早期胚胎质量评估:提高预测胚胎发育潜能的敏感性和特异性

背景:胚胎发育潜能的评估将直接影响胚胎移植的选择和辅助生殖的临床结局。目的:对早期胚胎发育潜能评估的方法进行归纳分析。方法:由第一作者检索1990年1月至2013年12月PubMed数据库相关文献,检索词为Assisted Reproductive Technology,ART;Pre-implantation Embryo;Embryonic development viability;Evaluation methods,文献语言限制在英文。根据纳入排除标准,最终纳入63条进行分析探讨。结果与结论:形态学评估方法由于其快速、无创、简单等特点而得到广泛的应用。但随着辅助生殖技术的发展,新的胚胎评估方法成为研究的热点,形态学评分系统与实时成像分析系统相结合对早期胚胎发育过程连续观察便于选择优胚。通过分析培养液中的代谢产物变化来预测胚胎发育潜能(丙酮酸、葡萄糖、氨基酸等)、胚胎源性细胞因子(可溶性人白细胞抗原G1、血小板活化因子等);针对基因、染色体异常而产生的植入前遗传学筛查法等以期找到更有效地评估胚胎发育潜能的标记物。     

早期胚胎质量评估:提高预测胚胎发育潜能的敏感性和特异性CSCD

背景:胚胎发育潜能的评估将直接影响胚胎移植的选择和辅助生殖的临床结局。目的:对早期胚胎发育潜能评估的方法进行归纳分析。方法:由第一作者检索1990年1月至2013年12月PubMed数据库相关文献,检索词为"Assisted Reproductive Technology,ART;Pre-implantation Embryo;Embryonic development viability;Evaluation methods",文献语言限制在英文。根据纳入排除标准,最终纳入63条进行分析探讨。结果与结论:形态学评估方法由于其快速、无创、简单等特点而得到广泛的应用。但随着辅助生殖技术的发展,新的胚胎评估方法成为研究的热点,形态学评分系统与实时成像分析系统相结合对早期胚胎发育过程连续观察便于选择优胚。通过分析培养液中的代谢产物变化来预测胚胎发育潜能(丙酮酸、葡萄糖、氨基酸等)、胚胎源性细胞因子(可溶性人白细胞抗原G1、血小板活化因子等);针对基因、染色体异常而产生的植入前遗传学筛查法等以期找到更有效地评估胚胎发育潜能的标记物。     

时差成像监测在评估胚胎发育潜能中的作用

选择性单胚胎移植已逐步在临床应用中能够接受,提高胚胎着床率的需求因而变得至关重要,选择最具发育潜能的胚胎仍然是辅助生殖技术的一个重大挑战。在给定时间点胚胎形态和发育阶段与胚胎发育潜能是紧密相关的,因而,形态参数的评价仍然是评价胚胎发育潜力的首选方法。最近,胚胎发育的动态评估作为评估胚胎潜能的一种工具受到更多的关注。时差成像设备的引入及在人类胚胎的批准使用为胚胎连续监测提供了新的临床机会,实现了对已知形态学参数的灵活评价,并可能引入新的胚胎发育能力动态指标。由于缺乏较大的随机临床研究,因此,还有待阐明胚胎选择是否使用动态参数改善临床结果以及哪些参数具有意义。本文总结了当前关于胚胎发育能力动态标记的进展并讨论了时差成像监测分析在胚胎评估和选择中潜在的临床作用。     

胚胎培养密度对胚胎发育潜能的影响

目的探讨在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术中胚胎培养密度对胚胎发育潜能的影响。方法选取应用延时摄像技术进行胚胎微滴聚集培养的119个周期为研究对象,以同期同条件的IVF/ICSI常规培养患者119个周期为对照组,比较两组胚胎培养结果的差异;同时比较微滴聚集培养9孔与16孔培养结果。结果微滴聚集培养的胚胎培养方式与常规培养方式比较,卵裂率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率、临床妊娠率和胚胎种植率(分别为98.2%、58.6%、54.1%、31.5%、57.9%,48.5%VS 97.1%、59.0%、49.6%、33.9%、60.9%、50.5%)差异均无统计学意义(P0.05)。9孔与16孔D3优胚率有显著性差异(分别为55.7%VS63.5%,P0.05),其余卵裂率、囊胚形成率、优质囊胚率、临床妊娠率和胚胎种植率无统计学意义(P0.05)。结论胚胎培养密度(1-16个/30μl)的胚胎发育潜能相似,延时摄像技术采用的微滴聚集培养与常规传统培养可以获得相似的培养效果。     

