LC-MS/MS方法同时测定人血浆和尿液中乌头碱与次乌头碱的含量

 目的 建立同时测定血浆和尿液中乌头碱（aconitine）与次乌头碱（hypaconitine）含量的LC-MS/MS分析方法。 方法 采用Phenomenex Gemini C₁₈柱 (4.6 mm×150 mm,5 μm) 为色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸（70∶30）为流动相,流速为0.5 mL·min-1,以乙醚提取血浆和尿液中乌头碱与次乌头碱。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过API3200三重四级杆串联质谱仪,采用多反应离子监测（MRM）对乌头碱(m/z 646.3→105.2)与次乌头碱(616.3→105.2)进行测定。结果 生物样品中乌头碱在0.5~40 μg·L-1内、次乌头碱在0.25~25 μg·L-1内线性关系良好;乌头碱与次乌头碱最低定量限分别为0.5和0.25 μg·L-1,在尿液中的平均提取回收率76.54%~81.25%,血浆中的平均提取回收率73.22%~80.31%;日间和日内精密度均小于15%。结论 本方法简便、灵敏可靠,适用于血浆、尿液中乌头碱与次乌头碱的分析。     

配伍对乌头汤中乌头碱型生物碱的影响

目的:考察在乌头汤中制川乌配伍后对乌头碱型生物碱的影响。方法:采用HPLC-ESI-MS正离子检测模式分析制川乌单煎液及乌头汤中乌头碱型生物碱类成分,对各成分的MS2和MS3谱图进行解析,比较制川乌单煎液与乌头汤中乌头碱型生物碱类成分的区别。结果:制川乌单煎液及乌头汤中检出36个共有成分,制川乌单煎液中有13个成分在乌头汤中未检出,分别为10-羟基焦乌头碱,10-羟基焦乌头原碱,10-羟基焦中乌头原碱,中乌头碱,10-羟基次乌头次碱,10-羟基焦次乌头碱,去氧乌头碱,焦去氧乌头原碱,去氧中乌头次碱,去氧中乌头原碱,3,13-去氧乌头原碱,3,13-去氧焦乌头碱,3,13-去氧焦乌头原碱。乌头汤中10-羟基中乌头原碱在制川乌单煎液中未检出。结论:制川乌配伍后,大量乌头碱型生物碱类成分丢失,成分区别明显。建立的HPLC-ESI-MS可有效分离各种乌头碱型生物碱类成分,提供了各组分的相对分子质量和结构信息。     

LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中4种黄连生物碱的含量

目的: 建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱含量的方法。 方法: 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相乙腈-水(含2 mmoL乙酸铵和0.05%甲酸),流速0.3 mL·min^-1,柱温30 ℃,以士的宁为内标,血浆样品用4倍量乙腈萃取并沉淀蛋白,用电喷雾离子化(ESI)和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测,选择离子对为药根碱m/z 338.227→m/z 322.824;黄连碱m/z 320.244→m/z 291.996;巴马汀:m/z 352.243→m/z 308.016;小檗碱:m/z 336.227→m/z 277.981;士的宁:m/z 335.264→m/z 184.017。 结果: 药根碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的线性范围分别为1.01~505,1.06~530,1.13~565,1.07~535 μg·L^-1;定量下限分别为0.539 2,0.646 3,0.761 5,0.197 1 μg·L^-1; 平均回收率分别为103.90%,101.50%,101.58%,115.54%;日内和日间精密度、稳定性的RSD均<10%。 结论: 建立的方法准确、灵敏、特异、简便,适用于大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的同时测定及药动学研究。     

UPLC-MS/MS法同时测定百合知母汤中10种成分的含量

目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定百合知母汤中菝契皂苷元、王百合苷C、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷、王百合苷A、王百合苷B、知母皂苷BⅢ、异芒果苷、知母皂苷BⅡ的含量。方法 分析采用Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm, 2.7μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.998 1),平均加样回收率95.65%～106.5%,RSD 1.2%～5.5%。结论 该方法准确、灵敏、快速,可用于百合知母汤的质量控制。     

