地塞米松对内毒素休克新生大鼠脑一氧化氮合成酶基因表达的调节

目的：探讨新生大鼠内毒素休克脑损伤时脑一氧化氮合成酶(NO6)三种亚型基因表达的变化及地塞米松(DEX)对其的调控作用。方法：在新生大鼠内毒素休克动物模型基础上，采用逆转录PCR及PCR技术，对脑组织中三型NOS mRNA及caspase—3 mRNA的表达进行半定量分析。结果：正常新生大鼠脑iNOS及eNOS mRNA无明显表达，nNOS mRNA、caspase—3 mRNA有一定程度表达。内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射后2h，三种亚型NOS mRNA开始表达，于LPS6h达高峰，并持续至24h。caspase—3 mRNA于LPS腹腔注射后2h后表达逐渐增加，24h达高峰。DEX可抑制nNOS、iNOS及caspase—3 mRNA的表达，且以用药后2h最为明显，并持续至用药后24h。结论：内毒素休克脑损伤时，各型NOS均有表达，NO的产生是内毒素休克脑损伤时重要的病理生理机制之一。DEX通过抑制NOS、caspase—3 mRNA的表达部分实现其神经保护作用．     

一氧化氮合酶与脑缺血亚急性期神经损伤的关系

目的 探讨大鼠脑缺血亚急性期脑力内三型一氧化氮合酶（NOS）的表达及其与经济损伤的关系。方法 采用大鼠大脑中动脉缺血模型，用免疫组织化学方法检测局灶性脑缺血24h三型NOS在脑内的表达。结果 局灶性脑缺血24h，缺血中心区及部分边缘区内可见大量诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性的胶质细胞浸润。表达神经元型一氧化氮合酶（nNOS）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的神经细胞数减少。结论 脑缺血亚急性期胶质细胞iNOS表达上调与迟发性神经元损伤有密切关系。在此期给予选择性iNOS抑制剂可以减少缺血性损害。     

淫羊藿苷对动脉性ED模型大鼠阴茎海绵体压力和一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的　建立动脉性勃起功能障碍大鼠模型 (arteriogenicerectiledysfunction ,A -ED) ,研究淫羊藿苷 (Icariin)对A -ED大鼠勃起功能和一氧化氮合酶 (NOS)三种亚型表达的影响。方法　 4 0只Wistar大鼠随机分为假手术组 (A组 )、A -ED组 (B组 )、A -ED低剂量淫羊藿苷治疗组 (C组 )和AED高剂量淫羊藿苷治疗组 (D组 )。结扎大鼠双侧髂内动脉建立A -ED动物模型后 ,C组和D组每天口饲不同剂量的淫羊藿苷 ( 5mg/kg ,10mg/k) ,A组和B组口饲等体积的生理盐水。 30d后 ,通过检测各组大鼠阴茎海绵体压力 (ICP)变化评估淫羊藿苷对大鼠勃起功能的效果 ,切取阴茎海绵体组织 ,通过逆转录 -PCR和Western印迹方法检测N0S亚型的表达变化。结果　建立A -ED模型 30d后 ,B组ICP较手术前显著降低 ,N0S三种亚型的表达水平也显著降低。经淫羊藿苷治疗后 ,C组和D组的ICP比B组明显升高 (P <0 .0 1) ,且D组较C组增高效果明显 ;C组和D组的eNOS表达水平较之B组有所增高 ,与ICP的变化有相同的趋势。C组的iNOS表达水平有一定程度的升高。治疗后nNOS表达水平没有明显增高。结论　经淫羊藿苷治疗后大鼠勃起功能显著改善 ,这种功能改善与eN0S的表达增加有相同的趋势 ,提示淫羊藿苷可能通过恢复eN0s的表达来改善A -ED模型的勃起功能。     

Effect of Berberine on the mRNA Expression of Nitric Oxide Synthase （NOS） in Rat Corpus Cavernosum

