肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析

目的研究肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的表型和基因型。方法利用3-氨基苯酚硼酸及ESBLs确认试验检测AmpC酶与ESBLs表型,接合转移试验了解质粒在细菌间的传递;通过质粒的提取、纯化,PCR反应及序列分析,研究肺炎克雷伯菌质粒携带的ampC基因和ESBLs基因类型。结果从肺炎克雷伯菌中获得1条约15 kb大小的质粒,此质粒可通过接合转移方式将耐药性传递至大肠埃希菌,以从肺炎克雷伯菌及接合转移后的接合子细菌中,提取的质粒为模板,均可扩增出DHA型ampC基因及SHV型ESBLs基因,序列分析进一步证实ampC及ESBLs基因型分别为DHA-1型及SHV-12型。结论从肺炎克雷伯菌可转移的质粒中,检测到DHA-1型ampC基因及SHV-12型ESBLs基因。     

产ESBLs与质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型研究

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药性及产ESBLs与AmpC酶的存在形式、基因类型和转移方式。方法采用K-B法和微量稀释法测定病原菌对17种抗菌药物的药敏率，用PCR法及基因测序分析两种酶基因的类型，采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式。结果对头孢西丁耐药的55株肺炎克雷伯菌中单产ESBLs为主要形式，ESBLs基因绝大多数为CTX-M型，AmpC酶基因绝大多数为MIR和DHA型，它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的产ESBLs与AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因，产酶株对多种抗菌药物耐药，耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。     

2006-2007年产ESBLs和质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的 调查2006-2007年临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及产ESBLs和AmpC酶的存在形式.方法收集2006-2007年对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌110株,用K-B法和微量稀释法测定细菌对头孢他啶等16种抗菌药物的敏感性,用PCR法检测TEM、SHV、GES、PER、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-3群、DHA和MIR-1/ACT-1基因,用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式.结果 110株肺炎克雷伯菌对美罗培南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟的耐药率在0～49.9%,对其他抗菌药物耐药率在80.0%～100.0%,110株肺炎克雷伯菌中单产ESBLs为主要形式,ESBLs基因为CTX-M和SHV型,AmpC酶基因为ACT和DHA型,它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌.结论 同时存在ESBLs和AmpC酶足肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散,两年比较,肺炎克雷伯菌耐药性呈下降趋势.     

肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶的筛选及其耐药性

目的了解头孢类耐药肺炎克雷伯菌(KPN)质粒β-内酰胺酶的分布及耐药性,寻求最佳的检测方法. 方法双纸片协同试验和三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),表型筛选法和三维试验检测质粒AmpC酶. 结果 182株KPN中,ESBLs检出率双纸片协同试验为42.85%、三维试验为45.05%,两法总符合率为95.12%;表型筛选法显示9株(4.9%)产AmpC酶,三维试验则为7株(3.8%);4株(2.2%)同时产两种酶;产酶株对三代头孢高度耐药,对喹诺酮类、复方新诺明交叉耐药率也很高,对氨基糖苷类有一定敏感性,尚未发现亚胺培南耐药株. 结论 KPN质粒β-内酰胺酶以ESBLs为主;双纸片协同试验操作简便,为检测ESBLs最常用方法;AmpC酶表型筛选法只能作为初筛,确证还需用三维试验证实.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性的探讨

目的探讨临床患者分离出来的肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的耐药性. 方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的方法与规则,采用浓度梯度法(E-test)测定并比较亚胺培南等11种抗菌药物对肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性. 结果除亚胺培南对产ESBLs和非产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药率均为零外,产ESBLs的肺炎克雷伯菌的耐药率显著高于非产ESBLs的肺炎克雷伯菌. 结论临床实验室应将ESBLs作为常规检测项目;在治疗包括肺炎克雷伯菌在内的革兰阴性菌严重感染中,最敏感的抗菌药物是碳青酶烯类,如亚胺培南,其次为头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药性及产酶因素分析

