PGE2诱导胃癌细胞株BGC-823HIF-1α、VEGF表达

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人胃癌细胞株BGC-823低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的调节作用。方法以不同剂量的PGE2刺激BGC-823细胞24h,应用RT-PCR和Western blot方法检测PGE2能否在常氧下诱导BGC-823细胞HIF-1α、VEGF表达。结果PGE2呈剂量依赖性诱导HIF-1α蛋白表达,但对HIF-1α mRNA表达无影响,PGE2呈剂量依赖性诱导细胞VEGF mRNA和蛋白表达。结论PGE2对VEGF表达的诱导可能通过HIF-1α途径介导．这可能是环氧合酶-2(COX-2)诱导肿瘤血管生成的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ在翻译后水平影响血管平滑肌细胞缺氧诱导因子1α表达的机制

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）以及脯氨酸羟化酶2（PHD2）、缺氧诱导因子1抑制因子（FIH-1）、p-ERK表达的影响,探讨PHD2、FIH-1、p-ERK在AngⅡ作用下对HIF-1α表达的影响机制。方法 HUASMC分为三组：（1）对照组：正常培养基培养细胞6 h;（2）AngⅡ组：含AngⅡ的培养基（终浓度为10^－6 mol/L）培养细胞6 h;（3）AngⅡ+PD98059组：含PD98059的培养基（终浓度为10^－5 mol/L）预处理细胞1 h后,加入含AngⅡ的培养基（终浓度为10^-6 mol/L）培养细胞6 h。RT-PCR检测细胞HIF-1α、VEGF、PHD2、FIH-1的基因表达;Western blot检测上述目的蛋白表达及p-ERK表达。结果 （1）与对照组比较,AngⅡ增加HUASMC中HIF-1α、VEGF 基因和蛋白表达（P＜0.05）,增加p-ERK蛋白表达（P＜0.05）,降低FIH-1 基因和蛋白表达（P＜0.05）,不影响PHD2 基因和蛋白表达;（2）与AngⅡ组比较,ERK抑制剂PD98059降低 HUASMC中HIF-1α、VEGF 基因和蛋白的表达（P＜0.05）以及p-ERK蛋白的表达（P＜0.05）,增加FIH-1的基因和蛋白表达（P＜0.05）。 结论 （1）AngⅡ增加HUASMC中HIF-1α、VEGF的表达,该作用通过激活ERK通路、抑制FIH-1表达,在翻译后水平减少HIF-1α的降解所致;（2）ERK抑制剂可削弱AngⅡ的促HIF-1α、VEGF表达作用。     

EGCG对胃癌BGC-823细胞增殖及其VEGF表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对胃癌BGC-823细胞增殖和VEGF表达的影响。方法用5、10、20、40、80μmol/L的EGCG培养BGC-823细胞48 h,采用MTT法测定BGC-823细胞增殖抑制率,并计算IC50。用12、24、48μmol/L EGCG处理BGC-823细胞24 h,用Trizol法提取RNA,采用实时定量PCR法检测VEGFmRNA;同时收集细胞上清液,用ELISA法检测VEGF蛋白。结果 BGC-823细胞增殖抑制率与EGCG浓度呈正相关（r=0.977、P〈0.05）。EGCG抑制BGC-823细胞增殖的IC50为（47.94±3.26）μmol/L。以12、24、48μmol/LEGCG处理BGC-823细胞24 h,BGC-823细胞中VEGF mRNA相对表达量分别为0.63±0.05、0.25±0.02、0.16±0.01,BGC-823细胞中VEGF mRNA相对表达量与EGCG浓度呈负相关（r=-0.855、P〈0.05）;上清液中VEGF水平为（677.32±41.08）、（545.16±28.17）、（256.06±11.02）ng/L,上清液中VEGF水平与EGCG浓度呈负相关（r=-0.991、P〈0.05）。结论 EGCG可以抑制胃癌细胞的增殖,并且可以下调VEGF mRNA的表达,减少VEGF的分泌。     

芒柄花素调节HIF-1α/VEGF信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和肿瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨芒柄花素(FMN)调节低氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子(HIF-1α/VEGF)信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和肿瘤血管生成拟态(VM)的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、MKN28、SGC-790和人胃黏膜上皮细胞株GES-1中HIF-1α、VEGF的m RNA表达水平。将生长良好的MGC-803细胞分别设为对照组、30μmol/L FMN组、50μmol/L FMN组、80μmol/L FMN组、80μmol/L FMN+HIF-1α过表达质粒(pc-HIF-1α)组、80μmol/L FMN+阴性对照(pc-vector)组并进行相应处理。MGC-803细胞经上述药物处理及质粒转染后,采用MTT法计算MGC-803细胞增殖率,实时荧光定量PCR法检测各组MGC-803细胞中HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平,流式细胞仪检测MGC-803细胞凋亡率,成管实验检测VM形成情况,蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中VEGF、HIF-1α的蛋白表达水平。结果 各种人胃癌细胞株中HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平均较...     

