乙酰葛根素对血管紧张素Ⅱ致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管内皮细胞凋亡及凋亡调控基因的作用及乙酰葛根素对血管内皮细胞凋亡的抑制作用。方法：采用流式细胞学技术，观察乙酰葛根素对血管紧张素Ⅱ致血管内皮细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的影响。结果：血管紧张素Ⅱ可明显促进血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达，且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性；乙酰葛根素抑制AngⅡ引起的血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达。结论：血管紧张素Ⅱ促进血管内皮细胞凋亡和凋亡调控基因的表达；乙酰葛根素明显抑制内皮细胞凋亡和凋亡调控基因表达。     

乙酰葛根素对血管紧张素Ⅱ致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在不同浓度和不同作用时间下,对血管内皮细胞凋亡及凋亡调控基因的作用及乙酰葛根素对血管内皮细胞凋亡的抑制作用。方法采用流式细胞学技术,观察乙酰葛根素对AngⅡ致血管内皮细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的影响。结果AngⅡ可明显促进血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达,且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性;乙酰葛根素抑制AngⅡ引起的血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达。结论乙酰葛根素明显抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡和凋亡调控基因表达。     

缬沙坦对人脐静脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的调节作用,以探讨缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:荧光显微镜观察缬沙坦作用后VSMC凋亡的形态学变化,用流式细胞仪测定缬沙坦用药前后VSMC凋亡率并作周期分析,用流式细胞仪检测缬沙坦对凋亡相关基因Bax,Bcl-2和caspase3表达的影响.结果:缬沙坦高浓度 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组的VSMC凋亡率较AngⅡ模型组明显提高,缬沙坦单药高、中、低浓度组的VSMC凋亡率较对照组明显提高.细胞周期分析表明,AngⅡ 缬沙坦组与AngⅡ组比较,G0/G1期百分率显著升高,S期百分率显著降低,且具有浓度依赖性.Bax和caspase 3基因经高浓度缬沙坦组作用24 h后表达水平增加,Bcl-2则没有改变.结论:缬沙坦对AngⅡ诱导VSMC的增殖有抑制作用;缬沙坦可能促进VSMC凋亡;缬沙坦促进VSMC凋亡可能与Bax和caspase基因表达增加有关.     

药物对血管紧张素Ⅱ致平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下,对血管平滑肌细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦对其影响。方法:采用流式细胞技术测定了在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下,血管平滑肌细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦及二者舍用对其影响。结果:血管紧张素Ⅱ中低剂量对血管平滑肌细胞凋亡无明显作用,大剂量有诱导凋亡的作用;单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用,卡托普利有一定的作用,二者合用时明显增加凋亡率。结论:血管紧张素Ⅱ具有促进血管平滑肌细胞凋亡作用,大剂量作用尤为明显;合用卡托普利和氯沙坦可明显增加平滑肌细胞的凋亡作用。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法单侧肾切除大鼠ip STZ诱发糖尿病模型,每日ig苯那普利(10 mg·kg^-1),共12周。采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质凋亡相关基因Fas和Fas-L的表达。结果糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,Fas和Fas-L的表达亦显著增强;苯那普利治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Fas和Fas-L的表达减弱。结论苯那普利可能通过影响凋亡相关基因Fas和Fas-L的表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

淫羊藿通过调控多基因表达促进血管平滑肌细胞的凋亡

目的：研究淫羊藿影响血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的机理。方法：取家兔主动脉平滑肌进行细胞培养，培养基中加入不同浓度的淫羊藿后72小时收集细胞，流式细胞仪测定淫羊藿组和对照组的细胞凋亡率，荧光显微镜观察两组凋亡细胞形态变化，基因差示分析系统检测两组细胞多基因表达水平的改变。结果：各浓度的淫羊藿均引起细胞凋亡率高于对照组，并呈现剂量依赖关系；荧光显微镜观察到了典型的凋亡细胞核形态学改变；多基因差示分析显示，淫羊藿正调与人类原粒细胞系的KG-1基因的cDNA序列，人类DNA的CpG岛基因序列同源的基因表达，结论：淫羊藿通过影响多基因表达水平而促进血管平滑肌细胞的凋亡过程。     

