褪黑素对人肝癌SMMC—7721细胞的抑制作用

观察褪黑素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长抑制作用及其作用机理。方法采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、ＭＴＴ显色技术研究其抑制作用,以流式细胞仪和电子显微镜技术观察其作用机理。结果褪黑色素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞具有抑制作用,其ＩＣ３０、ＩＣ５０分别为１．１０和２．００ｍｍｏｌ／Ｌ。以ＩＣ３０的褪黑素处理ＳＭＭＣ－７７２１细胞,使其倍增时间由２１．１ｈ延长到３８．４ｈ。流式细胞仪观察到     

猪垂体不同剂量照射后血清激素和靶腺器官的反应

目的：探讨垂体不同单次剂量照射后的放射反应。方法：采用依附于LINAC的SRS系统对幼年小型猪垂体一次施照，观察照射后血清睾酮、T3、T4、皮质醇水平的动态变化，并对垂体及其靶腺器官进行组织学观察。结果：照射后血清睾酮水平的降低出现最早，15Gy以下组在观察期末出现不同程度恢复，20Gy组血清睾酮和T4在实验后期呈持续低水平，血清T3和皮质醇水平未出现改变。结论：垂体腺分泌细胞具有不同的放射敏感性，5Gy照射即可抑制促性腺激素分泌细胞，但15Gy照射后仍能部分恢复。对于单次20Gy的剂量照射，ACTH分泌细胞有较好的耐受，促甲状腺素(TSH)分泌细胞轻度受抑。     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究

目的构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制。方法构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况。结果重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P0.05)。DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,procaspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡。进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

猫人参注射液体外抗肝癌实验研究

目的:观察单味猫人参注射液在体外对肝癌细胞的抑制作用.方法:噻唑蓝还原法(MTT法)检测猫人参注射液对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721、小鼠肝癌细胞株H22、大鼠肝癌细胞株CBRH-7919的生长抑制作用.结果:体外实验结果表明:250mg/ml浓度猫人参注射液对H22、CBRH-7919、SMMC-7721肝癌细胞株均有抑制作用,抑制率分别63.68%、41.51%、32.92%,IC50分别为:107.70mg/ml、519.49mg/ml、667.56mg/ml;在24h,48h,72h三个时相,对小鼠H22肝癌细胞的生长抑制作用存在较明显的时效关系,在72h内16.88mg/ml～250mg/ml浓度内药物浓度与抑制作用有正相关趋势,其相关系数为0.91.结论:猫人参注射液对不同肝癌细胞株有一定的抑制作用.     

乙酰咪唑修饰对高密度脂蛋白结合人肝癌SMMC—7721细胞的影响

利用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）研究其对ＨＤＬ３结合肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞能力的影响。结果：ＨＤＬ３乙酰咪唑修饰降低其竞争结合作用。这一抑制作用取决于乙酰咪唑浓度，在１ｍｏｌ／Ｌ时达最大抑制。结果提示ＨＤＬ３中酪氨酸残基存在于ＨＤＬ３结人合确认部位，参与ＨＤＬ３的受体结合过程。     

铅块屏蔽对照射野外的剂量影响

目的探讨适形铅挡块遮挡照射野外边缘情况下对表面辐射剂量的影响。方法将金属氧化物半导体场效应管（MOSFET）剂量探测器探头沿垂直于野边缘的直线布置在照射野外边缘,用不同宽度的低熔点适形铅块去屏蔽照射野外边缘,比较遮挡不同宽度铅块后与不遮挡时边缘区的剂量变化。结果遮挡适形铅挡块后与没有遮挡铅块比较,照射野边缘表面0～2mm内剂量跌落15%~20%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;遮挡适形铅块后与不遮挡铅块比较,照射野外2～10mm区域,剂量变化不显著,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论用低熔点铅挡块遮挡照射野既可形成适形放疗效果而且可降底照射野外边缘辐射剂量,有利于保护照射野外正常组织。     

