miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的研究miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 Real-time PCR方法检测miR-379在胶质瘤U87MG细胞和正常星型胶质细胞中的表达水平。在胶质瘤U87MG细胞中瞬时转染miR-379 agomir并用real-time PCR方法验证其转染效率。CCK-8方法检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖能力的影响。划痕实验检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞侵袭能力的影响。结果 miR-379在胶质瘤U87MG细胞中的表达水平显著低于在正常星型胶质细胞中的表达。miR-379 agomir抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-379抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

ATAD2对人胶质瘤细胞系转移及上皮间质转换的影响

目的探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)对人胶质瘤细胞的影响。方法用real-time PCR及Western blot检测ATAD2在人胶质瘤细胞系U87MG、U251和正常人星形胶质细胞的表达。U87MG和U251分为对照组(control)、脂质体对照组(mock)、ATAD2 siRNA(转染特异性siRNA)和ATAD2 overexpression(过表达ATAD2)4组,MTT法、Transwell实验观察细胞增殖和侵袭迁移。Western blot检测上皮间质转换标志蛋白上皮钙黏素、神经钙黏素和波形蛋白的表达。结果 U87MG和U251细胞ATAD2高表达。与对照相比,ATAD2 siRNA抑制U87MG和U251细胞增殖、侵袭、迁移、神经钙黏素及波形蛋白表达,促进上皮钙黏素表达(P0.05);ATAD2 overexpression促进细胞增殖、侵袭、迁移、神经钙黏素和波形蛋白表达,降低上皮钙黏素表达(P0.05)。结论 ATAD2可能通过调节上皮间充质转换进程参与人胶质瘤细胞转移。     

RNA干扰Fascin1表达抑制胶质瘤细胞U87MG的侵袭、转移能力

目的:本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性抑制肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白Fascin1的表达,并探讨其对胶质瘤细胞U87 MG的侵袭和转移能力的影响及相关分子机制。方法:将针对Fascin1的小干扰RNA(Fascin1-si RNA)和阴性对照si RNA(Negative-si RNA)转染至人胶质瘤细胞株U87 MG中。实验分为3组:空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染neg-si RNA的细胞)、实验组(转染Fascin1-si RNA的细胞)。用transwell小室法检测Fascin1对U87MG细胞的侵袭和转移能力的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测U87 MG细胞中Fascin1、p AKT及p STAT3等蛋白的表达。通过添加针对PI3K通路的抑制剂LY294002和针对STAT3通路的抑制剂JSI-124,证实了这两条信号通路在胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移方面的作用。结果:相比空白对照组和阴性对照组,实验组细胞的转移能力降低了约(49±5.8)%及(46±5.4)%(P0.05),侵袭能力降低了约(42±4.9)%和(43±4.8)%(P0.05);且相关的PI3K/AKT及STAT3等信号通路的磷酸化减少;添加相应的信号通路抑制剂后,细胞的侵袭、转移能力显著降低(P0.05)。结论:RNAi抑制Fascin1表达能够降低胶质瘤细胞U87 MG的侵袭及转移能力,并可抑制PI3K/AKT和STAT3信号激活,在一定程度上可逆转胶质瘤细胞的转移和侵袭等肿瘤特性。     

CD74低表达对人胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨干扰CD74表达对人胰腺癌细胞株Capan-2细胞生物学行为的影响。方法设计CD74．短发夹RNA（CD74-shRNA）干扰序列构建CD74干扰质粒转染Capan-2细胞（CD74-shRNA组）,以转染pSUPER空载质粒为对照,采用MTr法检测细胞增殖活力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,实时定量PCR和免疫印迹法检测CD74mRNA和蛋白表达,实时定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9mRNA表达。结果细胞增殖活力检测和划痕实验显示,干扰CD74表达可降低Capan-2细胞的增殖活力、抑制细胞迁移（均P〈0．05）。Transwell实验显示,培养48h后CD74-shRNA组和对照组的穿膜细胞数分别为（102．5±9．03）个/孔、（139．1±9．89）个／孔,CD74-shRNA组显著低于对照组（P〈0．05）。相对于对照组,CD74-shRNA组细胞CD74mRNA和蛋白表达抑制率分别为61％、90％,MMP-2和MMP-9mRNA表达抑制率分别为84％、85％。结论CD74低表达可抑制Capan-2细胞增殖、迁移和侵袭,CD74可能作为胰腺癌治疗的新靶点。     

