泛素化在TRAF2介导的NF-κB信号通路中的作用

NF-κB(核因子κ增强子结合蛋白)是核转录因子家族成员,具有调节免疫、炎症和细胞存活的功能.它可被TRAF2(tumor necrosis factor receptor associated factor 2,肿瘤坏死因子受体相关因子2)等相关因子活化.TRAF2包含了N-端的环指结构域和C-端的高度保守结构域.它通过与肿瘤坏死因子受体超家族成员相互作用,介导了下游信号通路.而TRAF2的泛素化在过程中是关键的,鞘磷脂作为TRAF2的泛素化连接酶辅助因子,在TRAF2介导的NF-κB信号通路中发挥重要作用.     

NF-κB与危重病治疗

核因子 κB (NF κB)为一种参与多种炎症介质基因表达的转录因子。NF κB过度及长时间激活与许多炎性疾病 ,包括脓毒性休克、急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)、缺血及再灌注损伤等有关。为减轻组织和器官损伤 ,NF κB在调控炎症中的重要作用使之成为一个治疗目标。通过基因治疗策略或药物抑制导致NF κB活化中的关键步骤 ,能调控NF κB信号转导。     

PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达TNF-α中的作用

目的：研究PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞（PBMCs）肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达中的作用，探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系，为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础。方法:采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞，分为chelerythrine+低氧组、forskolin+低氧组和单纯低氧组。Chelerythrine+低氧组和forskolin+低氧组细胞在低氧前分别予10 μmol/L chelerythrine和50 μmol/L forskolin预处理。然后各组均于低氧条件下（3 % O2, 5 % CO2, 92 % N2）培养0、1、3、6、9、12、24 h后，收集细胞及培养液上清，分别采用PKC、Raf活性检测试剂盒、电泳迁移分析法（EMSA）、逆转录PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PKC、Raf-1、NF-κB活性及TNF-α表达量。结果:低氧1-9 h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性及TNF-α表达量显著高于正常对照组（P<0.01）。低氧后1-24 h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性与TNF-α mRNA和蛋白表达水平间呈显著正相关（P<0.01，P<0.05）。10 μmol/L chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、Raf-1、NF-κB活性升高和TNF-α表达。50 μmol/L forskolin可显著抑制低氧诱导的Raf-1、NF-κB活性升高及TNF-α表达。结论:低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、Raf-1活性及NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α，这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征（ARDS）时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。     

NF-κB/REL激活的信号机制

NF-κB/REL蛋白是进化学上高度保守的一种免疫反应介质。多种不同的刺激信号都可激活核转录因子参与细胞的生长、分化、发育、凋亡、粘附及炎症反应。激活NF-κB的信号机制十分复杂。不同的刺激信号,不同的细胞种类,以及细胞不同的状态所涉及的NF-κB激活的具体信号通路有可能不同。随着一些IκB家族成员激酶的鉴定及其相关敲剔基因模型的建立,人们对NFκB激活的信号机制有了更深入、全面的认识。     

正畸对牙龈炎大鼠牙周组织TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的探讨正畸对牙龈炎大鼠牙周组织中TLR4/NF-κB信号通路相关分子表达的影响,为临床牙龈炎、牙周炎患者的正畸矫治提供实验依据。方法将100只大鼠随机分为4组,包括牙龈炎组、正常加力50 g组、正常对照组、牙龈炎加力50 g组(实验组),每组25只。丝线结扎法构建牙龈炎模型,正畸镍钛螺旋拉簧构建加力模型,分别于第1、3、5、7、14天处死,取大鼠双侧实验区近中侧牙周组织。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠牙周组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。Real-time PCR法、免疫组化测定大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达水平。结果实验组大鼠牙周组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR、免疫组化结果显示,实验组大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。TLR4、NF-κB p65含量变化呈正态分布,第5～7天为高峰期。结论正畸力可促进牙龈炎大鼠TLR4/NF-κB炎性信...     

