利拉鲁肽对缺氧诱导的心肌细胞凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的 检测胰高血糖素样肽-利拉鲁肽对氯化钴(cobalt chloride, CoCl2)诱导缺氧条件下的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达量的影响.方法 将原代培养的心肌细胞分为6组:空白对照组,CoCl2诱导化学缺氧组,缺氧+不同剂量利拉鲁肽处理组(1、10、100、1000nmol/L利拉鲁肽).结果 缺氧能诱导心肌细胞中凋亡蛋白Bcl-2表达的增高并抑制Caspase-3蛋白的表达(P<0.05);利拉鲁肽能抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达并增加Bcl-2的表达,且利拉鲁肽对凋亡蛋白的影响具有剂量依赖性.结论 利拉鲁肽抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达,并促进凋亡蛋白Bcl-2的表达.     

凋亡抑制蛋白c-IAP1和Caspase-3在喉癌中表达的研究

喉癌是耳鼻咽喉外科常见的肿瘤之一,其逐年增加的发病率和死亡率严重威胁着患者的健康,其中以鳞状细胞癌（约90%）为主,其次是腺癌。凋亡抑制蛋白c-IAP1和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达与喉癌的发展变化关系密切。本文将凋亡抑制蛋白c-IAP1和Caspase-3在喉癌中的表达作用进行了系统综述。     

奥卡西平对癫痫患者运动皮质兴奋性的影响

目的：利用经颅磁刺激（transcranial magnetic stimulation, TMS）技术来研究奥卡西平（oxcarbazepine, OXC）对部分性癫痫患者运动皮质兴奋性的影响，并与卡马西平(carbamazepine, CBZ)的作用相比较。方法：对38例头颅MRI正常的部分性癫痫患者和20例正常对照进行磁刺激，并记录双侧大脑的静息期运动皮质阈值(rest motor threshold, rMT)、运动诱发电位波幅（motor evoked potential amplitude，MEP amplitude）、皮质潜伏期(cortical latency, CL)和中枢传导时间（central motor conduction time, CMCT）。癫痫组中18例给予OXC治疗，20例给予CBZ治疗，在治疗后第2周末、第4周末分别给予TMS。结果： 癫痫组38例治疗前可能致痫灶同侧大脑rMT高于对侧大脑，但差异无显著(P>0.05)。奥卡西平组可能致痫灶同侧大脑rMT在第2周末和第4周末均明显高于治疗前(P<0.05)，卡马西平组可能致痫灶同侧大脑rMT仅在第4周末时高于治疗前(P<0.05)。癫痫组治疗前后同侧大脑MEP amplitude、CL和CMCT差别均无显著，两侧大脑半球间比较差别也无显著。结论： 头颅MRI正常的部分性癫痫患者可能致痫灶所在半球和对侧半球的大脑皮质兴奋性可能存在差异，OXC和CBZ均能降低运动皮质兴奋性，可能机制为细胞膜钠离子通道阻滞。 TMS是从电生理角度研究大脑皮质兴奋性的可靠辅助工具。     

半夏提取物调节Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达诱导白血病细胞凋亡

背景:温热中药半夏拥有可人工广泛种植、易提纯等优势,其提取物可抑制慢性髓系白血病、急性髓系白血病、急性T淋巴白血病细胞增殖,但是作用机制尚不明确。目的:探讨中药半夏提取物对3种白血病细胞凋亡的作用机制。方法:慢性髓系白血病细胞株(K562)、急性髓系白血病M3细胞株(HL-60)、急性T淋巴白血病细胞株(C8166)在半夏提取物5种浓度梯度中分别作用24,48,72 h,采用CCK-8法评估3种白血病细胞增殖情况并从中筛选出有明显抑制作用的中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度。然后进一步采用流式细胞术检测3种白血病细胞早期凋亡发生率,采用RT-PCR与Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与结论:①5种质量浓度的半夏提取物作用3种白血病细胞具有细胞增殖抑制作用,中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度半夏提取物增殖抑制率较高,与低质量浓度组(100 mg/L)、对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);②中、高质量浓度半夏提取物可诱导3种白血病细胞早期凋亡;③中、高质量浓度半夏提取物可以下调3种白血病细胞的Bcl-2 mRNA表达,上调Bax及Caspase-3 mRNA表达(P<0.05;P<0.01);④中、高质量浓度半夏提取物作用72 h后,K562、C8166细胞的Bcl-2蛋白条带明显减弱,而HL-60细胞无减弱变化;Bax及Caspase-3蛋白条带明显增强;⑤结果表明,半夏提取物能有效抑制髓系白血病、T淋巴细胞白血病细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与其调节Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。     