下调血管内皮生长因子-C基因表达对乳腺癌MCF-7细胞侵袭抑制作用的研究

目的 探讨下调乳腺癌MCF-7细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-C基因的表达后对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株.荧光定量PCR及Western印迹检测转染后对乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA和蛋白质水平的影响.Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力.RT-PCR检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2、-9 mRNA表达变化.结果 转染后获得稳定表达的细胞株.转染后的乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05).Transwell体外侵袭实验显示,转染后重组质粒组与阴性质粒相比,穿膜数明显减少(29.0±1.9比59.0±2.1,P<0.05).RT-PCR显示,转染后乳腺癌细胞的MMP-2、-9 mRNA表达均明显受抑制,抑制率分别为55%、75%(P<0.05).结论 下调VEGF-C表达对乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力有显著抑制作用.     

过表达miR-139-5p对胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨过表达miR-139-5p对胶质瘤U87MG细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其可能机制.方法 在胶质瘤U87MG细胞中瞬时转染miR-139-5p并用real-time PCR方法验证其转染效率,CCK-8法检测转染后各组U87MG细胞的增殖能力,Transwell实验检测转染后各组U87MG细胞的侵袭能力,Western blot检测转染后各组U87MG细胞中BMI1蛋白的表达,应用生物信息网站Targetscan和双荧光素酶报告基因实验验证BMI1是否为miR-139-5p的靶基因.结果 miR-139-5p过表达使U87MG细胞增殖能力下降,侵袭能力下降,U87MG细胞中BMI1蛋白表达下降,生物信息学分析及双荧光素酶实验证实BMI1为miR-139-5p的靶基因.结论 过表达miR-139-5p抑制U87MG细胞增殖及侵袭能力,与下调BMI1的表达相关.     

反义表皮生长因子受体cDNA转染抑制胶质母细胞瘤生长的机制研究

目的 探讨反义表皮生长因子受体(EGFR)cDNA转染抑制胶质母细胞瘤细胞株U87MG生长的机制。方法 反义EGFR cDNA转染胶质母细胞瘤细胞株U87MG后,筛选出低表达EGFR的细胞株;通过观察肿瘤细胞的形态和Western蛋白印迹免疫化学方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,来研究反义,EGFR cDNA转染对胶质母细胞瘤分化的影响;通过流式细胞仪进行细胞周期分析及免疫组织化学方法检测细胞周期调控蛋白p53、Rb、p16和CDK4等,以研究反义EGFR cDNA转染对细胞周期的影响及机制;用telomeric repeat amplification protocol(TRAP分析)检测肿瘤细胞的端粒酶活性。结果 反义EGFR cDNA转染胶质母细胞瘤U87MG后,肿瘤细胞的突起延长,细胞的GFAP表达增高;肿瘤细胞的G0／G1期细胞百分率明显增高,而S期细胞百分率明显减少;肿瘤细胞的野生型,p53蛋白表达明显增高,而Rb、p16和CDK4等的蛋白表达水平未发生明显改变;肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低。结论 反义EGFR cDNA转染可以通过诱导胶质母细胞瘤细胞分化、诱导野生型p53的表达、G1细胞周期阻滞及抑制端粒酶活性等机制而抑制肿瘤细胞生长,而且这些作用机制之间是相互作用、相互协调而共同发挥抑制肿瘤细胞生长作用的。     

CNTN-1促进人食管癌EC9706细胞侵袭和迁移

目的探讨接触蛋白-1(CNTN-1)在食管癌转移中的作用。方法 q PCR和Western blot检测食管癌细胞系EC9706中CNTN-1的表达;RNA干扰和CNTN-1过表达质粒转染调整EC9706细胞CNTN-1的表达,并将细胞分为空白对照组、scrambled siRNA组、CNTN-1 siRNA组、pcDNA3.1-vector组和pcDNA3.1-CNTN-1组;Brd U和Transwell实验分别检测EC9706细胞增殖、侵袭和迁移能力;qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果 CNTN-1在食管癌细胞EC9706中mRNA和蛋白水平较与正常食管上皮细胞显著上调(P0.05);转染CNTN-1siRNA后,EC9706细胞CNTN-1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P0.05),同时细胞中侵袭转移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下降(P0.05);CNTN-1过表达质粒转染细胞后,EC9706细胞内CNTN-1表达水平上调(P0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高,同时MMP-2和MMP-9表达明显升高(P0.05)。结论 CNTN-1可能通过调节MMP-2和MMP-9表达促进食管癌细胞的侵袭转移。     

