两种方法检测低浓度乙型肝炎病毒表面抗体的探讨

目的 探讨对低浓度乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗体(抗-HBs)定性与定量检测方法的差异.方法 采用酶免疫测定(EIA)一步法、时间分辨荧光法(TRF)、Axsym雅培试剂来测试抗-HBs.结果 采用EIA一步法对低浓度抗-HBs标本进行测定显示,阴性37例,阳性21例;再用TRF法进行复查,阴性标本37例中有3例呈弱阳性,阳性标本21例中有2例呈阴性;以上5例结果不一致标本,采用美国Abboutt公司生产的Axsym雅培试剂检测显示,与TRF法一致.结论 标志物提倡使用EIA二步法酶联试剂及定量方法,改善定性和定量检测结果差异性问题,最小限度避免结果上的差异,减少医患之间矛盾.     

溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响

目的通过实验观察溶血标本在酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法中对乙型肝炎两对半（HBVM）检测结果的影响。方法用80例健康人（HBVM均为阴性）的血液标本,人为造成不同程度溶血,用ELISA一步法和二步法同时检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBe）,通过对检测结果的观察来分析溶血对检测结果的干扰程度。结果当溶血程度大于或等于10g／L时,ELISA一步法40％以上的标本0D值均大于临界值,差异有统计学意义（P〈0．01）;ELISA二步法仅为3％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论当溶血程度大于或等于10g／L对ELISA一步法检测HBVM的结果有干扰,可造成临界假阳性;ELISA二步法干扰不明显,无统计学意义。     

检测乙型肝炎病毒e抗体的影响因素

目的探讨当乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）和乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）同时阳性，用改进的酶免疫竞争（EIA）二步法复查抗-HBe的必要性。方法使用EIA二步法检测HBeAg和抗一HBe同时阳性的标本，结果同一步法进行比较。结果用EIA一步法与二步法检测抗-HBe的吸光度（A）值，二者差异有非常显著性（P〈0．001）。结论用EIA一步法检测抗-HBe易出现前带现象而导致假阳性，建议用改进二步法检测。     

ELISA一步法检测梅毒抗体钩状效应三例

笔者在用ELISA双抗原夹心一步法试剂检测梅毒抗体（TP-Ab）工作中遇到高滴度标本检测结果假阴性1例、弱阳性2例,经进一步实验判定此结果为钩状效应（Hook effect）引起,现报告如下。     

ELISA一步法检测梅毒抗体钩状效应三例

笔者在用ELISA双抗原夹心一步法试剂检测梅毒抗体（TP-Ab）工作中遇到高滴度标本检测结果假阴性1例、弱阳性2例,经进一步实验判定此结果为钩状效应（Hook effect）引起,现报告如下。     

美国核心抗体(抗-HBc)筛查阳性供血者中HBV DNA的检出率:输血感染和供血者筛选的意义

要作核心抗体筛查的供血者,尤其是随之而来的HBV核酸检测很重要。设计与方法 从库存标本中找出HBsAg EIA反应、抗-HBc反应(Corzyme,Abbott实验室)标本进行抗-HBe和抗-HBs复检。PRISM核心抗体反应和抗-HBs阴性或每升低于100IU的反应的标本进一步抽样进行HBV DNA检测,采用每ml少于50个拷贝能检出95％以上的PCR法。结果1,231份标本中共有395份符合血清学标准并进行了PCR试验,4份抗-HBs阴性标本PCR检测阳性,其中计算两份标本的HBV     

时间分辨免疫荧光定量检测乙型肝炎病毒前S1抗原的研究

目的 建立时间分辨免疫荧光定量分析乙型肝炎病毒PreS1抗原的方法.方法 以基因重组的带有PreS1抗原的乙型肝炎表面抗原作标准品,应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs分别作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中含有PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测.结果 自制TRFIA试剂检测PreS1抗原,单侧95%参考范围为0～0.26 ng/ml;自制TRFIA试剂与ELISA试剂对乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法灵敏度高于ELISA方法,250份乙型肝炎患者血清标本中有3例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原;对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出.ELISA方法在一阳性标本1：4 096倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1：16 384倍稀释时仍为阳性;高、中、低三个浓度,批内和批间精密度测试变异系数（CV,%）均小于10%,平均回收率为103.3%;TRFIA方法检测PreS1抗原与HBsAg及HBeAg无交叉反应;50份我院正常体检者血清标本进行PreS1抗原的检测,结果均正常,特异性100%.结论 TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况.     