星形胶质细胞瘤的PTEN、HIF-1α、VEGF表达及临床意义

目的探讨星形胶质细胞瘤中的与张力蛋白和辅助蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸基因（PTEN）缺失情况，PTEN与缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）、血管内皮生长因子（VEGF）以圾与某些临床因素的关系。方法用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测PTEN基因缺失；应用免疫组化法检测肿瘤中PTEN、HIF-1α、VEGF蛋白表达情况。结果星形胶质细胞瘤的PTEN缺失率为12．5％（4／32），均为Ⅳ级。PTEN、HIF-1α、VEGF蛋白在不同恶性级别星形胶质瘤细胞中的阳性表达率均具有差异性，与肿瘤恶性程度呈相关。PTEN与HIF-1α、VEGF表达呈负相关，HIF-1α和VEGF表达呈正相关。结论PTEN通过对HIF—1α、VEGF的作用参与了肿瘤的恶性进展过程，HIF—1α是VEGF表达调控因子之一。三者相互作用。对星形胶质细胞瘤的进展，尤其是对肿瘤血管新生起有重要作用。     

胰岛素通过激活P13K／mTOR通路诱导人肾小球系膜细胞血管内皮细胞生长因子转录

目的探讨胰岛素诱导人肾小球系膜细胞（HMC）血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因转录机制。方法（1）用VEGF报告质粒或低氧诱导因子1（HIF-1）结合位点畸变的VEGF mut报告质粒转染HMC,荧光素酶分析法检测其转录活性;（2）应用Real—time PCR、Western blot法分别检测HIF-1α mRNA和蛋白表达。结果（1）胰岛素呈剂量依赖性增加VEGF基因转录,在100nmol／L时达高峰,为未刺激组的2．14±0．17倍（P〈0．01）,但对转染VEGF mut报告质粒的HMC VEGF基因转录无影响;（2）Ly294002和雷帕霉素均可抑制胰岛素诱导的VEGF基因转录（P〈0．01）;（3）胰岛素呈时间依赖性上凋HIF-1α蛋白表达,4h达高峰,为对照组的2．35±0．35倍（P〈0．01）,但对其mRNA表达无影响。结论胰岛素通过激活P13K／mTOR通路和上调HIF-1α蛋白表达诱导HMC VEGF基因转录。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.     

缺氧诱导因子（HIF）-1α介导的辛伐他汀抗大鼠心肌细胞凋亡作用

目的：观察原代心肌细胞模拟缺血／再灌注（I／R）对缺氧诱导因子（HIF-1α）表达的影响以及HIF-1α在辛伐他汀心肌细胞保护中的作用。方法：原代培养心肌细胞,采用Western blot检测HIF-1α在心肌细胞中的表达水平,采用HEPES缓冲液在低氧（10ml／L）条件下培养心肌细胞2h（模拟缺血组,ISC组）,然后以含有100ml／L新生牛血清的DMEM培养液在常规细胞培养箱中继续培养细胞6h（缺血／再灌注组,I／R组）,辛伐他汀预处理（SIM）组是用2μmol／L辛伐他汀预处理心肌细胞后再进行I／R处理。以这种方法模拟细胞在缺血时缺乏血清、糖和氧供的培养条件,再灌注时恢复血清、糖及正常供氧供的条件。接着,运用表达HIF-1α的腺病毒载体在原代心肌细胞中的过表达HIF-1α,采用Western blot检测PARP降解程度方法检测对照腺病毒（AdC）组、对照腺病毒感染细胞进行I／R处理（AdCIR）组、对照腺病毒感染细胞采用2μmol／L辛伐他汀预处理后进行I／R处理（AdCIRS）组和Ad-HIF-1α感染细胞后采用2μmol／L辛伐他汀预处理后进行I／R处理（AdHIRS）组心肌细胞的凋亡程度。结果：模拟I／R诱导HIF-1α表达,原代心肌细胞模拟缺血2hHIF-1α表达是对照组的（3．4±0．8）倍（P〈0．05）;而模拟缺血2h／再灌注6h组HIF-1α达是对照组的（8．9±1．5）倍（P〈0．05）。辛伐他汀抑制I／R诱导的HIF-1α表达增高。采用表达HIF-1α的腺病毒过表达HIF-1α消了辛伐他汀抑制PARP蛋白降解产物的作用。结论：证明I／R可以诱导HIF-1α表达升高,而辛伐他汀可以显著抑制HIF-1表达的升高;辛伐他汀对HIF-1α表达的抑制是其心肌保护作用的机制之一。     

