间隙连接蛋白在高催乳激素血症大鼠卵巢中的表达及肝脾调控的影响

目的运用逍遥散加减方干预高催乳激素血症(HPRL)模型动物,观察其对HPRL大鼠卵巢间隙连接蛋白Cx37/Cx43的影响。方法选取48只性成熟雌性大鼠随机划分6组:正常组,阴性组,阳性组,中药高、中、低剂量组。采用ip甲氧氯普胺制作HPRL模型大鼠,中药灌胃30天后,取模型动物卵巢,采用蛋白质印迹法检测各组卵巢组织中间隙连接蛋白Cx37、CX43表达的情况。结果与正常组比较,造模组卵巢中缝隙连接蛋白Cx37、CX43表达减少,差异有统计学意义(P0.05);与阴性组比较,中药高剂量组Cx37、Cx43表达显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与阳性组比较,中药高剂量组Cx37、CX43表达显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与中药高剂量组比较,中药中、低剂量组Cx37、CX43表达有所降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论高催乳激素血症大鼠卵巢中间隙连接蛋白Cx37、CX43的表达水平较低,逍遥散加减方具有调节卵巢间隙连接蛋白Cx37、CX43表达的作用,与中药剂量成一定的正比关系。     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化与间隙连接蛋白关系的研究

目的:探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS)的保护作用与细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)的关系。方法:将32只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常对照组。模型组和治疗组采用Hcy ig造模,0.1 g.kg-1.d-1。造模同时,治疗组分别ig补阳还五汤(5,10,20 g.kg-1.d-1)。8周后观察和测量主动脉根部AS斑块面积、血管壁面积,检测主动脉组织活性氧(ROS)含量,p38MAPK,ERK,Cx37,Cx43蛋白表达变化。结果:模型组AS病变明显,主动脉组织中ROS含量(17.01±1.31)×105 RFU与正常对照组ROS含量(2.73±0.18)×105 RFU相比显著升高(P<0.01);模型组与正常组比p38MAPK,ERK,Cx43蛋白表达明显增高,Cx37蛋白表达显著降低;不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时显著降低血管组织中ROS含量,下调p38MAPK,ERK,Cx43的蛋白表达水平,提高Cx37蛋白的表达水平。结论:补阳还五汤可能通过拮抗有丝分裂激活蛋白激酶磷酸化水平,改善细胞间隙连接而抗Hcy所致动脉硬化的作用。     

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方(SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量,心肌核因子-κB(nuclear factor—kappa B,NF—κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx43的影响．方法用冠状动脉结扎／放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,N—BT染色法测量心肌梗死范围;免疫组织化学法检测心肌组织NF—κB p65表达;双抗体夹心ABC—ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子(TNF—α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx43表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κB p65表达、血清中TNF-α及ICAM—1含量明显升高(P<0．05);心肌连接蛋白Cx43大量降解。SSTG理后心肌梗死面积及重量减轻;血清中TNF—α、ICAM-1水平下调(P<0．05);NF—κB p65表达及Cx43降解抑制．结论缺血再灌注时,心肌梗死严重,NF—κB信号途径可被激活,Cx43降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化,抑制血清中TNF-α、ICAM—1的过量分泌和抑制Cx43的降解,减小心肌梗死面积及重量。     

敷脐疗法对腹泻大鼠小肠神经-ICC-平滑肌网络信号传导通路及Cx43表达的影响

目的探究小儿腹泻外敷散敷脐疗法对番泻叶所致腹泻大鼠小肠神经-ICC-平滑肌网络信号传导通路以及其连接蛋白Cx43表达的影响。方法采用透射电镜法观察小儿腹泻外敷散对腹泻大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络传导结构损伤的修复情况;采用免疫组化法观察Cx43在小肠肌层的分布和表达;采用蛋白印迹法检测小肠中的Cx43表达水平,分析小儿腹泻外敷散对腹泻大鼠小肠Cx43表达所产生的影响。结果透射电镜法显示治疗组ICC空泡样和核周隙消失,网络链接趋于紧密,信号通路得以修复;免疫组化法显示Cx43主要分布在肌间神经丛中,也有少量分布于环形肌间、纵行肌间以及黏膜下神经丛;免疫组化法和WB法均显示小儿腹泻外敷散可上调Cx43的表达水平。结论小儿腹泻外敷散可通过修复肠神经系统-ICC-平滑肌网络信号传导通路结构,上调缝隙连接Cx43的表达水平以治疗腹泻。     

