LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。如ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

培养细胞超薄切片制备方法改进

目的探讨培养细胞超薄切片的制备方法。方法取肝癌患者手术标本进行原代培养后分为常规组和改良组,比较2组培养细胞的超微结构特征。结果常规组细胞结构模糊,有大量细胞自溶、皱缩和挤压现象。改良法超薄切片显示细胞结构清晰可见,自溶及皱缩现象少。结论改良法能更好地显示细胞的超微结构,是制备培养细胞超薄切片的好方法。     

自体LAK细胞回输疗法对慢性乙型肝炎患者NK及LAK细胞活性的影响

目的探讨自体ＬＡＫ细胞回输疗法的作用机制。方法用ＭＴＴ比色法检测２９例慢性活动型乙型肝炎（ＣＡＨ）患者及１４例正常人外周血ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性；检测２１例自体ＬＡＫ细胞回输治疗前、后ＣＡＨ患者外周血ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。结果ＣＡＨ患者ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性较正常人低，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）；治疗后较治疗前ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性增高，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论自体ＬＡＫ细胞回输疗法治疗ＣＡＨ有效，其作用机制之一是提高了ＣＡＨ患者的ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。     

自体LAK细胞制备及其在临床上的应用

以基因重组白细胞介素Ⅱ（ｒＩＬ－２）诱导患者自体ＬＡＫ细胞。使用ＬＡＫ／ｒＩＬ－２治疗３例经病理或临床确诊为妇科晚期恶性肿瘤患者。ＬＡＫ细胞（２．２～３．１）×１０９／ｒＩＬ－２１．６×１０６单位治疗一个疗程。治疗前后用Ｂ超、Ｘ线平片观察肿块变化。结果显示，１例癌肿块明显缩小（ＰＲ），１例肿块缩小（ＭＲ），１例肿块无改变（ＳＤ）。患者主观症状改善，生活质量提高。除１例病人在治疗时出现一过性发热外，未见其他毒副作用。     

LAK细胞过继免疫治疗肺癌的初步观察

应用人同种异体ＬＡＫ细胞治疗１３例肺癌患者，观察表明：１３例患者应用ＬＡＫ细胞后生活质量有所提高，癌性疼痛减轻，其中４例伴血性胸水者应用ＬＡＫ细胞胸腔注射后胸水明显减少。说明ＬＡＫ细胞过继免疫治疗肺癌不仅可改善症状，而且还可有效控制胸水积聚。     

SD大鼠自体平滑肌细胞的获取和体外培养

目的建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的方法.方法取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增.倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗α-SMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞.结果平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现"峰-谷"样生长特征.用抗α-SMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91.3±5.2)%.结论成功建立了从SD大鼠的输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型.     

LAK细胞对人肝癌细胞及乙型肝炎病毒的杀伤活性

由健康人外周血制备的ＬＡＫ细胞加ｒＩＬ－２体外培养时间分别为４天和７天，其对人肝癌细胞的杀伤活性分别是５８．７％及４３．２％；其对人肝癌细胞所分泌的ＨＢＶ表面抗原和ｅ抗原也有一定的杀灭活性；结果揭示，ＬＡＫ细胞对与肝炎病毒密切相关的肝癌治疗有着潜在的临床意义。     

LAK细胞的抗白血病效应及其影响因素的研究

本实验研究了LAK细胞/IL—2过继输入对L_(615)白血病的治疗作用并用细胞毒试验研究了影响LAK细胞/IL—2临床治疗急性白血病的若干因素。实验结果表明,LAK细胞对急性白血病有治疗作用;急性白血病病人外周血单个核细胞诱生的LAK细胞活性极低,其血清对LAK细胞活性有抑制作用;用同种异体的正常人外周血单个核细胞或胎儿脾脏单个核细胞、胸腺细胞诱生的LAK细胞对急性白血病细胞有较强的杀伤活性,是临床治疗急性白血病的可靠的LAK细胞来源。     

人脑海马内部微血管三维构筑的研究

本文收集广州地区６个月胎儿至６岁儿童新鲜大脑标本６３例（１２６侧），其中５例作脑血管有机玻璃单体铸型，３５例用碱性磷酸酶染色（包括７例墨汁灌注后复染），其余用于墨汁灌注法，在光镜暗视野全景放大观察和日立Ｓ－４５０扫描电镜观察，较完整地显示人脑海马内部血管动脉－微动脉－毛细血管前括约肌－毛细血管－微静脉－小静脉连续性立体构筑。此外还观察到微血管形态特征及微血管间存在多种吻合。     

胎脾、胸腺LAK细胞制备及治疗晚期肿瘤患者初试

本文报道了一种从人胎儿脾脏和胸腺细胞制备LAK细胞的方法。经IL-2激活后LAK细胞的NK活性由16.2±6.7％提高到32.4±17.6％。用此LAK细胞治疗了14例患进展期转移癌的患者。每例患者经外周静脉输注LAK细胞4～5次,每次接受的细胞剂量为2～23×10~8LAK细胞。结果表明,这一疗法是安全有效的。14例患者中有11例在治疗后4～23个月病情稳定,其中2例局部转移癌灶完全消失,另1例缩小50％。另外3例治疗期间病情继续进展。     