目的 分析医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及其产酶因素,为指导临床合理用药提供参考.方法 收集医院2011年住院患者不同标本的肺炎克雷伯菌162株,进行耐药性检测和产ESBLs菌株的确认,采用t检验、x2检验及多因素logistic回归进行分析.结果 162株肺炎克雷伯菌中,检出产ESBLs肺炎克雷伯菌65株,检出率40.1％;所有产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南敏感,耐药率为0,产ESBLs肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物耐药率普遍高于非产ESBLs;多因素logistic回归分析结果表明仅糖尿病、住院时间、抗菌药物联用及机械通气是造成细菌产ESBLs的危险因素.结论 连续使用抗菌药物或使用不当易造成细菌产ESBLs,应及时加强肺炎克雷伯菌中产ESBLs及其对抗菌药物耐药性的检测.     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药性分析

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及对13种抗生素的耐药性。方法收集2005～2007年分离出的216株肺炎克雷伯菌,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,用纸片扩散确证实验检测超广谱β-内酰胺酶。结果共检出产ESBLs菌68株,检出率为31.5%。产ESBLs菌对头孢类抗生素高度耐药,对亚胺培南高度敏感(100%),对头孢西丁,头孢哌酮-舒巴坦,哌拉西林-他唑巴坦等的耐药率较低。结论医院产ESBLs菌的阳性率较高,应加强检测,控制ESBLs的传播,根据药敏结果合理选用药物。     

质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的表达及对耐药性的影响

目的 研究质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的基因表型及耐药性。方法根据美国临床实验室标准协会（CLSI）的标准,用琼脂稀释法检测MIC值和K-B法确证ESBLs,利用3-氨基苯酚硼酸对AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）的抑制作用检测肺炎克雷伯菌的AmpC酶表型;用基因芯片技术及聚合酶链反应（PCR）检测ESBLs与AmpC酶的基因型。结果 DHA型AmpC酶肺炎克雷伯菌同时具有产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）为94.2%,以DHA＋TEM＋SHV的基因表型最多38.3%;AmpC酶肺炎克雷伯菌的MIC50均〈0.25μg/ml、MIC90均〈0.5μg/ml,该类菌对头孢他啶的耐药率（85.7%）高于对头孢噻肟的耐药率（60.0%）,但MIC50和MIC90基本相同;34株产酶菌的耐药基因经质粒接合试验,分别有14株接合成功,5株在头孢噻肟和头孢西丁两种选择性平皿培养基中同时接合成功,2株在和头孢西丁平皿培养基中接合成功,7株在头孢噻肟平皿培养基中接合成功。结论 解放军总医院质粒介导的DHA型AmpC酶,在肺炎克雷伯菌中以DHA＋TEM＋SHV的基因表型为主,同时具有ESBLs占94.1%;41.2%的可以将耐药质粒结合给大肠埃希菌。     

温州地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因型研究

目的 研究温州地区分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的基因型.方法 随机挑取经全自动微生物分析仪鉴定的产ESBLs肺炎克雷伯菌35株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌29株;用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸和头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸双纸片扩散法对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,采用聚合酶链反应(PCR)法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBLs基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别,同时采用PCR法检测整合酶基因.对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 47株经双纸片扩散法确定为ESBLs阳性株中,经仪器法确定为阳性的为35株,仪器法的敏感性为73.4%;在17株经双纸片法确定为ESBLs阴性的菌株中,经仪器法确定为ESBLs阴性的有12株.仪器法的特异性为70.1%;TEM型、SHV型和CTX-M型阳性率分别为90.0%、86.7%和90.0%;整合酶基因阳性率为93.3%,经测序.所有TEM型为TEM-1 ESBLs;26株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12的有16株、SHV-11的有6株、SHV-2的有2株及SHV-Ⅰ型2株,在27株CTX-M型中,CTX-M-14型有18株、CTX-M-15型9株.结论 温州地区肺炎克雷伯菌临床分离株的ESBLs基因主要为CTX-M型和SHV型,CTX-M-14和SHV-12是主要的基因型.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因的研究

目的研究肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的存在形式及其基因类型和转移方式。方法利用CLSI纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs和AmpC酶,基因芯片技术和序列分析测定两种酶基因的类型,接合转移实验了解肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药基因转移方式。结果在对头孢西丁不敏感的72株肺炎克雷伯菌和20株产酸克雷伯菌中,以同时产生ESBLs和AmpC酶为主要形式,分别占54.2%和75.0%;单产ESBLs分别为22.2%和25.0%,肺炎克雷伯菌中单产AmpC酶占12.5%;肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中的AmpC酶基因绝大多数为DHA型(测得DHA-1型基因),ESBLs则以SHV型为主(测得SHV-12型),它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。     

肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶的基因型研究

目的检测质粒AmpC酶的基因型及耐药特性,指导临床合理使用抗菌药物,减少耐药菌株的流行及传播。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院细菌室2004年1-12月,非重复分离肺炎克雷伯菌218株,改良三维试验筛选产AmpC酶菌株,多重PCR和基因测序检测质粒AmpC酶基因型别,琼脂稀释法检测其对15种抗菌药物的最低抑菌浓度。结果改良三维试验检出13株AmpC酶,检出率为5.96%,经多重PCR测定,7株菌约在405 bp出现阳性条带,经基因测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%;7株质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌对头孢西丁、头孢唑林、头孢呋辛及酶抑制剂联合制剂阿莫西林/克拉维酸全部耐药,对其他头孢类、单环β-内酰胺酶类、含酶抑制剂药物、氨基糖苷类及氟喹诺酮类药物普遍耐药,只有亚胺培南对其显示较好抗菌活性,尚未见耐药菌株出现。结论同济医院肺炎克雷伯菌中检出DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%,产酶株显示多重耐药特性。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性变迁

目的了解大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对抗生素耐药性变迁. 方法采用纸片扩散确认试验和双纸片协同试验,药敏试验采用纸片扩散法. 结果 4年中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰氨酶(ESBLs)的发生率呈逐年上升的趋势.从1999～2002年大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌总的ESBLs菌的发生率分别为15.9%、14.8%、20.2%、29.6%;产ESBLs菌对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类交叉耐药,且呈逐年上升趋势;产ESBLs菌株70%发生于重症监护病房. 结论实验室应尽早开展ESBLs的检测,合理使用抗生素,有效控制ESBLs的传播和流行.     

大肠埃希菌、克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的研究本院3年中大肠埃希菌、克雷伯菌ESBLs的检出率及对常用抗生素的耐药情况。方法对山西医科大学第二医院2001～2003年分离的837株大肠埃希菌、216株克雷伯菌用标准纸片扩散确证法检测其ESBLs产生率；采用K-B法进行药敏检测。结果大肠埃希菌产ESBLs分离率为2001、2002、2003分别为12．27％、15．90％、30，85％；克雷伯菌产ESBLs分离率为2001、2002、2003分别为23．88％、28．81％、30．00％；产ESBLs株对头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹喏酮类耐药率均高于非产ESBLs菌株；未发现对亚胺培南耐药的菌株。结论近年来大肠埃希菌、克雷伯菌产ESBLs菌株逐年升高，应引起足够的重视，采取有效措施控制产ESBLs菌的感染。     

产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药性动态观察

目的动态观察并分析解放军第174医院2006年10月—2009年9月3年间产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的检出率及耐药性变化,为临床准确合理地进行治疗提供依据。方法采用美国临床实验室标准化委员会或研究所(NCCLS/CLSI)推荐的纸片扩散确证法检测ESBLs,纸片扩散法做药敏试验,WHONET5.3分析软件对药敏试验进行统计,并对产和非产ESBLs菌株的药敏试验数据进行对比分析。结果369株肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性共211株,占57.2%,且3年来阳性率逐年显著性增高。产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药率明显高于非产ESBLs菌株,且具有多重耐药性。结论该院肺炎克雷伯菌产ESBLs率逐年升高,治疗时应考虑首选亚胺培南。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶检测

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产质粒β-内酰胺酶的类型、检测方法及耐药性. 方法用NCCLS确证试验检测超广谱β-内酰胺酶,根据表型、纸片协同试验及头孢西丁三相试验检测AmpC酶. 结果 835株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,共检测出产超广谱β-内酰胺酶菌株220株,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总ESBLs发生率为26%;根据头孢西丁三相试验结果,表现为产AmpC酶的菌株共有36株,检出率为4.31%,表型鉴别高产AmpC酶,表现为产AmpC酶的菌株共有37株,检出率为4.43%,与头孢西丁三相试验符合率为97.3%;纸片协同试验表现为产AmpC酶的为32株,检出率为3.83%,与头孢西丁三相试验符合率为88.9%. 结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶为主;表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简便,易于在临床实验室中推广应用.     