LC-MS/MS测定16种市售中药制剂中8种乌头类生物碱的含量

目的采用LC-MS/MS方法测定16种含乌头属中药制剂中8种乌头类生物碱含量。方法以90%甲醇-水(水相含0.1%甲酸和2.5 mmol/L醋酸铵水溶液)为流动相,Agilent Zorbax SB-C18色谱柱分离,采用ESI(+),MRM监测方法,对16种市售含乌头属中药制剂中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱,乌头碱、次乌头碱、新乌头碱,新乌头原碱、乌头原碱进行含量测定。结果上述8种生物碱的线性关系良好,精密度、重复性良好,加样回收率为95.3%~102.3%,不同含乌头属中药制剂中8种生物碱成分的含量差别较大。结论该方法快速、灵敏,可靠,可应用于对乌头属中药制剂的质量控制。     

LC-MS/MS测定正骨水中3种乌头类生物碱的方法研究

目的建立高效液相色谱-串联质谱法检测正骨水(九龙川、木香、海风藤、草乌等)中3种乌头类生物碱(乌头碱、次乌头碱和新乌头碱)的定量测定方法。方法样品经浓缩,乙醚提取,再经1%甲酸萃取,正己烷净化,用XTerraMSC18,5μm,2.1 mm×150 mm柱子分离,以乙腈-10 mmol/L醋酸胺(含0.1%甲酸)(35∶65)作为流动相,柱温35℃,体积流量0.25 mL/min,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测方式检测,外标法定量。结果在本实验条件下,乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的标准曲线及线性范围分别为:Y=47.374 2X-0.136 0(1.14～57.0 ng/mL,r=0.999 97);Y=78.384 6X-23.14(1.328～66.40 ng/mL,r=0.999 93);Y=66.887 4X-16.69(0.995～49.75 ng/mL,r=0.999 70);加样回收率均在80%～110%之间,回收及重复性的RSD均少于5%;最低检出质量浓度均为0.01 ng/mL。结论该方法操作简单,方法精密度较好、准确度较高,结果满意,可作为正骨水中乌头类生物碱的测定方法。     

LC-MS/MS同时测定左金丸和香连丸中6种生物碱的含量

目的:建立左金丸(黄连、吴茱萸)和香连丸(黄连(吴茱萸制)、木香)中6种生物碱含量的LC-MS/MS测定方法。方法:色谱条件:Phenomenex Luna C18柱(5μm,250 mm×4.60 mm);乙腈-水(4 mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸)为流动相,梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,MRM模式。结果:左金丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的平均回收率分别为101.0%,101.3%、101.2%、100.2%、99.6%、99.7%,RSD分别为1.1%、1.8%、0.98%、1.0%、1.3%、1.3%,香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和吴茱萸碱的平均回收率分别为101.6%、99.8%、101.9%、101.0%、101.3%,RSD分别为1.0%、1.9%、0.75%、1.1%、1.9%。结论:本方法可同时测定左金丸和香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点。     

HPLC法同时测定复方制剂中乌头类生物碱含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定复方制剂中乌头类生物碱含量的方法。方法：色谱柱为AgilentTc—C18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相A：乙腈一四氢呋喃（25：15）,流动相B：0．1mol／L乙酸铵溶液（每1000mL加0．7mL冰醋酸）,梯度洗脱,柱温25℃,流速0．8mL／min,检测波长235nm。结果：四种乌头类生物碱：苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、次乌头碱的分离度良好,各成份在进样量分别为0．066～0．827μg、0．065—0．815μg、0．053～0．662μg、0．066—0．827μg的范围内线性关系良好,r分别为0．9998、0．9998、0．9999、0．9999,在36h内稳定性良好。结论：本实验所确立的高效液相色谱法科学准确,简单快速,可用于构建复方制剂的多指标评价模式。     

HPLC同时测定附子乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)同时测定附子及其炮制品在不同提取溶剂中的乌头碱、中乌头碱及次乌头碱3种双酯二萜型生物碱含量的方法。方法:采用Agilent Eclipse plus C18柱(4.6mm×150mm,5μm),以乙腈和碳酸氢铵(10mmol/L,pH=9.8±0.2)作为流动相进行梯度洗脱;流速1mL/min;进样体积200μL;检测波长240nm;柱温30℃。结果:乌头碱、中乌头碱、次乌头碱分离良好,各成分在0.78-50.00μg/mL内均呈良好的线性关系(r0.999);平均加样回收率(n=6)为91.4-103.4%,RSD在2.41-4.20%。结论:本方法简便、准确、灵敏,可用于附子及其炮制品中乌头碱类化合物的提取以及定量分析,为附子及其炮制品的质量控制奠定基础。     

