紫杉醇联合卡培他滨调控MAPK/mTOR信号抑制食管癌的机制研究

目的探讨紫杉醇联合卡培他滨调控MAPK/mTOR信号抑制食管癌的机制研究。方法选取2017年1月—2018年1月本院收集的80例晚期食管癌患者给予紫杉醇联合卡培他滨治疗2疗程,评价化疗临床疗效。免疫组织化学法检测化疗前后患者食管癌组织内MAPK和mTOR表达。选取食管癌Ec-9706细胞给予紫杉醇联合卡培他滨培养24 h、48 h和72 h,细胞计数CCK-8法检测食管癌Ec-9706细胞的存活率;Capase-3活性试剂盒检测Capase-3活性;Western blot法检测患者食管癌组织内和食管癌Ec-9706细胞中磷酸化蛋白p-MAPK、p-AKT、mTOR、NF-kB、BCL-2和cleaved-Capase-3蛋白表达水平。结果食管癌患者应用紫杉醇联合卡培他滨给药化疗后疗效为65.00%(52/80)。免疫组化法结果显示食管癌患者化疗后MAPK含量显著上升,mTOR含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,食管癌患者应用紫杉醇联合卡培他滨给药化疗后,患者组织内p-MAPK、NF-kB和cleaved-Capase-3蛋白含量显著增加,p-AKT、mTOR和BCL-2蛋白含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。给予紫杉醇联合卡培他滨治疗后,食管癌细胞株的细胞存活率随时间的延长明显降低,Caspase-3活性随时间的延长显著升高,食管癌EC9706细胞p-MAPK、NF-kB和cleaved-Capase-3蛋白含量随时间的延长呈显著增加,p-AKT、mTOR和BCL-2蛋白含量随时间的延长呈显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇联合卡培他滨可能通过上调MAPK/mTOR信号抑制食管癌的发生与发展。     

姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

姜黄素通过下调IκBα磷酸化抑制食管鳞癌细胞的体外增殖

目的探讨姜黄素是否能够通过下调IκBα的磷酸化而抑制食管鳞癌细胞的增殖并对其细胞周期产生影响。方法 MTT法检测姜黄素作用下食管鳞癌细胞的增殖;Western blot法检测EC9706和Eca109细胞在姜黄素作用下pIκBα和细胞周期蛋白cyclin D1的表达情况。两种细胞中加入姜黄素培养72 h,或联合5-FU培养72 h,流式细胞仪检测细胞周期。结果 EC9706和Eca109细胞的存活率均随着姜黄素浓度的增加逐渐下降;姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和cyclin D1蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降,且G0/G1期的细胞开始增加,S期的细胞逐渐减少;当姜黄素联合使用5-FU时,G0/G1期的细胞明显增加,S期的细胞明显减少。结论 姜黄素通过下调IκBα及cyclin D1的表达而抑制食管鳞癌细胞的增殖,或许有望成为食管癌治疗中的一个辅助用药。     

蛇床子素调控PI3K/AKT通路对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移与凋亡的影响

目的 探讨蛇床子素调控PI3K/AKT/mTOR信号对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响.方法 用不同浓度的蛇床子素处理人膀胱癌T24细胞,计算IC50浓度.采用CCK-8方法检测蛇床子素对T24细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测蛇床子素对细胞迁移和侵袭的影响,采用流式细胞仪检测蛇床子素对T24细胞凋亡的影响,采用Western blot方法检测抗凋亡蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平.结果 蛇床子素抑制T24细胞增殖的IC50为42.4μmol/L.42.4μmol/L蛇床子素处理24、48、72h后,T24细胞增殖能力显著降低(P＜0.05).42.4μmol/L蛇床子素处理24h后,T24细胞的迁移能力和侵袭能力降低、细胞凋亡率升高(P＜0.05);T24细胞中p-AKT、p-mTOR、P70与Cyclind1蛋白表达水平降低(P＜0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P＜0.05).结论 蛇床子素可通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡.     

