钩吻生物碱成分的研究进展

目的对钩吻中生物碱成分的研究进展进行综述,为钩吻生物碱成分的进一步研究奠定基础。方法查阅国内外相关文献47篇,从其中化学成分的理化常数、结构式、提取分离方法、药理作用、毒性以及开发前景等方面对钩吻生物碱类成分的研究进展进行综述。结果与结论钩吻中含有生物碱成分44种,主要为吲哚类生物碱;主要提取分离方法为硅胶柱层析和重结晶;钩吻生物碱具有免疫调节、抗肿瘤、镇痛镇静等药理活性;钩吻中的毒性成分也为生物碱类成分,这给广大研究人员带来了严峻的挑战与机遇。     

钩吻生物碱钩吻素子的提纯及其抗神经病理性疼痛的作用

神经病理性疼痛(NPP)的新型治疗药物以及治疗靶点亟待研究。中国钩吻为马钱科植物胡蔓藤的全草,盛产于闽、粤、桂等地。钩吻的主要有效成分为吲哚类生物碱,含有数十种生物碱单体,其中钩吻素子(koumine,KM)为国产钩吻生物碱单体中含量最高的一种有效成分。民间一直应用钩吻原植物治疗各类疼痛,尤其神经性疼痛与癌性疼痛。有报道,钩吻总碱具有显著的镇痛效果,但治疗指数小,有效量与中毒量较接近。本文拟从国产钩吻分离纯化获取钩吻素子,并报道其抗神经病理性疼痛作用及其机制。选取本地采集的钩吻根和茎,提取钩吻总生物碱;应用高速逆流色谱等技术分离纯化钩吻总碱获得钩吻素子单体,纯度达99%;经紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱分析、元素分析以及熔点测定等确证其化学结构,钩吻素子分子式为C20H22N2O,分子量306.3。钩吻素子原料药对光、温度、湿度稳定,钩吻素子水溶液在pH值3～8以及温度在室温、40℃、60℃条件下稳定。在大小鼠坐骨神经慢性束缚损伤(CCI)模型和脊神经结扎模型上,以动物机械阈值、热阈值和自发痛行为为指标,首次观察到ig或sc钩吻素子具有显著的抗NPP作用,有效剂量远低于中毒剂量(小鼠sc钩吻素子LD50为99 mg·kg-1)。脊髓可能是钩吻素子抗NPP的重要作用部位;脊髓神经活性甾体3α,5α-四氢孕酮(3α,5α-THP)参与调控NPP,钩吻素子可显著提高CCI模型大鼠脊髓腰段内3α,5α-THP的水平;3α-羟化类固醇脱氢酶(3α-HSD)是催化3α,5α-THP合成的关键酶,钩吻素子可显著上调脊髓3α-HSD酶的表达。上述结果表明,钩吻素子具有显著的抗NPP作用;增强脊髓3α-HSD酶的表达,促进脊髓3α,5α-THP的生成,可能是其发挥抗NPP作用的机制之一。     

大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱的研究

目的:研究用大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱中主要成分的方法和工艺条件。方法:采用不同型号的HPD系列大孔吸附树脂对钩吻总生物碱进行提取纯化,以高效液相色谱法检测钩吻总生物碱中主要成分的峰面积为指标,考察最佳工艺和参数条件。结果:HPD-500、HPD-600、HPD-800型大孔吸附树脂对钩吻总生物碱提取效果好,并得到HPD-800的最佳工艺和参数条件。结论:采用HPD-800型大孔吸附树脂及不同浓度乙醇洗脱的方法,可用于钩吻总生物碱的提取纯化。     

闽产钩吻根总生物碱半数致死量的实验研究

目的 研究闽产钩吻根总生物碱对小鼠的半数致死量(LD50),为药理实验和临床安全合理用药提供依据.方法 将闽产钩吻根粉碎后用95％乙醇提取,减压下回收乙醇,加2％盐酸溶解后用氯仿萃取,浓氨水碱化水层,再用氯仿萃取,得到钩吻根总生物碱.根据预试验结果将40只小鼠分成4组,每组10只,按照5.5mg·kg-1、4.4mg·...     

