血栓素受体参与子痫前期的发病

目的 探讨血栓素受体(TPr)与子痫前期发病机制的关系.方法 用免疫组化和实时荧光定量PCR(real-time PCR)的方法检测36例子痫前期孕妇(病例组)和34例正常妊娠孕妇(对照组)胎盘中血栓素合酶(TXS)、血栓素受体(TPr)和非吞噬细胞氧化酶1(NOX1)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胎盘TXA2的表达.结果 TXS和TPr蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛血管内皮细胞的胞质中,NOX1蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞、绒毛血管内皮细胞及间质细胞的胞质中.子痫前期组胎盘TXS和NOX1蛋白、mRNA表达和TXA2表达均强于对照组(P＜0.05).子痫前期TXA2表达与新生儿体质量呈负相关(P＜0.01).TXA2表达与NOX1 mRNA表达呈正相关(P＜0.05).结论 TXA2可能通过TPr通路导致胎盘产生过量ROS并向母体血液循环释放,参与子痫前期的发病过程.     

生长分化因子15在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的探讨生长分化因子-15（GDF-15）在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的表达,探讨其在子痫前期发病机制中的作用。方法选择2009年12月至2010年10月在青岛市市立医院住院分娩的子痫前期孕妇140例,其中早发型轻度子痫前期孕妇35例（早发轻度组）,晚发型轻度子痫前期孕妇35例（晚发轻度组）,早发型重度子痫前期孕妇35例（早发重度组）,晚发型重度子痫前期孕妇35例（晚发重度组）;另选同期健康孕妇35例为对照组。采用RT—PCR检测胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA的表达量;采用免疫组化方法检测胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白的表达。结果RT—PCR显示子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化显示GDF-15表达于胎盘滋养细胞的细胞浆和细胞外基质中,并在各组胎盘滋养细胞中均表达。子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白表达水平均高于对照组组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论GDF-15在子痫前期胎盘滋养细胞中表达升高,GDF-15的表达水平变化可能与子痫前期发病有关。     

滋养细胞自噬在重度子痫前期发病中的作用与分子机制

目的:研究重度子痫前期患者胎盘滋养细胞自噬的发生规律及其导致细胞受损的可能机制。方法:收集23例重度子痫前期患者及23例正常孕妇的胎盘组织,应用扫描电镜观察胎盘绒毛表面的变化;透射电镜观察滋养细胞超微结构及自噬体形成;免疫组化检测胎盘组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ的表达变化,并将其相对表达量与胎盘重量、新生儿体质量进行相关性分析。结果:与对照组相比,重度子痫前期患者胎盘组织在扫描电镜下见绒毛稀少、排列紊乱等结构异常;透射电镜下见细胞质中典型的自噬体形成;免疫组化提示Beclin-1、LC3Ⅱ等蛋白表达显著升高(P<0.01),其相对表达量与胎盘重量、新生儿体质量呈负相关,Beclin-1,LC3Ⅱ与胎盘重量、新生儿体质量的相关系数分别为-0.977、-0.930,-0.812、-0.849。结论:重度子痫前期患者滋养细胞Beclin-1、LC3Ⅱ等蛋白的表达增加,自噬活性增高,与胎盘重量、新生儿体质量呈负相关。     