Penile erection is a complex neurovascularprocess that involves relaxation of the corpus cav ernosum smooth muscle[1]. Relaxation of cavern osal smooth muscle leads to engorgement of bloodin the corpus cavernosum that results in an in crease in intracavernosal pressure and thus in tu mescence. Many studies have shown that nitric ox ide (NO) released from cavernous nerves and endo thelium is a key factor for penile erection. TheNO cGMP signaling pathway is…     

糖尿病视网膜病变前期 NOS亚型的蛋白表达及其在血流变化中作用的实验研究

[目的]探讨在糖尿病大鼠视网膜病变 (DR)前期,3种亚型一氧化氮合酶 NOS在视网膜不同组织细胞中蛋白表达的变化,及其与视网膜血流变化的关系.[方法] 将 Wistar大鼠随机分成正常对照组与链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射诱导的糖尿病组各 10只,采用彩色多谱勒对大鼠视网膜中央动脉 (CRA)进行血流参数的测量,运用免疫组织化学技术观察视网膜 eNOS、 iNOS、 nNOS蛋白表达的变化.[结果] 8周糖尿病大鼠视网膜尚未出现病变,但血流参数已显著异常,表现为糖尿病组大鼠 CRA的血流速度较对照组显著降低 (P< 0.05),而阻力指数则显著增高 (P< 0.05),搏动指数高于对照组,但尚未有显著意义. 3种亚型 NOS在糖尿病与正常对照组视网膜中表达部位一致;但与正常对照组比较,iNOS免疫反应的强度在糖尿病大鼠视网膜中的内核层显著增强,而 eNOS与 nNOS的免疫反应强度则未见显著变化.[结论]在 DR前期,糖尿病大鼠视网膜已开始出现血流灌注不良,此时 NOS亚型中 iNOS在视网膜中的表达上调可能与之相关.     

锂-匹罗卡品致痫大鼠海马结构nNOS、iNOS及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化

目的 探讨大鼠癫痫持续状态（SE）后海马结构神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化及其相互关系。 方法 采用锂-匹罗卡品腹腔注射建立大鼠SE模型,用免疫组织化学及免疫印迹法在2h、6h、3d及7d不同时相点检测大鼠海马nNOS、iNOS 及活化Caspase-3蛋白的表达。 结果 大鼠海马nNOS的蛋白表达在SE后2h开始迅速增高,在6h时达到高峰,之后逐渐降低,但在3、7d时仍显著高于对照组（P均<0.01）。iNOS蛋白的表达在SE后6h时开始持续增高（P<0.01）,并在7d时达到高峰（P<0.01）。活化Caspase-3蛋白的表达在3d开始增高（P<0.01）,7d时达到高峰（P<0.01）。 结论 大鼠在SE后海马的nNOS、iNOS及活化Caspase-3的表达均有不同程度的增高,提示一氧化氮合酶的反应产物一氧化氮可能与癫痫发作后海马结构内的神经元受损有关,而神经元受损与凋亡之间的关系亦密不可分。     

Expression of nitric oxide synthase and guanylate cyclase in the human ciliary body and trabecular meshwork

Background  The role played by the nitric oxide (NO) signaling pathway in the aqueous humor dynamics is still unclear. This study was designed to investigate the expression and distribution of NO synthase (NOS) isoforms and guanylate cyclase (GC) in human ciliary body, trabecular meshwork and the Schlemm’s canal.

Methods  Twelve eyes after corneal transplantation were used. Expression of three NOS isoforms (i.e. neuronal NOS (nNOS), inducible NOS (iNOS) and endothelial NOS (eNOS)) and GC were assessed in 10 eyes by immunohistochemical staining using monoclonal or polyclonal antibody of NOS and GC. Ciliary bodies were dissected free and the total proteins were extracted. Western blotting was performed to confirm the protein expression of 3 NOS isoforms and GC.

Results  Expression of 3 NOS isoforms and GC were observed in the ciliary epithelium, ciliary muscle, trabecular meshwork and the endothelium of the Schlemm’s canal. Immunoreactivity of nNOS was detected mainly along the apical cytoplasmic junction of the non-pigmented epithelium (NPE) and pigmented epithelial (PE) cells. Protein expressions of 3 NOS isoforms and GC were confirmed in isolated human ciliary body by Western blotting.

