不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）心室肌组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达以及与心肌肥厚的关系。方法： 用左心室重量与体重的比值作为心肌肥大指数并以此指标反映心肌肥厚；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定心室肌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达和MKP-1 mRNA的含量。结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），心肌肥大指数明显大于WKY（P<0.05），ERK和MKP-1的表达均比WKY高（P<0.05）；（2）SHR的血压随年龄增长而升高（P<0.05），至14周趋于稳定，心肌肥大指数则在24周时出现激增（P<0.01）；（3）p-ERK随年龄增长呈递增趋势，而MKP-1呈递减趋势，且与心肌肥大指数和ERK的表达呈负相关（P<0.01）。结论： MKP-1在高血压大鼠随年龄和血压增加的心肌肥厚过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，进而引起心肌细胞肥大的重要原因。     

血管紧张素转换酶2在自发性高血压大鼠肾脏表达与血压的关系研究

目的： 研究血管紧张素转换酶2(ACE2)在20周龄自发性高血压大鼠(SHR)和Wistar Kyoto大鼠(WKY)肾脏组织的表达以及与血压的关系。 方法： 采用实时定量PCR方法检测肾脏组织中ACE2 mRNA的含量，应用放免法测定肾脏组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度。 结果： 20周龄SHR的血压明显高于WKY（P<0.05）,SHR肾脏组织ACE2的表达显著低于WKY（P<0.01），而SHR肾脏组织AngⅡ的浓度显著高于WKY（P<0.05）。 结论： ACE2在肾素-血管紧张素系统(RAS)中可能通过改变SHR肾脏中AngⅡ水平调节血压。     

自发性高血压大鼠一侧颈动脉去外膜后结构和功能的变化

目的： 研究自发性高血压大鼠（SHR）去除一侧颈动脉外膜后血管结构和功能的变化。方法: 8只13周龄雄性SHR作为SHR对照组，8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组（WKY组）。机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜，左侧作假手术对照。4周后，电磁流量计测量双侧颈动脉血流量，放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）浓度。取双侧颈动脉制成光镜标本，病理图像分析系统测定颈动脉管腔横截面积（LA）、内弹力层围绕面积（IELA）、外弹力层围绕面积（EELA），评价内膜和中膜增生程度。RT－PCR法检测颈动脉血管紧张素转换酶2 mRNA（ACE2 mRNA）表达，免疫组化法检测ACE2 mRNA、蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）和胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）蛋白表达。结果: （1）SHR对照组双侧血管内膜比WKY组明显增生(P<0.01)，中膜面积显著大于WKY组（P<0.05, P<0.01）；去外膜侧内膜增生较外膜完整侧显著（P<0.05）；（2）SHR对照组去外膜侧血流速度明显少于WKY组和SHR对照组外膜完整侧（均P<0.01）；（3）SHR对照组血浆及双侧颈动脉AngⅡ浓度均明显高于WKY组 (P<0.01)，去外膜侧颈动脉AngⅡ浓度明显高于外膜完整侧（P<0.01）；（4）SHR对照组双侧血管ACE2 mRNA表达均显著少于WKY组（P<0.01），去外膜侧ACE2 mRNA表达显著少于外膜完整侧（P<0.01）；（5）SHR对照组PKC-ζ和ERK1/2在双侧血管的表达均显著高于WKY组（P<0.01），去外膜侧PKC-ζ和ERK1/2表达显著高于外膜完整侧（P<0.01）。结论: SHR去除一侧颈动脉外膜后血管内膜增生明显，中膜面积增大，血流速度减慢；这一变化可能与ACE2 mRNA表达减少、PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达增加有关。     