RIP1介导的坏死性凋亡通过NF-κB通路调节肾小管上皮细胞炎症反应

目的:探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)介导的坏死性凋亡对肾小管上皮细胞炎症的影响及其机制。方法:体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合Z-VAD-FMK刺激24 h。乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞坏死百分比,Western blot检测观察RIP1、IKK-α和NF-κB p65的表达,Western blot和ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,real-time PCR检测NF-κB p65的mRNA表达水平。进一步应用RIP1抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)进行干预,检测上述指标。结果:与对照组比较,TNF-α联合Z-VAD-FMK刺激组(T/Z组)的HK-2细胞中cleaved RIP1蛋白水平明显升高,IKK-α和NF-κB p65的蛋白水平明显增高,LDH释放明显增多(P<0. 01)。Western blot和ELISA检测炎症相关指标IL-1β和MCP-1的水平均有明显升高,real-time PCR检...     

辛伐他汀通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨辛伐他汀对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠保护作用及机制。方法 45只10周龄成年SD雌性大鼠,按随机数字表法平均分为对照组（Control）、急性肺损伤模型组（ALI）和辛伐他汀治疗组（BFTT）,检测支气管灌洗液中总细胞和嗜中性粒细胞数量及肺组织湿/干重量;HE染色观察肺组织病理学改变;ELISA方法检测BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及肺组织中SOD和MDA的水平;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4和NF-κB的表达。结果 辛伐他汀治疗降低ALI大鼠W/D比值、BALF中的嗜中性粒细胞、总细胞数量及MDS活力,升高SOD活力;改善ALI大鼠肺组织病理变化,抑制HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白表达。结论辛伐他汀可以抑制内毒素引起的急性肺损伤,该作用可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。     

桑黄素通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路改善重症肺炎大鼠肺损伤

目的 观察桑黄素对重症肺炎大鼠肺功能的影响,及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路的调控作用。方法 SD大鼠分为正常对照组、模型组、桑黄素低（10 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量组、甘草酸（HMGB1通路抑制剂,30 mg/kg）组,每组12只;制备重症肺炎模型,给药2周,1次/d。检测大鼠肺活量、呼气容积、肺阻力、肺顺应性及肺泡灌洗液中白细胞数量及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-4(IL-4)水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理变化;免疫荧光共定位法检测HMGB1与P型肺泡上皮细胞特异性-肺表面活性蛋白-C(SP-C)阳性共表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR4、p65NF-κB、磷酸化p65NF-κB(p-p65NF-κB)水平。取大鼠P型肺泡上皮细胞,肺炎克雷伯杆菌感染培养后,分为空白组、感染组、桑黄素（40μmol/L）组、HMGB1过表达腺病毒（ago-pC-HMGB1）组、桑黄素+ago-pCDNAHMGB1组、HMGB1空载体腺病毒（ago-pC-NC）组。透射电...     

构架蛋白TRAF对CD154诱导转录因子NF-κB活化的影响

目的　研究构架蛋白TRAF1-6在CD154诱导NF-κB活化信号通路中的作用机制。方法通过流式细胞仪分析TRAF蛋白在Ramos B细胞中的基础表达,转染野生型或显性失活TRAF判断TRAF对NF-κB活化的影响,并研究CD154刺激可诱导哪些TRAF蛋白与CD40免疫共沉淀。结果TRAF1、2、3、5和TRAF6在Ramos B细胞中均有基础表达,转染野生型TRAF6较其他TRAF可更显著诱导NF-κB活化,而转染显性失活质粒对CD154诱导NF-κB活化的抑制作用TRAF6>TRAF5>TRAF2> TRAF3。CD154刺激诱导TRAF2、6与CD40共沉淀。结论TRAF6在CD154诱导NF-κB活化中作用最重要;CD154刺激诱导TRAF2、6与CD40形成免疫复合物。     