解整合素金属蛋白酶19/ADAM19在子痫前期胎盘组织中的表达及其对滋养细胞分泌MMPs的调节

目的通过对子痫前期及正常孕妇胎盘组织中解整合素金属蛋白酶19（ADAM19）的检测及ADAM19对绒毛滋养细胞分泌MMP2,9的调节,探讨ADAM19与子痫前期发病的关系。方法应用免疫组织化学（免疫组化）链霉素抗生物素-过氧化物酶法、免疫印迹技术和RT-PCR技术检测24例正常胎盘组织及46例子痫前期（其中26例为重度子痫前期,20例为轻度子痫前期）胎盘组织中ADAM19蛋白及mRNA的表达;用明胶酶谱方法检测抗ADAM19抗体作用后滋养细胞MMP2,9的分泌变化。结果胎盘组织中,ADAM19主要分布在多种滋养层细胞中,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞一和些绒毛间质结缔组织细胞、毛细血管中,其阳性信号不仅定位于细胞膜上,在细胞质中也有分布。正常胎盘中ADAM19的蛋白表达量为0.372±0.016,重度和轻度子痫前期组ADAM19蛋白定量分别为0.766±0.029和0.693±0.041,轻、重度子痫前期组分别与正常组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）,轻度子痫前期与重度子痫前期比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。ADAM19mRNA在正常组胎盘中的量为0.205±0.084,在重度和轻度子痫前期组中分别为0.481±0.057和0.454±0.033,轻、重度子痫前期组分别与正常组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）,轻度子痫前期与重度子痫前期比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。在体外培养的滋养层细胞中,100μg/L浓度的抗ADAM19抗体在作用12h即可以抑制滋养细胞MMP2,MMP9的分泌,其作用呈浓度依赖。结论子痫前期胎盘组织中ADAM19过表达可能与子痫前期的发生和发展有关;在子痫前期的发生中,ADAM19可能是在妊娠早期抑制滋养细胞的浸润而导致胎盘浅着床的。     

基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的 检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。 方法 采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产（正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例）胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组（P<0.05）;重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组（P<0.05）;3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组（P<0.05）,中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组（P<0.05）。结论 子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。     

KiSS-1在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1是否是子痫前期的发病机制。方法采用免疫组化SP法检测25例正常足月妊娠妇女(正常妊娠组)与40例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度子痫前期15例、重度子痫前期25例)胎盘组织中KiSS-1的表达。结果KiSS-1主要位于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞。子痫前期组胎盘组织中KiSS-1的平均光密度为(0.137±0.010),其中轻度子痫前期为(0.132±0.004),重度子痫前期为(0.140±0.012);均明显高于正常妊娠组的(0.124±0.010),P值分别为P<0.01、P<0.05(P=0.019)、P<0.01。结论胎盘组织中KiSS-1的表达水平随病情程度的加重而增高,可能与子痫前期的发病有关。     

RECK、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。方法采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产(正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例)胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组(P0.05);重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组(P0.05);3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组(P0.05),中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组(P0.05)。结论子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。     

VEGF在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测18例正常孕妇（对照组），36例子痫前期患者（子痫前期组，其中轻度子痫前期患者18例，重度子痫前期患者18例）胎盘组织中VEGF的表达强度。结果VEGF主要表达于胎盘绒毛滋养细胞；重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞VEGF表达强度明显低于对照组及轻度子痫前期患者（P＜0．05），而轻度子痫前期患者与对照组比较，无显著性差异（P＞0．05）。结论VEGF在胎盘中主要由绒毛滋养细胞分泌，子痫前期患者VEGF分泌减少，尤其是重度子痫前期的患者,这可能是引起局部胎盘绒毛及血管痛变的原因。     

细胞外钙受体在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的表达及意义

目的 探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中细胞外钙受体(CASR)mRNA及蛋白表达水平变化及其意义.方法 采用免疫组化方法和免疫荧光及RT-PCR技术分别检测妊娠期高血压疾病患者65例(妊娠期高血压组22例,子痈前期轻度组24例,重度组19例)及健康足月孕妇30例(对照组)胎盘组织中CASR的定位、mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)CASR主要位于胎盘细胞滋养细胞、绒毛滋养细胞及血管内皮细胞上.(2)妊娠期高血压组患者胎盘组织中CASR的mRNA表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(g=7.07,P=0.0004).子痫前期轻度组和子痫前期重度组,两组比较,差异也有统计学意义(q=20.96,P＜0.0001).(3)CASR的蛋白在妊娠期高血压组患者胎盘组织中表达水平为59.0532±8.039,对照组为54.8585±4.3035,两组比较,差异无显著性(q=0.08,P=0.7759).而子痫前期轻度组、子痫前期重度组两组比较,差异有统计学意义(q=16.18,P＜0.0001).结论 妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中CASR的mRNA表达激活及CASR的蛋白异常表达,导致妊娠期高血压疾病的发病和胎盘病理改变的发生发展.     