LC-MS/MS同时测定小鼠脑组织中7种神经递质含量

目的: 建立一种同时测定小鼠脑组织中7种神经递质的LC-MS/MS分析方法。方法: 小鼠脑组织加入4倍量冰冷的0.2%甲酸-水超声匀浆,匀浆液加入0.2%甲酸-乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液,加入内标,混匀后进LC-MS/MS分析。采用TSK Gel amide 80 (4.5 mm×150 mm,5 μm) 色谱柱,柱温35℃,流动相乙腈-6 mmol·L^-1甲酸铵水溶液(pH 5.5)(67.5:32.5),流速0.2 mL·min^-1,采用正离子多反应检测(MRM)模式进行扫描。通过动物试验验证LC-MS/MS的可靠性,并考察酸枣果肉对小鼠神经递质水平的影响。结果: 多巴胺(DA)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱(Ach)、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)的最低检测限均<0.1 μg·L^-1,精密度RSD分别为0.52%,0.71%,0.98%,0.35%,0.32%,0.46%,0.94%,准确度RSD分别为0.67%,0.46%,0.53%,0.72%,0.48%,0.59%,0.82%,均符合生物样品的分析要求。动物试验显示与空白组相比,小鼠给予多奈哌齐后,海马和皮层中乙酰胆碱水平极显著升高;而东莨菪碱则作用相反,给药后会降低脑内乙酰胆碱含量,与空白组相比,具有极显著差异。小鼠口服酸枣果肉后,脑内多种神经递质明显发生改变,且变化规律与阳性药物舒乐安定相同。结论: 建立的LC-MS/MS分析方法可应用于神经精神类药物的药理作用机制研究。     

HPLC-MS/MS法同时测定白头翁汤中13种成分及其配伍前后含量变化

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定白头翁汤中白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5、黑海常春藤皂苷A1、白头翁皂苷D、白头翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、秦皮素、秦皮甲素、秦皮乙素、黄柏碱、巴马汀、黄连碱、小檗碱的含量,并考察配伍前后其变化。方法 白头翁、白头翁汤、缺白头翁阴性汤50%甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLC?BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×50 mm, 1.7μm);流动相甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温24.5℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果 13种成分在各自范围内线性关系良好(R²>0.990 0),平均加样回收率94.4%～106.2%,RSD 1.1%～4.2%。在白头翁汤中,双糖类皂苷(白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5)、单糖类皂苷(白头翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、黑海常春藤皂苷A1、白头翁皂苷D)含量低于白头翁中,香豆素(秦皮素、秦皮甲素、秦皮乙素)含量高于缺白头翁阴性汤中,生物碱(小檗碱、黄柏碱)含量低于缺白头翁阴性汤中。结论 ...     

HPLC同时测定生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量

 目的建立同时测定血液、肝组织中新乌头碱(mesaconitine)、乌头碱(aconitine)、次乌头碱(hypaconitine)含量的HPLC分析方法。方法采用Welchrom C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.03%四丁基氢氧化铵(用冰醋酸调至pH9.74)(58∶42)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为230nm。结果生物样品中新乌头碱在0.077～23mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),乌头碱在0.083～25mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),次乌头碱在0.08～24mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9996)。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的回收率不低于83.6%。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的日内精密度和日间精密度分别在5.1%和9.3%以内。结论本方法简便、灵敏、准确,适用于血液、肝组织中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的分析。     

LC-MS/MS法同时测定金樱子中7种主要成分的含量

目的:建立同时测定金樱子中7种主要成分(蔷薇酸、原儿茶酸、没食子酸、木犀草素、山柰素、槲皮素和芦丁)含量的方法。方法:采用LC-MS/MS联用方法。结果:金樱子中的7种主要成分分别在给定的浓度范围内,各化合物的响应值与浓度间均呈现良好的线性关系,相关系数r在0.9954~0.9989之间。实验结果表明不同产地金樱子各成分含量方面存在差异。结论:该方法能够快速、灵敏、有效的测定金樱子中7种主要成分的含量,可用于金樱子的质量评价。     