RNA阵列技术检测自发性高血压大鼠甲羟戊酸途径酶的基因表达

目的：探讨甲羟戊酸(MVA)途径的9个酶在不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)发病过程中的基因表达变化特点。方法:提取2、4、6、8、10、12不同周龄雄性SHR以及正常血压大鼠(WKY)的心室肌、血管平滑肌、肝脏和肾脏4种组织的总RNA，共294个样品，利用高通量RNA阵列技术(RNA array)检测甲羟戊酸途径的9个酶的基因在不同周龄SHR和WKY大鼠中mRNA表达谱的改变。 结果:（1）SHR大鼠从第6周开始收缩压明显高于WKY(P<0.01)。 （2）12周龄SHR大鼠体内血清胆固醇浓度明显低于WKY大鼠，组织中的胆固醇浓度没有明显差异(P<0.01)。（3）在SHR大鼠心脏、血管、肝脏、肾脏组织中：MVA中间产物的合成酶如法呢醇焦磷酸合成酶(FDS)、异戊烯化焦磷酸化异构酶(IDI)、法呢醇转移酶α亚基(FT1)和β亚基(FT2)的表达明显高于WKY(P<0.01)。（4）SHR肾脏组织中羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）、甲羟戊酸激酶（MVK）、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶（MVD）、鲨烯合成酶（SQS）和鲨烯环氧化酶（SQ） 表达较为一致，早期(2-4 周)SHR大鼠的基因表达明显高于WKY，随着周龄增加SHR的表达进一步增高，且与WKY相比都有明显差异(P<0.01) 。（5）在心脏、血管和肝脏中，HMGR、MVK、MVD、SQS和SQ的基因表达无明显规律。结论:SHR大鼠随着周龄的增长甲羟戊酸途径中各酶基因表达的改变，以非胆固醇产物类合成酶(如IDI、FDS和FT1、FT2)表达增加为特点，这一改变是否与高血压有关尚待进一步验证。     

高血压大鼠主动脉平滑肌BK通道表达增强

 目的 研究在自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常对照组大鼠(wistar-kyoto,WKY)主动脉平滑肌上大电导钙激活钾通道(BK)的功能改变及其机制。方法 用实时定量PCR反应和免疫印迹对SHR和WKY大鼠的主动脉组织的BK通道组成亚基α和β1表达量的检测。结果 SHR大鼠α和β1亚基的mRNA的表达量明显高于WKY大鼠（n=6,p<0.05）,SHR大鼠的α亚基的蛋白表达量与WKY没有显著性差异（n=6,p>0.05）,β1亚基的蛋白表达量SHR大鼠却明显高于WKY大鼠（n=6,p<0.05）。结论 SHR大鼠BK通道在mRNA水平和蛋白水平的表达都比WKY增强,可能是在高血压状况下机体负反馈抑制血管张力的一种调节机制。     

苯那普利对高血压大鼠细胞外信号调节激酶和B型钠尿肽的影响

目的：研究苯那普利对自发性高血压大鼠（SHR）细胞外信号调节激酶（ERK）和B型钠尿肽（BNP）的影响。方法：选择Wistar Kyoto（WKY）大鼠作对照，将21只14周龄雄性SHR随机分成3组：未治疗组、肼苯哒嗪组和苯那普利组，每组7只。药物溶于载体（0.5%羧甲基纤维素钠）以灌胃法给予，肼苯哒嗪10 mg·kg-1·d-1，苯那普利10 mg·kg-1·d-1，SHR未治疗组及WKY组灌喂载体，共10周。以左心室重量与体重的比值反映心肌肥厚的程度；用袖带式尾动脉测压法测量大鼠尾动脉血压；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定大鼠心肌中磷酸化ERK（p-ERK）的蛋白表达以及BNP mRNA的含量；酶联免疫吸附法检测大鼠血浆BNP水平。结果：（1） 治疗后SHR苯那普利组和SHR肼苯哒嗪组血压相似，均显著低于SHR未治疗组（P<0.01）。（2） SHR苯那普利组心肌肥厚指数显著低于SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P<0.01) ，与WKY组无显著差异(P>0.05)；SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组心肌肥厚指数无显著差异(P>0.05)。（3）SHR苯那普利组大鼠心肌p-ERK表达显著低于SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P<0.05) ，与WKY组无显著差异(P>0.05)。SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组大鼠心肌p-ERK表达无明显差异(P>0.05)。（4） SHR苯那普利组大鼠心肌BNP mRNA和血浆BNP水平显著低于SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P<0.05)，与WKY组无显著差异(P>0.05)；SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组大鼠心肌BNP mRNA和血浆BNP水平无明显差异(P>0.05)。结论：苯那普利能通过抑制ERK活性逆转心肌肥厚，伴随BNP水平下降；而降压效果相似的肼苯哒嗪不能抑制心肌肥厚，对p-ERK和BNP水平没有影响，提示BNP水平可以反映逆转心肌肥厚药物疗效。     