启膈方对人食管癌细胞Eca109、TE13及Cx26表达的影响

目的探讨启膈方治疗食管癌的可能作用机制。方法采用人食管癌细胞Eca109及TE13,将各细胞分为对照组及启膈方高剂量组、启膈方低剂量组。采用MTT法观察启膈方对食管癌细胞增殖的影响,应用Transwell小室法检测启膈方对食管癌细胞迁移的影响,应用激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察启膈方对食管癌细胞间隙连接蛋白26(Cx26)表达的影响,采用RT q-PCR法观察启膈方对食管癌细胞中Cx26水平的影响。结果启膈方正常剂量在体外环境不能抑制Eca109及TE13细胞增殖。启膈方高剂量组Eca109迁移细胞数明显少于对照组和启隔方低剂量组(P0.01),启膈方高、低剂量组TE13迁移细胞数明显少于对照组,且启膈方高剂量组明显少于启隔方低剂量组(P0.05或P0.01)。经启膈方作用后的食管癌细胞Eca109和TE13中Cx26蛋白及mRNA水平表达明显增高(P0.05)。结论启膈方可抑制人食管癌细胞Eca109、TE13的增殖与迁移,并能够增强Cx26在蛋白水平及转录水平的表达,使食管癌细胞间隙连接增强,从而抑制细胞的迁移。这可能是其治疗食管癌的部分作用机制。     

谈间隙连接技术在妇产科中的应用

细胞同存在着间隙连接、桥粒和紧密连接等连接方式。其中,细胞通过间隙连接所介导的细胞闻隙连接通讯,进行着信息和能量物质的交换,对细胞的新陈代谢、增殖和分化等生理过程起重要调控作用。同时,GJIC功能异常与多种肿瘤的发生、发展及转移密切相关,间隙连接已成为当今生命科学领域中的研究新热点。本文通过对间隙连接技术在妇产科中的应用方面,提出了自己的独特见解。     

温胆汤含药血清对星形胶质细胞Cx43和GJ的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对星形胶质细胞缝隙连接(GJ)和连结蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组。氯氮平组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg组分别ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,正常组用等量生理盐水ig,1次/d,8天后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌备用。将星形胶质细胞分为6组:对照组(普通培养基培养)、正常鼠血清组、氯氮平20mg/kg血清组、温胆汤40g/kg血清组、温胆汤30g/kg血清组、温胆汤20g/kg血清组,按照相应的分组更换含药血清进行培养24h、36h、48h后,采用划痕染料标记示踪技术(SLDT)在荧光显微镜下,通过荧光黄扩散距离测定星形胶质细胞间GJ水平;Western blotting法检测星形胶质细胞中Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结果:温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组作用于星形胶质细胞24h、36h、48h后,能使荧光扩散面积及强度不同程度的显著增加;并显著提高Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结论:温胆汤能够上调星形胶质细胞Cx43磷酸化和非磷酸化的表达,增强GJ水平,从而改善细胞间隙连接通讯(GJIC)功能。     

几种常见的细胞因子对Cx43的作用

缝隙连接是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,连接蛋白43（connexin43,Cx43）是比较常见的缝隙连接蛋白,在很多细胞中都有表达。很多细胞因子能影响Cx43的表达及其缝隙连接功能。本文综述了Cx43的结构和功能及几种常见的细胞因子与Cx43表达之间的关系。     

不同机体状态下针刺对神经递质的调控

针刺效应的产生与神经系统结构完整性和功能正常密切相关,神经递质是针刺效应产生的物质基础。本文在梳理针刺效应神经生物学机制的基础上,就不同机体状态下针刺对神经递质的调控机制作一总结。神经递质在腧穴局部参与针刺信号的启动,在中枢层次参与针刺信息的传导与整合,在效应器官参与疾病的调控。针刺对神经递质的调控与机体状态密切相关,具有趋正常化调节效应特点。神经递质在穴位局部产生的针刺效应是非特异性作用;在特定机体状态下,神经递质参与靶器官、效应器官的功能调控,体现了针刺的特异性作用。     

