激光共聚焦扫瞄显微镜检测急性白血病骨髓基质细胞Cx43表达

目的 观察急性白血病骨髓基质细胞上connexin43蛋白的表达以及GJIC功能.方法 体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用激光共聚焦扫瞄显微镜观察二者Cx43表达的变化;采用荧光漂白恢复技术比较二者之间GJIC功能的差异.结果 正常及急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达的像素密度分别为(81.04±8.84)%和(34.10±17.91)%,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减弱.     

急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间通讯的改变

目的 观察急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间隙连接蛋白43 (connexin43, Cx43)表达的变化及通讯功能的改变.方法 体外培养初发急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的与正常人的骨髓基质细胞,采用免疫细胞化学方法观察三者之间Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较三者之间间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication, GJIC)功能的差异.结果 正常人、急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的骨髓基质细胞上Cx43表达的阳性率分别为(88.0±3.5)%、(12.0±2.4) %和(52.0±3.1) %;基质细胞上Cx43蛋白的光密度值分别为(175.08±8.34)、(45.42±3.71)及(94.33±7.20);染料传输的细胞数分别为(9.20±0.35)、(1.84±0.33)和(4.07±0.53).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常人及化疗后完全缓解急性白血病骨髓基质细胞明显减弱.     

腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰对骨髓基质细胞功能的影响

目的　通过腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs) ,探讨基因修饰对BM SCs主要功能的影响。方法　以CTLA4Ig 重组腺病毒转染BMSCs,通过测定粘附于BMSCs层的3 H TdR标记CD34+ 细胞的cpm值 ,观察基因修饰对其粘附力影响 ;通过观察骨髓基质细胞支持CD34+ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数 (colonyformingcell,CFC)的变化 ,评价基因修饰对BMSCs支持CD34+ 细胞扩增能力的影响。结果　转染组与对照组BMSCs对CD34+ 细胞的粘附力及支持CD34+ 细胞扩增的能力均无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　适当条件下 ,腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰BMSCs不影响其对CD34+ 细胞的粘附力及支持CD34+ 细胞扩增的能力     

Cx43介导GJIC与mTOR在胃癌组织中表达及意义

目的:探讨连接蛋白43(Cx43)介导的细胞间隙连接(GJIC)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在胃癌组织中的表达情况及意义.方法:利用免疫组化和qRT-PCR技术联合检测60例胃癌组织及正常胃黏膜组织中Cx43及mTOR的表达情况及其与临床病理参数的关系.结果:在胃癌组织中Cx43 mRNA及蛋白的表达均低于正常...     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能的研究

目的：研究急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接的功能方法：体外培养正常（正常对照组）及急性淋巴细胞白血病（急淋组）原代骨髓基质细胞,采用细胞免疫组化法及计算机灰度检测观察两组之间Connexin 43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较两组之间缝隙连接细胞间通讯（GJIC）功能的差异。结果：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞Connexin 43的表达较正常骨髓基质细胞明显减低,GJIC功能减弱。结论：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能下降可能与白血病骨髓造血微环境功能异常有关。     

Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞神经元样分化中作用的研究

【立论依据】 在神经系统的发育和修复过程中,神经元间的细胞通讯在细胞的静息、增殖、分化和凋亡过程的发生发展中发挥着重要作用。细胞间通讯有缝隙连接、膜表面分子接触通讯和化学通讯三种方式,而缝隙连接(GJ)是细胞间直接通讯的唯一方式。缝隙连接蛋白(connexin)是GJ结构和功能的基础,在缝隙连接蛋白家族中,Cx43在中枢神经系统的发育过程中发挥重要作用。功能性缝隙连接(GJIC)是通过缝隙连接在相邻细胞间传递氨基酸、离子、小分子等的一种通讯方式。研究表明,神经生长因子(NGF)可以促进Cx43磷酸化,同时可以诱导嗜铬细胞瘤PC12细胞分化而产生与交感神经元相似的神经元。但是Cx43形成的功能性缝隙连接(GJIC)在NGF诱导PC12细胞分化中的作用尚不清楚。因此,本研究拟阐述Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞分化中的作用。 【设计思路】 本实验拟构建Cx43稳定转染的PC12细胞系,并检测Cx43形成的GJIC的功能。 NGF诱导PC12细胞和Cx43稳定转染的PC12细胞,分析Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞神经元样分化过程中的作用,为神经损伤和修复提供新的研究靶点。 【实验内容】 (1)构建Cx43稳定转染的PC12细胞系;(2)实验分组:NGF诱导PC12细胞组,NGF诱导Cx43稳定转染的PC12细胞组,NGF诱导PC12细胞组+缝隙连接抑制剂(CBX),NGF诱导Cx43稳定转染的PC12细胞组+CBX;(3)形态学观察和NES免疫荧光细胞化学染色检测细胞分化率;(4)Dye Coupling检测Cx43形成的GJIC。 【材料】 PC12细胞;NGF;Cx43真核表达质粒;Cx43引物和抗体;CBX;NES单克隆抗体;FITC-IgG。 【可行性】 本研究前期研究工作通过形态学观察及Image软件测量显示在一定范围内,NGF量的增加可以有效提高PC12细胞的分化水平,课题组成员熟练掌握相关实验的方法和技术;研究室能提供相关的仪器和材料。实验思路清晰,实验过程明确。 【创新性】 本研究应用NGF诱导PC12细胞分化模型,探究Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞分化过程中的作用,从而为神经损伤和修复提供新的研究依据和调控靶点。     

上调白血病骨髓基质细胞GJIC功能对Jurkat细胞药物敏感性的影响

目的 观察上调白血病骨髓基质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能对共培养的人急性淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)细胞药物敏感性的影响.方法 体外培养白血病骨髓基质细胞,转染Cx43基因,罗氏黄染料传输法检测转染后骨髓基质细胞的GJIC功能变化;将Jurkat细胞与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养,观察共培养的Jurkat细胞对化疗药物甲氨蝶呤(MTX)药物敏感性的改变.结果 转染Cx43基因的白血病骨髓基质细胞的GJIC功能明显增加;与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞在MTX作用下的存活率(61.3±3.24)%较未转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞(82.4±3.12)%明显下降;与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞在MTX作用下的凋亡率(48.1±3.78)%较与未转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞(18.5±3.43)%明显增加,差异有统计学意义(P<0.01).结论 上调白血病骨髓基质细胞GJIC功能能够增加共培养的Jurkat细胞对化疗药物的敏感性.     

