灌流7个下丘脑脑片,5个放电单位放电频率明显增加(71.43%),在此基础上灌流尾加压素Ⅱ(30.0nmol/L)2min,放电频率无明显变化;(3)预先用氯通道阻断剂印防己毒素(picrotoxin)灌流12个下丘脑脑片,12个放电单位的放电频率均明显增加(100%),在此基础上灌流尾加压素Ⅱ(30.0nmol/L)2min,11/12(91.67%)放电频率无变化;(4)12个放电单位灌流一氧化氮合酶抑制剂(NG-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)50μmol/L,有11个单位(11/12,91.67%)放电明显增加,在此基础上灌流尾加压素Ⅱ(30.0nmol/L)2min,放电被抑制。以上结果提示:尾加压素Ⅱ能抑制下丘脑室旁核神经元自发放电,可能与其同GABAA受体结合加强氯电流有关。     

一氧化氮对缺血再灌注豚鼠左心室流出道自律性电活动的影响

目的:研究一氧化氮(NO)对豚鼠左心室流出道自发电活动的影响及其对缺血/再灌注(I/R)时自发电活动改变的影响。方法:采用标准玻璃微电极细胞内电位记录技术观测外源性NO供体硝普钠(SNP)对豚鼠左心室流出道自发慢反应电位的影响及其对I/R时该电位改变的影响。结果:1、10、100μmol/L SNP呈浓度依赖性地导致4相自动除极速度(VDD)和自发放电频率(RPF)明显增加,但1 000μmol/L SNP的效应不明显。SNP呈浓度依赖性地导致最大舒张电位(MDP)绝对值和动作电位幅度(APA)增大,0相最大除极速度(Vmax)加快,复极50%和90%时间(APD50和APD90)缩短。缺血10 min组VDD和RPF明显减慢,APA和Vmax明显增大,APD50和APD90明显延长。与缺血10 min组相比,再灌注10 min组VDD和RPF明显加快,且常出现节律不齐,MDP绝对值和APA明显减小,APD50和APD90明显缩短。1、10、100μmol/L SNP再灌注时可明显改善缺血造成的VDD和RPF减慢以及再灌注造成的节律不齐,1 000μmol/L SNP的上述效应不明显。各浓度SNP再灌注时均可使缺血造成的APA和APD的改变恢复至对照组水平。结论:SNP可呈浓度依赖性地增加左心室流出道的自律性,并可明显改善I/R导致的自发慢反应电位的改变。     

电针改善脊髓损伤大鼠逼尿肌的形态结构和膀胱功能

背景：大量临床和基础研究表明，电针能够改善骶上脊髓损伤后神经源性膀胱的功能。目的：观察电针对骶上脊髓损伤大鼠膀胱功能及结缔组织生长因子表达的影响。方法：将48只雌性SD大鼠随机分为4组，每组12只：空白组不做任何处理；假手术组仅暴露T8椎体下脊髓；模型组建立T8椎体下脊髓横断损伤模型；电针组建立T8椎体下脊髓横断损伤模型后第19天给予电针干预，选择“次髎”“中极”“三阴交”三穴，20 min/次，1次/d，连续干预10 d。干预结束后，进行相关指标检测。结果与结论：(1)尿流动力学检测：与空白组比较，模型组大鼠漏尿点压、膀胱最大容量、膀胱最大压力均升高(P <0.05)；与模型组比较，电针组大鼠漏尿点压、膀胱最大容量、膀胱最大压力均下降(P <0.05)；(2)苏木精-伊红染色：与空白组比较，模型组大鼠膀胱上皮细胞排列紊乱，固有膜被破坏，逼尿肌肌束肥大，肌纤维排列紊乱，组织水肿明显；与模型组比较，电针组大鼠膀胱上皮细胞排列相对规则有序，膀胱纤维化及组织水肿程度相对减轻；(3)Masson染色：模型组大鼠膀胱逼尿肌纤维化程度较重，电针组大鼠膀胱逼尿肌纤维化程度轻于模型组；(4...     

