山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练致急性心肌损伤大鼠的影响

目的探讨山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练致急性心肌损伤大鼠的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,体重200～220 g,随机分为5组:正常对照组(C组,n=8)、力竭对照组(E组, n=24)、山莨菪碱组(A组,n=16)、旋覆花素组(IB组,n=16)、苦碟子组(IS组,n=16)。采用游泳致力竭建立过度训练动物模型。A组于力竭前即刻腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg,IB组于力竭前24 h和力竭前即刻口腔灌入旋覆花素25 ml/kg,IS组于力竭前即刻腹腔注射苦碟子20 ml/kg。取标本检测大鼠血清磷酸肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK-MB)的活性,光镜观察心肌组织形态学,采用流式细胞术及TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,并计算心肌细胞凋亡率。结果与C组比较,E组、A组、IB组和IS组血清CK及CK-MB升高,心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与E组比较,A组、IB组及IS组大鼠血清CK及CK-MB及心肌细胞凋亡率均降低(P<0.05)。光镜下,E组的心肌细胞核深染,有固缩现象;而A组、IB组及IS组的心肌心肌组织学变化均未见异常。结论山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子预先给药通过抑制心肌细胞的凋亡,可减轻过度训练致大鼠的心肌损伤。     

山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子对过度训练大鼠心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子对过度训练大鼠心肌Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,体重200～220 g,随机分为5组：正常对照组（C组,n=8）、力竭对照组（E组,n=24）、山莨菪碱组（A组,n=16）、旋覆花素组（IB组,n=16）、苦碟子组（IS组,n=16）。采用游泳至力竭建立过度训练动物模型,A组于力竭前即刻腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg,IB组于力竭前24 h、即刻口腔灌入旋覆花素25 ml/kg,IS组于力竭前即刻腹腔注射苦碟子20 ml/kg。检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达,并对Bax/Bcl-2蛋白比值与心肌细胞凋亡率进行相关性分析。结果与C组比较,E组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,Bax/Bcl-2蛋白比值升高。A组、IB组和IS组Bax、Bcl-2蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白比值升高（P〈0.05）。与E组比较,A组、IB组和IS组Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白比值降低（P〈0.05）。各组Bax/Bcl-2蛋白比值与心肌细胞凋亡率呈正相关（r=0.727,P〈0.01）。结论山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子预先给药可通过下调过度训练大鼠心肌促凋亡蛋白Bax、上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制心肌细胞凋亡。     

旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织细胞凋亡调控基因的影响

目的：观察旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织细胞Bax和Bcl-2的表达以及Bax/Bcl-2比值变化的影响,探讨上述二种药物抗肾组织细胞凋亡的分子机制。方法：采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型,将大鼠随机分为安静对照组、力竭运动组（力竭6h、力竭24h）、旋覆花素防治组（旋覆花素6h、旋覆花素24h）,苦碟子防治组（苦碟子6h、苦碟子24h）。采用免疫组织化学方法检测大鼠肾组织Bax、Bcl-2蛋白的表达;采用CMIAS病理图像分析仪测量Bax、Bcl-2蛋白表达的平均光密度。结果：力竭后6h及24h大鼠肾组织Bax的表达增强（P〈0.05）,Bcl-2的表达减弱（P〈0.05）,Bax/Bcl-2比值明显增高（P〈0.05）;旋覆花素和苦碟子6h及24h组大鼠与同期力竭组比较,Bax的表达减弱（P〈0.05）,Bcl-2的表达增高（P〈0.05）,Bax/Bcl-2比值降低（P〈0.05）。结论：旋覆花素和苦碟子均可通过调节Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2比值而起到抗过度训练大鼠肾组织细胞凋亡的作用。     

山莨菪碱与旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织上皮钙黏素表达的影响

目的：探讨过度训练大鼠肾组织上皮钙黏素表达的变化及山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子干预的影响。方法：将80只雄性Wistar大鼠随机分为安静对照组（CN）、力竭运动组（ES）、山莨菪碱干预组（AD）、旋覆花素干预组（IB）、苦碟子干预组（IS）。CN组为安静对照;ES组又根据力竭后恢复时间分为力竭即刻（ESI）、力竭后6h（ES6h）和力竭后24h（ES24h）;AD组、IB组、IS组均分别于力竭后6h和力竭后24h4取材观察各项指标。每个时间点8只大鼠。采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型。采用免疫组织化学法检测各组肾组织E-Cadherin蛋白表达的变化;采用CMIAS病理图像分析仪测量E-Cadherin蛋白表达的平均光密度。结果：对照组大鼠肾组织有E-Cadherin的丰富表达,广泛分布于肾小管上皮细胞膜上及细胞浆内;力竭即刻、6h及24hE-Cadherin表达逐渐减弱（P〈0.05）。山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子组大鼠肾组织E-Cadherin表达比同期力竭组明显增强（P〈0.05）。结论：过度训练可引起肾组织E-Cadherin的表达下调,山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子干预后可逆转这种变化,这可能是过度训练引起急性肾损伤及上述3种药物减轻OTIAKI的重要机制之一。     

