HPLC测定新疆紫草不同部位中8种羟基萘醌的含量

建立同时测定新疆紫草Arnebia euchroma不同部位中左旋紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素等8种羟基萘醌含量的高效液相色谱法。采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),检测波长275 nm,流速1mL·min~(-1),柱温30℃。定量结果显示,新疆紫草各部位中主要成分含量差异较大,根皮含量最高,其次是根,再次是茎残基,根木质部和地上部分含量较低。本研究为确定紫草药用部位提供科学依据。     

一测多评法测定新疆紫草中主要萘醌类成分的含量

以β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁为内参物,测定新疆紫草中乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、α-甲基-正丁酰紫草素的含量,建立紫草中5种萘醌类成分的一测多评定量分析方法。采用高分辨LC-MS对含量测定的5个色谱峰进行鉴定。采用不同高效液相(HPLC)系统和不同色谱柱考察相对校正因子的耐用性,同时采用外标法与一测多评法对16批新疆紫草药材进行分析,并对含量测定结果进行比较。结果表明相对校正因子的耐用性良好,16批样品一测多评法与外标法所得结果无显著差异。所建立的含量测定方法可用于同时测定新疆紫草中5种萘醌类成分。     

新疆紫草中2条CYP450基因的干扰毛状根体系的建立及其影响研究

该研究依托新疆紫草悬浮细胞转录组数据库,以CYP76B74蛋白序列为搜索序列,挖掘了2条与紫草素生物合成下游途径相关的CYP450候选基因。构建了候选基因的干扰型毛状根并进行培养,测定了鲜重、干重、总萘醌含量、紫草素类化合物含量以及紫草素生物合成途径关键酶基因的表达量,初步探究了候选基因对新疆紫草毛状根的生长和紫草素合成产生的影响,并讨论了其影响紫草素合成的可能调控机制。通过本地Blast和系统发育分析,筛选出2条新疆紫草中与CYP76B74具有高同源性的CYP450候选基因(CYP76B75,CYP76B100),并构建了相应的干扰型毛状根。相比空载毛状根(RNAi-control),CYP76B75被干扰毛状根(RNAi-CYP76B75)和CYP76B100被干扰毛状根(RNAi-CYP76B100)的鲜重显著减少,而干重未受到影响,折干率显著增加。除β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁在3组毛状根中含量都很高外,紫草素、去氧紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、β-羟基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素以及总萘醌在3组毛状根中的含量高低均呈现一致规律:RNAi-CYP76B75RNAi-CYP76B100RNAi-control。其中,干扰CYP76B75表达后对β-羟基异戊酰紫草素合成的促进作用最显著,RNAi-CYP76B75中β-羟基异戊酰紫草素的含量为RNAi-control的11.7倍。实时荧光定量PCR结果显示,与RNAi-control相比较,RNAi-CYP76B75与RNAi-CYP76B100中AePGT基因的表达量无明显变化,CYP76B74与AeHMGR的表达量上调;此外,RNAi-CYP76B75中,CYP76B100的表达量下调,而RNAi-CYP76B100中,CYP76B75的表达量反而显著上调。结果说明CYP76B75与CYP76B100被干扰表达后,毛状根的生长受到了抑制,但却显著促进了其紫草素的合成,其可能通过上调新疆紫草毛状根中CYP76B74基因的表达量调控了紫草素生物合成。     

软紫草与硬紫草萘醌类化学成分的研究

目的:对软紫草与硬紫草中萘醌类化学成分进行研究。方法:利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等方法分离纯化,通过理化常数和波谱数据鉴定化合物结构,利用圆二色谱测定萘醌化合物绝对构型。结果:从软紫草中分离得到6个化合物,鉴定为阿卡宁(AE-1),乙酰阿卡宁(AE-2),β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(AE-3),异丁酰阿卡宁(AE-4),α-甲基-正丁酰阿卡宁+异戊酰阿卡宁(AE-5),β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(AE-6);从硬紫草中分离鉴定了6个化合物,分别为紫草素(LE-1),乙酰紫草素(LE-2),β,β-二甲基丙烯酰紫草素(LE-3),异丁酰紫草素(LE-4),α-甲基-正丁酰紫草素+异戊酰紫草素(LE-5),β-羟基异戊酰紫草素(LE-6)。结论:软紫草中萘醌类化学成分绝对构型为S型,硬紫草中为R型。     

