丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理

目的 了解丹参酮对人肺癌细胞（SPC-A-1）的凋亡诱导作用，并探讨其可能的分子机理，方法 体外培养的SPC-A-1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA（0.5mg/L)处理5天，光镜，电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果 SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后，电镜观察可见多量凋亡细胞，流式细胞仪检测；丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组及对照组，而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因p53,Fas,Bax表达水平明显升高，而凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平则显著降低。结论 丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用。其分子机理可能是上调p53,Bax,Fas及下调Bcl-2的表达。     

丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理

目的：观察丹参酮ⅡA对人肺腺癌细胞（SPC－A－1）的增殖抑 制作用及其分子机理。方法：体外培养的SPC－A－1细胞经无毒剂量（0．5μg/ml）的丹参酮ⅡA处理5天后，观察细胞形态学、增殖动力学、细胞周期分布及肿瘤相关基因表达改变，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果：SPC－A－1细胞经丹参酮ⅡA处理后，细胞生长明显减慢，集落形成率显著降低。FCM细胞周期分析：S期细胞显著减少，G0／G1期细胞则明显增加。丹参酮ⅡA可使细胞p53、p21表达显著升高而CDKN2明显降低。结论：丹参酮ⅡA对SPC－A－1细胞增殖具有显著抑制作用，其分子机理可能是丹参酮ⅡA能显著上调p53、p21表达和下调CDKN2的表达而抑制DNA的合成。     

土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究

目的:研究土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡的作用机制.方法:采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法, DNA片段化分析技术检测细胞凋亡的变化;FCM分析细胞周期的变化; Western 印迹法和RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白及mRNA的表达.结果:土槿乙酸明显诱导人胃癌AGS细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期;10 μmol/L土槿乙酸作用AGS细胞12 h后p53表达增加,在36 h时达到峰值,24 h后可见p21WAF1/CIP1表达明显增加.土槿乙酸作用于AGS细胞后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,降低了抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性. 结论:土槿乙酸可通过p53激活Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡.     

蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用及其机制

 目的 研究蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用，并探讨其作用机制。方法 采用流式细胞仪检测HeLa细胞的细胞周期分布相和细胞凋亡率；末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧核苷酸缺口末端标记（TdT mediated dUTP nick end labeling）TUNEL法检测凋亡细胞；通过免疫细胞化学SP法测定凋亡相关基因产物p53、Fas、bcl 2、Bax蛋白的表达情况。结果 (1)蛴螬粗提物可以诱导HeLa细胞发生凋亡，加药组出现亚二倍体峰，并且G0/G1期细胞比例显著增加（P＜0.01），而S期和G2/M期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期；（2）蛴螬粗提物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多，凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性；(3)蛴螬粗提物作用后bcl 2、p53蛋白随提取物浓度表达均下降，Bax、Fas蛋白表达上升，四种蛋白表达各组间比较差异均有具有统计学意义（P<0.01）。结论 (1) 蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞具有诱导凋亡作用；(2)蛴螬粗提取物诱导凋亡作用机制可能与细胞周期发生G0/G1期阻滞有关；并且通过下调bcl 2、p53蛋白表达,上调Bax、Fas蛋白表达，经由细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas、Bcl-2和p53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖，P=0．004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示，G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高，P=0．005；Fas蛋白表达明显上调，P=0．002；Bcl-2蛋白表达下调，P=0．00～0；p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562/ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究

背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一.从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点.本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制.方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化.结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用.②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24 h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P＜0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P＜0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P＜0.001).④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P＜0.05).结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡.     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法:利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(PI标记),Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果:MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度(10μg/ml)时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡(P<0.05),这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论:小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

藏红花素对人肺腺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的探讨藏红花素（Crocin）对肺腺癌SPC A1细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度（1、2、4、8、16mg／ml）的Crocin对人肺腺癌SPC A1细胞体外生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞形态学改变;采用Annexin V FITC／PI荧光双标流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;采用RT PCR法检测凋亡相关分子p53、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。结果 Crocin作用SPC-A1细胞24、48、72h后,细胞生长受到明显抑制且呈剂量依赖性。不同浓度Crocin处理48h后,倒置显微镜下SPC-A1细胞形态表现为皱缩、变圆等细胞凋亡性状。不同浓度Crocin处理48h后,各浓度组SPC-A1细胞的凋亡率增加且呈剂量依赖性;随着Crocin作用浓度的增加,SPC-A1细胞生长更多地阻滞在G₀／G₁期,而S期、G₂／M期的细胞比例逐渐降低。RT-PCR法检测显示,随着Crocin浓度的增加,SPC-A1细胞中p53、Bax mRNA水平上调和Bcl-2 mRNA水平下调。结论 Crocin可以抑制人肺腺癌SPC-A1细胞增殖和诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,这可能与其对p53、Bax和Bcl-2的调控有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E 琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法: 以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性, Wright Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2 和p53 蛋白表达水平。结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P= 0 .004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示,G1 期阻滞,亚G1 期细胞比例增高,P=0 .005;Fas蛋白表达明显上调,P=0. 002;Bcl -2蛋白表达下调,P=0. 000;p53蛋白表达无明显变化。结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl 2表达有关。     

丹参酮ⅡA对MKN-45细胞生长的影响

目的:研究丹参酮ⅡA(Tanshi-noneⅡA,TanⅡA)对人胃癌细胞株MKN-45的生长抑制作用。方法:选用人胃癌细胞株MKN-45,运用MTT法、流式细胞术(FCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和各组p53mRNA表达。结果:TanⅡA可明显抑制MKN-45细胞的增殖,其抑制作用具有时间-效应和剂量-效应关系。当2·0μg/mL TanⅡA处理MKN-45细胞96h,增殖抑制率达(74·84±0·41)%。FCM检测肿瘤细胞DNA变化,观察到TanⅡA使MKN-45细胞周期阻滞于G2/M期,出现浓度依赖性的亚“G1”峰,同时野生型p53表达增加。结论:TanⅡA能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-45的增殖,其可能的机制与凋亡有关。肿瘤防治杂志,2005,12(19):1465-1468