薯蓣皂苷对卵巢癌细胞体外转移活性及PI3K/AKT通路的影响

目的 探讨薯蓣皂苷对卵巢癌细胞生物学行为以及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将卵巢癌细胞分为对照组、薯蓣皂苷组和PI3K/AKT通路抑制剂组，CCK-8实验检测细胞增殖能力；细胞划痕实验分析细胞迁移能力；Transwell实验分析细胞侵袭能力；流式细胞术分析细胞凋亡率；蛋白免疫印迹实验分析细胞PI3K/AKT通路蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，薯蓣皂苷组和抑制剂组细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力显著降低，凋亡率增加，p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低。结论 薯蓣皂苷通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，并促进卵巢癌细胞凋亡。     

乌骨藤提取物通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制黑色素瘤细胞的活力并诱导细胞凋亡

目的:探究乌骨藤提取物(Marsdenia tenacissima extract,MTE)对黑色素瘤细胞活力及凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、50、100和200 mg/L) MTE处理小鼠皮肤黑色素瘤B16-F10细胞24 h或不同浓度MTE处理不同时间(0、24、48、72和96 h),MTT法检测细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达,同时检测通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)处理细胞后p-PI3K及细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果:根据预实验结果,选择MTE作用时间为72 h。MTE浓度为100 mg/L和200 mg/L时能明显抑制B16-F10细胞活力及增殖相关蛋白Ki67和PCNA的表达,并且还可诱导B16-F10细胞凋亡,提高凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白水平;同时,MTE还可显著降低p-PI3K、p-AKT和mTOR的蛋白水平;此外,激动剂IGF-1可明显减弱MTE抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的作用。结论:MTE可通过下调PI3K/AKT/mTOR通路活性抑制黑色素瘤细胞活力,诱导细胞凋亡。     

白毛藤多糖抑制人食管癌细胞增殖作用的研究

目的:探讨白毛藤多糖对人食管癌细胞的生长抑制作用。方法:将不同浓度白毛藤多糖作用Ec-9706细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因表达量的变化。结果:不同浓度白毛藤多糖对Ec-9706细胞的增殖有明显抑制作用,并可诱导Ec-9706细胞凋亡,抑制Ec-9706细胞bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论:白毛藤多糖抑制Ec-9706细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与激活caspase-3、抑制bcl-2表达有关。     

低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的:阐述低强度脉冲超声（LIPUS）对骨肉瘤细胞增殖的调控作用和机制,探索低强度脉冲超声治疗骨肉瘤的潜在价值。方法:在时间梯度实验中,将MG-63细胞分为LIPUS组和Control组,对LIPUS组加载1、6、12、18和24 h的低强度脉冲超声,CCK-8检测各组细胞增殖活力,Western Blots检测24 h低强度脉冲超声对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。在机制实验中,将MG-63细胞分为Control组、LY294002组、LIPUS组和LIPUS+740Y-P组,对各组施加对应的干预措施后使用CCK-8检测各组细胞增殖能力,Western Blots检测各组增殖相关蛋白PCNA和Cyclin D1的表达情况。所有数据重复3次后使用单因素方差分析统计。结果:加载低强度脉冲超声18和24 h后,LIPUS组的细胞增殖活力较对照组显著降低（P<0.010, P<0.001）,这些结果表明LIPUS可抑制MG-63细胞的增殖。LIPUS可抑制p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的表达（P<0.001）,即抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,而不影响PI3K、AKT和mTOR的表达。使用LIPUS就如同使用PI3K的抑制剂（LY294002）一样,可以抑制MG-63细胞的增殖（P<0.001）,在使用PI3K的激动剂740Y-P后,可逆转LIPUS对MG-63细胞增殖的抑制（P<0.001）。这些结果表明LIPUS可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖。结论:低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖,它可能是单独或联合放化疗治疗骨肉瘤的有效方法之一。     

