Oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中的表达及意义

背景:干细胞特异性基因Oct-4在维持干细胞功能和调节干细胞的分化过程中起着关键性作用,了解前列腺癌干细胞中Oct-4的表达,对前列腺癌的预后、复发和耐药的评估具有重要意义.目的:观察Oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中的表达.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02/10在南吕大学第一附属医院中心实验室完成.材料:取12例前列腺癌患者手术后组织标本,其中6例在手术前没有经过化疗和激素治疗,另外6例患者经过激素治疗出现抵抗而手术.方法:制备前列腺癌组织单细胞悬液,流式细胞仪分选未经治疗前列腺癌和治疗后出现耐药的前列腺癌干细胞,RT-PCR和Western blot榆测激素非依赖件前列腺癌Oct-4基因和蛋白的表达.主要观察指标:激素依赖和非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+以及CD133-/CD44-细胞的比例;Oct-4基因和蛋白在激素非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+、CD133+/CD44-、CD133-/CD44+、CD133-/CD44-细胞的表达.结果:流式细胞仪检测显示未经过治疗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞占(0.83±0.21)%,而CD133-/CD44-细胞多达(95.62±1.35)%;治疗出现激素抵抗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞为(54.62±0.86)%,而CD133-/CD44-细胞为(9.56±0.47)%;与其他亚群细胞相比,激素非依赖性前列腺癌CD133-/CD44-细胞Oct-4基因和蛋白显著降低(P＜0.01);CD133+/CD44+细胞Oct-4基冈和蛋白表达显著升高(P＜0.01):而CD133+/CD44-和CD133-/CD44+细胞之间Oct-4基因和蛋白表达无显著差异(P＞0.05).结论:Oct-4在激素非依赖件前列腺癌干细胞中高表达,可能与前列腺癌的预后和耐药有关.     

骨肉瘤干细胞的分离与鉴定

背景：骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤,其发生可能与骨肉瘤干细胞有关。目的：评估骨肉瘤干细胞分离、培养和鉴定方法以及其相关肿瘤标记物的表达。方法：在无血清条件下以及无血清联合抗肿瘤药物的条件下应用免疫磁珠分选法对骨肉瘤干细胞进行分离、培养,分选出Stro-1阳性、CD133阳性骨肉瘤干细胞,采用免疫荧光染色、蛋白质印迹法等检测骨肉瘤肿瘤干细胞标记物CD133、Oct3／4以及Nanog等的表达水平以及致瘤性能。结果与结论：骨肉瘤干细胞在接种培养2-10d后形成悬浮细胞球,增殖潜伏期约为24h,Stro．1阳性干细胞能够形成悬浮细胞球,Stro-1阴性细胞则不能形成悬浮细胞球。此外,骨肉瘤干细胞还能高表达Oct3／4、Nanog和CD133等,CD133阳性骨肉瘤干细胞高表达CD133分子,侵袭力更强,而CD133阴性细胞则不能表达CD133分子,侵袭力相对较弱。塞来昔布对骨肉瘤干细胞的形成具有一定程度的抑制作用,能够降低肿瘤新生血管中血管内皮生长因子的表达。     

胃癌周围淋巴结组织间充质干细胞的分离和鉴定

目的试分离培养胃癌患者周围淋巴结组织中的间充质干细胞(h GCL-MSCs),并鉴定其生物学特性。方法采用组织块贴壁法分离培养24例胃癌患者周围淋巴结组织,通过测定生长曲线、细胞周期、RT-PCR、染色体分析、免疫组化染色、成骨成脂诱导染色及裸鼠致瘤等实验,评价其生物学特性,并与人骨髓间充质干细胞(h BM-MSCs)进行比较。结果 24例胃癌患者周围淋巴结组织中分离培养出3例h GCL-MSCs;生长曲线试验发现,h GCL-MSCs增殖速率高于h BM-MSCs;染色体分析示其核型正常,裸鼠致瘤实验未见致瘤;RT-PCR检测其表达Oct-4、Nanog、ABCG2、CD44、CD73、α-SMA、Bmi-1等干细胞相关基因;免疫组化染色结果表明,h GCL-MSCs中α-SMA、P53、ABCG2染色呈强阳性,PCNA染色呈弱阳性。结论 h GCL-MSCs与h BMMSCs的生物学特性相似,对研究胃癌微环境及其发生具有重要意义。     