早期卵裂胚胎的发育和妊娠结局

目的探讨胚胎早期卵裂与胚胎发育速度、胚胎质量、临床妊娠结局之间的关系。方法这项回顾性研究对2012年8月至2013年5月共690个IVF/ICSI周期进行了比较分析。试验组于受精后25-27h观察早期分裂情况,将胚胎分为早期分裂胚胎,原核破裂胚胎和2原核合子期胚胎。胚胎发育至受精后66-68 h(第3天)对胚胎进行形态学评级,根据移植胚胎中早期卵裂胚胎的数目分为三组:2 EC组(2枚早期卵裂胚胎),2 Non-EC组(2枚非早期卵裂胚胎),混合组(1枚非早期卵裂胚胎和1枚早期卵裂胚胎)。结果早期卵裂胚胎发育速度要快于原核破裂胚胎和2原核合子期胚胎,而且早期卵裂胚胎和原核破裂胚胎的优胚率显著高于2原核合子期胚胎。2 EC组、2 Non-EC组和混合组三组的临床妊娠率和种植率无统计学差异。早期卵裂观察组与非早期卵裂观察组之间的临床妊娠率和种植率也没有显著差异。结论虽然早期卵裂与胚胎发育速度和优胚率有着密切的关系,但形态学评分均优的胚胎优先选择早期卵裂的移植策略尚不能明显改善临床妊娠结局。     

延时摄像技术在判断早期受精和胚胎发育潜能的应用

目的探讨延时摄像技术在判断早期受精和胚胎发育潜能的应用价值。方法对体外受精/卵胞浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)后行培养的21个周期共145个胚胎进行观察,分析早期受精第二极体释放时间和原核消失时间对胚胎发育潜能的预测作用、卵裂期不同的时间点与胚胎的优胚率的关系、培养基类型对培养结果的影响。结果动态监测的结果分析显示(1)ICSI后第二极体释放时间3h为77.4%,4h为92.7%,5h为100%。(2)原核消失较早(受精后小于24h)的胚胎第2天4细胞比率、D3 8细胞比率、优质率均高于原核消失时间较晚组(受精后大于24h)。(3)t3、t4、t5、s2和cc2组最佳时间范围内的优胚率显著高于最佳时间范围外的优胚率(P0.01),而t2组最佳时间范围内外之间的优胚率差异不显著(P0.05)。(4)全程培养基与序贯培养基培养可以获得相似的临床结果,全程培养基培养囊胚获得更高的囊胚形成率。结论第二极体的释放可以作为早期受精判断的标准之一;原核消失的时间将会是评测胚胎发育能力的一个重要指标,原核消失较早的胚胎比原核消失时间较晚的胚胎有更好的发育潜能;t3、t4、t5、s2和cc2最佳时间范围内的优胚率显著高于最佳时间范围外的优胚率,全程培养基更便于Time-lapse监测。延时摄像技术能够对胚胎体外发育过程进行全程监控的行为学指标,可更有效地评估胚胎的发育潜能。     

人类胚胎早期发育潜能的研究

目的　本研究采用卵裂球分离技术获取不同发育阶段人类早期胚胎单个卵裂球 ,对分散的人类早期胚胎单个卵裂球进行体外培养。对其进一步发育和分化进行研究 ,发现其影响因素。结果　 2 0个 4-细胞、2个 3-细胞人类早期胚胎分散后获得单个卵裂球 83个 ,经体外培养后有 35个发育成为扩张囊胚。结论　 4-细胞人类胚胎卵裂球具有发育成为完整囊胚的能力     