Frequency of Beta-Lactamase Antibiotic Resistance Genes in Escherichia Coli and Klebsiella pneumoniae

BackgroundThis cross-sectional study was performed on isolates of Klebsiella pneumoniae, and E.coli from clinical specimens of patients admitted to Sayyad Shirazi Hospital by census sampling method in 2019. Antibiogram testing was performed using the disk diffusion method as defined by the Clinical and Laboratory Standards Organization for performing this test. Finally, the abundance of genes was evaluated by PCR using specific primers. Frequency, percentage, mean±SD were used to describe the data. Chi-square and Fisher''s exact tests were used to compare the presence and absence of the studied genes alone and in the presence of each other.ResultThis study was performed on 130 positive samples, isolated from 32 (24.6%) males and 98 (65.4%) females with a mean age of 43.78 ± 21.72. From the total number of 130 isolates, 84 (64.6%) consisted of E.coli, and 46 (35.4%) were Klebsiella. Most of the cultures were urine and vaginal (61.5%). The highest antibiotic resistance in isolates was cephalexin and cefazolin (67.9% in E.coli & 63% in Klebsiella). Colistin was identified as the most effective antibiotic (100%) in both. AMPC extendedspectrum β-lactamase genes were present in 40 (30.8%) isolates. The highest frequency about the gene pattern of AMPC positive β-lactamase bacteria was correlated to DHA, FOX, and CIT genes, while none of the samples contained the MOX β-lactamase gene. E.coli and Klebsiella beta-lactamase-producing AMPC isolates were also significantly correlated with antibiotic resistance to the cephalosporin class (P <0.05).ConclusionThis study indicated a high percentage of resistance to third and fourth generation cephalosporins. Hence, careful antibiogram tests and prevention of antibiotic overuse in infections caused by AMPC-producing organisms and screening of clinical samples for the resistance mentioned above genes and providing effective strategies to help diagnose and apply appropriate treatments and change antibiotic usage strategies can partially prevent the transmission of this resistance.     

广州地区大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶基因分型的研究

目的 对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌(ECO)CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株进行耐药基因分型,从而调查广州地区目前临床分离菌对抗菌药物的耐药性.方法 收集广州地区9所医院临床分离所获产ESBLs肺炎克雷伯菌(KPN)和ECO CTX-M型菌株,应用纸片扩散筛选法和纸片扩散确证法对菌株进行确认,然后用PCR方法对ESBLs进行基因分型.结果 92株产ESBLs ECO,对氨苄西林、哌拉西林和头孢呋辛均高度耐药,耐药率分别为97.5%、89.5%和89.5%;42株产ESBLs KPN对氨苄西林(100.0%)和哌拉西林(100.0%)也呈高度耐药;PCR及测序结果显示,CTX-M-1群阳性株包括ECO 7株、KPN 9株,阳性率分别为7.6%和21.4%,基因型分布在ECO为CTX-M-3、CTX-M-15和CTX-M-55型,而在KPN为CTX-M-3和CTX-M-15型.结论 广州地区9所医院临床分离的134株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对青霉素类和头孢菌素类抗菌药物的耐药率均达到很高水平,并且在广州地区首次分离获得CTX-M-55型耐药菌株.     

45株肺炎克雷伯菌下呼吸道感染的耐药分析

目的了解肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的发生率和耐药性,预防医院感染的暴发流行. 方法收集2003年3月～2004年1月,确诊为肺炎克雷伯菌下呼吸道感染的住院患者的临床资料,进行回顾性分析. 结果产ESBLs细菌总检出率为55.6%,主要分布神经外科、神经内科、胸外科;产ESBLs菌株,除亚胺培南/西司他丁敏感率为95.5%哌拉西林/他唑巴坦敏感率41.7%外,其他16种抗菌药物的耐药率高达70.4%～100.0%,非产ESBLs菌株除头孢曲松、亚胺培南/西司他丁外,仅氨苄西林的耐药率为93.3%,其余15种抗菌药物的耐药率为6.7%～44.4%;产ESBLs菌株可引发医院感染,同时大量第三代头孢菌素、激素的使用是造成耐药的主要原因,经卡方检验,P＜0.01. 结论合理应用抗菌药物,严格执行消毒、隔离制度,对降低细菌的产酶率,预防医院感染的暴发流行非常重要.