阿托伐他汀影响自发性高血压大鼠血压的机制探讨

目的：探讨阿托伐他汀控制自发性高血压大鼠（SHR）高血压的机制，研究阿托伐他汀对SHR血浆内皮素-1（ET-1）和主动脉一氧化氮合酶（NOS）的影响，以及对SHR的主动脉平滑肌细胞（ASMC）凋亡和P27蛋白表达的影响。 方法： 选用8周龄SHR 12只，随机分为阿托伐他汀治疗组（ATV组, n=6）和SHR组（n=6），并以同周龄WKY（n=6）作为对照。ATV组给以阿托伐他汀（50 mg·kg-1·d-1）灌胃。10周后观察3组大鼠血压、血清总胆固醇（TC）、总甘油三酯（TG）含量变化，血浆ET-1和主动脉NOS活性的改变，以及TUNEL法检测ASMC凋亡率，测定动脉ASMC P27蛋白表达。 结果： 阿托伐他汀给药10周后，ATV组动脉收缩压显著低于SHR组［（134.17±3.60）mmHg vs （173.33±3.78）mmHg, P<0.01］；ATV组血清TC和TG浓度均显著低于SHR组（P<0.01, P<0.01）。同时，阿托伐他汀显著降低SHR血浆ET-1水平［（130.04±40.07）ng/L vs （196.74±59.69）ng/L，P<0.05］和增加SHR主动脉NOS活性［(0.189±0.040）kU/g protein vs （0.124±0.057）kU/g protein，P<0.01］；ATV组ASMC凋亡率显著高于SHR组（16.94%±3.08% vs 9.01%±2.36%, P<0.01）；ATV组ASMC P27蛋白表达阳性率显著高于WKY大鼠（33.02%±5.01% vs 24.25%±4.41%, P<0.05），而SHR组该指标明显低于WKY大鼠（16.08%±7.09% vs 24.25%±4.41%, P<0.05）。 结论： 阿托伐他汀控制SHR血压增高，其机制可能与降低SHR的血浆ET-1水平和增高主动脉NOS活性，以及增高ASMC凋亡率和P27蛋白表达阳性率有关。     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠细胞色素P450羟化酶基因表达的影响

目的： 评价阿托伐他汀对自发性高血压大鼠（SHR）血压和细胞色素P450羟化酶(CYP)4A1的调节作用。方法： 18只SHR随机分为3组：SHR对照组、阿托伐他汀50 mg组(HATV组)和10 mg组(LATV组)；6只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组。给药共10周,分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)；RT-PCR、Western blotting法检测心、肝、肾及主动脉中CYP4A1 mRNA和蛋白质表达；并测定血脂含量。结果： 用药前SHR各组SBP均显著高于WKY组(P<0.01)；HATV组在给药后第6、8、10周和LATV组在给药后第10周SBP明显低于SHR对照组(P<0.05或P<0.01)。在CYP4A1 mRNA及其蛋白质表达中，SHR对照组4种组织均明显高于WKY组(P<0.01或P<0.05)；给药10周后，HATV组心、肾及主动脉和LATV组肾和主动脉的表达均明显低于SHR对照组(P<0.01或P<0.05)；同时，用药2组血脂水平亦明显低于SHR对照组(P<0.01或 P<0.05)。结论： 阿托伐他汀可下调CYP4A1基因的表达，这可能是其降低血压的作用机制之一。     

RNA阵列技术检测自发性高血压大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶和受磷蛋白基因表达

目的:探讨肌浆网Ca²⁺-ATP酶(SERCA)和受磷蛋白(PLB)在原发性高血压发病过程中的变化特点及其相互关系。方法:提取2、4、6、8、10、12不同周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)的心室肌、血管平滑肌、肝脏和肾脏组织的总RNA,共294个样品,利用高通量RNA阵列技术(RNAarray)检测SERCA和PLB基因在不同周龄SHR和WKY中mRNA表达谱改变。结果:SHR在6、8、10、12周龄血压出现显著高于同周龄WKY(均P<0.01),10、12周龄心室肌重量／体重比出现显著增加(均P<0.01),心肌和血管平滑肌SERCA的表达在4、6、8、10、12周龄出现显著高于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01)。PLB基因表达在两组间无显著差异(P>0.05)。心肌的SERCA与PLB表达量比值在6、8、10、12周龄出现显著大于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01),而血管平滑肌的SERCA与PLB表达量比值在4、6、8、10、12周龄出现显著大于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01)。结论:肌浆网SERCAmRNA表达改变及SERCA与PLB比例失常是高血压发生和发展过程中重要的分子生物学机制。     