急性白血病骨髓基质细胞表达SDF-1异常

白血病骨髓造血微环境异常对白血病细胞具有庇护及促增殖作用,其异常的持续存在可能是白血病细胞逃避药物杀伤形成微小残留病并增殖复发的根源[1,2].基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1, SDF-1)在白血病细胞的迁移定位、增殖及维持生存等方面发挥重要作用.为了解急性白血病患者骨髓微环境是否存在SDF-1异常及治疗后是否存在持续异常,我们检测了初诊及完全缓解的急性白血病患者骨髓基质细胞培养上清的SDF-1水平.     

急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制.方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量.结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05).结论急性白血病存在造血微环境异常.     

正常骨髓基质细胞对K562细胞凋亡敏感性的影响

目的观察正常人骨髓基质细胞对白血病敏感细胞株K562细胞凋亡易感性的影响,并研究其作用机制。方法建立正常人骨髓基质细胞的体外培养体系及其与K562细胞共培养的体系;流式细胞仪检测Annexin V阳性的早期凋亡细胞;电镜下观察凋亡形态学改变;流式细胞仪检测bcl-2,活化的胱冬氨酸蛋白酶（caspaae）-3的表达变化。结果与单独K562细胞培养相比,与正常人骨髓基质细胞共培养的K562细胞,分别经阿糖胞苷作用后,共培养体系下其凋亡率下降,电镜下细胞凋亡的形态改变减少或消失,而且bcl-2蛋白表达上调,活化的caspase-3表达减弱。结论正常人骨髓基质细胞可促进白血病细胞株K562细胞的增殖,降低K562细胞对阿糖胞苷的凋亡易感性,其作用机制中包括影响凋亡相关蛋白bcl-2和caspase-3的表达。     

Ad.ANG体外转染骨髓基质细胞表达产物对血管内皮细胞生长的促进作用

目的:研究Ad.ANG转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的转染效率、产物表达和其表达产物的促血管内皮细胞生长作用。方法:体外培养扩增SD大鼠BMSCs,通过转染β-半乳糖苷酶基因评价腺病毒转染BMSCs的转染效率;通过Western印迹分析和ELISA检测血管生长素(ANG)在细胞内表达和细胞外分泌情况;通过细胞计数的方法研究转染Ad.ANG后的BMSCs培养上清的促内皮细胞生长作用。结果:腺病毒对于BMSCs具有很高的转染效率,转染倍数为50时,转染效率>95％,而且对细胞生长没有影响。Ad.ANG转染BMSCs后可以获得很高的表达水平,第7天达表达高峰[(1 086.808±83.301 pg/ml],15 d后仍可检测到蛋白表达。含有ANG的培养上清与对照组相比具有明显的促血管内皮细胞生长作用(P相似文献   

腺病毒介导的BMP-2基因转染兔骨髓基质干细胞及对其增殖、成骨分化的影响

目的: 用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),研究转染对其增殖、成骨分化的影响.方法: 用Ad-BMP-2转染兔BMSCs,利用免疫细胞化学法、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP-2的表达.流式细胞仪观察细胞周期的变化,分析转染对BMSCs增殖的影响.酶标法检测ALP活性;免疫荧光检测骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原表达,分析转染对BMSCs成骨分化的影响.结果: BMP-2基因在转染细胞内mRNA水平和蛋白水平均有较高表达,蛋白印迹法检测到培养液中有BMP-2蛋白阳性表达.流式细胞仪检测G1期、S期细胞比例与空白对照组无差异.ALP活性明显增高,骨钙素、Ⅰ型胶原免疫荧光检测,见胞浆内有大量显绿色荧光的阳性物质.结论: 在腺病毒载体介导下BMP-2基因成功导入BMSCs,细胞增殖未因转染而受影响,并可持续表达基因产物,向成骨细胞分化.     

不同来源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响

目的观察正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响。方法收集与正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境共培养10d的Jurkat细胞,观测Jurkat细胞增殖、细胞周期分布、凋亡、分化及DNR摄药量的改变。结果白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞黏附、趋化及降低摄药量的作用强于正常骨髓基质细胞微环境;抑制增殖及促分化作用弱于正常骨髓基质细胞微环境。白血病骨髓基质细胞微环境抑制Jurkat细胞凋亡,而正常骨髓基质细胞微环境促进其凋亡。结论正常骨髓源基质细胞微环境较白血病源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞具有更强的促进凋亡、分化及抑制增殖的作用,增加Jurkat细胞对DNR的敏感性。     

脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

目的：用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法：构建的重组载体鉴定后，以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48 h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果：限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX-1基因；克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致；质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳；细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX-1基因表达。结论：成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体；通过优化转染条件提高了pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

Direct contact with bone marrow stromal cells promotes the invasions of SHI-1 leukemia cells

Background Interactions of tumor cells with the microenvironment were deemed to promote the tumor invasion and metastasis.CXC chemokine receptor 4 (CXCR4) and extracellular matrix metalloproteinase ind...