Conclusions  The expression of NOS isoforms and GC in human ciliary body suggest the possible involvement of NO and cyclic guanosine monophosphate (cyclic GMP, cGMP) signaling pathway in the ciliary body, and may play a role in both processes of aqueous humor formation and drainage.

     

一氧化氮合酶在大鼠脑缺血再灌注损伤后时间-量的变化

目的探讨在大鼠可逆性大脑中动脉栓塞模型(MCAO)中,在不同的再灌注时间点NOS各亚型酶的发生发展规律。方法雄性SD大鼠用异氟烷吸入性麻醉,MCAO90 min后再灌注。分别在再灌注1,2,6,9,12,24 h后检测左、右侧大脑组织中NOS各亚型酶的活力(cNOS和iNOS),进行神经功能评分,取脑,切片,用TTC染色,经图像分析仪分析脑梗死灶体积。结果大脑中动脉栓塞导致了严重的脑缺血,再灌注激活了NOS的活性,使得cNOS和iNOS的活力在再灌注后的各个时间点都大幅度增加,至少持续到再灌注24 h。cNOS的高峰出现在再灌注后6h,iNOS的高峰出现在再灌注后9 h。梗死灶体积的增加与NOS活力的增加呈平行状态。结论原生型酶(cNOS)包括eNOS和nNOS,在缺血再灌注早期被诱导表达,其活力在再灌注6 h后达到高峰。iNOS,在正常生理状态下很少表达,其高峰出现在缺血后再灌9 h。cNOS和iNOS在缺血性脑损伤再灌注阶段发挥着重要的作用。     

心脏缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的变化

目的:研究大鼠心脏缺血再灌注损伤(IRI)过程中一氧化氮合酶(NOS)的变化规律及其作用.方法:制作SD大鼠心脏IRI动物模型,用同位素法测定正常及IRI心组织的NOS活性;用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化.结果:心脏eNOS活性、蛋白和mRNA表达水平,在缺血再灌注2～6 h后均增高,3天后降低,21天后逐渐恢复到正常水平.心脏iNOS活性、蛋白和mRNA表达水平,在缺血再灌注12 h后开始表达,3天达高峰,然后逐渐降至正常水平.结论:单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加,酶的合成增多,活性增高.     

肾脏缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的变化

目的　研究大鼠肾脏缺血再灌注损伤 (IRI)过程中一氧化氮合酶 (NOS)的变化规律。方法　制作SD大鼠单侧肾脏IRI动物模型 ,用同位素法测定正常及IRI肾组织的NOS活性 ;用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化。结果　单纯热缺血 1h对肾脏NOS活性无明显影响 ,再灌注30min后NOS活性即开始升高 ,2～ 6h到达高峰 ,持续到 6h ,此后迅速下降 ,2 4h降低到正常以下 ,2 1d时恢复至正常水平。Western印迹显示IRI早期eNOS蛋白表达升高 ,12h后开始逐步降低 ,3d后明显低于正常对照组 ,以后逐步恢复正常。iNOS的变化与eNOS明显不同 ,正常肾脏iNOS表达微弱 ,IRI可诱导iNOS表达 ,12h开始表达 ,并逐渐升高 ,3d后达到高峰 ,以后逐步恢复正常。RT PCR分析发现eNOS及iNOSmRNA的变化与其蛋白变化相一致。结论　单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化 ,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加 ,酶的合成增多 ,活性增高。正常肾脏iNOS的表达微弱 ,IRI可诱导iNOSmRNA表达 ,使iNOS合成增加     

Expression of Nitric Oxide Synthase Isoenzyme in Lung Tissue of Smokers with and without Chronic Obstructive Pulmonary Disease

Background:

It has been demonstrated that only 10%–20% cigarette smokers finally suffer chronic obstructive pulmonary disease (COPD). The underlying mechanism of development remains uncertain so far. Nitric oxide (NO) has been found to be closely associated with the pathogenesis of COPD, the alteration of NO synthase (NOS) expression need to be revealed. The study aimed to investigate the alterations of NOS isoforms expressions between smokers with and without COPD, which might be helpful for identifying the susceptibility of smokers developing into COPD.