胚胎干细胞基因Nanog，Oct-4基因在前列腺癌中的表达及意义

【目的】探讨Nanog基因和Oct-4基因在良性前列腺增生（BPH）,前列腺上皮内瘤变（PIN）及前列腺癌（PCa）中的表达及其在PCa发生发展中的作用。【方法】用免疫组织化学法检测BPH（n=30）、PIN（n=8）厦、PCa（n=94）中胚胎干细胞相关基因Nanog,Oct-4的表达水平,并比较三者之间的差异。【结果】Nanog基因和Oct-4基因在BPH和PIN组织中无明显差异（P〉0．05）。PCa组织中的Nanog基因和Oct-4基因明显高于BPH及PIN（P〈0．05）。随着PCa组织Gleason评分的增加,肿瘤中干细胞相关基因Nanog,Oct-4的表达也明显增多（P〈0．05）。【结论】Nanog,Oct-4基因在前列腺癌中均有表达,其表达水平与肿瘤的组织学分级相关。     

人肝癌干细胞标志物在大鼠肝癌中的表达

目的:分析8种人肝癌干细胞标志物在化学药物诱导的大鼠原发性肝癌中的表达情况。方法:应用二乙基亚硝胺及N-亚硝基吗啉建立化学药物诱导的大鼠原发性肝癌模型。用免疫组织化学方法检测8种人肝癌干细胞标志物CD133、CD90、CD44、腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、OV6和乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenases,ALDH)在大鼠肝癌组织及癌旁组织中的表达,并通过13点评分法及Image-Pro Plus 6.0软件对图像进行半定量分析。结果:ABCG2、CD133、CD44和AFP在肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织,其余4个标志物无显著差异。结论:化学药物诱导的大鼠肝癌细胞中含有肿瘤干细胞标志物阳性细胞。     

氧化修饰高密度脂蛋白对大鼠颗粒细胞激素分泌的影响及相关机制

目的研究氧化修饰高密度脂蛋白(Ox-HDL)对大鼠颗粒细胞激素分泌的影响及相关机制。方法 30只6周龄SPF级SD雌性大鼠经适应性饲养5 d后,采用孕激素拮抗剂米非司酮进行多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠造模。随机选择25只雌鼠,每天对大鼠进行1次皮下注射,每次剂量0.2 mL米非司酮(20 mg/mL),连续14 d。其余5只雌鼠作为对照组。选择造模成功的15只雌鼠,分为模型组,低剂量组及高剂量组,每组5只。对照组及模型组大鼠尾静脉注射0.05 mL生理盐水,连续14 d。低剂量组和高剂量组每天尾静脉注射0.05 m L Ox-HDL溶液(浓度分别为200、400μmol/L),连续14 d。并收集大鼠卵巢颗粒细胞。采用ELISA试验检测大鼠血清雌激素及孕酮水平;采用HE染色检测Ox-HDL对PCOS卵巢病理形态的影响观察;采用Hoechest33258凋亡染色检测大鼠颗粒细胞凋亡水平的影响;采用RT-PCR法检测Ox-HDL对大鼠颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR及Bax基因表达的作用;采用Western blot法检测Ox-HDL对大鼠颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR及Bax蛋白表达的作用。结果 PCOS大鼠在Ox-HDL作用后,雌激素及孕酮水平均下降差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组的雌激素及孕酮均显著低于其它各组差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色发现PCOS大鼠给予高剂量Ox-HDL后,囊肿卵泡进一步增多,颗粒细胞排列较为疏松,大鼠卵巢病理症状有一定加剧。Hoechest33258凋亡染色检测发现高剂量组细胞凋亡水平显著高于其它各组(P<0.05)。RT-PCR实验发现发现Ox-HDL可抑制颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR基因的mRNA表达水平差异有统计学意义;Ox-HDL可促进颗粒细胞Bax基因的mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting实验发现发现Ox-HDL可抑制颗粒细胞Bcl-2、FSHR、StAR蛋白表达水平;Ox-HDL可促进颗粒细胞Bax蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ox-HDL可促使PCOS大鼠卵巢病理症状加剧,诱导颗粒细胞发生凋亡,并导致颗粒细胞激素分泌能力紊乱。     