钩吻生物碱化合物体外抗消化系统肿瘤的活性

目的探讨钩吻生物碱化合物抗消化系统肿瘤的活性,并初步探索其构效关系。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）比色法,观察钩吻生物碱化合物对人肝肿瘤细胞HepG2、人胃癌细胞MGC80-3、人食管癌细胞TE-11和人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用。结果钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱对SW480细胞和MGC80-3细胞增殖具有显著的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对SW480细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.45±0.10,0.76±0.28,0.52±0.22和1.41±0.06mmol·L^-1。对MGC80-3细胞IC50分别为0.82±0.19,1.20±0.33,1.14±0.23和1.22±0.11mmol·L^-1。钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己对TE-11细胞和HepG2细胞的增殖也有一定的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对TE-11细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.74±0.05,1.94±0.30和1.73±0.35mmol·L^-1。对细胞HepG2的IC50分别为1.26±0.32,1.82±0.35和1.79±0.54mmol·L^-1。结论钩吻生物碱化合物具有抗消化系统肿瘤活性,并存在一定的构效关系。     

中国钩吻中生物碱:钩吻碱子的结构

自1931年赵承嘏等从钩吻(Gelsemium elegansBenth)中分离出钩吻碱子(Koumine)以来,其结构式一直未确定。作者采用X-射线结晶分析法进行钩吻碱子的结构鉴定。钩吻碱子(Koumine),C_(20)H_(22)N_2O,熔点172°(丙酮),[α]_D-272°。UV(EtOH)λ_(max)220,262nm(log∑4.32,3.84); IR1700cm~(-1),MS Mm/e     

钩吻生物碱的提取分离及结构鉴定

中草药钩吻中具有抗癌活性生物碱单体成分的提取分离,并测定其结构。方法：药材粉碎后用3%NaOH碱化后,晾干,用氯仿浸泡,回收氯仿提取液得浸膏。加酸溶解后,用氯仿萃取,碱化水层,再用氯仿萃取,得到钩吻总生物碱。然后经硅胶柱层析、反相ODS柱层析以及制备型HPLC层析分离纯化,并经理化性质和光谱学数据的测定鉴定单体化合物的结构。结果：共分离得到12个单体化合物,经测定紫外光谱、1H-NMR数据并与文献报道相比较,初步确定两个化合物的结构分别为gelsemine和koumine。结论：通过硅胶柱层析、ODS柱层析和HPLC相结合的方法可以达到分离钩吻总生物碱的目的。     

钩吻生物碱化合物抗肿瘤效应及其诱导凋亡作用

目的研究钩吻生物碱化合物抗肿瘤效应及其诱导凋亡作用。方法①在小鼠H22肝癌细胞小鼠移植性肿瘤模型上观察钩吻生物碱化合物对H22小鼠实体瘤的抑制作用;②AO／EB荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞仪PI染色检测细胞周期变化及凋亡率。结果腹腔注射钩吻素子对H22小鼠实体瘤的抑瘤率为40．29％、36．57％、22．89％;钩吻素甲对小鼠H22实体瘤的生长具有一定的抑制作用,抑瘤率为28．91％、16．85％、9．68％;但1-甲氧基钩吻碱小鼠H22实体瘤没有明显的抑制作用。钩吻素子可诱导SW480细胞发生凋亡形态学改变．并且可使SW480细胞周期阻滞于s期,阻止细胞从s期至G2期转移,从而诱导其凋亡。结论钩吻生物碱化合物特别是钩吻素子具有较强的抗肿瘤活性并具有一定的构效关系,钩吻索子的抗肿瘤作用机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和促进肿瘤细胞凋亡作用有关。     

钩吻根脂溶性化学成分的分离与鉴定

目的对钩吻根脂溶性部位的化学成分进行研究。方法通过乙醇回流提取、溶剂分步萃取得到钩吻根粗提物,利用硅胶柱、ODS柱、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F等多种色谱柱进行分离纯化,利用NMR等现代波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为钩吻素子(koumine,1)、钩吻绿碱(gelsevirine,2)、胡蔓藤碱乙(humantenine,3)、钩吻内酰胺(gelsemamide,4)、12β-羟基-孕甾-4,16-二烯-3,20-二酮(12β-hydroxy-pregna-4,16-diene-3,20-dione,5)、正三十一烷醇(n-hentriacontyl alcohol,6)、十四碳酸甲酯(methyl myristate,7)、6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin,8)、3,4,5-三甲氧基苯甲醇(3,4,5-trimethoxybenzyl alcohol,9)、5-甲基间苯二酚(5-methylresorcinol,10)。结论化合物6-10为首次从胡蔓藤属中分离得到。     