Methods:

Peripheral lung tissues were obtained from 10 nonsmoker control subjects, 15 non-COPD smokers, and 15 smokers with COPD. Neuronal NOS (nNOS), inducible NOS (iNOS), and endothelial NOS (eNOS) mRNA and protein levels were measured in each sample by using real-time polymerase chain reaction and Western blotting.

Results:

INOS mRNA was significantly increased in patients with COPD compared with nonsmokers and smokers with normal lung function (P < 0.001, P = 0.001, respectively). iNOS protein was also higher in COPD patients than nonsmokers and smokers with normal lung function (P < 0.01 and P = 0.01, respectively). However, expressions of nNOS and eNOS did not differ among nonsmokers, smokers with and without COPD. Furthermore, there was a negative correlation between iNOS protein level and lung function parameters forced expiratory volume in 1 s (FEV₁) (% predicted) (r = −0.549, P = 0.001) and FEV₁/forced vital capacity (%, r = −0.535, P = 0.001).

Conclusions:

The expression of iNOS significantly increased in smokers with COPD compared with that in nonsmokers or smokers without COPD. The results suggest that iNOS might be involved in the pathogenesis of COPD, and may be a potential marker to identify the smokers who have more liability to suffer COPD.     

黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响

目的探讨黄芩茎叶黄酮(flavonoids from stem and leaf ofscutellaria baicalensis georgi,SSF)对大鼠永久性慢性脑缺血引起记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。方法雌性sprague-dawley(SD)大鼠双侧颈总动脉永久结扎2个月制备慢性脑缺血记忆障碍模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化测定海马细胞中胆碱乙酰转移酶(chloine acetyltransferase,ChAT)、神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达来探讨黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。结果与假手术组相比,脑缺血模型组大鼠的学习记忆能力显著降低,找到平台的游泳路程显著延长;海马细胞中ChAT和eNOS蛋白表达显著降低;nNOS和iNOS蛋白表达显著增加。然而,17.5、35.0和70.0 mg/kg SSF灌胃给脑缺血大鼠38 d均能不同程度地改善学习记忆能力障碍,明显缩短大鼠找到平台的游泳路程;增加海马细胞中ChAT和eNOS蛋白的表达;抑制海马细胞中nNOS和iNOS蛋白的表达。结论 SSF对大鼠脑缺血性记忆障碍具有明显的改善作用,其作用机制可能与调节脑内ChAT和一氧化氮合酶的异常变化有关。     

高蛋白饮食对慢性肾衰模型大鼠NO和NOS的影响

目的探讨高蛋白饮食对慢性肾衰大鼠的血和肾组织NO和．NOS的影响。方法通过先用5／6肾切除大鼠法制作慢性肾衰的动物模型,成功后再分别给予5／6肾切除大鼠不同蛋白饮食喂养2个月。观察不同蛋白饮食喂养的5／6肾切除大鼠血BUN、Scr、24小时尿蛋白定变化;分光光度计比色法检测血．NO和NOS水平;免疫组化法半定量检测肾组织ENOS、NNOS、INOS的表达。结果 给予5／6肾切除大鼠高蛋白饮食,可导致慢性肾衰大鼠大量蛋白尿的产生,同时降低血NO和NOS水平及肾组织ENOS、NNOS的表达,增强肾组织INOS的表达。结论高蛋白饮食可通过导致5／6肾切除大鼠大量蛋白尿,降低N0和NOS对5／6肾切除大鼠的保护作用而加速慢性肾衰的进展。     