不同灸法对高脂血症大鼠施灸局部Cx43表达的影响及与血脂调节的相关性

目的探讨温和灸、隔姜灸、麦粒灸,不同灸法对局部效应与整体效应影响之间的相关性。方法建立急性高脂血症大鼠模型,观察温和灸、隔姜灸、麦粒灸3种灸法刺激,对大鼠施灸局部神阙穴皮肤间隙连接蛋白43(Cx43)表达的作用和血脂调节的影响。结果艾灸各治疗组与模型对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01),温和灸组、麦粒灸组与隔姜灸组差异有极显著性意义(P<0.01),温和灸组与麦粒灸组差异无显著性意义(P>0.05)。结论 Cx43的表达与不同的灸法影响密切相关,这一结果与不同灸法对血脂调节的影响体现出较为一致的相关性。     

荧光双重标记Cx43在大鼠“足三里”表达的实验研究

目的:研究缝隙连接蛋白Cx43在大鼠“足三里”穴的表达及其与穴位、经络的可能关系。方法:20只健康成年SD大鼠随机分为非针刺组、针刺组,每组10只。应用荧光双重标记免疫组织化学方法和激光扫描共聚焦显微镜技术对成年大鼠皮肤肌肉组织的Cx43进行定位、定量分析。结果:皮肤肌肉组织中Cx43主要在表皮上皮细胞、皮下筋膜的肥大细胞中表达;非针刺组中穴位处Cx43的表达显著高于非经非穴处,两者相比有极显著性差异(P<0.01);穴位针刺后Cx43表达显著增加,与非针刺组中穴位比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:电针可使“足三里”穴区皮肤及肌肉组织中的Cx43表达明显增加,缝隙连接蛋白及缝隙连接可能在经络活动中起重要作用。     

针刺对免疫抑制的Cx43基因敲除小鼠免疫功能的影响

目的:观察针刺对免疫抑制的Cx43基因敲除小鼠(Cx43+/-鼠)免疫功能的影响,探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)与针刺信号传递机制之间的可能关系。方法:8~9周龄雄性Cx43+/-小鼠及野生型小鼠(Cx43+/+鼠)各18只,分别随机分为正常组、模型组和针刺组,每组6只。小鼠腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg)制造免疫抑制模型。针刺双侧"足三里"穴及"关元"穴,每5 min行针1次,每次30 s,留针15 min,连续治疗7 d。计算各组小鼠的脾脏指数及胸腺指数和外周血白细胞数,并采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞亚群的百分数。结果:Cx43+/+鼠及Cx43+/-鼠的模型组与各自的正常对照组相比,其脾脏指数、胸腺指数、白细胞数及CD3+%、CD4+%均明显降低(P<0.05,0.01),提示两种动物模型组免疫功能显著低下。在Cx43+/+小鼠上,针刺组的脾脏指数、胸腺指数、白细胞数、CD3+%、CD4+%、CD8+%与模型组比较均明显升高(P<0.05,0.01),与正常组比较差异无显著性意义(P>0.05),提示针刺可增强免疫功能;而对于Cx43+/-小鼠,针刺组脾脏指数、胸腺指数、白细胞数、CD3+%、CD4+%、CD8+%与模型组相比较差异无显著性意义(P>0.05),说明基因Cx43敲除后针刺的效应消失。结论:Cx43基因的敲除抑制了针刺改善免疫力效应的产生,提示以Cx43为主要组成的细胞间缝隙连接(GJ)可能在针刺调整机体免疫功能的信号传递通路上起着重要的作用,GJ可能与针刺改善免疫力效应的产生有着密切的关系。     

针刺对大鼠"足三里"穴缝隙连接蛋白Cx43表达的影响

目的:观察大鼠"足三里"穴与非经非穴处缝隙连接蛋白Cx43的表达及针刺对该表达的影响,探讨缝隙连接蛋白与穴位的可能关系.方法:20只健康成年SD大鼠随机分为非针刺组、针刺组,每组10只;应用荧光双重标记免疫组织化学方法和激光扫描共聚焦显微镜技术对"足三里"穴、非经非穴处皮肤组织Cx43进行定位、定量分析.结果:皮肤组织中Cx43主要在上皮细胞胞浆、胞膜上表达,包括皮肤表皮和部分毛囊等上皮角质形成细胞;非针刺组中穴位处Cx43的表达显著高于非经非穴处(P＜0.01),针刺组中穴位针刺后Cx43表达显著增加,与非针刺组中穴位比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:缝隙连接蛋白及缝隙连接可能是穴位的主要组成成分,且针刺能明显增加缝隙连接蛋白在穴位处的表达.     