常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖的体内外作用特征

常绿钩吻碱(sempervirine,SPV)是从钩吻中分离得到的一种育亨宾型生物碱,本研究探讨了常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤细胞体内外增殖的作用特征。以0~16μmol·L^-1不同浓度常绿钩吻碱处理人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,分别用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst细胞核染色和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2、caspase-3和cleaved caspase-3蛋白。采用体内裸鼠移植神经胶质瘤模型,观察常绿钩吻碱抗神经胶质瘤的体内作用,所有动物实验操作均严格遵守福建医科大学生物医学伦理委员会相关规定。结果显示,常绿钩吻碱在1~8μmol·L^-1能显著抑制U251细胞的增殖和集落形成,引起细胞核固缩,促进细胞凋亡,蛋白检测表明,其促进caspase-3的切割活化,下调Bcl-2/Bax值和PI3K蛋白的表达,抑制AKT的磷酸化;裸鼠移植瘤实验结果表明,剂量4和8 mg·kg^-1·day^-1常绿钩吻碱干预能抑制体内神经胶质瘤的生长,肿瘤重量分别减少了44.76%和61.26%。本研究在体内外水平表明,常绿钩吻碱能明显抑制神经胶质瘤的增殖,为其抗神经胶质瘤的研究开发奠定基础。     

常绿钩吻碱平衡溶解度、油水分配系数及解离常数的测定

目的 测定常绿钩吻碱(Sempervirine,SPV)在不同pH磷酸盐缓冲液（PBS）中的平衡溶解度和油水分配系数,考察常绿钩吻碱的解离常数,为常绿钩吻碱的剂型开发提供一定的依据。方法 采用超高效液相色谱法（UPLC）结合摇瓶法测定常绿钩吻碱在不同pH的PBS中的平衡溶解度和正辛醇-PBS中的油水分配系数;采用紫外分光光度法测定常绿钩吻碱的解离常数。结果 常绿钩吻碱在pH 1.2~7.4的PBS中的溶解度为285.356~557.945 mg?L^-1,油水分配系数在0.316~5.803,解离常数pKa为11.10。结论 pH值影响常绿钩吻碱平衡溶解度和油水分配系数,常绿钩吻碱的低溶解度与解离常数可能影响其体内吸收。     

钩吻急性毒性快速检测方法研究

目的 建立以秀丽隐杆线虫为模式生物的钩吻急性毒性快速筛选方法。方法 将线虫同步化到l4期,优化体系DMSO浓度、吐温-80用量、染毒时间,确定最优实验条件,建立以秀丽隐杆线虫为模式生物的钩吻急性毒性快速筛选方法。结果 以M9缓冲液为基本培养液,秀丽隐杆线虫在钩吻粗提物溶液中暴露LC50为39.722 mg?ml-1（95%置信限33.802-45.985 mg?ml-1）。结论 该方法简便,快速,试验周期短,样品用量少,该方法可作为钩吻急性毒性研究中钩吻毒性变化的快速判断方法。     

钩吻总碱对肝癌细胞氯通道的激活作用

目的探讨钩吻总碱对肝癌(HepG_2)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法活细胞图像法观察记录钩吻总碱作用后HepG_2细胞容积的变化;全细胞膜片钳技术记录钩吻总碱对HepG_2细胞膜电流的作用,通过细胞外灌流高渗液,氯通道阻断剂tamoxifen和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)研究电流的生理学及药理学特性。结果细胞外灌流钩吻总碱50min,细胞体积减小(12.48±2.2)%(P<0.01),该现象可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制。膜片钳结果显示,细胞外灌流钩吻总碱(2μmol·L~(-1))可激活HepG_2细胞膜氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位为(-3.21±0.67)mV,接近氯离子平衡电位(-0.9mV),可被氯通道阻断剂tamoxifen和NPPB抑制,细胞外灌流47%高渗溶液亦可明显抑制该电流。结论钩吻总碱可引起肝癌HepG_2细胞体积缩小,诱导凋亡性容积缩小(AVD)发生,该作用可被氯通道阻断剂明显抑制,提示氯通道可能为钩吻总碱抗癌作用的靶点之一。     