LncRNA CDKN2B-AS1对胶质母细胞瘤细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的 探讨LncRNA CDKN2B-AS1靶向miR-627-3p对胶质母细胞瘤细胞生物学行为和炎症反应的影响。方法采用RT-qPCR检测人正常星形胶质细胞（NHA）和胶质母细胞瘤细胞（U87、U251、LN229）中LncRNA CDKN2B-AS1和miR-627-3p表达情况。分别转染si-NC、si-LncRNA CDKN2B-AS1、miR-NC、miR-627-3p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA CDKN2B-AS1、si-LncRNA CDKN2B-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA CDKN2B-AS1+anti-miR-627-3p至U251细胞，运用CCK-8法、克隆形成实验、Transwell实验研究U251细胞活力以及克隆形成、迁移及侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析LncRNA CDKN2B-AS1和miR-627-3p的关系。结果 与NHA细胞比较，U87、U251、LN229细胞中LncRNA CDKN2B-AS1表达量显著升高（P<0.05）,miR-627-3p表达量显著降低（P<0.05）。沉默LncRNA ...     

Raptor对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

 目的：研究Raptor对于胶质瘤细胞侵袭能力的影响。方法：采用RNA干扰技术,向胶质瘤U87细胞转染Raptor限定性siRNA干扰质粒, Western blotting检测转染后细胞Raptor的表达水平以鉴定转染效果。体外侵袭实验检测Raptor表达降低后,U87细胞侵袭能力的变化;Western blotting检测细胞中ARK5的磷酸化情况和MMP-2、MMP-9的表达水平。免疫组织化学法检测低级别及高级别胶质瘤中Raptor的表达水平。结果：转染Raptor siRNA质粒的U87细胞命名为siRaptor/U87,转染对照组质粒的细胞命名为Scr/U87,转染成功的实验组细胞Raptor的表达降低。体外侵袭实验中siRaptor/U87较对照组穿透基质膜的细胞数少(P＜0.01)。Western blotting显示实验组细胞中磷酸化ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均较对照组低。胶质瘤组织中Raptor的表达与恶化程度存在相关性（P＜0.01）。结论：Raptor 表达降低可能通过磷酸化ARK5及增加MMP-2、MMP-9的表达促进胶质瘤细胞的侵袭力。     

miR-107抑制胶质瘤细胞的体外增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-107对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法运用RT-qPCR检测人正常的星形胶质细胞系NHA、神经胶质瘤细胞系U87、A172、U251中miR-107和FOXK1的表达;将细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-107组(转染miR-107 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXK1组(转染si-FOXK1)、miR-107+pcDNA3.1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1)和miR-107+pcDNA3.1-FOXK1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1-FOXK1);用脂质体法分别转染至U87细胞;CCK-8法检测细胞的增殖;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测细胞中FOXK1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常的星形胶质细胞NHA相比,神经胶质瘤细胞U87、A172、U251中miR-107表达明显下调,FOXK1表达明显上调(P<0.05);过表达miR-107、敲减FOXK1均可抑制U87细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-107可抑制野生型FOXK1的细胞荧光活性,并负向调控FOXK1的表达;过表达FOXK1可逆转miR-107对U87细胞增殖迁移侵袭的抑制作用。结论 miR-107抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制可能与靶向负调控FOXK1有关,将可为胶质瘤的诊断和治疗提供靶向治疗的依据。     

下调CENP-W对人脑胶质瘤U87细胞的影响

目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

人附睾蛋白4过表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响

目的 探讨人附睾蛋白4（HE4）过表达对子宫内膜癌（EC）细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响。 方法 构建HE4过表达质粒载体（pcDNA 3.1/Myc-His-HE4）和HE4特异性小干扰RNA（siRNA）表达质粒载体（siRNA-HE4）,分别转染HEC-1B（HE4过表达组）和Ark2（HE4低表达组）两个EC细胞系;以空载体pcDNA 3.1/Myc-His转染的HEC-1B细胞为HE4过表达组的阴性对照,以非特异性序列siRNA转染的Ark2细胞为HE4低表达组的阴性对照;不进行转染处理、正常培养的EC细胞系为正常对照组。转染后,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测HE4 mRNA表达水平,MTT比色法测定细胞增殖活性,体外迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。构建移植性肿瘤小鼠模型,比较各组动物的形成瘤体积。 结果 与正常对照组和阴性对照组的HEC-1B细胞比,转染pcDNA 3.1/Myc-His-HE4后HEC-1B细胞中HE4 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞增殖活性、穿膜细胞数明显升高（P＜0.05）;与正常对照组和阴性对照组的Ark2细胞比,转染siRNA-HE4后Ark2细胞中HE4 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞增殖活性、穿膜细胞数明显降低（P＜0.05）;而阴性对照组与正常对照组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;HE4过表达组的移植性肿瘤体积和重量明显大于其对照组（P＜0.05）,而HE4低表达组的移植性肿瘤体积和重量明显小于其对照组（P＜0.05）。 结论 HE4过表达可导致EC细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强,促进肿瘤形成;下调HE4基因表达可明显抑制EC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制肿瘤生长。     