RP-HPLC法同时测定黄连中四种原小檗碱型生物碱的含量

目的：建立用RP—HPLC技术同时测定黄连中小檗碱、巴马亭、黄连碱及药根碱等4种原小檗碱型生物碱含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。测定黄连药材中上述4种原小檗型生物碱的含量。结果：4种原小檗碱型生物碱的平均含量分别为：5．74％（RSD=1．7％）（n=9），1．33％（RSD=1．3％）（n=9），3．67％（RSD=2．8％）（n=9），0．95％（RSD=5．2％）（n=9）。结论：该方法可用于同时测定黄连中4种原小檗碱型生物碱的含量。且简便、准确、可靠、快速，并具重现性。     

RP-HPLC法同时测定黄连中四种原小檗碱型生物碱的含量

目的：建立用RP-HPLC技术同时测定黄连中小檗碱、巴马亭、黄连碱及药根碱等4种原小檗碱型生物碱含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。测定黄连药材中上述4种原小檗型生物碱的含量。结果：4种原小檗碱型生物碱的平均含量分别为：5．74%（RSD=1．7%）（n=9）,1．33%（RSD=1．3%）（n=9）,3．67%（RSD=2．8%）（n=9）,0．95%（RSD=5．2%）（n=9）。结论：该方法可用于同时测定黄连中4种原小檗碱型生物碱的含量,且简便、准确、可靠、快速,并具重现性。     

HPLC法同时测定乌头属不同药材4种生物碱的含量

目的:HPLC法同时测定乌头属药材附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿中乌头碱(AC)、次乌头碱(HA)、新乌头碱(MA)、苯甲酰新乌头原碱(BMC)的含量。方法:色谱柱:Phenomenex-ODS(250 mm×4.0 mm,5μm);流动相:乙腈-四氢呋喃(25∶15),梯度洗脱,流速:1.0 mL/min;检测波长:235 nm;柱温:30℃。结果:4种乌头类生物碱的线性范围分别为:0.0241～0.5211μg(r1=0.9995)、0.0168～0.3152μg(r2=0.9994)、0.0107～0.2674μg(r3=0.9994)、0.0122～0.2503μg(r4=0.9996);4种药材中4种生物碱的加样回收率范围分别为:附子:95.56～98.63%、川乌:98.83～100.47%、草乌:95.91～99.30%、雪上一枝蒿:95.99%～98.53%,RSD%≤4.0%。结论:乌头属4种药材4种生物碱含量差异较大,为临床疾病治疗防止中毒反应的发生提供了一定的参考依据。     

UPLC-MS/MS同时测定经典名方泽泻汤中6个成分的含量

目的 建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定泽泻汤中泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的方法。方法 泽泻汤按照经典名方自制,采用Agilent SB-C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min^–1,柱温为40 ℃,进样量为1 μL;质谱条件为电喷雾离子源（ESI）,正离子模式采集,多反应监测（MRM）方式进行定量。结果 15 min内泽泻汤中6个成分的色谱峰分离良好,泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ分别在8.20~409.90（r=0.999 3）、16.06~802.99（r=0.999 5）、14.47~723.49（r=0.999 9）、2.57~128.67（r=0.999 6）、2.85~142.66（r=0.998 5）、3.24~162.24 ng·mL^–1（r=0.999 8）线性关系良好;平均回收率为95.39%~102.53%,RSD为0.71%~2.33%,精密度、稳定性、重复性符合要求。结论 所建立的方法简便、快速、准确,可为泽泻汤的质量标准提升提供参考。     

LC-MS/MS同时测定四逆汤中11个有效成分

目的建立LC-MS/MS法同时测定四逆汤(生附子、干姜和炙甘草)中11个有效成分(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚)的量。方法四逆汤水提液在Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)上分离,流动相为乙腈-水(4 mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸),梯度洗脱;地西泮乙腈溶液作为内标。MS采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描。结果 11种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,平均回收率为95.4%¹03%。结论本研究建立的LC-MS/MS定量分析方法可靠准确、灵敏高,可用于四逆汤的质量控制方法。     

LC-MS/MS法同时测定护心口服液中11种成分

目的建立高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定护心口服液(甘草、黄芪、麦冬等)中苦参碱、氧化苦参碱、丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛、甘草苷、黄芪甲苷、桂皮醛、丹参酮ⅡA、麦冬皂苷D、鲁斯可皂苷元的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3μm);流动相水-甲醇(含0.05%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.4 m L/min;柱温25℃。结果 11种成分在各自范围内线性关系良好(r0.999 0),平均加样回收率96.66%~103.2%,RSD 1.4%~3.4%。结论该方法灵敏、可靠、准确,可用于护心口服液的质量控制。