Cajal间质细胞数量在反复膀胱炎大鼠膀胱中增加

目的研究Cajal间质细胞(ICCs)在大鼠反复膀胱炎相关膀胱过度活动症(OAB)膀胱中的数量变化。方法将大鼠分为对照组和实验组[大肠埃希菌(E.coli)1×10~8～1.2×10~8 CFU/mL,100μL膀胱灌注],通过尿检和尿流动力学测定及HE染色膀胱组织明确OAB建模成功;用免疫荧光法观察膀胱组织c-kit阳性的ICCs,Western blot检测干细胞因子(SCF)及c-kit蛋白表达水平。结果实验组大鼠较对照组ICCs网格状分布紊乱,数量明显增加(P0.05),干细胞因子(SCF)及c-kit蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 ICCs在反复膀胱炎膀胱中明显升高。     

枸杞多糖抑制核因子κB(NF-κB)通路降低骨关节炎软骨细胞炎性细胞因子水平

目的探讨枸杞多糖对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖、细胞中免疫相关细胞因子水平的影响及其潜在机制。方法收集骨关节炎样本,分离培养OA软骨细胞。以(0、100、200、400、800)μg/m L枸杞多糖作用OA软骨细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖确定最佳枸杞多糖剂量。以400μg/m L枸杞多糖处理OA软骨细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、生长转化因子β(TGF-β)、核因子κBp65(NF-κBp65)的mRNA水平,Western blot法检测细胞i NOS、TGF-β、NF-κBp65的蛋白水平,ELISA检测培养OA软骨细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果当枸杞多糖剂量为(200、400、800)μg/m L时,OA软骨细胞活力明显低于0μg/m L组,且400μg/m L组、800μg/m L组细胞活力低于200μg/m L组,而400μg/m L组和800μg/m L组细胞活力无明显变化,选取400μg/m L为最适剂量。与对照组相比,400μg/m L枸杞多糖处理的OA软骨细胞上清液中IL-1β和TNF-α水平降低,细胞中i NOS在mRNA和蛋白水平上表达下调,而TGF-β表达上调,同时,NF-κBp65蛋白水平降低。结论枸杞多糖能够降低OA软骨细胞炎性细胞因子水平,抑制NF-κB信号通路,从而改善骨关节炎症损伤。     

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱容量及其组织形态学的影响

背景：骶段的脊髓和腰椎病变导致脊髓损伤使骶髓初级排尿中枢受损或其周围神经(副交感和体神经)病变引起逼尿肌无反射,会导致尿潴留,进而导致膀胱组织细胞形态学也发生了病理性变化。 目的：观察电针次髎、中极、三阴交穴对骶髓损伤后尿潴留模型大鼠最大膀胱容量及其组织形态学的影响。 方法：SD雌性大鼠40只,随机抽取10只为空白组,其余制备骶髓损伤模型后随机摸球法均分为模型组、电针穴位组和电针对照点组。模型组大鼠只捆绑不针刺,穴位组取大鼠“次髎”、“中极”、“三阴交”,对照点组取非穴对照点,针刺后加电针,均治疗20 min。且所有大鼠在治疗后第14天和第22天行膀胱容量检测,治疗结束后取膀胱组织行苏木精-伊红染色观察大鼠膀胱组织形态学变化。 结果与结论：①电针穴位组最大膀胱容量较治疗前明显降低(P < 0.01),并且较对照点组疗效更明显(P < 0.05),穴位组膀胱容量差值(d值)较对照点组差异更明显(P < 0.05)。②电针穴位组膀胱组织形态学较模型组及对照点组有明显改善。说明电针次髎、中极、三阴交穴可有效降低骶髓损伤后尿潴留大鼠最大膀胱容量并使受损的膀胱组织细胞得到一定程度修复。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

Glevic抑制ICCs功能对ATP诱导大鼠盆神经放电的影响

目的探讨Glevic抑制ICCS功能对ATP诱导大鼠盆神经传入电活动的影响。方法20只SD大鼠随机分为ATP组和Glevic组。ATP组通过膀胱内灌注ATP诱发盆神经放电评估ATP介导的膀胱感觉功能,Glevic组则通过Glevic预处理抑制膀胱ICCs功能后,重复ATP组实验。结果两组大鼠给药前膀胱灌注生理盐水均可诱发盆神经进行性增强的簇状放电。膀胱内灌注20mmol／LATP可诱发大鼠盆神经放电,频率为（27．36±2．53）次／分,并伴有较微弱的逼尿肌收缩。100μmol／LGlevic抑制ICCs功能后,ATP诱发的盆神经放电频率为（2．46±0．38）次／分,与ATP组相比差异非常显著（P〈0．01）。结论Glevic对ATP诱发的大鼠盆神经放电的抑制作用表明ICCs可能在ATP介导的膀胱感觉形成中发挥了重要作用。     

Reflex activation of sympathetic pathways to vesical smooth muscle and parasympathetic ganglia by electrical stimulation of vesical afferents.