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。     

HPLC法测定新疆软紫草属4种植物根中萘醌类成分

目的采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量。方法该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%甲酸;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长275 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37%～99.75%,RSD为0.42%～1.94%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制。     

新疆紫草7种萘醌类成分的同时测定

目的:建立同时测定新疆紫草中紫草酸、紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素7种成分的HPLC检测方法.方法:选用安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.03％甲酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长516,254 nm,柱温30℃,进样量6μL,流速1 mL· min-1.结果:7种萘醌类对照品在进样量范围内分别与峰面积呈现的良好线性关系(r＞0.999 1);仪器精密度和稳定性RSD均＜3％;加样回收率在97％～103％ (n=3).结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量新疆紫草的7种水溶性及脂溶性萘醌类成分,为新疆紫草的质量评价提供了更为全面的科学依据.     

中药紫草的临床应用

紫草是传统中草药,又名东紫草、地血、紫丹。近年来对紫草的研究不断加深,对其药理作用和药用价值多有报道,临床应用也更加广泛。现将其临床应用情况介绍如下: 一、实验研究 化学成分:紫草及新疆紫草根及根茎中主要含多种萘醌类化合物:紫草素(Shikonin)、乙酰紫草素(Acetylshikonin)、ββ──二甲基丙烯酰紫草素(ββ──Dimethylacrylshikonin)、异丁酰紫草素(lso-butyl-shikonin)等十多种紫草素衍生物;有报道紫草或其幼苗(Ⅱ)与紫草茸(Ⅰ)具不相同成分,实验表明紫草(Ⅱ)中主含萘醌类化合物──紫草素及其衍生物,紫草茸(Ⅰ)中主含树脂蜡及水溶性红色素等。     

新疆紫草羟基萘醌类化学成分的研究及对PDE4的抑制作用

目的 :研究新疆紫草羟基萘醌的主要成分及对PDE₄酶的抑制作用。 方法 :用硅胶柱层析、制备HPLC 和制备TLC等方法分离纯化新疆紫草中羟基萘醌化合物,通过理化性质和光谱数据进行结构鉴定。HPLC方法测定主要羟基萘醌类化合物对PDE₄酶的抑制活性。 结果 :分离鉴定了7个化合物,分别为去氧阿卡宁(1)、阿卡宁(2)、乙酰阿卡宁(3)、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁(4)、α-甲基丁酰阿卡宁(5)、异丁酰阿卡宁(6)和β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(7)。 结论 :化合物2,5,6为首次从新疆紫草中分离得到。首次评价了新疆紫草羟基萘醌类成分对PDE₄酶的抑制作用。     

新疆紫草根与茎残基部分化学成分及含量的比较研究

目的:比较新疆紫草根及茎残基部分成分及含量。方法:采用薄层色谱法及HPLC指纹图谱鉴别新疆紫草成分;紫外-可见分光光度法测定新疆紫草中羟基萘醌总色素含量;HPLC测定β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和紫草素的含量总和。结果:10批药材根与茎残基部分薄层斑点数目、形状一致,根的斑点大、色泽深;指纹图谱中两者指纹特征相同,相同保留时间下,根的峰面积更大;10批药材中根的羟基萘醌总色素含量平均为3.631%,茎残基平均为1.516%,紫草素与β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量总和的平均值在根及茎残基中分别为0.896%、0.309%。结论:新疆紫草根与茎残基部分所含成分基本一致,但根中羟基萘醌总色素含量、β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁与紫草素总含量均高于茎残基部分两倍以上。     