针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响

目的:观察针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响。方法:SD大鼠20只,连续6w腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1)和亚硝酸钠(45mg·kg-1)建立AD模型后随机分成模型组、针刺组(n=10),同时设立非模型组(n=10)。造模后第21d,针刺组大鼠予以针刺百会和肾俞穴治疗,而模型组大鼠不予以治疗。针刺治疗结束后大鼠立即处死,采用免疫组化法检测非模型组、模型组、针刺组大鼠海马Caspase-3表达。结果:免疫组化结果显示模型组大鼠海马Caspase-3表达明显增加,与对照组比较有显著差异(P0.01);而针刺组Caspase-3的表达明显减少,与模型组比较(P0.01)。结论:针刺可抑制大鼠海马Caspase-3表达。     

凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3在乳腺癌中的表达及意义

目的观察人乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3的表达,探讨Fas和Caspase-3与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织(距癌组织5 cm以上),用免疫组织化学方法对23例乳腺癌标本进行检测。结果在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Fas蛋白的阳性表达率分别为86.9%和47.3%;乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率分别为82.6%和43.5%;乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。乳腺癌组织中caspase-3与Fas的表达率均与淋巴结转移无关。相关性分析表明,乳腺癌癌中的表达caspase-3与Fas表达呈正相关。结论乳腺癌组织中Fas和Caspase-3表达下调,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,可能在乳腺癌的发生和发展过程中起重要作用。     

GAP-43和Sema3A蛋白在戊四氮点燃慢性癫痫大鼠海马的表达

目的:探讨神经生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)和semaphorin3A(Sema3A)蛋白在慢性癫痫模型大鼠海马的表达。方法:将成年雄性SD大鼠41只随机分为正常对照组和癫痫组,通过腹腔注射戊四氮(40 mg/kg)诱导慢性癫痫模型,取大脑海马组织,应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹分析(Western Blot)方法,观察GAP-43蛋白及Sema3A蛋白在大鼠海马各区的表达变化。结果:免疫组织化学结果显示:GAP-43免疫阳性颗粒主要位于阳性细胞的胞浆和细胞膜表面,胞浆和突起被染成深棕色,靠近轴突一侧的胞浆染色较深;Sema3A免疫阳性颗粒主要位于阳性细胞的胞浆中,分布比较均匀,胞浆被染为棕黄色,染色较浅。在海马的齿状回及CA3区,癫痫组大鼠GAP-43蛋白的表达高于对照组大鼠,而Sema3A蛋白的表达则低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);在海马的CA1区,癫痫组大鼠GAP-43和Sema3A蛋白的表达均显著高于对照组大鼠,差异具有统计学意义(P0.01)。Western Blot结果显示:在整个海马组织内GAP-43蛋白在癫痫组的表达为0.45±0.21,明显高于对照组(0.28±0.23),差异具有统计学意义(P0.05);Sema3A蛋白在癫痫组和对照组的表达分别为1.18±0.55和1.55±1.96,虽有差异,但并无统计学意义(P0.05)。结论:GAP-43蛋白在癫痫大鼠海马中表达升高,Sema3A在癫痫大鼠海马中具有区域性差异表达;这两种蛋白的表达变化可能参与了癫痫的发病机制。     

脑室亚低温对急性脑梗塞脑组织兔细胞凋亡和Caspase-3表达的影响

目的检测低温组和常温组家兔大脑中动脉脑梗塞周边缺血区脑组织细胞凋亡和Caspase-3表达,探讨脑室内低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织细胞凋亡影响。方法选用4-6个月龄雄性家兔20只,随机分为常温组(10只)和低温组(10只)。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,进行脑室内穿刺低温液体灌注亚低温干预,术后动物行为观察,SP和Western blot法检测各组脑组织Caspase-3的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡。结果术后24h神经病学体征评分低温组明显优于常温组(P0.05),低温组的TUNEL染色凋亡细胞数和Caspase-3染色阳性细胞数明显低于常温组(P0.05),Western blot表明低温组脑组织中Caspase-3的表达水平明显低于常温组(P0.05)。结论脑室内穿刺低温干预对急性脑梗塞动物模型有脑保护作用。     

磷酸化DARPP-32在戊四氮诱导大鼠癫痫模型中的表达及其作用的研究

本文应用免疫酶组织化学及免疫荧光双标技术,将30只健康雄性SD大鼠分为一个对照组和5个实验组[即癫痫持续状态(SE)发作后1、6、24、48和72h组],研究磷酸化DARPP-32(p-DARPP-32)在PTZ诱导的癫痫发作大鼠前脑区域的表达(动态变化)和分布,并计算p-DARPP-32阳性表的神经元细胞数,以及与非磷酸化DARPP-32在大鼠前脑神经元的共存情况。结果表明,PTZ诱导大鼠SE发作1h和6h时,p-DARPP-32在大鼠前脑神经元的表达达到高峰,24h后开始逐渐下降;p-DARPP-32在大鼠前脑皮层、海马及纹状体神经元的胞质、胞核中有明显表达。免疫荧光双标记显示,p-DARPP-32与DARPP-32在上述区域出现高比例的共存。本研究提示p-DARPP-32在癫痫发作中可能起着重要作用。     

泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡及Survivin表达和Caspase-3活性的影响

目的探讨泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡,生存素(Survivin)表达和Caspase-3活性的影响。方法体外细胞培养,待细胞生长处于对数期时,加入不同浓度泰素帝,MTY比色法检测细胞活性。参考MTT结果,选取100ng/ml泰素帝处理A549细胞。透射电镜,流式细胞术检测细胞凋亡的发生;RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;Western印迹法检测Survivin蛋白质的表达;Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果泰素帝可抑制A549细胞生长,诱导细胞凋亡,呈时间依赖性降低Survivin的表达,增强Caspase-3酶活性。结论 100ng／ml泰素帝可诱导A549细胞凋亡,Survivin表达降低和Caspase-3活性增强可能是其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子途径之一。     

小鼠精子发生相关蛋白3基因在小鼠生精细胞的特异表达及对HEK 293T细胞凋亡和自噬的影响

目的检测小鼠精子发生相关蛋白3(spata3)基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spata3基因mRNA及蛋白产物在小鼠各组织中的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在生精细胞中的定位;借助脂质体将真核表达载体Plv-EGFP-2(a)purospata3瞬时转染HEK 293T细胞,进一步在蛋白水平分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)、BAX和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3A/B的变化。结果 Spata3基因及其编码产物在小鼠睾丸组织特异表达;粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞质与胞核均有显著SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞质也有大量分布;过表达spata3的HEK 293T细胞内活化型Caspase-3和PARP降解产物的含量较对照组差异无显著性,BAX表达量0.815±0.020较裸细胞组0.469±0.012和空载体转染组0.588±0.018均有所增高,Bcl-2含量0.214±0.020低于裸细胞0.507±0.021和空载体转染组0.545±0.024,LC3A/B-Ⅱ的表达量0.741±0.037则显著高于裸细胞组0.136±0.011和空载体转染组0.169±0.012。结论 Spata3基因在小鼠生精细胞特异表达,过表达spata3对HEK 293T细胞凋亡无明显影响,但可以促进细胞自噬。     

探讨丙戊酸钠联合奥卡西平治疗癫痫的临床疗效和对炎性因子的影响

目的探讨丙戊酸钠联合奥卡西平治疗癫痫的临床疗效和对炎性因子的影响。方法选取本院2018年4月～2019年4月收治的100例癫痫患者作为研究对象,采用随机法将其分为对照组和观察组,每组各50例。对照组患者在常规治疗基础上加用丙戊酸钠治疗,观察组患者在对照组的治疗基础上加以奥卡西平联合治疗。治疗结束后比较两组患者的临床疗效和对炎性因子的影响。结果观察组患者的临床总有效率为96.00%,明显高于对照组68.00%,差异具有统计学意义(P0.05);治疗后观察组患者血清中白细胞介素IL-1β和IL-6的表达水平均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组患者不良反应总发生率为6.00%,明显低于对照组20.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论丙戊酸钠联合奥卡西平治疗癫痫患者临床效果好,能有效抑制炎性因子水平,不良反应少,值得临床推广应用。     

小鼠囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与维甲酸的诱导作用

背景：细胞凋亡是维甲酸导致早期胚胎异常发育的原因之一,而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3介导的细胞凋亡是细胞凋亡的主要途径。 目的：观察维甲酸对体外培养小鼠囊胚细胞凋亡的影响,以及对囊胚细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的改变。 方法：获取妊娠3.5 d小鼠囊胚,分别在含0,1和10 μmol/L维甲酸的M199培养基中培养24 h,用带有荧光标记的原位末端标记法观察维甲酸对小鼠囊胚细胞凋亡的效应;并用免疫组织化学S-P法检测维甲酸对小鼠囊胚半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 结果与结论：所有组均观察到囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,高剂量维甲酸组中囊胚细胞凋亡荧光值,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的平均吸光度值和阳性面积率均显著升高(P < 0.01)。结果提示维甲酸可促进体外培养小鼠囊胚细胞凋亡和及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,证实了维甲酸对小鼠胚胎的发育的细胞毒性作用。     