1. Activation of the sympathetic input to the urinary bladder by electrical stimulation of afferent fibres in the pelvic nerve evoked three responses: (1) an initial transient rise in intravesical pressure, (2) an inhibition of neurally evoked bladder contractions and (3) an inhibition of transmission in vesical parasympathetic ganglia. Similar responses were elicited by stimulation of the hypogastric nerve. 2. The reflex responses were observed in acute spinal preparations (T10-T12) and in cats with intact spinal cords, but were abolished by bilateral transection of the hypogastric nerves. 3. The inhibition of bladder contractions was antagonized by the administration of propranolol (200-400 mug, I.A.), a beta-adrenergic blocking agent. The inhibition of ganglionic transmission was antagonized by dihydroergotamine (30-75 mug, I.A.), an alpha-adrenergic blocking agent. The initial rise in intravesical pressure was not antagonized by either agent. 4. Electrical stimulation of other afferents (carotid sinus nerve and sciatic nerve) did not consistently elicit responses in the urinary bladder. However, stimulation of these afferents as well as pelvic nerve afferents evoked reflex firing in nerve filaments on the surface of the urinary bladder. The firing was abolished by transection of the ipsilateral hypogastric nerve. 5. It is concluded that stimulation of vesical afferents activates a spinal sympathetic reflex which results in closing of the internal urethral sphincter and a depression of bladder activity. The latter occurs by a direct depression of detrusor smooth muscle as well as a block of the neural input to the bladder. This vesico-sympathetic reflex represents a negative feed-back mechanism which may have an important role in the maintenance of urinary continence.     

Nerve fibre proliferation in interstitial cystitis

Summary The aetiology of pain in interstitial cystitis is not understood, although it has been reported to be due to release of mediators from mast cell granules. Cystolysis and intravesical instillation of dimethyl sulphoxide have been shown to relieve pain in this condition. We have studied the nerve population within the bladder wall using immunohistochemical stains for protein gene product 9.5. A group of 18 cases of chronic interstitial cystitis and 12 controls; neuropathic bladder (n=1), chronic bacterial cystitis (n=3), systemic lupus erythematosus cystitis (n=2) and normals (n=6), were investigated. There were significantly more nerve fibres within the sub-urothelial and detrusor muscle layers in chronic interstitial cystitis than there were in normals. Patients with chronic cystitis of other aetiology did not have a significant increase in nerve fibre density within the bladder wall suggesting a specific association between nerve fibre proliferation and interstitial cystitis. Cystolysis is shown to deplete selectively the submucosal nerve plexuses without altering the nerve density within detrusor muscle. This finding explains the desensitisation of the bladder without impairment of detrusor function after this procedure.     

浸润性膀胱癌保留膀胱综合治疗的短期疗效分析

目的:探讨T2N0M0 、T3N0M0原发性浸润性膀胱癌三种不同治疗方案的近期临床疗效.方法:134例原发性浸润性膀胱癌患者,按术式分为3组,单纯治疗组(S组) 56例行单纯保留膀胱手术,术后常规行丝裂霉素或羟基喜树碱膀胱灌注6个月以上,其中T2N0M0 28例,T3N0M0 28例;综合治疗(I组) 37例行保留膀胱手术、术后行静脉吉西他滨和顺铂化疗,并常规行丝裂霉素或羟基喜树碱膀胱灌注6个月以上,其中T2N0M0 16例,T3N0M0 21例;根治组(R组)41例行根治性手术,其中T2N0M0 20例,T3N0M0 21例.比较3组患者的三年总体生存率以及相同临床分期患者的三年生存率.结果:S组三年总体生存率为39.29%,T2N0M0患者三年生存率为42.86%,T3N0M0为39.26%;I组三年总体生存率为70.27% 、T2N0M0患者三年生存率为75.00%、T3N0M0为66.67% ;R组三年总体年生存率为75.61%,T2N0M0患者三年生存率为80.00%,T3N0M0为71.24%.S组与I组间三年生存率比较差异有统计学意义(P＜0.05),I组与R组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:T2N0M0 、T3N0M0临床分期的原发性浸润性膀胱癌患者,综合治疗与根治治疗近期临床疗效无统计学差异.因此建议采用保留膀胱的综合方法治疗,以提高患者生活质量.     