肝硬化肝癌立体定向照射后细胞因子表达的实验研究

目的应用兔肝硬化肝癌模型观察肝病状态下肝癌照射后放射性肝损伤的细胞因子变化。方法肝硬化肝癌兔16只(实验组1),随机分为两组,每组8只,分别给予单次剂量20,30Gy的立体定向照射;8只单纯接种肝癌兔(实验组2),随机分为两组,每组4只,按上述方法分别给予相同照射。照射后3周全部处死,应用EV二步法分别观察照射后实验组1与实验组2兔肝组织GST-π的变化。结果①给予20Gy照射,实验组1GST-π在癌周组织的表达比实验组2GST-π的表达高,两组间差异有显著性(P=0.010);②给予30Gy照射,实验组1GST-π在癌周组织的表达与实验组2GST-π的表达相似,两组间差异无显著性(P=1.000);③实验组1不同剂量照射后,高剂量组(30Gy)GST-π在癌周组织和肝癌组织的表达比低剂量组(20Gy)的表达低,两组间差异有显著性(P=0.010)。结论①实验性肝硬化肝癌的照射效果单次剂量30Gy优于20Gy;②GST-π可作为评价肝硬化肝癌照射效果的参考指标。     

乙酰咪唑修饰对高密度脂蛋白结合人肝癌SMMC－7721细胞的影响

利用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）研究其对ＲＤＬ３结合肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞能力的影响。结果：ＨＤＬ３乙酰咪唑修饰降低其竞争结合作用。这一抑制作用取决于乙酰咪唑浓度，在１ｍｏｌ／Ｌ时达最大抑制。结果提示ＨＤＬ３中酪氨酸残基存在于ＨＤＬ３结合确认部位，参与ＨＤＬ３的受体结合过程。     

交替半身照射消除体内残留白血病细胞的实验研究

用BN大鼠粒细胞白血病模型(BNML),于白血病强化疗后交替进行半身照射,不用骨髓移植,以代替全身照射移植自身骨髓。结果表明,实验动物能耐受这一新的治疗措施,骨髓造血能自行重建,无1只大鼠死于造血衰竭,而且实验动物生存时间比单用化疗动物明显延长。     

小白菊内酯诱导肝癌细胞SMMC 7721自噬性死亡的实验研究

目的 探讨小白菊内酯对肝癌细胞SMMC 7721自噬反应的影响及其机制。方法 通过MTT测定小白菊内酯对 SMMC 7721细胞活力的影响;通过吖啶橙染色观察不同浓度小白菊内酯对SMMC 7721细胞自噬的影响,Western blot检测细胞自噬标志物LC3、p62的表达以及自噬流检测分析小白菊内酯对细胞自噬的影响;用抗氧化剂NAC去除细胞中ROS,通过Western blot检测小白菊内酯对细胞自噬的影响,确定ROS在其中的作用。结果 小白菊内酯可抑制SMMC 7721细胞的增殖,并具有浓度依赖性;通过自噬的标志物及自噬流的检测显示小白菊内酯可诱导肝癌细胞系SMMC 7721细胞发生自噬,用NAC去除ROS后,小白菊内酯引起的自噬明显下降,说明其诱导的SMMC 7721细胞发生自噬依赖于ROS。 结论 小白菊内酯可能是通过刺激细胞产生ROS诱导SMMC 7721肝癌细胞发生自噬性死亡。     

阿霉素对人肝癌细胞SMMC—7721抑制作用的研究

目的 研究阿霉素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的影响。方法 应用ＭＴ法、流式细胞术及航向电镜技术观察阿霉素对ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长的作用及细胞周期和形态学改变。结果 阿霉素明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的生长（Ｐ〈０．０５）,半数生长抑制剂量（ＩＣ５０）为０．４４ｍｇ／Ｌ。流式细胞术证实,阿霉素作用１２ｈ,细胞阻滞于Ｇ２期,４８ｈ细胞阻滞于Ｇ１期。航向电镜超微结构观察发现阿霉素可使肿     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