鸡内金对冠状动脉内皮细胞损伤的影响及可能机制研究

目的 探究鸡内金对冠状动脉内皮细胞(HCAEC)的影响及可能机制。方法 将HCAEC细胞分为对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组和ox-LDL+鸡内金组。CCK-8方法检测各组细胞的活力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot方法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3II和p62的表达以及PI3K、Akt、mTOR的表达。结果 ox-LDL可显著抑制HCAEC的细胞活力,抑制LC3II和PI3K/Akt/mTOR的表达水平,促进凋亡和p62蛋白的表达;而鸡内金预培养则可显著缓解由ox-LDL引起的细胞活力降低和凋亡率的升高,促进自噬,激活PI3K/Akt/mTOR通路。结论 鸡内金可通过调控自噬和上调PI3K/AKT/mTOR通路减轻ox-LDL引起的冠状动脉内皮细胞损伤。     

葛根素通过TLR4/NF-κB诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制

目的探讨葛根素(puerarin,Pue)通过TLR4/NF-κB信号通路诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制。方法结肠癌sw480细胞给予50μmol/L Pue培养24 h,48 h和72 h后,细胞计数CCK-8法检测结肠癌sw480细胞的存活率;TUNEL法检测结肠癌sw480细胞凋亡;Real-Time PCR法和Western blot法检测结肠癌sw480细胞中TLR4、NF-κB和Caspase 3的基因和蛋白表达水平。结果与对照组相比,葛根素组中sw480细胞存活率显著降低,细胞凋亡显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,葛根素组中TLR4、NF-κB和Caspase 3 m RNA水平和蛋白表达含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论葛根素可以显著抑制结肠癌sw480细胞生长,诱导细胞凋亡的发生,且TLR4/NF-κB信号通路在此过程中起到重要作用。     

黄芩苷通过调控PI3K/AKT/NF-κB通路改善大鼠脑出血后的神经元凋亡

目的 研究黄芩苷(Bai)对脑出血模型大鼠神经元凋亡的改善作用并探讨其作用机制。方法 选取30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham)、脑出血组(ICH)、黄芩苷治疗组(Bai),通过胶原酶IV注射法构建大鼠ICH模型。进行神经功能评分;测定各组大鼠脑组织含水量;HE染色检测脑组织形态;TUNEL法检测大鼠神经元凋亡数量;Western blot方法检测BAX、Bcl-2、Caspase-3以及PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果 黄芩苷能够降低ICH大鼠神经功能评分、减轻ICH模型大鼠的脑水肿、降低ICH大鼠凋亡神经元的数量、上调Bcl-2/Bax比率、降低Cleved-Caspase-3的表达水平、激活PI3K/AKT信号抑制NF-κB蛋白的表达。结论 Bai可通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路改善ICH大鼠神经元的凋亡,从而减轻ICH大鼠的脑水肿、改善其神经功能。     

自噬在红景天甙诱导胃癌细胞凋亡中的作用及机制

目的:探讨自噬在红景天甙诱导人胃癌细胞凋亡中的作用及机制。方法:红景天甙处理人胃癌AGS细胞,Hoechst33342染色观察凋亡形态学变化,流式细胞术检测凋亡细胞数;透射电镜观察自噬体形成,mRFP-GFP-LC3转染观察荧光自噬斑点;Western blot观察凋亡蛋白、自噬蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达;自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理AGS细胞,流式细胞术检测凋亡细胞数,Western blot观察凋亡相关蛋白变化,Hoechst33342染色观察凋亡形态学变化;PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子(IGF-1)预处理AGS细胞,mRFP-GFP-LC3转染和Western blot分别观察自噬变化。结果:红景天甙诱导人胃癌AGS细胞自噬体形成,荧光自噬斑点增多,抑制PI3K/AKT/mTOR通路蛋白活化;CQ预处理胃癌细胞后,细胞凋亡数量显著增加,细胞核固缩现象增强,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase9表达上调;IGF-1预处理胃癌细胞明显减弱红景天甙诱导的自噬现象。结论:中药红景天甙可诱导人胃癌AGS细胞自噬,与抑制PI3K/AKT/mTOR通路相关,抑制自噬可促进红景天甙诱导的细胞凋亡。     