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

目的:研究抗原85B(Ag85B)体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞(m DCs)的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)介导下m DCs表达TSLP受体(TSLPR)和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法:应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B+TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果:体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高(P0.05),表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加(P0.05);与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高(P0.05)。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B+TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低(P0.05),与空白对照组比较差异不显著。结论:Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。     

异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞的细胞周期蛋白D1表达并诱导G0/G1细胞周期阻滞

 目的：探索异丹叶大黄素（ISO）抑制膀胱癌细胞侵袭、转移和增殖活性的机制。方法：以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3细胞后,倒置相差显微镜下观察并以ATP生物荧光法检测癌细胞增殖活性;以RT-PCR和Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达;以流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕法检测细胞迁移活性。结果：20 μmol/L浓度以上ISO可显著抑制UMUC3细胞的增殖,其IC50为(22.5±2.8) μmol/L。同时 UMUC3细胞的细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白水平均显著降低。以低浓度5 μmol/L ISO预处理UMUC3细胞后,与对照组（47.33%）进行比较,可分别在12 h（58.82％）和24 h（63.94％）显著诱导细胞G0/G1期阻滞（P<0.01）。细胞划痕法检测证实5 μmol/L ISO可显著抑制膀胱癌细胞的迁移活性。结论：ISO可抑制膀胱癌细胞增殖,下调细胞周期蛋白D1表达,诱导G0/G1细胞周期阻滞,抑制细胞的迁移能力。     

Non-viral tumor necrosis factor-alpha gene transfer decreases the incidence of orthotopic bladder tumors

Our aim was to evaluate the feasibility and efficacy of tumor necrosis factor-alpha gene therapy in preventing bladder tumor recurrence using an orthotopic model of bladder cancer. We transiently transfected a murine bladder cancer cell line MB49 with pBud-TNF-alpha using a transfection system consisting of the cationic liposome N-(1-(2,3-dioleoyloxyl)propyl)-N,N,N-trimethylammoniummethyl sulfate (DOTAP) plus methyl-beta-cyclodextrin solubilized cholesterol (MBC). MB49 cells produced 893.7+/-24.0 pg/ml of TNF-alpha 2 days after transfection. Cell growth was inhibited, apoptosis was induced and MHC class I, B7.1 and Fas expression on the MB49 cells were increased. In vivo, an orthotopic murine bladder cancer model was established by intravesical instillation of bladder cancer cells after transurethral cauterization of the mouse bladder mucosa. TNF-alpha gene transfer was initiated 2 days after the tumor inoculation, when the tumor burden was small, and given twice per week for 3 weeks. RT-PCR showed TNF-alpha mRNA was observed to increase after the first instillation and then return to basal level 1 month after the sixth instillation. Histology revealed that TNF-alpha gene transfer decreases the bladder tumor incidence from 75% for the control group to 25% for the treated group. Increased level of T lymphocytes and NK cells was found in the TNF-alpha transfected bladders. In situ cytokine gene transfer provides significant protection against tumor growth. This approach may be useful to reduce the incidence of a subsequent tumor after endoscopic resection when used for prophylaxis.     

荧光谱客观分析在膀胱癌光动力学诊断中的应用

目的 探讨紫外激光激发膀胱癌组织细胞荧光谱分析对改进膀胱癌光动力学诊断的意义.方法 以不含细胞培养液和血卟啉单甲醚混合液为对照,分别取浓度为0、10、100、200 mg/L的血卟啉单甲醚作为光敏剂,孵育膀胱癌组织细胞株T24 1～3 h,再以全固态紫外激光作为激发光源(波长355 nm)激发,检测膀胱癌组织细胞特征荧光光谱并分析药物峰位置.结果 在可见光区域390～780 nm,不含细胞的培养液和血卟啉单甲醚混合液未出现特征峰;无血卟啉单甲醚光敏剂的膀胱癌组织细胞的自体峰在445～490 nm处;不同时间不同浓度血卟啉单甲醚光敏剂孵育的膀胱癌组织细胞除在445～490 nm处有自体峰外,在628.65 nm处均出现药物峰,200 mg/L血卟啉单甲醚孵育2 h时膀胱癌组织细胞药物峰及自体峰荧光强度达到最高,且药物峰的荧光强度超过了自体峰.结论 紫外激光激发的膀胱癌组织细胞荧光谱性质稳定、强度佳,对改进膀胱癌光动力学诊断具有确切价值.