Caspase-3 mRNA在发育中小鼠肾小体的表达

目的探讨Caspase-3 mRNA在小鼠肾小体发育中表达的变化特征及其可能的生物学意义。方法选取胚龄14d、16d、18d胎鼠和出生后1d、3d、7d的仔鼠肾组织,采用原位杂交技术及体视学分析方法对Caspase-3 mRNA在不同发育阶段肾小体中的表达进行定性及定量观察。结果Caspase-3 mRNA在小鼠肾小体发育的不同阶段都有阳性表达。在Ⅰ期和Ⅱ期肾小体的表达较低,进入Ⅲ期肾小体时,其表达达高峰,Ⅳ期肾小体中的表达稍有下降,Ⅴ期肾小体中的表达显著降低,其体积密度分别为12.35±3.78(%)、15.63±4.05(%)、43.28±6.09(%)、33.45±5.32(%)和10.28±2.56(%)。结论Caspase-3 mRNA在小鼠不同发育阶段肾小体内的表达不同,它对肾小体的正常发育可能有重要意义。     

抗HER-2抗体诱导人卵巢癌裸小鼠移植瘤细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨Herceptin对高表达HER-2的人卵巢癌SKOV-3裸小鼠移植瘤细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法建立动物模型,随机分为生理盐水(NS)组和Herceptin组。给药6周后,取肿瘤组织,HE染色和电镜观察细胞凋亡;并利用组织芯片为平台,TUNEL技术检测凋亡指数,进一步应用免疫组化技术结合显微图像分析技术检测肿瘤组织中的bc l-2/bax、Fas和caspase-3的表达。结果Herceptin组肿瘤细胞凋亡指数(7.96±3.04)显著高于NS组(2.58±1.49),其bax、Fas和caspase-3的表达增加,bc l-2和NF-κB的表达及bc l-2/bax比值下降。结论Herceptin可诱导人卵巢癌SKOV-3裸小鼠移植瘤细胞凋亡,其可能的机制是上调bax、Fas和caspase-3以及抑制bc l-2和NF-κB的表达。     

活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响

目的探讨活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中所诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响。方法制作脑缺血再灌注模型，80只大鼠随机平均分为4组，假手术组、模型组、阿司匹林组、活血通脉汤组，每组20只。应用免疫组织化学方法分别检测每组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达的情况。结果模型组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显高于假手术组（P〈0．01）；活血通脉汤组大鼠各时间点脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01），且与阿司匹林组无显著差异性（P〉0．05）。结论活血通脉汤能降低大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达水平，减轻缺血脑组织神经元坏死的程度，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，机制与降低Fas、Caspase-3表达水平有关。     

GFP共表达检测重组型Caspase-3对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性。方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因。通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有或没有其自身识别的四肽序列。将上述基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pIRES2-EGFP中,转染人HeLa细胞,在荧光显微镜和电镜下观察转染细胞的形态和结构。结果成功地获得了野生型caspase-3基因及两种重组型caspase-3基因。构建了重组型caspase-3基因的表达载体。转染HeLa细胞后,重组型caspase-3基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况变差甚至死亡。电镜观察显示,许多细胞呈现凋亡的典型特征。结论重组型caspase-3可促进HeLa细胞的凋亡。     

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法 20只SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,电镜观察细胞形态改变,Western blotting分析大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白的表达变化,annexinV荧光染色检测caspase-3特异性阻断剂对大鼠滑膜细胞凋亡的抑制作用. 结果 TFC能诱导大鼠滑膜细胞凋亡,电镜规察到典型的凋亡细胞核.大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白表达随TFC浓度增加而明显升高,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻AA大鼠滑膜细胞凋亡. 结论 TFC可促进大鼠滑膜细胞凋亡而达到治疗AA作用,其机制与TFC诱导滑膜细胞凋亡及提高caspase-3的活化有关.     

Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的　观察caspase 3mRNA反义寡核苷酸 (ASODN)对HL 6 0细胞凋亡的抑制作用 ,筛选有效ASODN。　方法　用脂质体介导法将针对caspase 3mRNA不同序列的 4条ASODN导入HL 6 0细胞中 ,γ 射线照射。应用电泳法检测DNA梯状条带 ;Hoechst332 5 8 碘化丙啶染色 ,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率 ;流式细胞术进行细胞凋亡定量。　结果　以caspase 3mRNA 5′非编码区 (- 6 2至 - 4 6位 )与编码起始区 (- 1至 16位 )ASODN转染 ,当转染终浓度≥ 3μmol L时 ,DNA电泳梯状条带消失 ,流式细胞术亦未见明显的亚二倍体峰 ;荧光染色分析 ,凋亡细胞百分率比未转染对照组和错配寡核苷酸对照组显著降低 (P <0 0 1) ,且随转染终浓度的增加 ,凋亡抑制率显著增加。另外 ,5′非编码区ASODN的抑制作用显著强于编码起始区ASODN(P <0 0 5 )。　结论　caspase 3mRNAASODN可抑制γ 射线诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,其作用有序列特异性及剂量依赖性