钩吻药理及毒理机制研究进展

正剧毒植物钩吻(Glsemium elegans Benth.)又名断肠草、野葛、大茶药、黄藤、火把花、猪人参等,为马钱科(Loganiaceae)胡蔓藤属常绿一年生木质藤本植物。主要分布于我国浙江、江西等长江以南省份及东南亚地区。钩吻的主要活性成分为吲哚类生物碱,包括:甲基钩吻素乙(gelsedine)类、钩吻素甲(gelsemine)类、葫蔓藤乙素(humantenine)类、钩吻素子(koumine)类、蛇根     

RP-HPLC法测定钩吻生物碱

用RP-HPLC法分离和测定了钩吻碱甲(G),钩吻碱戊(F),胡蔓藤碱丙(D)、胡蔓藤碱乙(B)及胡蔓藤碱甲(A)。用常山碱为内标。分析柱C₁₈,甲醇—水—正丁胺(78:22:0.1 V/V)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长256 nm。线性范围0.02～0.12μg,相关系数r=0.9835～0.9977,回收率95.01～99.70%。本方法简便、灵敏、重现性好,为生产及临床用药提供质量控制依据。     

钩吻的本草考证

钩吻在历代本草中均有记载。从古人所描述的治疗作用、中毒症状、植物形态和产地分布等方面考证,本草中的钩吻包括胡蔓藤、雷公藤以及其他某些植物,面以雷公藤为主。     

钩吻的本草考证

钩吻在历代本草中均有记载。从古人所描述的治疗作用、中毒症状、植物形态和产地分布等方面考证,本草中的钩吻包括胡蔓藤、雷公藤以及其他某些植物,面以雷公藤为主。     

钩吻中毒的机制、临床特点及处理

钩吻是毒性极强的外用中药,应用不当或误服可致中毒,有时还可致命。主要毒性成分是钩吻碱,以钩吻素子含量最高。钩吻中毒主要抑制延髓呼吸中枢,并抑制脑和脊髓的运动中枢。临床表现以呼吸系统、神经系统症状为主,可出现呼吸衰竭和呼吸肌麻痹,是钩吻中毒最常见的死因。目前尚无特效解毒剂,以对症支持治疗为主。洗胃时须注意监测呼吸情况,必要时先行气管插管再洗胃。     

钩吻中非生物碱不同组分体内、外抗肿瘤作用比较研究

目的:探讨钩吻非生物碱不同分离组分的体内、外抗肿瘤作用以及与毒性的关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐法分析确定各组分对肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,通过对小鼠进行体内急性毒性实验、对H22瘤的抑制作用及对免疫指标的影响实验,综合评价钩吻非生物碱各组分的抗肿瘤作用。结果:钩吻非生物碱成分体外活性高于生物碱成分,钩吻非生物碱组分2对小鼠肝癌H22生长具有明显的抑制作用,胸腺指数明显高于未用药荷瘤组,其它各组分对肿瘤生长无明显影响,毒性大的组分未显示出抗肿瘤作用。结论:钩吻非生物碱具有一定的抗肿瘤作用,对免疫功能有增强作用,其体内、外抗肿瘤作用与毒性无明显相关性。     

榕产钩吻的生药学研究

目的研究榕产钩吻的生药学特征,建立其生药学鉴别方法与鉴别特征。方法采用植物形态鉴定、显微特征鉴定、理化性质鉴定等手段对榕产的钩吻进行生药学研究。结果榕产钩吻生药学鉴别特征主要有无毛、茎长、叶断面齐、淡黄色花漏斗状聚伞花序、味特异等性状特征,木质部宽广、含大量石细胞等显微特征,以及含有生物碱、紫外灯下呈现鲜亮的天蓝色荧光等理化性质特征,可与相近植物相区别。结论确立了榕产钩吻生药学鉴别方法与鉴别特征。