针刺对大鼠不同部位穴位Cx43表达的影响

目的:观察针刺大鼠穴位和非穴位对细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨穴位的相对特异性。方法:将20只Wistar大鼠随机分为2组,一组为针刺组,另一组为空白对照组,每组10只。对照组大鼠不做任何干预直接用空气栓塞法处死;针刺组大鼠选上肢"内关"穴,下肢"后三里"即"足三里"穴,背部"大椎"穴和腹部"关元"穴,对以上穴位、穴位旁1cm处及爪部"涌泉"穴,行手针针刺,留针30min后,空气栓塞处死。固定后,取两组大鼠穴位处及穴位旁开1cm处的组织块,涌泉穴只取穴位处,冰冻切片。采用Cx43的免疫组化染色方法染色。结果:两组大鼠各穴位处Cx43的表达均显著高于其穴位旁(均P<0.01);针刺组穴位处Cx43的表达均显著高于对照组穴位处(均P<0.01)。结论:穴位和非穴位之间Cx43的表达有显著性差异,表明穴位确实存在且有其相对特异性。     

Cx26和Cx43在乳腺癌中的表达及与上皮间质转化的关系

目的研究连接蛋白26(Connexin26,Cx26)和连接蛋白43(Connexin43,Cx43)在乳腺癌中的表达及与上皮间质转化(EMT)的关系。方法应用免疫组织化学方法检测70例浸润性导管癌、10例乳腺良性病变(乳腺纤维腺瘤)患者中Cx26和Cx43的表达情况,并分析其与EMT的关系。结果Cx26和Cx43在浸润性导管癌中表达的阳性率分别为31%(22/70)和47%(33/70),与乳腺纤维腺瘤中相比,Cx26和Cx43在浸润性导管癌中的表达明显降低(P0.05);在浸润性导管癌中Cx26和Cx43的表达与EMT状态呈负相关(r=-0.26,r=-0.24)。结论Cx26和Cx43与EMT状态呈负相关,可作为乳腺浸润性导管癌中EMT发生的有价值的标记物。     

房颤大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43磷酸化水平改变及青蒿提取物的干预作用

目的：通过建立房颤大鼠模型,研究房颤状态下Cx43磷酸化水平对房颤发生的影响以及中药青蒿提取物对Total-Cx43、NP-Cx43表达与分布的影响。方法：建立房颤大鼠模型,使用青蒿提取物进行干预,以卡托普利作为对照组。实验当日处死动物后Western-blot法检测Cx43表达及磷酸化水平。激光共聚焦显微镜检测Total-Cx43、NP-Cx43分布情况。结果：Total-Cx43的表达中对照组的表达量最高,模型组表达量最低,较对照组下降了（57.2±12.5）%（P〈0.05）,青蒿组与卡托普利组相比,表达量没有统计学差异（P〉0.05）。NP-Cx43的表达中对照组的表达量最高,模型组表达量最低,模型组、青蒿组、卡托普利组之间没有统计学差异（P〉0.05）。结论：房颤的发生与Total-Cx43表达减少以及重新分布有密切关系。青蒿提取物以及卡托普利对房颤的改善作用机制之一是通过改变Total-Cx43的表达与分布实现的。在房颤的发生过程中,Total-Cx43的表达与分布发生改变,NP-Cx43的表达与分布无异常,说明P-Cx43是诱发房颤的重要因素。     

基因治疗联合六味地黄丸对肝癌荷瘤小鼠缝隙连接蛋白表达的影响

目的:探讨六味地黄丸联合基因治疗对小鼠移植性肝癌缝隙连接蛋白(connexin,Cx)表达的影响,初步阐明六味地黄丸对肝癌HSV-tk/GCV自杀基因治疗的增效作用机制是否与缝隙连接相关。方法:昆明种小鼠90只,随机分为模型对照组、六味地黄丸治疗组(ig六味地黄丸10 g·kg-1·d-1)、自杀基因治疗组(ip丙氧鸟苷100 mg·kg-1·d-1)、联合治疗组(ig六味地黄丸10 g·kg-1.d-1+ip丙氧鸟苷100 mg·kg-1.d-1);选用H22与H22/tk细胞株皮下接种建立小鼠肝癌模型,取荷瘤小鼠肿瘤组织进行常规病理制片,采用SABC免疫组化法检测各组肿瘤组织Cx26,Cx32,Cx43蛋白表达。结果:阳性表达定位于细胞浆和细胞膜,Cx43在癌旁组织,特别是有纤维组织浸润部位表达呈强阳性,而在癌结节中肿瘤细胞表达相对较弱;Cx26,Cx32在肿瘤细胞特别是脂肪组织浸润附近的癌组织中呈现强阳性表达。与肿瘤模型组相比,联合治疗组则能增强Cx26,Cx43,Cx32蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05);与单独六味地黄丸和自杀基因治疗组相比,联合治疗组能明显提高Cx32蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:六味地黄丸联合自杀基因治疗能增强Cx26,Cx43,Cx32蛋白表达,尤其是促进Cx32的表达,提示六味地黄丸增强自杀基因旁观者效应的机制与缝隙连接相关。     