Oct4和Nanog在胰腺癌干细胞中表达的研究

目的:研究Oct4和Nanog基因在人胰腺癌细胞系及干细胞中的表达情况.方法:用流式细胞仪,以CD44+CD24+和CD44+CD24+ESA+为表面标记,在胰腺癌Panc-1细胞中分选肿瘤干细胞,RT-PCR、定量PCR及免疫荧光法检测肿瘤干细胞中Oct4、Nanog基因的表达情况.结果:分选出的胰腺癌CD44+CD24+细胞约占细胞总量的1%～3%,CD44+CD24+ESA+约占细胞总量的0.1%～0.8%,Oct4及Nanog基因在两种分选出的细胞中表达均高于未分选细胞,在CD44+CD24+ESA+细胞中的表达高于CD44+CD24+细胞.结论:干细胞相关基因Oct4、Nanog高表达于胰腺癌干细胞中,其表达量与干细胞纯度成正相关.     

人参皂苷Rg1干预骨髓间充质干细胞转化为多潜能干细胞关键基因mRNA的表达

背景：将成体细胞重编程为诱导多潜能干细胞方案主要通过反转录病毒将Oct-4,Sox2,c-Myc,Klf4等基因转入成体细胞而实现。目的：观察人参皂苷Rg1作用于骨髓间充质干细胞后,对成体细胞向诱导多潜能干细胞转化的关键性基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、NanogmRNA表达的影响。方法：培养骨髓间充质干细胞,对照组培养基为α-MEM,体积分数5%FBS,1%双抗;用药组培养基为α-MEM,体积分数15%FBS,1000U/mLRatESGRO,1%双抗,并加入6.25μmol/L和12.5μmol/L人参皂苷Rg1。检测骨髓间充质干细胞Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,Nanog等mRNA的表达。结果与结论：人参皂苷Rg16.25μmol/L培养30d,Nanog、c-Myc、Oct、Klf4、Sox2mRNA表达均有升高,且Nanog、c-Myc与对照组差异有显著性意义。人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞表达c-Myc,Nanog,但Nanog阳性的诱导多潜能干细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,提示人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞向诱导多潜能干细胞转化可能具有促进作用。     

人参皂苷Rg1干预骨髓间充质干细胞转化为多潜能干细胞关键基因mRNA的表达

背景:将成体细胞重编程为诱导多潜能干细胞方案主要通过反转录病毒将Oct-4,Sox2,c-Myc,Klf4等基因转入成体细胞而实现.目的:观察人参皂苷Rg1作用于骨髓间充质干细胞后,对成体细胞向诱导多潜能干细胞转化的关键性基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog mRNA表达的影响.方法:培养骨髓间充质干细胞,对照组培养基为α-MEM,体积分数5%FBS,1%双抗;用药组培养基为α-MEM,体积分数15%FBS,1 000 U/mL Rat ESGRO(R),1%双抗,并加入6.25 μmol/L和12.5 μmol/L人参皂苷Rg1.检测骨髓间充质干细胞Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,Nanog等mRNA的表达.结果与结论:人参皂苷Rg1 6.25 μmol/L培养30 d,Nanog、c-Myc、Oct、Klf4、Sox2 mRNA表达均有升高,且Nanog、c-Myc与对照组差异有显著性意义.人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞表达c-Myc,Nanog,但Nanog阳性的诱导多潜能干细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,提示人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞向诱导多潜能干细胞转化可能具有促进作用.     

鸡卵清提取液中大于3 ku蛋白促细胞升高表达多能基因Oct-3/4和Nanog

背景：将体细胞重编程为多能干细胞在生物医学研究领域有广泛的应用价值。目的：分析鸡卵清提取液中不同分子质量的蛋白促进293T细胞升高表达多能基因Oct-3/4和Nanog的作用。方法：分离鸡卵清提取液中大于3 ku和小于3 ku的成分,用于293T细胞共培养。实验分为4组：每孔加入1×10^5个293T细胞,总体积500μL。对照组加入500μL培养基;另外3个孔分别加500μL鸡卵清提取液、鸡卵清大于3 ku的成分和小于3 ku的成分。采用定量PCR检测多能基因Nanog和Oct-3/4的相对表达量。结果与结论：用共培养法大于3 ku的成分有促细胞升高表达多能基因Oct-3/4和Nanog的作用,但小于3 ku的成分没有促细胞升高表达多能基因的作用。提示在鸡卵清提取液中促细胞升高表达多能基因的成分是大于3 ku的蛋白质。     