黄精皂苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT、补体系统和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的影响

目的分析黄精皂苷通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控补体系统对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法 HK-2细胞分为4组:对照组、黄精皂苷组、TGF-β1组、TGF-β1+黄精皂苷组。在培养基中加入终质量浓度为10 ng/ml的TGF-β1处理48 h诱导。黄精皂苷终质量浓度为20 ng/ml,培养48 h。检测各组细胞迁移和侵袭的能力,并检测E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vimentin,Vim)mRNA和蛋白水平评估EMT。通过RT-qPCR和Western blot检测C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB m RNA和蛋白表达量。结果 4组细胞的上述指标比较差异显著(P<0.05)。黄精皂苷组细胞的迁移能力(22.75%±1.98%)、C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB、N-cad、Vim的mRNA和蛋白表达量显著低...     

杜仲绿原酸通过PI3K/AKT/Nrf-2通路增强视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性

目的　探究杜仲绿原酸（CGA）通过调控PI3K/AKT/Nrf-2通路,对视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性的增强作用。 方法　通过不同浓度的CGA处理HXO-Rb44细胞,检测IC10,作为后续实验中CGA浓度。将细胞分为Ctrl、Radio、CGA、Radio+CGA组,Radio组给予4 MV X射线照射24 h,CGA组使用CGA处理24 h,Radio+CGA组在CGA处理24 h后再给予4 MV X射线照射24 h,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,蛋白质印迹检测Ki67、依赖还原型辅酶I/II醌氧化还原酶I（NQO1）、活化型半胱天冬酶（cl-caspase-3）、硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）、活化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白表达。进一步通过PI3K激活剂740Y-P处理细胞,检测细胞周期、凋亡、增殖和相关蛋白表达、PI3K/AKT/Nrf2通路蛋白表达。 结果　随着CGA浓度的增高,细胞的相对存活率降低,药物毒性呈浓度依赖性,IC10为81.59 μmol/L。与Ctrl组相比,Radio和CGA组G2/M期细胞比例显著升高,细胞凋亡比率显著升高（P<0.01）;与Radio组相比,Radio+CGA组G2/M期细胞比例和细胞凋亡比率进一步显著升高（P<0.01）。同时在蛋白水平上,与Ctrl组相比,Radio和CGA组Ki67、NQO1、TrxR1、p-PI3K、Nrf2蛋白表达及p-AKT/AKT比率显著降低（P<0.01）;放射和CGA联合作用进一步降低以上各指标（P<0.01）。此外,PI3K激活剂可逆转放射对细胞周期、增殖、凋亡以及PI3K/AKT/Nrf2通路的作用,CGA可恢复放射引起的上述各指标的变化（P<0.01）。 结论　CGA可增强HXO-Rb44细胞的放射敏感性,其作用机制与抑制PI3K/AKT/Nrf2通路相关。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

骨化三醇通过B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB通路抑制大鼠高原肺水肿的发生

目的 ：探讨骨化三醇通过B细胞受体/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)通路抑制大鼠高原肺水肿的发生及其机制。方法 ：雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧+骨化三醇组（0.252μg/kg）,连续灌胃给药5 d后,除常氧组外,其余2组均置于模拟海拔6 000 m的低压氧舱内低氧胁迫48h,建立高原肺水肿大鼠模型。干湿比重法测定肺含水量;H-E染色观察大鼠肺组织病理变化,并进行炎症评分;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率;ELISA检测肺组织B细胞激活因子（BAFF）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量;免疫荧光染色观察肺组织CD21和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;免疫印迹检测肺组织PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达。结果 ：与常氧组比较,低氧组大鼠肺组织见轻微肺泡隔增宽,炎症细胞浸润;肺含水量升高,肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-...     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