SHR鼠颈上交感神经节内NPY的差异表达研究

目的　通过对自发性高血压大鼠（SHR）颈上神经节形态学及其内神经肽酪氨酸（NPY）表达变化的研究，探讨NPY在高血压发生发展中的作用。 方法　随机选取成年SHR和WKY各20只，观测颈上交感神经节的位置、形状、大小及重量，采用Real-time PCR技术和免疫组织化学法，检测两组大鼠颈上神经节内NPY mRNA和蛋白的表达。 结果　与同周龄的WKY组大鼠相比较，SHR组大鼠血压明显升高（P<0.05）；Real-time PCR和免疫组化结果显示：SHR颈上神经节内NPY mRNA和蛋白水平均较WKY增加（P<0.05）。 结论　NPY在基因转录和蛋白表达等方面均较WKY上调，并参与高血压的形成。     

Gαq/11介导的信号转导通路在自发性高血压大鼠主动脉中的变化

目的:观察自发性高血压大鼠 (SHR)主动脉Gαq/11及磷脂酶C(PLC)的动态变化,探讨其在SHR高血压发病机制中的意义。方法:4周龄和12周龄SHR,颈动脉插管记录动脉血压,放免法测定血浆血管紧张素Ⅱ的浓度,免疫印迹法检测主动脉组织Gαq/11和PLC的含量。结果:SHR12周龄时动脉血压明显增高。4周龄SHR主动脉Gαq/11的表达较对照高 69.2 % (P <0.05)。4周龄和12周龄SHR主动脉PLCβ₃分别较各自同龄对照组高66.9%和 85.1% (P <0.05)。结论:Gαq/11介导的信号转导通路上调参与SHR高血压的发生和发展.     

Rho蛋白解离抑制因子α在高血压大鼠胸主动脉的表达

目的 研究高血压大鼠胸主动脉以及周期性张应变刺激下血管平滑肌细胞(VSMCs)的Rho蛋白解离抑制因子(RhoGDIα)的表达变化,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)信号通路对其表达的调控影响. 方法 应用实时PCR和Western blotting技术分别检测4周、12周和18周自发性高血压大鼠(SHR, n =4)和正常血压京都种鼠(WKY, n =4)胸主动脉RhoGDIα mRNA和蛋白的表达;免疫组织化学检测RhoGDIα在SHR和WKY胸主动脉的定位;Western blotting技术检测腹主动脉缩窄性高血压大鼠(ACR, n =6)胸主动脉RhoGDIα蛋白的表达;应用细胞应变加载系统对大鼠胸主动脉VSMCs施加1Hz、10%的周期性张应变,在有或无血管紧张素亚型Ⅰ(AT1)受体拮抗剂 L-158809的条件下观察周期性张应变刺激对VSMCs RhoGDIα蛋白表达的影响. 结果 4周与12周SHR和WKY胸主动脉RhoGDIα表达无显著性差异,而在18周组,SHR胸主动脉RhoGDIα表达显著高于WKY.RhoGDIα主要存在于血管中膜VSMCs.2周和4周ACR胸主动脉RhoGDIα表达较正常对照组显著上调,提示在高血压状态下的主动脉RhoGDIα的表达上调.10%周期性张应变加载抑制了VSMCs的RhoGDIα表达,加入ATI受体拮抗剂后RhoGDIα表达显著低于10%周期性张应变加载组. 结论 大鼠高血压时主动脉RhoGDIα表达上调;Ang Ⅱ信号通路在RhoGDIα表达调控中起重要作用.     

Reduced expression of FXYD domain containing ion transport regulator 5 in association with hypertension

Experimental evidence indicates that hypertension is a multifactorial disorder and that the products of several genes may contribute to its development. The aim of this study was to investigate the expression of hypertension-related genes in spontaneous hypertensive rats (SHRs). A microarray screening for hypertension-related genes was conducted in SHRs and Wistar-Kyoto (WKY) rats using total-RNA extracted from second-order mesenteric arteries and kidneys. The FXYD5 mRNA expression in vascular smooth muscle cells (VSMCs) was silenced by RNA interference (RNAi). Meanwhile, the FXYD5 mRNA overexpression in renal tubular epithelial cells (RTECs) was induced by the recombinant plasmid pcDNA3.1(+)-FXYD5. The expression of FXYD5 mRNA was found to be 14.8-fold lower in SHR rats compared to that in WKY rats (P<0.01). The levels of FXYD5 mRNA expression were the highest in kidneys of SHR 13-week-old rats when the blood pressure reached the highest levels. The down-regulated FXYD5 mRNA expression inhibited the migration of smooth muscle cells (P<0.01) and cell membrane Na?-K?-ATPase activity (P<0.01). Up-regulated FXYD5 mRNA expression enhanced the renal tubular epithelial cell membrane Na?-K?-ATPase activity (P<0.05) and cell proliferation (P<0.05). FXYD5 is related to the migration of smooth muscle cells and cell membrane Na?-K?-ATPase activity in rodents. The results of the present study suggest that FXYD5 may have profound impact on the regulation of blood pressure, and that this gene may be a potential target for anti-hypertensive therapy.     