血管紧张素Ⅱ可能通过线粒体途径抑制低糖低氧诱导的神经元凋亡

目的：血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是体内重要的生物活性物质，它可以调节机体血压、体液平衡和神经内分泌功能。近年研究表明，AngⅡ在细胞分化及凋亡方面也发挥着极其重要的作用。AngⅡ的生物学效应可以分别被AT1和AT2受体的拮抗刺缬沙坦和PD123319抑制。本试验旨在通过体外培养新生大鼠皮层神经元，用化学损伤的方法建立低糖低氧“缺血再灌注”损伤模型，在细胞及分子水平上观察AngⅡ对神经元的作用并探讨作用机制。方法：无菌条件下进行大鼠皮层神经元原代培养，加入阿糖胞苷抑制非神经元的生长进行纯化。取培养10天的细胞，随机分组为：①正常对照组；②低糖低氧损伤组；③血管紧张素Ⅱ低、中、高浓度组；④缬沙坦组；⑤PD123319组。正常对照组常规换液培养；损伤组弃去原培养液，D—hank＇s液洗2次后，加入含1mmol／1的连二亚硫酸钠的无糖Earle＇s液，置培养箱中37℃、5％CO2、饱和湿度下培养1h后换以完全培养基，制造低糖低氧的损伤模型；药物处理组在损伤过程中和损伤后先后分别加入含不同浓度药物的无糖Earle＇s液及完全培养基。再灌注损伤24h后倒置相差显微镜进行一般形态学观察，MTT法检测各组细胞的存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因表达情况。结果：低糖低氧再灌注损伤组皮层神经元损伤严重，细胞存活率显下降，血管紧张素Ⅱ各浓度组可以明显改善损伤所致神经元形态的变化，且显提高神经元的存活率，并呈浓度依赖性。缬沙坦组也可明显改善细胞状况，提高细胞存活率，而PD123319组改善不明显。流式细胞术检测结果显示，损伤组细胞凋亡率明显升高，     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及Fas和Fas-L表达的影响

目的 探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对糖尿病肾脏细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响。方法 单侧肾切除大鼠腹腔注射STZ(65mg/kg)诱发糖尿病模型，每日灌胃给予ACEI苯那普利(10mg/kg)，共12周。采用原位末端标记法检到肾脏细胞凋亡情况，流式细胞术和免疫组化检到肾皮质Fas和Fas-L表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多，Fas和Fas-L的表达亦显著增强，苯那普利治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少，Fas和Fas-L的表达减弱。结论 苯那普利可能通过影响凋亡相关蛋白Fas和Fas-L的表达而抑制肾脏细胞凋亡，从而发挥肾脏保护作用。     

AT2受体介导入内皮细胞凋亡

研究了AT2受体在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)及2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）兴奋剂CGP42112A作用下能否诱导人内皮细胞凋亡及其与半胱氨酰蛋白酶（cystolic aspartatic proteases)之Caspase-3的关系。结果显示，AngⅡ或CGP42112A可以诱导人内皮细胞出现典型的细胞凋亡，凋亡细胞阳性率极显著高于阴性对照组，凋亡的相对强度与AngⅡ呈现典型的剂量依赖关系，Cas-pase-3酶活性在AngⅡ或CGP42112A作用后有极显著的增加，而在用Caspase-3抑制剂DEVD-fmk后凋亡不能诱导，提示AngⅡ或CGP42112A可以通过AT2受体诱导人内皮细胞凋亡，并且此凋亡是Caspase-3依赖性的。     

甲壳胺对AngⅡ所诱导的乳牛基底动脉平滑肌增殖的影响

本文采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所诱导的乳牛基底动脉平滑肌细胞（BAVSMCs)增殖模型，以MTT法观察甲壳胺对BAVSMCs增殖的影响[^3H]TdR掺入法观察甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞DNA的合成，还观察了甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞总蛋白的影响。结果表明：甲壳胺对AngⅡ所诱导的BAVSMCs增殖有浓度和时间依赖性抑制作用；可浓度依赖性抑制AngⅡ所诱导BAVSMCs的DNA合成增加作用；还可抑制AngⅡ所诱导BAVSMCs蛋白合成增多作用，提示甲壳胺可抑制AngⅡ所诱导的BAVSMCs增殖作用。     

甘肃黄芪黄酮对AngⅡ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨甘肃黄芪黄酮化合物芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法将不同浓度上述两种黄酮单体(0.01、0.1、1.0、10mg.L-1)分别与AngⅡ(10-6mol.L-1)和HUVECs作用24h后,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞核形态变化,流式细胞仪及激光共聚焦仪检测细胞凋亡,并观察凋亡基因Fas表达的变化。结果甘肃黄芪黄酮化合物芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖呈剂量依赖性地抑制AngⅡ引起的细胞存活率下降(P<0.05),AngⅡ(10-6mol.L-1)孵育24h后,内皮细胞凋亡率明显多于对照组(P<0.01);芒柄花素(1.0mg.L-1)与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1.0mg.L-1)可抑制AngⅡ(10-6mol.L-1)诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),并减少Fas的表达(P<0.05);以上实验芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖两化合物间比较无差异(P>0.05)。结论甘肃黄芪黄酮化合物可减轻AngⅡ诱导的HUVECs凋亡,其机制之一可能与其降低Fas的表达有关。     

Multisite phosphorylation of Bcl‐2 via protein kinase Cδ facilitates apoptosis of hypertrophic cardiomyocytes