人早期胚胎卵裂球全能性的体外实验研究

目的研究人早期胚胎分割后单个卵裂球的继续发育与分化,探讨人早期胚胎卵裂球的全能性。方法采用胚胎分割技术把35个人早期胚胎(2-8细胞期)分割成单个卵裂球,再行单个卵裂球的体外培养,观察卵裂球的生长发育情况。结果 35个胚胎经胚胎分割处理后共获得178个单个卵裂球,分散成功率为75．1％,单个卵裂球体外培养24h 分裂率为73．6％,48h达3-4细胞者70．2％,72h挤紧(compaction)者61．2％,96h迭早期囊胚者51．1％,120h达扩张囊胚阶段者42．7％。结论人早期胚胎的单个卵裂球体外培养可发育到扩张囊胚阶段,此试验可为人早期胚胎卵裂球全能性的研究提供直接的论据,具重要的临床价值和广泛的应用前景。     

玻璃化冷冻人卵裂期胚胎的效果观察

目的观察总结玻璃化冷冻第三天(D3)胚胎复苏后的存活率与妊娠率。方法对人D3早期胚胎进行玻璃化冷冻,统计分析了2013年1月份至2013年12月份来我中心进行冷冻胚胎复苏移植的215个周期。结果胚胎复苏215个周期,共493个胚胎,胚胎复苏后存活487个,胚胎存活率为98.8%(487/493),487个存活胚胎均予以移植;临床妊娠90例,临床妊娠率为41.9%(90/215)。妊娠的90例中分娩59例,流产31例(其中宫外孕4例)。妊娠90例中单胎68例,双胎20例,3胎2例。结论玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎的损伤较小,适用于临床对卵裂期胚胎长期保存的需求。     

早期卵裂联合胚胎形态学评分选择胚胎移植妊娠结局探讨

目的探讨早期卵裂在体外受精-胚胎移植中对胚胎选择的临床价值。方法分析2010年12月至2011年9月在本中心接受体外受精((In Vitro fertilization,IVF)和卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(intracytoplasmic sperm in-jection and embryo transfer,ICSI-ET)治疗的307个周期中根据移植的胚胎未观察到、观察到早期卵裂分为A、B两组,统计两组年龄、ICSI比例、内膜厚度、获卵数、移植胚胎数、移植优胚数、临床妊娠率、种植率。结果 B组临床妊娠率(54.1%vs40.8%)及种植率(34.5%vs25.7%)均高于A组,差异有统计学意义。结论早期卵裂联合胚胎形态评分运用简便、无创,可以在同等条件下改善体外受精-胚胎移植的临床结局。     

代谢组学在预测胚胎发育潜能中的研究进展

体外授精-胚胎移植技术发展20多年来,促排卵及胚胎培养技术有了很大进步,但是活婴出生率通常低于50%。而多个胚胎移植提高了多胎等相关风险,因此业界提倡单胚胎或单囊胚移植。准确评估胚胎的活力对实现该目标至关重要。目前除了胚胎形态学评级,对胚胎代谢的相关研究也反应了胚胎的活力。本文综述了国内外近年来对胚胎代谢的相关研究,为更好选择高活力胚胎,降低多胎率,减少多胎带来的母婴风险提供新的思路。     

早期卵裂作为胚胎质量预测指标对体外授精结局的影响

目的探讨早期卵裂是否可作为评估胚胎质量、胚胎种植率、临床妊娠率的预测指标。方法对2006年1月～2006年12月的471对夫妇，480个周期随机分A组和B组（对照组）。A组：262个周期，即从授精25～27h后观察2PN受精卵是否出现早期卵裂，同时第二天、第三天观察胚胎质量并进行分级；B组：218个周期，第二天、第三天观察胚胎质量并进行分级，但授精25—27h后不观察2PN受精卵是否出现卵裂。同时根据移植胚胎中含有出现早期卵裂的个数分为四组A，（三个移植胚胎均出现早期卵裂），A2（移植胚胎含两个出现早期卵裂），A1（移植胚胎一个出现早期卵裂），A0（移植胚胎无出现早期卵裂）。比较四组胚胎种植率。结果A组种植率和临床妊娠率均高于未观察早期卵裂B组，但统计学分析无显著意义；A3、A2、A1、A0组间胚胎种植率分别为30．9％、26．1％、21．2％、11．2％，有显著性差异（P〈0．001）。结论（1）第2，3天胚胎形态学分级依然可作为评定胚胎质量的参数。（2）早期卵裂是可作为预测高种植率胚胎的指标之一。     