三氧化二砷联合西罗莫司体外抑制人肾癌细胞786-O增殖及对PI3K/Akt/mTOR通路的影响

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)联合西罗莫司(sirolimus)对786-O人肾透明细胞癌细胞增殖的影响,并通过其对PI3K/Akt/mTOR蛋白表达的影响探讨促凋亡机制。方法体外培养786-O细胞,电镜观察药物对细胞形态的影响;MTT法检测单药作用及联合用药的细胞增殖抑制率;流式细胞法分析药物诱导786-O的细胞凋亡率;Western blot分析药物对PI3K、Akt、mTOR蛋白表达的影响。结果电镜结果可见786-O细胞发生细胞凋亡的形态学改变,MTT法显示As_2O_3和sirolimus均有抑制增殖作用,联合用药效果好于单独用药;PI/Annexin V双染分析表明sirolimus 3μmol/L、A_2O_3 3μmol/L、A_2O_3 3μmol/L+sirolimus 3μmol/L的凋亡率分别为7.17%、14.49%、20.34%;Western blot法显示A_2O_3联合sirolimus可同时下调PI3K、Akt、mTOR蛋白表达,效果显著优于单独用药。结论 A2O3联合sirolimus可明显抑制人肾癌786-O细胞增殖,并促进其凋亡,其机制与同时调控PI3K、Akt、mTOR蛋白表达有关。     

羟氯喹通过PI3K/Akt通路对系统性红斑狼疮外周血单个核细胞凋亡的作用研究

目的：探讨羟氯喹对SLE患者外周血单个核细胞的凋亡作用及其相关机制。方法：对30例活动期SLE患者及15例正常健康人抽血分离PBMCs细胞进行培养,分为正常对照组、SLE组、羟氯喹5 mg/L、羟氯喹25 mg/L组,MTT法检测细胞生长抑制,采用Annexin V/PI流式细胞仪细胞检测凋亡率,Western blot方法检测BAX、BCL-2、PI3K、pAKt及mTOR等相关蛋白的表达影响。同时加入羟氯喹HCQ 25 mg/L和PI3K/AKT通路抑制剂LY294002 20 μmol/L,作用SLE患者的PBMCs细胞48 h,检测PBMCs细胞生长抑制和凋亡率。结果：SLE组比正常对照组PBMCs细胞生长抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05）;与SLE组相比,羟氯喹5 mg/L和25 mg/L组细胞生长抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05）。羟氯喹组与SLE组比较,PI3K、pAKt、mTOR、bcl-2的表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,bax和caspase-3的表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。PI3K/AKT抑制剂 LY294002能够阻断羟氯喹导致的SLE患者PBMCs细胞凋亡。结论：羟氯喹能够通过PI3K/Akt信号通路促进SLE患者体外PBMCs的凋亡。     

红景天甙通过抑制PI3K / AKT 通路促进人胃癌AGS 细胞凋亡

目的:研究红景天甙对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及机制。方法:不同浓度红景天甙处理AGS细胞,CCK-8法检测红景天甙对AGS细胞增殖的影响;Hoechst33342核染色观察凋亡形态学变化,流式细胞术检测凋亡细胞数变化,Western blot检测凋亡蛋白和PI3K/AKT通路蛋白表达变化;PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)预处理AGS细胞,流式细胞术和Western blot检测AGS细胞凋亡改变。结果:红景天甙呈浓度依赖性抑制AGS细胞增殖,导致细胞核固缩增多,凋亡细胞数增加,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP上调,p-PI3K和p-AKT活性下降;IGF-1干预处理后,明显减弱红景天甙促凋亡效应。结论:红景天甙抑制胃癌细胞增殖,并通过抑制PI3K/AKT信号通路显著促进胃癌细胞的凋亡。