From stem cells to tissue-specific differentiation

Stem cells have been isolated from embryonic, foetal and adult sources. Embryonic stem cells, derived from the pre-implantation embryo, can be expanded indefinitely in vitro. When reintroduced into the blastocyst they contribute to all lineages in vivo. In vitro, differentiated derivatives of embryonic stem cells are obtained by manipulating culture conditions. Embryonic germ cells, derived from the primordial germ cells, display the same degree of pluripotential differentiation. Adult stem cells that repopulate the tissue of origin throughout life possess the ability to differentiate into phenotypes not restricted to the tissue and, in some cases, to the germ layer from which they derive. Although the pluripotential differentiation capability of these stem-cell populations is supported by an increasing amount of evidence, a better understanding of the mechanisms that control differentiation is required for their exploitation in the treatment of human diseases.     

白术对胃粘膜上皮细胞功能作用的实验研究

目的：研究白术治疗慢性胃病的机理。方法：用白术提取液与胃粘膜细胞共同培养；^3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察胃粘膜细胞增殖状况；改良李氏法测定胃蛋白酶含量，pH仪测定胃酸分泌量。结果：0.5%和1％白术浓度组cpm值显著高于对照组和0.25%浓度组（P＜0．05－0．01），但0.5和1％浓度组之间无显著性差异（P＞0．05）。0．5％和1％白术浓度组胃蛋白酶分泌量与对照组和0．25％浓度组比较差异显著（P＜0．01）。实验组中各组pH值低于对照组，但无统计学意义（P＞0．05）。结论：白求能促进胃粘膜细胞的增殖，刺激胃蛋白酶的分泌。     

三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

背景：关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的：采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法：无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论：分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而 CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。     

骨髓间充质干细胞复合多肽凝胶及成软骨生成因子修复兔关节软骨缺损

背景：多肽水凝胶因为其具有良好的可塑型性,能够与损伤部位很好的无缝隙结合,所以采用该材料作为支架是骨、软骨组织工程中一种可行的探索。目的：骨髓间充质干细胞联合新型可注射多肽凝胶及成软骨生成因子修复兔关节软骨缺损,观察其修复效果。方法：首先分离培养兔骨髓间充质干细胞,兔左侧膝关节处制备直径5 mm,深3 mm的全层骨-软骨缺损模型;右侧造模后空置作为对照。实验分为3组,单纯自组装多肽凝胶移植组,自组装多肽凝胶+成软骨因子组和自组装多肽凝胶+成软骨因子+骨髓间充质干细胞组。采用的成软骨因子包括转化生长因子β1,地塞米松和胰岛素样生长因子1,三者混合后加入到自组装多肽凝胶或骨髓间充质干细胞中。于处理后12周时处死动物行大体及组织学观察、X射线摄片、免疫组织化学法进行组织学评分评估修复情况。结果与结论：单纯自组装多肽凝胶移植在12周后显示出非常好的修复效果,可见番红O染色,Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色强度以及组织学评分明显高于其他组(P <0.05)。自组装多肽凝胶+成软骨因子组修复效果较好,与自组装多肽凝胶组相似,但其修复区域蛋白聚糖表达比对照组明显升高(P <0.01)。自组装多肽凝胶+成软骨因子+骨髓间充质干细胞组修复效果不佳,12周未能完全修复缺损区域,与单纯自组装多肽凝胶组比较骨赘的形成有所增加。结果表明,单纯自组装多肽凝胶能够在原位修复骨软骨缺损并促进软骨修复,提示以自组装多肽凝胶支架移植有望提高目前修复软骨缺损的效果。     