Activated protein kinase Cδ (PKCδ) associated with cardiac hypertrophy moves from the cytoplasm to the mitochondria and subsequently triggers the apoptotic signalling pathway. The underlying mechanisms remain unknown. The aim of the present study was to investigate whether mitochondrial translocation of PKCδ phosphorylates multiple sites of Bcl‐2, resulting in an imbalance between Bcl‐2 and Bak or Bax, thus enhancing the susceptibility of hypertrophic cardiomyocytes to angiotensin II (AngII)‐induced apoptosis. Chronic pressure overload was induced by transverse aortic constriction (TAC) in rats. The apoptotic rate increased in hypertrophied cardiomyocytes. In AngII‐treated hearts (10 nmol/L, 60 min), there was an increase in the number of TERMINAL deoxyribonucleotidyl transferase‐mediated dUTP–digoxigenin nick end‐labelling (TUNEL)‐positive cells; PKCδ inhibition with 500 nmol/L δV1‐1 for 60 min prevented the AngII‐induced increase in apoptosis. In the hypertrophied myocardium, PKCδ expression increased, whereas that of Bcl‐2 decreased compared with the synchronous control. Treatment of hearts with 10 nmol/L AngII for 60 min activated PKCδ and induced translocation of PKCδ to the mitochondria, where activated PKCδ facilitated the phosphorylation of Bcl‐2 at serine‐87 and serine‐70 sites. The multisite phosphorylated Bcl‐2 was released from the mitochondria, and exhibited reduced affinity for Bak and Bax. The imbalance between Bcl‐2 and Bak/Bax induced the release of mitochondrial cytochrome c and then activated the caspase 3 apoptotic pathway during AngII stimulation (10 nmol/L, 60 min) of hypertrophied cardiomyocytes. Inhibition of PKCδ reduced these effects of AngII. The results suggest that PKCδ can counteract the anti‐apoptotic effect of Bcl‐2 and may promote cardiomyocyte apoptosis through multisite phosphorylation of Bcl‐2 in hypertrophied cardiomyocytes.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及其机制研究

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞（vascular smooth musele cells,VSMC）的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3（caspase 3）表达的影响。方法：采用多个浓度（2．5、5、10μmol／L）的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC 24h和48h;流式细胞术分析细胞凋亡率;RT-PCR检测泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasome pathway,UPP）相关基因泛素、泛素活化酶（E1）、泛素缀合酶（E2）、泛素连接酶（E3）、26S蛋白酶体和caspase 3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果：蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加：细胞内UPP相关的基因rnRNA表达降低,而caspase 3 mRNA表达增高;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达水平升高。结论：蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导vSMC凋亡与下调UPP相关基因和上调caspase 3基因及蛋白的表达有关。     

果糖二磷酸钠对大鼠心肌缺血的防治作用及其机制

目的　研究口服果糖二磷酸钠对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血时心肌细胞的凋亡及对心肌细胞肌浆网钙泵活性的影响。方法　在大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成的心肌缺血坏死模型上 ,同时给予果糖二磷酸钠灌胃 ,观察心肌病理变化 ,以缺口末端标记法 (TUNEL)及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Fas、Bcl 2基因蛋白表达的变化 ,及应用 p 硝苯基磷酸法测定心肌细胞肌浆网钙泵活性变化 ,应用原子吸收法测定心肌钙含量。结果　应用异丙肾上腺素可导致明显的心肌缺血坏死及纤维化 ;缺血心肌组织中心肌细胞凋亡指数及Fas、Bcl 2基因蛋白表达量增加 (P <0 0 1) ,同时心肌细胞肌浆网钙泵活性降低 (P <0 0 5 )而心肌的钙含量却升高 (P <0 0 5 )。应用果糖二磷酸钠灌胃治疗能明显减轻心肌坏死及纤维化 (P <0 0 1) ,降低心肌组织细胞的凋亡 (P <0 0 5 )、心肌组织Fas基因的蛋白表达 (P <0 0 5 )及上调Bcl 2基因的蛋白的表达 (P <0 0 5 ) ;而且可以部分恢复心肌细胞肌浆网的钙泵活性 (P <0 0 5 ) ,降低心肌钙含量 (P <0 0 5 )。结论　口服果糖二磷酸钠可以保护由儿茶酚胺增多所引起的心肌缺血损伤 ,其机制与其能恢复心肌细胞肌浆网上的钙泵活性 ,调节心肌细胞的钙代谢紊乱 ,并抑制心肌缺血引起的细胞凋亡有关     

组织蛋白酶S抑制剂对兔血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 研究组织蛋白酶S抑制剂对培养的兔血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 获取兔主动脉组织,传代培养血管平滑肌细胞,将细胞分为对照组、单药组(血管紧张素Ⅱ)、联合组(组织蛋白酶S抑制剂+血管紧张素Ⅱ);采用流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测血管平滑肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤基因-2蛋白、B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达.结果 ①流式细胞术检查及TUNEL染色结果均显示,联合组血管平滑肌细胞晚期凋亡数量明显低于单药组;TUNEL染色10 h和12 h时点,单药组与联合组差异有统计学意义[ 10 h:(23607±176)比(36058±269)个,12 b:(29813±205)比(39146±263)个,均P＜0.05];②蛋白质印迹检测结果显示,与单药组相比,联合组B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X/B细胞淋巴瘤基因-2蛋白明显下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05);联合组半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 组织蛋白酶S抑制剂可能通过下调B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达减轻血管平滑肌细胞凋亡.     