NF-κB在大鼠CsA肾毒性中的作用

目的探讨NF-κB在环孢素A(CsA)肾毒性中的作用及与TGFβ-1、caspase-3和细胞凋亡的关系。方法Wist-ar雄性大鼠64只随机分成4组:溶剂对照组,二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组,CsA组,CsA PDTC组。动物每日皮下注射CsA15mg/kg,或溶剂、PDTC各100mg/kg。4周后取肾脏,检测血BUN、Cr、尿NAG酶和尿常规。HE、TUNEL、免疫组化观察。结果光镜下观察到明显的CsA慢性肾损伤。CsA组较其他组血BUN、Cr,尿NAG酶显著增高,尿常规有蛋白尿,尿比重降低;而CsA PDTC组与对照组比较无差异。TUNEL检测到CsA组细胞凋亡及免疫组化检测有NF-κB、TGF-β1和caspase-3的表达。PDTC阻断NF-κB后,TGF-β1和caspase-3表达显著减弱。CsA PDTC组与对照组比较无明显变化。结论CsA可致肾细胞凋亡。阻断NF-κB后凋亡明显减少,肾损伤减轻。提示CsA肾毒性与NF-κB的激活有关。     

异鼠李素通过调控TLR4/NF-κB信号通路对高氧诱导大鼠急性肺损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探讨异鼠李素对高氧诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其可能机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异鼠李素组、异鼠李素+瑞沙托维组[瑞沙托维(TAK-242)为TLR4特异性抑制剂],每组8只,除正常对照组正常饲养外,其余各组大鼠均置于自制高氧箱中3 d构建ALI模型,模型构建成功后,按照各组给药剂量进行腹腔注射。模型组及正常对照组腹腔注射等体积生理盐水。各组注射用药均为1次/d,连续7 d。采集大鼠腹主动脉血、肺泡灌洗液、肺组织,血气分析仪测定大鼠氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2)),烘箱法测定大鼠肺组织湿重/干重(W/D),HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,并对其进行肺组织损伤评分,免疫荧光染色法观察各组大鼠肺组织中TLR4表达水平,ELISA检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平,Western blot测定大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、W/D值显著升高,肺组织损伤严重,肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著升高;与模型组相比,异鼠李素组及异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到缓解,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低;与异鼠李素组相比,异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到改善,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低。结论:异鼠李素能缓解高氧诱导的大鼠ALI,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

白藜芦醇缓解完全弗氏佐剂所致小鼠炎性痛的NF-κB信号通路机制

目的:探讨白藜芦醇抗小鼠炎性痛的核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路机制。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、炎性痛模型组、阳性对照(地塞米松,0.5 mg/kg)组及白藜芦醇(100、50和25 mg/kg)组,每组10只。通过测定小鼠机械刺激缩足反射阈值、热刺激缩足反应潜伏期及冷缩足反射次数,观察白藜芦醇是否具有缓解小鼠炎性痛的作用。采用RT-PCR和Western blot法检测炎性痛小鼠脊髓组织(L4~L6)NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinaseβ,IKKβ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:白藜芦醇(100和50 mg/kg)可明显升高完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)所致炎性痛小鼠机械刺激缩足反射阈值,显著延长其热刺激缩足反应潜伏期,减少其冷缩足反射次数(P0.05或P0.01);白藜芦醇(100 mg/kg)可明显下调CFA诱导的炎性痛小鼠脊髓组织NF-κB、IκBα、IKKβ、TNF-α及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。结论:白藜芦醇对炎性痛具有较好的缓解作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化的探讨

目的研究TNF-α对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞NF-κB信号转导通路活化的影响。方法原代培养类风湿性关节炎滑膜细胞;应用Western blot检测滑膜细胞p65-NF-κB和ΙκBα蛋白的表达变化;应用免疫荧光技术分析NF-κB核移位的变化。结果 TNF-α刺激不同时间后p65-NF-κB蛋白在滑膜细胞核内表达增加,而在胞浆表达减少,30 min时最明显;同时,免疫荧光显示TNF-α可促使NF-κB向滑膜细胞核内移位;TNF-α刺激20 min后ΙκBα蛋白降解明显增加。结论TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化,可能与类风湿关节炎炎症进程有关。     

NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用

目的 探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这段序列进行酶切并定向克隆入表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(GFP)载体,将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINETM2000介导瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP.用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变,将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果 pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,并且NF-κB结合位点突变成功.细胞转染结果表明,构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱,与未转染质粒相近.结论 成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒;NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞巾绿色荧光表达明显减弱,说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用;为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础.     

NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κBp65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05)。结论HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移。NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程。     

NF-κB信号通路基本元件调节机制的研究进展

核因子-kappaB（NF-κB）信号通路广泛参与调节免疫反应、炎症反应、细胞分化与凋亡、肿瘤形成等多种生物学功能。在非激活细胞中,NF-κB转录因子通常与其抑制物结合形成复合物,并在胞浆与胞核间达到平衡,但这种复合物主要存在于胞浆中。当受到胞外信号刺激后,复合物可以在NF—κB信号通路的多个信号转导途径中发生降解,使得抑制物从复合物中解离,释放出的大量活性NF—κB迅速转移入核,从而调控相应靶基因的表达。目前发现的和NF—κB的调节紊乱有关的疾病谱在不断扩大,这也使得对于NF—κB信号通路功能和调节的研究得到了深入发展,对通路中一些基本元件的调节也有了较为充分的了解。     

NF-κB 在TNF-α抗体治疗大鼠肝肺综合征中的作用

 目的：探讨 TNF-α单克隆抗体（TNF-αMcAb）对肝肺综合征（HPS）大鼠NF-κB表达的影响及NF-κB在TNF-α单克隆抗体治疗大鼠肝肺综合症中的作用。方法: 采用胆总管结扎（CBDL）建立大鼠HPS模型,通过腹腔注射抗TNF-αMcAb（0.1mg/kg.2d）治疗HPS,观察肺组织病理变化;检测血浆TNF-α、内毒素水平及肺组织NF-κB蛋白表达;进行血气分析,计算肺泡-动脉氧分压梯度差;结果：TNF-αMcAb干预后肺组织的炎症和毛细血管扩张明显减轻,肺泡-动脉氧分压梯度差明显减少（P<0.05）,血浆内毒素、TNF-α的水平较胆总管结扎组明显减低（P<0.05）。肺组织NF-κB 蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。 结论： TNF-α单克隆抗体可部分改善大鼠肝肺综合征的严重程度并抑制NF-κB的表达,TNF-α单克隆抗体可能通过抑制NF-κB的表达治疗肝肺综合症。     

白芍总苷调控NF-κB/NLRP3信号通路对急性痛风性关节炎大鼠的影响机制研究

目的：探究白芍总苷（TGP）通过调控核因子-κB(NF-κB)/含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)信号通路对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠炎症的影响。方法：将60只SD大鼠以每组10只随机分为对照组、AGA组、秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组。对照组和AGA组每天进行生理盐水灌胃,秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组每天分别灌胃相应药物,共7 d,除对照组外均于灌胃第5天时构建尿酸钠（MSU）诱导的AGA大鼠模型;观察各组大鼠一般情况;检测大鼠步态及关节炎症指数评价、关节肿胀程度;HE染色观察大鼠踝关节滑膜组织病理学变化;ELISA法检测大鼠关节液中炎症因子水平;Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织NF-κB p65/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组相比,AGA组大鼠关节肿胀、跛行、皮毛无光泽、精神倦怠;秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组大鼠相关症状均得到有效改善;与对照组相比,AGA组大鼠步态级别、关节炎症指数、关节肿胀程度、组织病理学程度、TNF-α、IL-6、IL-1β、p-NF-κB p65...