人脐带Wharton′s jelly源性干细胞的分离、培养和表型鉴定

目的：探讨人类脐带Wharton′s jelly来源干细胞的分离、培养和表型鉴定。方法：剔除人类脐带动静脉,获得脐带Wharton′s jelly组织,应用组织块贴壁法进行培养,以流式细胞法行细胞表型鉴定。结果：分离出的人类脐带Wharton′s jelly组织,在培养后3-7 d可见细胞从组织块爬出,主要表现长梭形的成纤维样细胞,2周左右可达80%汇合,这些细胞表达间充质干细胞的标记物CD105、CD73、CD90、CD54、CD44,而不表达造血和内皮标记物CD34、CD45、CD106和CD133。结论：应用组织块贴壁法可以从人脐带Wharton′s jelly中分离、培养出干细胞,它们表达间充质干细胞的标记物。     

缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：观察缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞形态学特征。方法：将缺血性脑血管病患者自体骨髓中的阃充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSCs）经密度梯度离心法分离、纯化和培养，观察原代和传代细胞的形态。结果：原代培养的BM—MSCs最佳贴壁时间为3d，生长性状不一，呈散在圆形细胞群、散在梭形细胞群、克隆圆形细胞群、花带状细胞群、漩涡状细胞群，而传代培养的细胞，增殖速度较快，性状一致，排列规则，呈饱满的梭行。结论：通过体外非诱导培养获得的自体BM—MSCs，有较强的增殖能力和多向分化潜能，为缺血性脑血管病的临床治疗提供了实验依据。     

血细胞计数仪阈值确定

介绍一种带有阈值调节功能的血细胞计数仪阈值确定的方法，该方法是将阈值调节与血细胞体积联系起来，以血细胞体积确定测定阈值，经使用认为简便易行准确可靠。     

精液脱落细胞的研究与临床应用

精液脱落细胞检查包括对精液中精原细胞，初级精母细胞，次级精母细胞，精子细胞，支持细胞，生殖道上皮细胞，中性粒细胞等其他有形成分的鉴别分析，是对传统精液检查的改良和补充，是一项无创伤的睾丸生殖功能检查方法。     

人子宫内膜细胞体外培养模型的建立

【目的】构建人子宫内膜细胞体外培养模型。【方法】收集子宫内膜组织,采用酶消化、筛网滤过、梯度离心的方法获得腺上皮与基质细胞混合细胞进行体外原代培养,采用光学显微镜下观察体外培养的细胞形态,采用波形蛋白和角蛋白单克隆抗体进行免疫组化法鉴定子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞。【结果】倒置显微镜下发现子宫内膜细胞中腺上皮细胞和基质细胞呈混合生长,其中基质细胞占大部分,为72．0％;腺上皮细胞占小部分,为24．5％,基质细胞和腺上皮细胞免疫组化染色后呈阳性,细胞纯度分别为24．5％和70．5％,两种细胞加起来的纯度为95％。【结论】该方法操作简便,效率高,可建立一个稳定实用的人子宫内膜细胞体外培养体系。     

Prostanoids and cell injury

Cells respond to injury with a variety of mechanisms, one of which is the synthesis and release of various vasoactive factors. These factors can influence the intra- and extracellular environments of the cell and thus affect the overall rate of cellular survival. Products of arachidonic acid metabolism represent one such system. Studies have demonstrated the synthesis and release of various prostanoids during global injuries such as circulatory shock, burn injury, myocardial infarction, and severe trauma. We have carried out studies in an isolated, perfused rabbit liver preparation to investigate the cellular stimuli and cellular mechanisms by which the archidonic acid cascade is stimulated under these conditions. Both hypoxia and metabolic poisoning with dinitrophenol are stimuli for enhanced prostanoid production in vitro. This eicosanoid production is associated with evidence of severe cellular injury. In contrast, when endogenous prostanoid production is stimulated in a noninjured liver with phospholipase A2, the production is transient and is not associated with cellular injury. Another stimulus, bacterial endotoxin, has no effect on prostanoid biosynthesis in vitro even though endotoxin is a very potent stimulus in vivo. Activated complement has been shown to be a potent stimulus for arachidonic acid metabolism both in vivo and in vitro. It thus becomes apparent that arachidonic acid metabolism can be influenced by both receptor and nonreceptor related mechanisms in the injured cell. In addition, the eicosanoids released by the injured cell are apparently able to participate in the homeostatic response of the cell to the injury.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)