旋覆花素对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-3和细胞色素c表达的影响

目的 探讨旋覆花素对过度训练致急性心肌损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase3)和细胞色素c表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠48只,体重200 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:正常对照组(C组,n=8)、过度训练组(E组,n=24)和旋覆花素组(IB组,n=16).E组和IB组采用游泳致力竭法制备过度训练致大鼠急性心肌损伤模型.IB组于过度训练前24 h及过度训练前即刻分别经口灌入旋覆花素25 ml/kg.E组于过度训练后即刻、6、24h时,IB组于过度训练后6、24h时分别取8只大鼠,采集下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度;然后处死大鼠,取心肌组织,采用免疫组化法检测心肌组织caspase-3和细胞色素c表达,光镜下观察心肌组织病理学结果.结果 与C组比较,E组和IB组过度训练后各时点血清cTnI浓度升高,心肌组织caspase-3与细胞色素c表达上调(P＜0.05);与E组比较,IB组过度训练后6、24h时血清cTnI浓度降低,心肌组织caspase-3与细胞色素c表达下调(P＜0.05).IB组心肌损伤程度轻于E组.结论 旋覆花素可减轻过度训练致大鼠急性心肌损伤,其机制与下调心肌组织caspase-3及细胞色素c表达有关.     

山莨菪碱对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及炎性反应的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及炎性反应的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,体重200～220 g,按随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、过度训练组(E组)和山莨菪碱组(A组).采用游泳至力竭法建立过度训练致大鼠心肌损伤模型.A组于过度训练前20 min腹腔注射山莨菪碱10 m∥ks.于过度训练后6 h时采集下腔静脉血后处死,取心肌组织,应用全自动生化仪检测血清CK-MB活性,免疫组化法检测心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,E组和A组过度训练后6 h时血清CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性升高(P＜0.05);与E组比较,A组过度训练后6 h时血清CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性降低(P＜0.05).结论 山莨菪碱可抑制过度训练大鼠心肌细胞凋亡,其机制与减轻心肌组织炎性反应有关.

Abstract：

Objective To evaluate the effects of anisodamine on apoptosis in cardiomyocytes and inflammatory response in overtrained rats. Methods Twenty-four male Wistar rats, weighing 200-220 g, were randomly divided into 3 groups ( n = 8 each) : control group (group C) , overtraining group (group O) , anisodamine group (group A) . The model of overtraining-induced acute heart injury was established by exhausting swimming. Anisodamine 10 mg/kg was given intraperitoneally 20 min before overtraining in group A. Blood samples were taken at 6 h after overtraining for measurement of serum CK-MB activity. The rats were then sacrificed and myocardial tissues taken for determination of TNF-α content and NF-κB activity (by immunohistochemistry) . The apoptosis rate was detected by flow cytometry. Results The CK-MB activity, apoptosis rate, TNF-α content and NF-κB activity were significantly higher at 6 h after overtraining in groups O and A than in group C, while lower at 6 h after overtraining in group A than in group O ( P < 0.05) . Conclusion Anisodamine can inhibit apoptosis in cardiomyocytes by reducing inflammatory response in overtrained rats.     

苦碟子注射液对Lewis肺癌的抑制作用

目的 探讨苦碟子注射液(KDI)对Lewis肺癌体内外的抑制作用及其机制.方法 12.5～400.0g/L KDI分别作用Lewis肺癌细胞后,噻唑蓝(MTT)比色法检测KDI体外对Lewis肺癌细胞的抑制作用.用C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,观察不同浓度KDI的抗癌作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及细胞周期.结果 KDI能显著抑制Lewis肺癌细胞的增殖,并呈剂量效应.低、中、高剂量组对Lewis肺癌的抑瘤率分别为21.64%、36.43%、46.68%,均明显高于生理盐水组(P＜0.01);流式细胞仪检测发现,KDI低、中、高剂量组G0/G1期细胞数分别为(68.10±3.43)%、(80.06±5.48)%和(78.36±6.68)%,S期细胞比例分别为(30.98±1.99)%、(17.48±6.36)%和(17.05±6.35)%,KDI能够使Lewis肺癌细胞阻滞于G0/G1,凋亡率分别为8.96%、17.40%、10.34%,均显著高于生理盐水组(P＜0.05).结论 在体内外,KDI对Lewis肺癌均有明显的抑制作用,可能与其诱导细胞凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

山莨菪碱对过度训练大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 雄性SD大鼠48只,体重200～220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:正常对照组(C组,n=8)、力竭运动组(E组,n=24)和山莨菪碱组(A组,n=16).采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型,A组于力竭运动前20 min腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg后进行力竭运动.检测肾组织细胞凋亡和肾小管上皮细胞TLR4蛋白、TLR4 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,E组和A组细胞凋亡率升高,肾小管上皮细胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA表达上调(P＜0.05);与E组比较,A组细胞凋亡率降低,肾小管上皮细胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 山莨菪碱可通过下调过度训练大鼠肾小管上皮细胞TLR4表达,抑制肾脏细胞凋亡.     