玻璃化和程序化冻融人卵裂期胚胎结果分析

目的探讨冻融周期中玻璃化和程序化两种不同方法对人卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法回顾性分析35例玻璃化冷冻复苏周期和123例程序化冷冻复苏周期资料,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、完整性胚胎存活率,冻融前后的优质胚胎率,临床妊娠率、胚胎种植率。结果①玻璃化法与程序化法冷冻前优质胚胎率无显著性差异（70．83％和71．97％,P〉0．05）,冷冻后优质胚胎率差异显著（63．89％和47．75％,P〈0．05）,复苏后的胚胎存活率差异显著（95．83％和86．16％,P〈0．05）,完整性胚胎存活率差异极显著（90．28％和63．32％,P〈0．01）;②玻璃化法与程序化法临床妊娠率差异显著（48．57％和29．27％,P〈0．05）,种植率差异显著（31．88％和18．83％,P〈0．05）。结论在冻融人卵裂期胚胎的过程中,玻璃化优于程序化,可以更好的提高累积临床妊率。     

原核评分联合胚胎发育速度在临床选择胚胎的应用

目的研究移植日不同原核类型和发育速度胚胎与临床妊娠结局的相关性,探讨原核评分系统(Z评分系统)联合发育速度在临床胚胎选择中的应用价值。方法将D3所移植的胚胎根据原核期形态按照Z评分系统进行分组,分为Z1、Z2组和Z3、Z4组,比较两组患者胚胎发育速度、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 Z1、Z2组胚胎的4细胞、8细胞率及囊胚率显著高于Z3、Z4组(68.2%vs 42.8%;49.8%vs 31.3%;55.3%vs 34.8%)(P0.05),且妊娠率和种植率也显著高于于Z3、Z4组(56.9%vs 45.5%;39.2%vs 21.8%)(P0.05),流产率显著低于Z3、Z4组(9.2%vs 17.0%)(P0.05)。结论原核形态学评分与胚胎形态学评分相结合,有助于提高临床妊娠率和种植率。     

人体外受精-胚胎移植中第3天胚胎发育潜能的评估

目的通过分析第3天(D3)胚胎的优质囊胚形成率,探讨形态学评估在胚胎发育潜能评估中的价值。方法选取接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不育症夫妇1 185对,其中女方年龄21~45岁,平均年龄30.88岁。对正常自然受精的8 184个D3胚胎进行囊胚培养,所有的培养都为25μL液滴单培养,对其形成的优质囊胚情况进行比较。结果 D3胚胎中8Ⅰ级胚胎发育形成优质囊胚概率最高(76.49%),明显优于<8细胞的Ⅰ级胚胎(35.10%),与9细胞(68.12%)、>9细胞(70.36%)的Ⅰ级胚胎相比,差异有显著统计学意义(P<0.01);同为8Ⅰ级优质胚胎在高龄人群(≥35岁)优质囊胚形成率明显低于年龄较低人群(<35岁),差异有显著统计学意义(P<0.01);高龄人群优质囊胚形成率8细胞以上Ⅰ级胚胎>8Ⅰ级胚胎>7Ⅰ级胚胎(68.29%vs 68.06%vs 40.82%),差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 8细胞Ⅰ级胚胎仍为卵裂期胚胎移植首选,但传统D3的7、8、9细胞的Ⅰ、Ⅱ级胚胎为优质胚胎的方法值得进一步商榷;高龄人群D3优质胚胎评估标准有待进一步阐明。     

DNA断裂指数在评估胚胎发育潜力中的作用

目的探讨精子DNA断裂指数（DFI）与胚胎发育的相关性。方法选取26例在我中心行IVF-ET助孕治疗的男性患者,手淫取精后做精子DNA断裂指数（DFI）,将DFI〈27%作为对照组组（n=15）,平均年龄（35.29±4.43）岁;将DFI〉27%（n=11）作为实验组,平均年龄（32.27±4.03）岁,分别比较其受精率、1级胚胎率及囊胚率。结果对照组受精率（56.73±4.03）%,实验组（54.36±3.85）%;对照组1级胚胎率（49.27±4.40）%,实验组（35.27±7.38）%;对照组囊胚率（51.80±6.67）%,实验组（32.45±3.42）%。对照组与实验组的受精率无显著差异,而≥7细胞胚胎率、1级胚胎率及囊胚率有显著差异。结论DFI指数可以作为胚胎发育潜能的前瞻性评估指数在IVF术前应用。     