血清淀粉样蛋白A对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力以及MAPK信号通路的影响

目的:探讨沉默血清淀粉样蛋白A(SAA)的表达对骨肉瘤细胞活力、凋亡、转移能力以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:通过小干扰RNA(siRNA)特异性沉默SAA在骨肉瘤U2OS细胞中的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和实验组,阴性对照组和实验组分别转染阴性对照siRNA和SAA-siRNA,空白对照组不做任何处理。MTT法观察细胞的活力变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡率,Transwell小室法分析细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测细胞中SAA、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白水平。结果:SAA-siRNA可显著降低SAA在骨肉瘤U2OS细胞中的表达(P 0. 05);与空白对照组相比,SAA-siRNA组细胞的活力显著降低(P 0. 05),凋亡率显著升高(P 0. 05),侵袭和迁移能力显著降低(P 0. 05)。SAA-siRNA组细胞中p-p38 MAPK和p-JNK的蛋白水平显著低于对照组(P 0. 05),而总JNK和p38蛋白表达量的差异无统计学显著性。结论:沉默SAA的表达可抑制骨肉瘤细胞活力,诱导其凋亡,降低细胞的转移能力,其作用可能与调控MAPK信号通路的活性有关。     

KISS-1及MMP-9基因在胃癌侵袭转移中的作用及相关性

目的探讨肿瘤转移抑制基因KISS-1在胃癌侵袭、转移中的作用及其与MMP-9表达的关系。方法采用Lipofectamine脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒转染胃癌BGC-823细胞,经G418筛选,建立稳定高表达KISS-1蛋白的细胞系,通过RT-PCR和Western blotting法证实转染成功,并检测细胞中MMP-9蛋白及mRNA的表达情况;采用Transwell体外侵袭实验,探讨KISS-1对胃癌细胞株侵袭能力的影响。结果 Western blotting和RT-PCR结果显示:转基因组BGC-823细胞中KISS-1蛋白及mRNA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显增加(P均<0.05);转基因组BGC-823细胞中MMP-9蛋白及mR-NA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显降低(P均<0.05);Transwell检测结果显示:转基因组BGC-823细胞的穿膜数与转空质粒和对照组相比均明显降低(P<0.05),侵袭力抑制率达到25%。结论 pcDNA3.1-KISS-1的有效转染可降低MMP-9的表达并对胃癌细胞BGC-823的侵袭能力具有抑制作用。KISS-1基因对胃癌侵袭转移的抑制作用可能是通过下调MMP-9的功能实现的。     

Podoplanin increases migration and angiogenesis in malignant glioma

Expression of podoplanin in glial brain tumors is grade dependent. While serving as a marker for tumor progression and modulating invasion in various neoplasms, little is known about podoplanin function in gliomas. Therefore we stably transfected two human glioma cell lines (U373MG and U87MG) with expression plasmids encoding podoplanin. The efficacy of transfection was confirmed by FACS analysis, PCR and immunocytochemistry. Cells were then sorted for highly podoplanin expressing cells (U373P^high/U87P^high). Transfection did not influence the production of pro-angiogenic factors including VEGF, VEGF-C and D. Also, expression of VEGF receptors (VEGFR) remained unchanged except for U87P^high, where a VEGFR3 expression was induced. U373P^high showed significantly reduced proliferation as compared to mock transfected group. By contrast, podoplanin significantly increased migration and invasion into collagen matrix. Furthermore, conditioned media from P^high glioma cells strongly induced tube formation on matrigel. In conclusion, podoplanin increased migration of tumor cells and enhanced tube formation activity in endothelial cells independent from VEGF. Thus, podoplanin expression may be an important step in tumor progression.     

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。