紫草中萘醌类化合物的质谱鉴别及3种成分的UPLC同时测定

目的鉴别紫草药材中的萘醌类化合物,建立紫草中3种萘醌类成分的UPLC同时测定方法,比较和分析不同产地紫草中此3种成分的含量,为建立紫草的质量评价方法提供科学依据。方法根据化合物的紫外光谱、液相色谱行为及质谱数据等综合信息鉴别紫草中的萘醌类成分,采用UPLC对紫草中紫草素、乙酰紫草素及β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的含量进行测定,流动相为乙腈-0.1%用酸水溶液,检测波长274 nm,流速0.3mL.min-1,柱温35°C。结果对紫草药材中的5种萘醌类成分的化学归属进行了指认,并系统分析了该类成分的质谱裂解规律;测定了紫草药材中的3种紫草萘醌的含量,结果表明,紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰紫草素分别在0.98~98,4.40~440,3.07~307.20μg.mL-1范围内线性关系良好(R2=0.9998),平均回收率分别为(n=6)99.84%,102.23%和102.67%。结论紫草中活性成分的识别可以显著增强其质量控制的准确性和专属性,而快速准确的指标成分含量测定方法,也是质量控制的重要检测手段,定性与定量两方面结合,对于紫草药材及其相关产品的质量检测和控制具有重要意义。     

新疆紫草提取物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)Johns·t又名新疆软紫草、新藏假紫草,属紫草科Boraginaceae多年生草本植物,是《中国药典》收录的3种紫草科植物之一。紫草的有效成分主要为2大类[1,2]:一类是脂溶性很强的萘醌类色素,包括紫草素(shiko-nin),乙酰紫草素(acetyl shikonin),β-羟基异戊酰紫草素(β-hydroxyisovaleryl shikonin),β,β′-二甲基丙烯酰紫草素(β,β′-d imethylacryl shikonin),去氧紫草素(deoxy shikonin)等。另一....     

新疆紫草羟基萘醌类成分对炎症细胞因子的抑制作用

目的研究新疆紫草羟基萘醌化合物对炎症细胞因子的抑制作用。方法采用酶联免疫法测定新疆紫草羟基萘醌化合物对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1D（IL-1D）等炎症细胞因子的抑制作用。采用Griess法测定分离纯化的6种不同羟基萘醌化合物（紫草素、去氧紫草素、乙酰紫草素、β’β-二甲基丙烯酰紫草素、α-甲基丁酰紫草素、异丁酰紫草素）对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放炎症细胞因子一氧化氮（N0）的抑制作用。结果新疆紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放TNF—α和IL-1D具有抑制作用;6种紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放NO具有抑制作用。结论新疆紫草羟基萘醌成分对炎症细胞因子均有不同程度的抑制作用,为进一步研发以炎症因子TNF-α抑制剂为靶向的类风湿关节炎治疗药物提供了一定的理论依据。     

中低压制备型色谱制备紫草萘醌成分的研究

 目的 建立新的色谱技术,分离纯化紫草萘醌成分。方法 采用中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用理化性质和核磁共振谱、红外、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术分析单体的纯度。结果 分离鉴定了6个化合物。分别为去氧紫草素,紫草素,异丁酰紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,纯度分别是99.62%,99.02%,99.5%,99.31%,99.3%,99.2%。结论 首次建立中低压色谱技术,快速、准确分离紫草药材的单体成分。     

2-氨基磷酸茚处理对新疆紫草悬浮细胞次生代谢物积累的影响

用不同浓度2-氨基磷酸茚(AIP),并结合茉莉酸甲酯(Me JA)处理新疆紫草悬浮细胞,测定不同处理组、不同处理时间细胞中迷迭香酸及乙酰紫草素、脱氧紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素等次生代谢物的含量,考察AIP抑制苯丙氨酸通路后对紫草悬浮细胞中次生代谢物合成、积累的影响。结果显示Me JA处理能够明显促进新疆紫草细胞中次生代谢物的合成积累;AIP处理能够抑制新疆紫草细胞中上述次生代谢物的积累,并在二者联合处理时能一定程度上抵消Me JA的促进作用,且抑制作用的强弱与处理剂量、处理时间存在正相关性。表明苯丙氨酸途径在紫草素类化合物生物合成中具有重要作用,可为通过细胞培养方式生产紫草素类化合物的代谢调控及紫草素类化合物生物合成等进一步研究提供参考。     