小细胞肺癌化疗剂量和剂量强度的研究

目的探讨增加化疗剂量或剂量强度是否有利于小细胞肺癌的预后。方法回顾性分析1999年2月至2004年6月某地区73例小细胞肺癌患者的化疗次数、每次化疗的剂量、周期间隔等数据。结果治疗持续时间为3～6个周期,中位生存时间为2个月,大多数患者显表现出对首次化疗有反应;观察有2/5高剂量治疗的患者生存时间得以改善;减少化疗次数、增加剂量和/或提高剂量强度时,生存未得以改善。结论化疗的剂量是个体治疗效果的决定因素;化疗次数、化疗水平、化疗强度、累计剂量和剂量强度是改善生存的重要因素;但化疗强度对其的影响需要进一步的研究得以证实。     

白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡过程中bax和bcl-2基因表达

目的探讨中药白英提取物对肝癌SMMC7721细胞中细胞凋亡相关基因的影响。方法用不同浓度的白英提取物处理肝癌SMMC7721细胞,利用TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,研究白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡促进基因bax和凋亡抑制基因bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 IPP图像分析表明,bax表达显著增高,bcl-2显著下降。结论白英提取物通过调节细胞凋亡促进基因和抑制基因,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

siRNA介导的NF-κB P65沉默诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡

目的 研究siRNA介导的NF-κBP65沉默诱导肝癌细胞凋亡相关机制。方法实验以肝癌SMMC772l细胞株为材料,分为空白对照（Con）、脂质体对照（LP）以及siRNA干扰实验（siRNA）3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染SMMC7721细胞株;Westernblotting检测NF．KBP65表达水平,MTT检测细胞增殖情况,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2和Bax表达。结果与Con和LP组相比,siRNA具有抑制SMMC7721细胞NF-κBP65表达的作用,NF-κBP65表达抑制率分别达到64．74％和34．52％。siRNA明显抑制SMMC．7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,晚期凋亡细胞分别是Con组和LP组的8倍和7倍。siRNA引起Bcl-2表达下调,而Bax表达上调。结论siRNA可以有效抑制NF-κBP65蛋白表达,并通过调节Bcl-2和Bax诱导SMMC7721细胞的凋亡。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721的体外抗肿瘤作用

目的研究奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于SMMC7721细胞,应用MTT法检测奥沙利铂对SMMC7721细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用分光光度法检测caspase-3、cas-pase-8、caspase-9的活性。结果奥沙利铂可抑制SMMC7721细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和SubG1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株SMMC7721增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究

目的观察胰淀素对体外培养胰岛细胞活力的影响,探讨胰淀素在２型糖尿病发病中的作用。方法应用体外单 层培养新生乳鼠胰岛细胞,采用噻唑蓝法测定在不同浓度胰淀素作用不同时间后细胞的活力变化。结果１０ μｍｏｌ／Ｌ以 上胰淀素能引起胰岛细胞活力降低（Ｐ＜０．０１）,１０ μｍｏｌ／Ｌ胰淀素时间梯度组细胞活力呈进行性下降,在 ２ ｈ时与对照组 相比差异非常显著。相差显微镜下可见部分细胞胞体缩小,胞质发生空泡变性,少数细胞核固缩、裂解,胞膜突起呈出胞 状。结论　胰淀素对胰岛细胞有直接损伤作用,这种损伤程度与胰淀素浓度及作用时间呈正相关。     

过表达NNMT对SMMC7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨尼克酰胺N甲基化酶(NNMT)对人肝癌细胞株SMMC7721恶性生物学行为影响.方法 分别对转染NNMT基因SMMC7721/NNMT组(简称S/NNMT)、对照组SMMC7721细胞组(简称S)及转染pcDNA3.1空质粒SMMC7721/pcDNA3.1(简称S/P)组细胞进行MTT增殖实验、克隆形成实验、黏附实验、侵袭实验等,以研究过表达NNMT对细胞生物学行为的影响.结果 MTT法检测结果显示S/NNMT组细胞增殖速度、克隆形成率与S组、S/P组比较差异无统计学意义(P＞0.05),S/NNMT组细胞异质黏附能力明显高于S组、S/P组细胞(P＜0.001);Transwell侵袭力实验结果显示S/NNMT组细胞OD值明显高于其余两组(P＜0.001).结论 NNMT可以使肝癌细胞的恶性表形发生变化,使其侵袭转移能力增强.