FAS蛋白在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的检测子痫前期胎盘的FAS蛋白表达水平,探讨子痫前期的发病机制。方法采用免疫组织化学方法结合病理图像分析技术,定量分析10例正常妊娠组、17例轻度子痫前期组和13例重度子痫前期组胎盘FAS蛋白表达。结果 FAS蛋白主要表达与胎盘绒毛滋养细胞的胞膜及胞浆内。与正常妊娠组比较,子痫前期组胎盘FAS蛋白表达显著增加,轻度、重度子痫前期组比较,有显著性差异。结沦子痫前期患者胎盘滋养层细胞FAS蛋白表达增加可能是子痫前期的发病机制之一,从而为临床治疗子痫前期提供新的方向。     

Mucin 15 is expressed in human placenta and suppresses invasion of trophoblast-like cells in vitro

BACKGROUND: Trophoblast invasion is crucial for the development of normal placentas. Mucins are suggested to be involved in cancer invasion. However, the function of mucins in trophoblast invasion has never been reported. This study was to investigate the expression of mucin (MUC) 15 in human placenta and its role in trophoblast invasion. METHODS: MUC15 mRNA in human tissues was analyzed by Northern blot. MUC15 mRNA and protein in human placenta were detected by real-time RT-PCR and Western blot, respectively. The distribution of MUC15 was revealed by immunohistochemistry. The effects of MUC15 on trophoblast invasion in vitro were analyzed by matrigel invasion assay in human choriocarcinoma JAR and JEG-3 cells. RESULTS: MUC15 was expressed most highly in human placenta. MUC15 mRNA and protein increased with gestational age (P < 0.05, first versus third trimester). Immunohistochemistry showed that MUC15 protein was expressed by both cytotrophoblasts and syncytiotrophoblasts, especially at the apical membrane of syncytiotrophoblasts. In addition, MUC15 was found to be present in the glandular epithelium of the decidua. Overexpression of MUC15 substantially decreased matrigel invasion of JAR and JEG-3 cells by 87.5 +/- 1.1 and 83.8 +/- 5.7%, respectively, versus control, which was closely associated with an increase in mRNA expression of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP)-1 and TIMP-2. Knockdown of MUC15 with small interfering RNA significantly reversed these effects (P < 0.05). CONCLUSIONS: Differential expression of MUC15 in human placentas may play a critical role in the regulation of trophoblast invasion.     

Characterization of human villous and extravillous trophoblasts isolated from first trimester placenta

Trophoblasts of the human placenta differentiate along two pathways to give either extravillous cytotrophoblasts (EVCT) with invasive properties and that are implicated in the implantation process, or villous cytotrophoblasts (VCT) that by cell fusion form multinucleated syncytiotrophoblasts. We report the first isolation and purification of these two cell types from the same chorionic villi of first trimester human placenta. We also studied their differentiation in vitro. Electron microscopy showed that in contrast to VCT, EVCT had no microvilli but contained large fibrinoid inclusions. EVCT cultures required a matrix to invade, and as previously established, VCT cultured on plastic dishes aggregated and fused to form syncytiotrophoblasts. These differentiation processes were characterized by a particular pattern of gene expression as assessed by real-time PCR and confirmed by immunocytochemical analysis of the corresponding proteins. EVCT cultured in vitro expressed high levels of HLA-G, c-erbB2, human placental lactogen, and very little human chorionic gonadotropin. Interestingly, TGFbeta2 was a marker of EVCT in vitro and in situ. These data offer a new tool for cell biologists to study the molecular mechanisms involved in human placental development and its pathology.     

胎儿生长受限患者胎盘组织中松弛素受体的表达

目的探讨胎儿生长受限（FGR）患者胎盘组织中松弛素受体LGR7表达与胎儿生长受限发病的关系。方法应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法和RT-PCR技术检测40例正常孕妇（正常组）及40例胎儿生长受限组（FGR组）胎盘组织中松弛素受体LGR7及mRNA的表达。结果（1）两组孕妇的胎盘组织中均有松弛素受体LGR7表达,主要定位于胎盘绒毛滋养细胞的细胞膜上,在细胞滋养细胞、合体滋养细胞中都有较高的表达水平。（2）正常组胎盘组织中松弛素受体LGR7蛋白的表达水平为0．928±0．002,FGR组为0．620±0．022,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）正常组胎盘组织中松弛素受体LGR7mRNA表达水平为0．780±0．021,FGR组组为0．414±0．032,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论FGR患者胎盘组织中松弛素受体表达水平下降,可能与FGR的发病有关。     