ERK通路对胃癌细胞顺铂敏感性的调节作用

目的:研究在人胃癌细胞中,细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路对人胃癌细胞顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法测定顺铂对两种胃癌细胞MGC-803、BGC-823的增殖抑制影响,测定PD98059作用BGC-823细胞后顺铂对细胞的增殖抑制影响.Western blot方法检测MGC-803、BGC-823细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione S-transferases π,GGST-π)蛋白的表达;及PD98059作用BGC-823细胞24 h后BGC-823细胞中p-ERK、GsT-π蛋白的表达.结果:顺铂作用两种胃癌细胞7 2 h后.MGC-803,BGC-823细胞的IC50值分别为0.71和1.21 mg/L,且MGC-803细胞的增殖率明显低于BGC-823细胞的增殖率(P<0.05).MGC-803细胞顺铂的敏感性高于BGC-823细胞.MGC-803细胞不表达GST-π蛋白,BGC-823细胞强表达GST-兀蛋白.20 μmol/LPD98059作用BGC-823细胞24 h后,p-ERK蛋白表达明显下调,GST-π蛋白表达亦明显下调.20 μmol/L PD98059作用BGC-823细胞24 h后,加入顺铂培养48 h,BGC-823+PD98059组增殖率明显低于对照组,BGC-823细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:下调胃癌细胞GST-π蛋白的表达可增强其对顺铂的敏感性;抑制胃癌细胞中ERK通路的活化,可以降低其细胞内GST-π蛋白表达;ERK通路通过调节人胃癌细胞GST-π基因表达影响其对顺铂的敏感性.     

氯化钴对RNA干扰食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响

目的研究氯化钴模拟缺氧对RNA干扰的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因表达及功能的影响，观察在人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制HIF-1α的效果。方法选择4组细胞分别为食管癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1αSiRNA的Eca-109细胞（本实验室编号分别为H2／14号、H3／15号、H2／20号细胞），分别用200、400、600、800μmol／L氯化钴模拟缺氧，缺氧培养时间分别为12、24．48、72h，采用Western印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF—1α蛋白及mRNA表达，同时Western印迹检测血红素加氧酶（HO-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、葡萄糖转运体-1（Glut-1）、P53等相关基因的表达。结果4组细胞HIF-1α蛋白表达均随氯化钴浓度加大而增加，常氧与400μmol／L氯化钴处理24h后筛选出H3／15号细胞HIF-1α蛋白表达最少，与其它3组相比差异有统计学意义（P〈0．05），mRNA检测差异无统计学意义；干扰细胞常氧下HO-1、MMP-2、Glut-1、P53表达不同程度减少，缺氧后HO-1、P53表达增加，MMP-2、Glut-1表达无明显变化。结论RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达，从而不同程度减少HO-1、MMP-2、Glut-1、P53等相关基因表达；经氯化钴模拟缺氧筛选出干扰效果较好的一株细胞，为进一步研究HIF-1α的功能奠定了基础。     

胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 研究胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖、侵袭能力及细胞低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子( VEGF)表达的影响.方法 采用0.1、1、10、100 nmol/L胰岛素处理PANC1.噻唑蓝法和Transwell小室侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力;蛋白质印迹法和实时PCR法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)及HIF-1α、VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 胰岛素呈剂量依赖性诱导PANC1细胞的增殖,上调HIF-1α、VEGF蛋白表达.100 nmol/L胰岛素干预4d,PANC1细胞的PCNA蛋白表达显著上调(1.196±0.014比1.157±0.013,P＜0.05);Transwell小室穿膜细胞数量显著增加[(141.0±2.1)个比(89.0±1.4)个,P＜0.05];HIF-1α蛋白表达显著上调(1.139±0.020比0.598 ±0.013,P＜0.05),但HIF-1α mRNA表达无明显变化;VEGF蛋白表达显著上调(1.011±0.023比0.627±0.013,P ＞0.05),VEGF mRNA表达亦显著上调(0.970±0.016比0.350±0.013,P＜0.05).结论 高胰岛素微环境可诱导PANC1细胞增殖,并通过上调HIF-1α及VEGF的表达增强细胞的侵袭能力.     