Rho-kinase inhibition reduces neointima formation after vascular injury by enhancing Bax expression and apoptosis

Recently, we have shown that a specific Rho-kinase inhibitor, Y27632 (R-(+)-trans-N-(4-pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide), prevents neointima formation after vascular injury associated with increased terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nickend labeling (TUNEL)+ smooth muscle cells. Because the mechanism of the action of Y27632 remains unclear, we investigated the expression changes in Bcl family proteins, apoptosis regulators of smooth muscle cells, in the rat carotid artery after balloon injury (BI). Y27632 (BI + Y group) or saline (BI group) was administered peritoneally from Day 1 to Day 14 after BI. Y27632 markedly prevented neointima formation at Day 14. In the BI group, TUNEL+ smooth muscle cells were transiently increased in the neointima, but not in the media, with a peak at Day 7, returning to a lower level by Day 14. Y27632 significantly increased TUNEL+ smooth muscle cells at Days 7 and 14. Smooth muscle cell apoptosis was confirmed by electron microscopic examination. At Day 14, although proapoptotic Bax was slightly, but not significantly, increased in the BI group, it was significantly upregulated in the BI + Y group. Antiapoptotic Bcl-xL was upregulated in the BI group, and the upregulated Bcl-xL was not affected by Y27632. These findings indicate that Rho-kinase inhibition induces neointimal smooth muscle cell apoptosis through Bax upregulation, resulting in reduced neointima formation.     

Synergism of simvastatin with losartan prevents angiotensin II‐induced cardiomyocyte apoptosis in vitro

Objectives Increasing evidence suggests that cardiomyocyte apoptosis has an important role in the transition from compensatory cardiac remodelling to heart failure. The synergistic effect of statins (3‐hydroxy‐3‐methylglutaryl‐coenzyme A reductase inhibitors) and angiotensin II (Ang II) type 1 receptor antagonists reduces the incidence of cardiovascular events. However, the anti‐apoptotic potential of the synergism between losartan and simvastatin in heart failure remains unexplored. Here, we demonstrate that Ang II‐induced apoptosis is prevented by losartan and simvastatin in neonatal cardiomyocytes. Methods The in‐vitro cardiomyocyte apoptosis model was established by co‐culturing neonate rat cardiomyocytes with Ang II. Cell viability was analysed by the MTT assay. Cell apoptosis was evaluated using fluorescence microscopy and flow cytometry. Apoptosis‐related proteins Bax and Bcl‐2 expressions were measured by flow cytometry detection. Key findings Incubation with 10^?7 m Ang II for 48 h increased cardiomyocyte apoptosis and decreased cell viability. Losartan (10^?5 m ) and simvastatin (10^?5 m ), either alone or in combination, significantly decreased Ang II‐induced cardiomyocyte apoptosis and increased cell viability. The q values calculated by the probability sum test were 1.31 for cardiomyocyte apoptosis and 1.21 for cell viability. Ang II induced a significant increase in Bax protein expression, whereas Bcl‐2 protein expression was decreased. Losartan alone or in combination with simvastatin blocked the increased Bax expression and increased Bcl‐2 expression. However, simvastatin had no such effect. Conclusions Our data provide the first evidence that synergism of simvastatin with losartan prevents angiotensin II‐induced cardiomyocyte apoptosis in vitro. Synergism between simvastatin and losartan may provide a new therapeutic approach to the prevention of cardiac remodelling.     

三种不同IL-15基因转染对NCI—H446肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞凋亡的影响。方法用构建的3种转染不同IL-15基因的NCI—H446细胞模型：原型（CIL-15）、成熟肽（CIL-15mp）及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL—15基因（CIL-2sp—IL-15mp）,以野生株NCI—H446细胞（CW）为对照,流式细胞术检测细胞凋亡率及Fas蛋白表达。结果与CW相比,CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp—IL-15mp凋亡率及Fas蛋白表达依次增加（P＜0．05或＜0．01）。结论3种IL-15基因转染均可致NCI—H446细胞凋亡率明显增加,强度依次为改型＞成熟肽＞原型;这种作用与增加NCI-H446细胞Fas蛋白的表达有关。