一氧化氮合酶在糖尿病大鼠视网膜中表达模式的研究

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)在8周糖尿病大鼠视网膜的表达,探讨其与一氧化氮在糖尿病视网膜病变(DR)中可能的分子作用机制.方法 采用限制片段差异显示PCR(RFDD-PCR)技术建立正常和8周糖尿病大鼠视网膜基因表达谱,经生物信息学分析两者差异,初步确定NOS三种亚型-eNOS、nNOS和iNOS为DR相关基因,并以半定量RT-PCR和免疫组化方法进行验证.结果 RFDD-PCR结果显示,糖尿病组eNOS和nNOS表达下调,iNOS表达上调.RT-PCR结果显示,糖尿病组eNOS和nNOS表达比正常组明显降低(eNOS:0.23±0.03,0.32±0.03,P＜0.05;0.25±0.02,0.36±0.02,P＜0.05),iNOS比正常组明显增高(0.27±0.02,0.20±0.03,P＜0.05).免疫组化结果显示,正常组eNOS、nNOS和iNOS阳性细胞均见于内核层(INL)和节细胞层(GCL),eNOS阳性细胞也分布于血管内皮层;糖尿病组eNOS和nNOS阳性细胞较正常组明显减少(eNOS:14.33±3.19,22.13±3.60,P＜0.05;nNOS:21.87±3.62,34.40±7.09,P＜0.05),iNOS较正常组明显增多(17.60±2.58,11.73±2.70,P＜0.05).结论 eNOS、nNOS和iNOS表达变化与DR发生发展有关.     

体外循环对瓣膜置换术患者心房肌一氧化氮合成酶表达的影响

为了解体外循环（ＣＰＢ）对心瓣膜心房肌细胞内一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）表达的影响,采用免疫组织化学及计算机图像分析技术,检测了ＣＰＢ前后１０例患者心房肌细胞内三种一氧化氮合成酶的同功异构酶和含量的变化。结果显示：瓣膜置换术后患者心房肌神经型ＮＯＳ表达增加,内皮型ＮＯＳ表达减少,而诱导型ＮＯＳ表达的改变不明显。     

脑缺血/再灌注前后一氧化氮合酶在脑皮质中的表达

目的观察小鼠脑缺血/再灌注(CIR)前后一氧化氮合酶(NOS)的3个亚型:神经元型(nNOS)、诱导型(iNOS)和内皮型(eNOS)在小鼠脑皮质中的变化,探讨NOS在CIR损伤后的不同作用。方法健康雄性ICR小鼠32只,随机分为假手术组(n=16)和短暂性大脑中动脉闭塞再灌注(tMCAO)模型组(n=16)。tMCAO模型组采用改良的线栓法制作,再灌注24 h后应用氯化三苯四氮唑(TTC)染色测量梗死体积,应用免疫组织化学法观察各组小鼠脑皮质中nNOS、iNOS和eNOS的表达。结果假手术组nNOS、iNOS和eNOS在脑皮质中少量表达,与假手术组比较,tMCAO组小鼠脑梗死体积明显增加;脑皮质区nNOS、iNOS和eNOS阳性细胞数均显著增多(P<0.05)。结论小鼠CIR损伤后,nNOS和iNOS表达的增加可以引起神经损伤,而eNOS表达的增加,可能发挥神经保护作用。     

一氧化氮合酶在不同年龄大鼠睾丸中的表达

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在不同年龄大鼠睾丸中的表达情况，探讨NO在睾丸生殖功能中的作用。方法将健康雄性Wistar大鼠按月龄分为成年组和未成年组，4％多聚甲醛灌流固定，取大鼠睾丸，常规石蜡切片，免疫组化SABC法检测NOS在不同年龄大鼠睾丸中的表达。结果成年组大鼠睾丸间质细胞和间质血管中均有nNOS、iNOS和eNOS阳性物质表达，生精小管周围肌样细胞和腔面精子可见nNOS阳性物质；未成年组大鼠睾丸间质血管中偶见iNOS和eNOS阳性物质表达。结论3种NOS在睾丸中均有表达，但定位不同，且与年龄相关。     

一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林大鼠脑nNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林实验大鼠脑一氧化氮合酶表达的影响。方法 应用免疫组织化学ABC法研究了nNOS、iNOS在福尔马林大鼠脑内的表达。结果 在福尔马林实验大鼠不同脑区,nNOs和iNOS表达较强。一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可抑制福尔马林实验大鼠脑nNOS、iNOS的表达,NO生成减少。结论 一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可通过抑制一氧化氮合酶作用,参与伤害性痛觉调制。一氧化氮在脑的痛觉调制过程中起重要作用。