针刺对Cx43基因敲除小鼠痛经反应的影响

目的:观察针刺对缝隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除小鼠痛经反应的影响,探讨Cx43与针刺效应的关系。方法:选取杂合子[Cx43(+/-)]及野生型[Cx43(+/+)]2月龄雌鼠各20只,随机分为正常组、模型组、针刺组及益母草膏组,每组5只。其中模型组、针刺组及益母草膏组用己烯雌酚灌胃(2mg/g,容积0.2ml/10g),每日1次,连续12d,于末次给药1h后,腹腔注射催产素2U/kg;正常组以等量生理盐水灌胃,每日1次,连续12d。针刺组于造模第7天针刺双侧"三阴交"地机"穴,每日1次,连续5d;益母草膏组于第7天予以益母草膏0.6mg/g灌胃,连续5d。于造模第12天注射催产素后观察各组小鼠扭体潜伏期和30min内扭体数,随后剖腹取子宫组织,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定催产素受体(Oct-R)和血管加压素受体(Vas-R)的mRNA表达水平,免疫组化法检测Oct-R蛋白的表达水平。结果:针刺能够延长Cx43(+/+)痛经模型小鼠的扭体潜伏期,减少其扭体次数,并能降低子宫组织中Oct-R、Vas-RmRNA及Oct-R蛋白的表达水平(均P<0.05),但对Cx43(+/-)痛经模型小鼠上述指标的表达无显著性影响(P>0.05)。结论:针刺对野生型小鼠痛经反应有治疗作用,敲除Cx43基因后,针刺的治疗作用显著降低,表明Cx43可能参与针刺治疗效果的产生。     

牛蒡子苷元对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白表达的影响

目的：观察牛蒡子苷元在体外对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白（Cx）表达的影响。方法：采用Western blot 技术检测牛蒡子苷元对人肝癌细胞HepG2缝隙连接蛋白（Cx26/32/43）的表达。结果：Western blot 检测,用国产多克隆Cx一抗和进口单克隆Cx一抗的实验均显示：牛蒡子苷元等能明显提高人肝癌细胞HepG2Cx32的表达,且有时间、浓度依赖性,氧化剂H2O2能抑制牛蒡子苷元此作用;但牛蒡子苷元对HepG2的Cx43表达影响24h不明显,48h能明显提高Cx43表达。结论：牛蒡子苷元能提高人肝癌细胞Cx表达,增强细胞间缝隙连接功能。     

Connexin 43在银杏叶提取物抗大鼠脑缺血损伤中的作用

目的通过体内体外实验研究缝隙连接蛋白43(Cx43)与EGb761脑缺血神经保护作用的关系,探讨银杏叶制剂EGb761治疗脑缺血的机制。方法在大鼠原代神经细胞中转染荷载Cx43-shRNA的慢病毒,干扰Cx43蛋白表达,同时给予EGb761 200μg/mL处理观察Cx43的表达以及EGb761对Cx43蛋白表达的影响。建立大鼠脑缺血模型,腹腔给予EGb761 50、100 mg/kg,使用HE染色,TTC染色,免疫组化和westernblot方法检测大鼠脑组织细胞的形态变化和大鼠海马Caspase-3,TUNEL阳性细胞,Cx43,p-Cx43蛋白的表达变化。结果 EGb761给药可以减少脑缺血大鼠脑组织梗死面积,显著性抑制脑缺血大鼠海马Caspase-3表达和TUNEL阳性凋亡细胞数目,显著性抑制大鼠海马神经细胞p-Cx43的表达水平。体外培养的大鼠神经细胞转染Cx43-shRNA慢病毒,给予EGb761处理,处理前后神经细胞Cx43/p-Cx43蛋白表达未见明显变化。结论 EGb761可以减轻脑缺血缺氧引起的细胞损伤,其神经保护作用与抑制缺血引起的缝隙连接蛋白Cx43的表达和激活有关。