慢性乙型肝炎自体LAK细胞回输前后IL—2变化的意义

目的探讨ＬＡＫ细胞治疗慢性乙型肝炎的机制。方法应用生物学方法检测ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性慢乙肝患者治疗前后ＩＬ－２水平。结果４０例患者治疗后ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阴转率分别为４０．４％和６８．６％。治疗前ＩＬ－２水平低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后有显著提高（Ｐ＜０．００５）。依ＨＢＶ标记阴转情况分组：１组ＨＢｅＡｇ（－）、ＨＢＶＤＮＡ（－）１６例；２组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（－）９例；３组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（＋）１５例。１、２组治疗前ＩＬ－２均低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后均明显提高（Ｐ＜０．００５，Ｐ＜０．０１）。３组治疗前ＩＬ－２与对照组比较无明显降低（Ｐ＞０．０５），治疗前后无显著差异（Ｐ＞０．０５），治疗后ＩＬ－２比对照组低（Ｐ＜０．０２）。结论ＩＬ－２水平明显降低的慢性乙型肝炎采用ＬＡＫ细胞回输治疗ＨＢＶ标记阴转率高。     

LAK和TIL细胞的表型测定

应用多种抗人淋巴细胞的单克隆抗体和流式细胞仪，分析用ＩＬ－２诱生患者淋巴细胞２周形成的ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞的表型。结果：ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（８５．０±２．５３）％，ＣＤ＿（１６）细胞为（８．３±１．０）％，证实ＬＡＫ细胞是以Ｔ细胞为主，包括有ＮＫ细胞的混合群体。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占８１．４８％，因而推测ＬＡＫ细细胞中，抗原特异性和ＭＨＣ限制性的ＣＴＬ细胞占有很大比例。ＴＩＬ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（６４．７±９．７）％，ＣＤ＿（１６）￣＋细胞为（１．６±０．２）％，Ｌｅｕ７￣＋细胞为（６．８±１．１）％。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占ＣＤ＿８￣＋细胞的８６．７６％，证实ＴＩＬ细胞主要是Ｔ细胞，ＮＫ细胞极少。     

淋巴因子对人PBMNC的LAK细胞形成、增殖和细胞毒作用的影响

应用乳酸脱氢酶释放法对重组白介素２，粗制天然白介素２，重组肿瘤坏死因子和天然免疫活性肽等淋巴因子诱导人ＰＢＭＮＣ为ＬＡＫ细胞以及ＬＡＫ细胞对靶细胞（人外周血淋巴细胞，人食管癌１０９细胞株和人红白血病细胞株＿（５６２）的细胞毒作用分别于培养的第４ｄ和第７ｄ进行了检测。结果显示：①四个配伍组和一个重组白介素２组的多克隆ＬＡＫ细胞攻击溶解１０９细胞株和Ｋ＿（５６２）细胞株的水平波动子２８％和６６％之间，中位数为４７％，而对正常人外周血淋巴细胞均无细胞毒作用；②重组白介素２和粗制天然白介素２配伍培养ＬＡＫ细胞的增殖协力约高于重组白介素２和重组肿瘤坏死因子组，以及重组白介素２和免疫活性肽组增殖协力的３倍，③在诱导ＬＡＫ细胞的过程中其增殖量和其细胞毒活性可以不同步。建议临床上治疗晚期肿瘤病人除用ＬＡＫ细胞和重组白介素２外，首先选用天然白介素２。     

MTT法检测AU14-1介导LAK细胞的细胞毒效应

目的 应用MTT比色法研究抗小鼠宫颈癌单克隆抗体(McAb)AU14-1介导淋巴因子激活的杀伤细胞Gym-phokine activated killercells，LAK)对靶肿瘤细胞的体外细胞毒作用。方法 通过检测不同数量小鼠宫颈癌U14细胞与加入四甲基偶氮唑盐{[3-(4，5-dimethylthiazof-2-y1)-2，5-diphenyl terazolium bromide]，MTT}后形成甲质颗粒所产生的不同吸光度(A)值，建立测定的线性关系。进而应用MTT比色法研究McAb AU14-1介导LAK细胞的体外细胞毒作用。结果 当U14细胞在10～10^5个／孔以内时，活细胞数与A值呈直线相关；LAK细胞对于经AU14-1处理的肿瘤细胞的杀伤率显著高于未经AU14-1处理的肿瘤细胞(P＜0．01)。结论 McAb AU14-1可加强LAK细胞对靶细胞的溶解作用。提示特异性宫颈癌单克隆抗体AU14-1介导的细胞毒在治疗宫颈癌中可能是一种有潜在价值的方法。     

PHA胸导管来源诱生的LAK细胞的作用

利用胸导管引流治疗哮喘病的机会,研究了PHA在rIL-2诱导胸导管淋巴细胞成为LAK细胞中的作用。结果表明:PHA和rIL-2共同诱导TDL2周,细胞数量扩增约34倍。同时明显促进了DL的~3H-TdR和~3H-Leucine的参入,较对照组有明显差异(P<0.01)。其中rIL-2 100～1000U/ml和PHA组作用最佳,但PHA和rIL-2的协同作用持续时间短,第6d即开始下降,而且PHA参与诱导的TDL-LAK细胞的杀伤活性有所下降。