低温胁迫对新疆紫草悬浮细胞次生代谢物的影响

目的通过考察低温胁迫后新疆紫草悬浮细胞次生代谢物量的变化,探讨道地产区特有的环境因子对新疆紫草的作用。方法 4℃低温胁迫新疆紫草悬浮细胞24h后,HPLC法分别测定胁迫前(计为0h)和胁迫后12、24、48、72、168h5个时间点迷迭香酸、紫草酸B、紫草呋喃A、紫草呋喃E、乙酰紫草素、脱氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素和总紫草素类化合物的量。结果低温胁迫后不同时间点同类化合物的变化趋势基本一致,但其量差异显著,除β,β'-二甲基丙烯酰紫草素外,其他化学成分量的最大值均出现在低温胁迫组。结论低温胁迫可以促进新疆紫草悬浮细胞积累次生代谢物,并对揭示新疆紫草道地性形成的机制有重要作用。     

HPLC法同时测定紫白栓中9种成分

目的建立HPLC法同时测定紫白栓(紫草、大黄、白及等)中贝母兰宁、山药素Ⅲ、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254、275 nm。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.98%～100.03%,RSD 0.72%～1.64%。结论该方法简便、准确、可靠,可用于紫白栓的质量控制。     

中药紫草类的质量研究

通过中药紫草调查,它来源于紫草科6种植物的根、根皮或根木栓皮,为了比较其质量,应用比色法和薄层扫描法测定了12个样品紫草的萘醌总色素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素、乙酰紫草素、紫草素的含量。     

新疆软紫草有效成分分离及保肝抗HBV作用研究

目的 研究新疆软紫草(AER)石油醚部位(AERP)及水溶性部位(AERW)对小鼠急性肝损伤的保护作用,并对效果较好的石油醚部位进行有效成分分离,研究其有效成分抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法 C57小鼠48只,随机分为6组,给药14 d后,在末次2 h采用脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-Galn)诱导制备炎症浸润性急性肝损伤模型,测定肝脾指数、小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)含量以及肝组织匀浆中的NO含量,并进行肝组织病理切片的考察。采用正相硅胶,反相硅胶,薄层制备板对石油醚提取物进行分离,得到4个萘醌类有效成分,采用MTT法检测4个萘醌类有效成分对HepG2.2.15细胞的抗乙型肝炎病毒活性。结果 AERW高剂量组和AERP低剂量组均可不同程度降低小鼠血清中的AST、ALT活性以及肝组织中的NO含量,并使肝组织病变不同程度地得到改善,对比分析后AERP具有更好的保肝抗炎作用,之后对AERP的提取方法进行优化,得到含有效成分更充分的AERP,并分离得到4个萘醌类有效成分：异戊酰紫草素、乙酰紫草素、2,3-二甲基戊烯酰紫草素和紫草素。4个萘醌类化合物对H...     

HPLC法同时测定解毒生肌膏中6种成分

目的建立HPLC法同时测定解毒生肌膏(紫草、白芷、当归等)中6种成分的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5%冰醋酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;检测波长300 nm(欧前胡素、异欧前胡素)和516 nm(紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素);进样量20μL。结果欧前胡素、异欧前胡素、紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素分别在2.74~54.80μg/m L(r=0.999 1)、1.90~38.00μg/m L(r=0.999 5)、2.12~42.40μg/m L(r=0.999 2)、8.48~169.60μg/m L(r=0.999 8)、4.92~98.40μg/m L(r=0.999 7)、4.66~93.20μg/m L(r=0.999 1)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为99.72%(1.15%)、97.39%(1.49%)、98.29%(1.87%)、99.29%(1.94%)、98.51%(1.42%)、97.21%(1.55%)。结论该方法简便准确,专属性强,重复性好,可用于解毒生肌膏的质量控制。