伴有高血压的糖尿病大鼠主动脉的结构重建

目的 :观察伴有高血压的糖尿病 (SHRDM)主动脉结构重建的规律 ,并探讨高血糖、高血压对其影响。方法 :STZ诱导SHR大鼠建立SHRDM实验动物模型 ,。观测主动脉血管壁中膜结构成分的改变。结果 :SDDM(有高血压的糖尿病 )大鼠自 4周始主动脉中膜平滑肌相对含量和核密度、胶原纤维相对含量均大于SD组 ,弹性纤维相对含量少于SD组。SHRDM组主动脉平滑肌相对面积、C/E值大于SD和SHR组 ,但SMC核数少于SDDM ,多于SHR。结论 :糖尿病早期已出现主动脉结构重建 ,以平滑肌增生为主 ;高血压使平滑肌细胞肥大为主 ,因而SHRDM增生、肥大共存。高血压、高血糖均显著影响主动脉结构重建 ,高血压影响大于高血糖。     

酪氨酸蛋白激酶在自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大中的作用

目的: 明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖与血小板源生长因子-AA(PDGF-AA)、PDGF-α受体表达的关系及酪氨酸蛋白激酶在其中的作用。方法: 在培养的血管平滑肌细胞中,采用免疫印迹(Westernblot)、[³H]-TdR及[³H]-Leu掺入等方法,观察在不同来源大鼠(SHR/WKY)血管平滑肌细胞中,PDGF-AA、PDGF-α受体及PDGF-β受体表达的差异性;在PDGF-AA刺激下细胞的增殖、肥大反应及酪氨酸激酶抑制剂(genistein)对其的影响。结果: SHR-VSMC中PDGF-AA、PDGF-α受体蛋白表达明显高于WKY-VSMC,而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与WKY-VSMC无明显差异;在不同浓度PDGF-AA刺激下,PCNA及[³H]掺入率在SHR-VSMC明显增强且呈剂量依赖性;酪氨酸激酶抑制剂(genistein)明显抑制PCNA表达及[³H]掺入。结论: 自发性高血压大鼠VSMCPDGF-A链及其α受体的自发性增高,可能是导致SHR-VSMC异常增殖、肥大,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一;酪氨酸蛋白激酶介导的信号转导在其中发挥重要作用。     

高血压大鼠大小动脉血管重构的差异比较

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)大、小动脉血管重构的差异。方法:以20周龄雄性SHR为实验组,同龄Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为对照组。每周测量体重和血压,43周龄大鼠麻醉取血,留取胸主动脉和肠系膜小动脉组织。HE染色观察比较大、小动脉形态学变化,天狼星红-维多利亚蓝染色检测胶原纤维和弹力纤维变化,激光扫描共聚焦显微镜和Western blot分析Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,透射电子显微镜观察动脉超微结构变化,原位末端标记法(TUNEL)和增殖细胞核抗原(PCNA)检测评估血管壁细胞凋亡与增殖情况。结果:小动脉血管内径(ID)和血管腔横截面积(LCSA)减小,壁厚内径比(WT/ID)和壁腔横截面积比(WCSA/LCSA)增大,外膜成纤维细胞增殖并部分迁移,胶原增多,以III型胶原增多为主,血管壁细胞的增殖指数和凋亡指数增加;主动脉ID、LCSA、WT/ID和WCSA/LCSA均增大,中层血管平滑肌细胞(VSMCs)肥大增生明显,胶原增多,血管壁细胞的增殖指数和凋亡指数增加。结论:高血压大鼠大、小动脉血管重构差异明显,小动脉以基质增多,特别是外膜III型胶原蛋白增多为主,血管壁细胞凋亡增加;大动脉以血管壁细胞增生,特别是VSMCs增生、肥大为主。