非优质卵裂胚胎继续培养至囊胚的临床应用研究

目的探讨新鲜IVF/ICSI周期中移植或冷冻后剩余的非优质卵裂期胚胎在体外继续培养至囊胚的临床应用价值。方法将第3天移植或冷冻后剩余的非优质卵裂期胚胎在体外继续培养至第5、6天,选择优质的囊胚进行玻璃化冷冻。冷冻3个月后,当需要时将其解冻后进行胚胎移植,观察统计第5、6天囊胚移植后的妊娠结局。结果 67个解冻周期中共解冻102枚囊胚,复苏率、妊娠率及种植率为99.02%、22.39%和15.84%;其中第5、6天囊胚复苏率、妊娠率和种植率分别为(100%vs98.36%)、(32%vs16.67%)和(21.95%vs11.67%),两者间无统计学差异。结论部分第3天非优质卵裂期胚胎可在体外继续培养至囊胚,从中选择优质囊胚进行冻融胚胎移植,从而提高胚胎的利用率。     

小鼠胚胎毒性试验方法的建立及在评价中药早期胚胎毒性中的应用

目的 建立一种快速、早期的中药胚胎毒性的快速检测技术,用于中药的早期胚胎毒性筛选。方法 ①血清制备:SD大鼠随机分为阳性对照组4只,正常组4只,雄黄组、朱砂组各3只。阳性对照组给予环磷酰胺10 mg/kg,正常组用0.5%CMC-Na灌胃给药,雄黄组和朱砂组分别将雄黄和朱砂（用0.5%CMC-Na稀释）按1.0 ml/100 g灌胃给药。末次给药后1 h,无菌取血并取上清血清;②细胞采集:4~6周雌性C57小鼠,用妊娠孕马血清（PMSG）腹腔注射,48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）,合笼交配。第2天检查阴栓,用M2培养液将2细胞胚胎从输卵管中冲出,用M16培养液进行培养;③毒性试验:在胚胎2细胞阶段加入正常组、阳性对照组、雄黄组及朱砂组不同稀释比血清,观察囊胚成活率。结果 在1∶4、1∶16、1∶32的稀释比下,正常组的囊胚率为60.00%、73.33%、93.33%,高于阳性对照组的46.67%、60.00%、66.67%;朱砂组血清各个稀释比的囊胚率均未达到80%;除1∶512这个稀释比外,雄黄组血清各个稀释比2细胞胚胎的囊胚率均未达到80%。结论 ①朱砂和雄黄的大鼠含药血清在一定浓度时,对小鼠2细胞胚胎的生长发育有一定的影响,呈现中药的胚胎毒性;②小鼠胚胎2细胞用于中药的早期胚胎毒性筛选方法是可行的。     

D3卵裂期优质胚胎与非优质胚胎培养形成囊胚率及临床应用价值

目的探讨D3卵裂期非优质胚胎与优质胚胎继续培养形成囊胚率及临床应用价值。方法收集本中心486个体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)治疗周期中受精后第3天(D3)移植、冷冻保存后剩余的404枚优质胚胎,528枚非优质胚胎继续囊胚培养,比较两种胚胎的囊胚形成率。玻璃化冷冻已形成的囊胚,如果患者新鲜周期移植妊娠失败,则在下一周期把囊胚解冻移植,比较两种冻融囊胚的种植率和临床妊娠率。结果 D3卵裂期优质胚胎囊胚形成率为88.37%,非优质胚胎囊胚形成率为42.42%(P0.01);其中优质胚胎的78枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为42.37%,妊娠率为63.53%;非优质胚胎的64枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为39.65%,妊娠率为58.78%,两组比较差异没有统计学意义(P0.05)。结论⑴D3优质胚胎继续囊胚培养形成率明显高于非优质胚胎。⑵卵裂期优质胚胎培养形成的囊胚与非优质胚胎形成的囊胚冻融后移植的种植率及临床妊娠率没有明显差异。