XIAP Bax mRNA在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达及其意义

目的探讨凋亡相关基因XIAP Bax mRNA在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达及其意义.方法采用RT-PCR方法研究45例妊娠期高血压疾病病例和15例正常妊娠病例胎盘组织中XIAP Bax mRNA的表达.结果 (1)子痫前期患者XIAP mRNA的表达显著降低(P＜0.01),而妊娠期高血压组XIAP mRNA与正常妊娠组相比表达无显著变化(P＞0.05).(2)Bax mRNA在子痫前期患者中表达显著升高(P＜0.01),而在妊娠期高血压组和正常妊娠组之间表达无显著变化(P＞0.05).(3)XIAP和Bax表达含量间呈负相关.结论 XIAP Bax在妊娠期高血压疾病的发病中起着重要作用,妊娠期高血压疾病的发病可能与XIAP表达的降低和Bax表达的增加有关.XIAP可能通过调节Bax的表达发挥作用.     

Increased cystatin C expression in the pre-eclamptic placenta

Trophoblast invasion is regulated by proteinases and their inhibitors. Cystatin C inhibits cysteine proteinases. The serum concentration of cystatin C is increased in late pregnancy and pre-eclampsia. We aimed to investigate whether the expression of cystatin C is increased in the pre-eclamptic placenta and to investigate the expression pattern of cystatin C mRNA and protein in placental tissue. Tissue samples from the central part of the placenta from 13 normal and 22 pre-eclamptic pregnancies were included. We used real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ hybridization for mRNA expression analysis and immunohistochemistry and Western blotting for protein expression analysis. RT-PCR showed a significantly higher expression of cystatin C mRNA in pre-eclampsia than in normal pregnancy, with the highest expression in cases with severe pre-eclampsia. In situ hybridization revealed a distinct pattern of high expression in the extravillous trophoblast cells of the basal plate and low expression in the syncytiotrophoblast covering villi. The cystatin C protein distribution matched the mRNA expression pattern. Western blot analysis revealed an increased protein expression in cases with severe pre-eclampsia and confirmed the presence of cystatin C in amniotic fluid samples. The high expression of cystatin C mRNA in the extravillous trophoblast cells of the basal plate suggests a role for cystatin C in the regulation of proteases in placentation. Placental expression and secretion of cystatin C could contribute to the elevated maternal plasma levels seen in pre-eclampsia.     

自然流产患者绒毛滋养层细胞PCNA和caspase-3的表达

目的从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法取正常早孕流产和自然流产病例各20例的绒毛组织,光镜观察绒毛形态学变化;免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡蛋白酶caspase-3在滋养层细胞中的表达。结果自然流产绒毛组织均出现不同程度的退行性改变,细胞滋养层的增殖指数较对照组降低,而细胞滋养层、合体滋养层的凋亡指数却明显升高。结论凋亡蛋白酶caspase-3可能参与自然流产的发生机制。     

Endoglin基因在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达及意义

目的探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中Endoglin基因水平的变化及临床意义。方法选择2010年8月至2011年4月在北京军区总医院住院分娩的妊娠期高血压疾病患者共44例（妊娠期高血压疾病组）,其中妊娠期高血压孕妇15例（妊娠期高血压组）,轻度子痫前期孕妇14例（轻度子痫前期组）,重度子痫前期孕妇15例（重度子痫前期组）;以同期正常晚期妊娠孕妇16例为对照组。采用实时定量RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中Endoglin mRNA表达水平。结果妊娠高血压疾病组患者胎盘组织中Endoglin mRNA相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;轻度子痫前期组、重度子痫前期组患者胎盘组织中Endoglin mRNA相对表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义（P均〈0.05）。结论 Endoglin在妊娠期高血压疾病患者尤其是轻度子痫前期及重度子痫前期患者胎盘中高度表达,其表达水平可能与病情的发生发展密切相关。