氯化钴诱导人肝窦内皮细胞缺氧模型特点

目的观察氯化钴(CoCl_2)诱导人肝窦内皮细胞(HHSEC)缺氧模型特点。方法不同浓度CoCl2(0~800μmol/L)与HHSEC细胞孵育24 h,CCK8法检测细胞活力;50~200μmol/L CoCl2与HHSEC细胞孵育,Transwell实验检测细胞迁移;Matrigel管腔生成实验检测细胞管腔形成情况;蛋白质免疫检测细胞HIF-1α、vWF、VEGF蛋白表达;免疫荧光染色观察HIF-1α核转位。结果与对照组比较,50~200μmol/L CoCl2组HHSEC细胞活力明显增加,细胞迁移到膜下的数量显著增多,并且形成丰富而密闭的管状结构。50μmol/L、200μmol/L CoCl2促进HHSEC中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、第八因子相关抗原(vWF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,其中200μmol/L CoCl2组HIF-1α、vWF表达较50μmol/L CoCl2组高。结论 50μmol/L、200μmol/L低浓度CoCl2可诱导人肝窦内皮细胞缺氧、血管新生,其作用机制与促进HIF-1α表达及核转位相关。     

低氧对大鼠视网膜Müller细胞低氧诱导因子1α和促红细胞生成素蛋白表达的影响

目的探讨低氧对大鼠视网膜Müller细胞低氧诱导因子(HIF)-1α和促红细胞生成素(EPO)蛋白表达的影响。方法体外传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分为正常对照组(N组)、氯化钴浓度:50,100,150,200,300μmol/L(C50、C100、C150、C200、C300组),MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响。免疫细胞化学、细胞免疫荧光检测、Western印迹和酶联免疫吸附试验检测HIF-1α、EPO蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时,细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始,细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。氯化钴浓度高于50μmol/L时,HIF-1α、EPO蛋白免疫染色可见阳性表达。酶联免疫吸附试验检测,从50μmol/L开始HIF-1α蛋白的表达随氯化钴浓度升高而增加。Western印迹检测,EPO蛋白表达从50μmol/L开始增高,在150μmol/L时达到高峰,以后逐渐下降。结论低氧可引起细胞活性改变并诱导视网膜Müller细胞HIF-1α和EPO蛋白表达的变化。     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对缺氧时视网膜血管内皮细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）反义寡核苷酸（ASODN）治疗视网膜新生血管性疾病的可行性及机制。方法将体外培养的牛眼视网膜微血管内皮细胞（BREC）分为转染组和未转染组,转染组体外转染HIF-1α ASODN（根据GenBank提供的HIF-1αcDNA序列设计）,两组均予125μmol/L的CoCl2行缺氧处理。采用免疫荧光法检测细胞HIF-1α的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白水平。结果脂质体介导的HIF-1α ASODN可成功转染BREC细胞。未转染组缺氧开始时HIF-1α有极低表达,缺氧1h时表达量显著升高,4h达到高峰,16h后下降。而转染组HIF-1α的表达始终在极低水平,两组间有显著性差异（P〈0.01）。转染组从缺氧1h开始VEGF表达明显低于未转染组（P〈0.01）。结论脂质体介导的HIF-1α ASODN能有效抑制BREC细胞HIF-1α的表达,从而降低细胞VEGF的表达。     

食管鳞癌细胞HIF-1α与survivin的关系

目的探讨食管鳞癌细胞Eca-109中缺氧诱导因子-1α基因（HIF-1α）与抗凋亡基因生存素survivin的关系。方法培养食管鳞癌细胞Eca-109,用氯化钴模拟缺氧以促进HIF-1α表达,再以RNA干扰抑制HIF-1α基因表达,Westernblot法检测其中HIF-1α和survivin的表达。结果氯化钴培养后Eca-109细胞的HIF-1α蛋白表达增加,survivin蛋白表达也增加,并与氯化钴浓度有关;以RNA干扰方法抑制了HIF-1α基因的干扰细胞（Eca-109／shRNA）中HIF—1α蛋白表达减少,survivin蛋白表达也减少。结论在食管鳞癌细胞Eca-109中,HIF—1α基因和survivin表达具有高度的相关性,抑制HIF-1α表达可能通过抑制survivin而促进肿瘤细胞的凋亡。     

丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响

目的研究细胞外信号渊节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径（ERKMAPK）与DNA甲基化问的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116，分别以PBS、二甲基亚砜（DMSO）为对照组，PD 9805950μmol／L、5氮脱氧胞苷（5-aza—dC）5μmol／L、PD9805950μmol／L＋5-aza-dC5μmol／L进行药物干预．以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶（Dnmt）1、3a和3b基因转录水平；流式细胞仪分析细胞周期；MTT测定细胞活力；光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果ERK—MAPK途径阻断剂PD98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b．Dnmt抑制剂5-aza-dC下调Dnmt 1、Dnmt 3a和Dnmt 3b，且5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5-azo-dC明显降低G0／G1期细胞百分比（P〈0．05），G2／M期细胞百分比明显增加（P〈0．05）；PD98059使G0／G1期细胞百分比降低（P（0．05）．G2／M期增加（P〈0．05）。PD98059明显抑制细胞生长。PD98059促进细胞分化，呈上皮样改变，细胞变狭长，胞质减少，细胞排列开始出现相对整齐；5-azm-dC干预组细胞大小不一，出现较多多倍体细胞（多个核分裂相）。结论ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖，并诱导细胞分化；两者有协同作用；ERK—MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。     

LY294002对人胃腺癌细胞株BGC-823糖酵解水平的影响及其机制探讨

背景:有氧糖酵解是肿瘤细胞的特征性表型之一,靶向糖酵解有望成为一种有效的肿瘤治疗策略。M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈高表达,参与肿瘤细胞的有氧糖酵解。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是调控肿瘤细胞糖酵解相关基因表达的重要转录因子,而PI3K信号在肿瘤细胞中可上调HIF-1α表达。目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人胃腺癌细胞增殖和糖酵解水平的影响及其可能机制。方法:以不同浓度LY294002(10～100μmol/L)在不同条件下(常氧或缺氧)处理人胃腺癌细胞株BGC-823,CCK-8实验和流式细胞分析检测细胞增殖和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR、HIF-1α、PKM2表达,比色法检测反映糖酵解水平的胞内乳酸脱氢酶活性和胞外乳酸浓度。结果:LY294002可呈浓度和时间依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,在较高浓度时可诱导细胞早期凋亡。LY294002可呈浓度依赖性地抑制p-Akt、p-mTOR、HIF-1α表达,在较高浓度时可抑制PKM2表达,同时降低糖酵解水平。缺氧诱导可消除LY294002对HIF-1α、PKM2表达和糖酵解水平的抑制作用。结论:LY294002可通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制人胃腺癌细胞增殖及其糖酵解水平,而HIF-1α介导了糖酵解的抑制过程。     

姜黄素对缺氧HepG2细胞中HIF-1α表达的影响及可能机制

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其可能机制.方法:0、1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Westernblot免疫印迹法和RT-PCR检测HIF-1α的蛋白及mRNA的表达:0 μmol/L,10 μmol/L姜黄素,10 μmol/L姜黄素 10 μmol/L MG-132处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Western blot检测HIF-1α和VEGF的蛋白水平.结果:HepG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,HIF-1α蛋白水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(F=79.81,P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.但各剂量组HIF-1α的mRNA水平与对照组比较无显著性差异;蛋白酶体抑制剂MG-132可以逆转姜黄素所致的HepG2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制(F=68.47,83.79,均P<0.01).结论:姜黄素通过蛋白酶体途径,在转录后水平抑制缺氧HepG2细胞HIF-1α表达.     

HIF-1α和VEGF在胃癌中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌中的表达及其与胃癌发生、发展、转移的关系。方法应用免疫组化法检测64例胃癌及26例癌旁组织中HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果胃癌组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织（χ2=15.950,26.936;P〈0.01）。胃癌组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达率均与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移存在相关性（P〈0.05）。结论 HIF-1α、VEGF蛋白过表达于胃癌组织。HIF-1α、VEGF共同参与了胃癌的发生发展,HIF-1a可能通过上调VEGF蛋白表达促进肿瘤血管生成,而促进胃癌的转移。     

HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其可能的作用机制。方法不同浓度(0、20、40和80μmol/L)的HPI-4处理BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检查细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达情况。结果不同浓度的HPI-4处理BGC-823细胞24、48和72 h后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间-剂量关系(P0.05);与对照组(0μmol/L)相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理过的BGC-823细胞的侵袭细胞数、GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达均显著降低,且呈浓度依赖性(P0.05);与对照组相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理BGC-823细胞的凋亡率均显著升高,且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 HPI-4可抑制BGC-823增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关。