苦碟子注射液对大鼠随意皮瓣存活的影响

目的：观察苦碟子注射液研究苦碟子注射液对大鼠随意型皮瓣存活的影响对大鼠随意皮瓣成活的影响。方法：将2～3月龄重SD大鼠24只,采用随机抽签法分为2组（实验组和对照组,每组12只）。采用改良的大鼠随意型皮瓣制作方法造模,实验组每天腹腔注射苦碟子注射液5 ml/kg ,对照组每天腹腔注射生理盐水5 ml/kg。术后第7天颈椎脱臼处死大鼠分别进行皮瓣存活面积比的检测,同时取皮瓣近中远端组织经组织染色切片后光镜下观察,免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：术后7 d,实验组皮瓣存活面积比为（70．432±3．867）％,显著高于对照组的（50．498±2．346）％（P＜0．01）;实验组皮瓣组织水肿、炎症细胞浸润情况比对照组明显减轻;切片观察出现较多新生血管,Ⅱ区新生血管密度（（30．11±5．53）/mm2,与对照组（20．13±4．11））/mm2比较,差异有统计学意义（P＜0．01）,Ⅲ区坏死严重。实验组VEGF表达量为（4867．31±452．36）,与对照组的VEGF表达量（2387．45±768．46）比较,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：苦碟子注射液可以提高VEGF的表达量、促进毛细血管新生,减轻皮瓣炎性浸润,还可以明显提高大鼠随意型皮瓣的成活率,为临床皮瓣移植研究提供了新的思路。     

山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,体重200～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:对照组(C组,n=8)、力竭运动组(ES组,n=24)和山莨菪碱组(AD组,n=16).采用游泳力竭法建立过度训练致大鼠急性心肌损伤模型.AD组于力竭运动前20 min腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg.ES组于力竭后即刻、6、24 h时,AD组于力竭后6、24 h时分别随机取8只大鼠,采集下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnl)浓度,随后处死大鼠取心肌组织,采用免疫组化法检测caspase-1及IL-18的表达水平,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,ES组各时点血清cTnI浓度升高,心肌组织caspase-1和IL-18表达上调(P＜0.05);与ES组比较,AD组各时点血清cTnI浓度降低,心肌组织caspase-1和IL-18表达下调(P＜0.05).AD组心肌病理学损伤程度轻于ES组.结论 山莨菪碱可减轻过度训练致大鼠急性心肌损伤,其机制与下调心肌组织caspase-1及IL-18表达有关.     

瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 评价瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠75只,体重220～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=25)∶假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组).I/R组和R组采用夹闭双侧肾动脉45 min时恢复灌注法建立肾缺血再灌注损伤模型.R组于缺血前15 min至再灌注30 min经尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg· kg-1·min-1,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于缺血前15 min(T0)、再灌注3 h(T1)、6 h(T2)、12h(T3)及24 h(T4)时取肾组织标本.采用流式细胞术检测肾细胞凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达,采用RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA表达,计算Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值,采用Paller法行肾小管损伤评分.结果 与S组比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T12时升高,T3,4时降低(P＜0.01);与I/R组比较,R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值升高(P＜0.05或0.01);与T0时比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T1,2时升高,T3,4时降低(P＜0.01).结论 瑞芬太尼减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达,抑制肾组织细胞凋亡有关.     

山莨菪碱对大鼠急性肾损伤时内质网应激的影响

目的 评价山莨菪碱对大鼠急性肾损伤时内质网应激(ERS)的影响.方法 雄性SD大鼠42只,体重200 ～ 220 g,采用随机数字表法将其分为3组:对照组(C组,n=6),双侧后肢肌肉注射生理盐水10 ml/kg;急性肾损伤组(AKI组,n=18),双侧后肢肌肉注射50％ (v/v)甘油10 ml/kg;山莨菪碱组(AD组,n=18),腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg,20 min后处理同AKI组.C组于肌肉注射生理盐水后即刻(T0),AKI组和AD组于甘油给药后1 h(T1)、6 h(T2)、24 h(T3)分别随机取6只大鼠,采集肾组织标本,HE染色后行肾小管损伤评分,采用免疫组化和Western blot法测定肾组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和氧调节蛋白150(ORP150)表达.结果 与C组比较,AKI组和AD组各时点肾小管损伤评分升高,肾组织GRP78和ORP150表达上调(P＜0.01);与AKI组比较,AD组各时点肾小管损伤评分降低,肾组织GRP78和ORP150表达下调(P＜0.05或0.01).结论 山莨菪碱可抑制肾小管上皮细胞ERS,可能减轻了ERS途径诱导的细胞凋亡,从而减轻了大鼠急性肾损伤.