加酶时间对ELISA定性测定HBsAg的影响

目的探讨加酶时间对酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法定性测定HBsAg的影响程度,及加酶前后反应的差异。方法1加酶时间分别设为加样后0,5,10,15,20min,温育时间为30min,检测阴性血清和HBsAg为0.2,0.5,1,2,50,1000ng/ml的定值质控血清,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异;2同时作"一步法"与"二步法"对照检测,比较两种测定方法S/CO比值的差异。结果1随着加样后加酶时间的延长,弱阳性标本结果越明显;2弱阳性标本检测结果"一步法"S/CO比值明显低于"二步法"。结论1加酶时间对ELISA一步法定性测定HBsAg弱阳性标本结果有较大影响;2弱阳性标本的检测"二步法"优于"一步法"。     

时间分辨免疫荧光检测乙肝病毒前S1抗原临床应用

目的乙型肝炎病毒PreS1抗原时间分辨免疫荧光分析方法临床应用研究。方法应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中存在PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对样本中乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测。结果自制TRFIA试剂与ELISA试剂对300例乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法更灵敏,有9例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原。对这9例标本进行HBV DNA定量检测,有6例标本HBV DNA拷贝数均>106;高、中、低三个浓度,TRFIA方法批内和批间精密度测试,CV均小于10%;TRFIA方法从低值到高值,从批内至批间CV均优于ELISA方法;对于强阳性标本,从原倍到1∶16倍稀释,ELISA方法都无法区分阳性程度的强弱,而TRFIA方法结果从高到低有显著性区别。对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出,一强阳性标本,ELISA方法在1∶8192倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1∶16384倍稀释时仍可检出PreS1抗原。结论TRFIA方法与ELISA方法相比,测量范围、精密度和灵敏度有较大提高。     

TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价

目的对TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）的特异性进行评价。方法参考美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP12-A、EP7-A及有关文献,分别通过加样针的携带污染、加样和加酶间隔时间、溶血干扰等试验对仪器的RSP150/8前处理系统和BEPⅢ后处理系统检测HBsAg、抗-HBs的特异性进行评价。结果标本HBsAg〉8 000 S/CO时,加样针仍未出现携带污染,而标本抗-HBs〉1 000 mIU/mL时加样针出现携带污染现象。已加样HBsAg、抗-HBs阴性及弱阳性标本的反应板室温放置30min内加酶以及标本中加入血红蛋白（浓度≤8 g/L）,未出现假阳性结果。结论高浓度的抗-HBs对加样容易产生携带污染。血红蛋白对HBsAg、抗-HBs试验的干扰并不明显。HBsAg、抗-HBs酶标板在室温放置30 min内加酶对检测结果影响不大。     

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果的评价分析

目的对酶联免疫吸附试验（ELISA）、时间分辨免疫荧光法（TRFIA）、化学发光法（CLIA）、电化学发光法（ECLIA）检测乙型肝炎血清标志物[乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（抗HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）]的结果进行分析,评价不同方法学检测结果之间是否具有一致性。方法用ELISA、TRFIA、CLIA、ECLIA分别检测100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者和50名正常体检者的乙型肝炎血清标志物。以ECLIA作为参考方法,通过Kappa检验评价不同方法学检测结果之间的一致程度。结果 4种方法检测乙型肝炎血清标志物的结果具有高度以上一致性,CLIA和ECLIA在检测敏感性上更有优势。结论目前广泛使用的检测乙型肝炎血清标志物的方法具有较好的一致性,为实验室结果互认提供了依据。其中ELISA适用于人群初筛,CLIA和ECLIA对于肝炎患者疗效判断更有价值。     

乙型肝炎病毒表面抗原阴性271例隐匿性感染的研究

目的了解在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性人群中隐匿性感染情况。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测271例重庆黔江区HBsAg阴性住院患者血清中HBV-DNA含量。结果271例HBsAg阴性人群血清HBV—DNA阳性率为10．7％，HBV-DNA含量均低于10^3 copy／mL。HBV—DNA检出率与性别、年龄无关。在HBV-DNA阳性人群中抗-HBc抗体出现率较高，抗-HBs阳性或乙型肝炎病毒标志物全阴性也可检出HBV-DNA。结论血清HBsAg阴性者存在一定比例的隐匿性感染，对不明原因的肝损害、输血、器官移植等应结合灵敏度高的HBV-DNA检测结果再作判断。     

临产妇前S1抗原与乙型肝炎“两对半”联合检测的意义

目的探讨临产妇前S1抗原和乙型肝炎“两对半”组合模式的关系及其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测394例临产妇血清乙型肝炎病毒前S1抗原（PreS1）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）和乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）6种免疫指标的表达。结果HBsAg阳性血清141例，PreS1 99例（70.2％）。其中HBeAg阳性44例，PreS1检出39例（88.6％）；HBeAg阴性97例，PreS1检出60例（61．9％），两者比较差异有统计学意义（χ^2=10，38，P〈0．005）。HBsAg阴性血清中未检出PreS1。结论PreS1与HBeAg具有较好的相关性，是乙型肝炎病毒复制的可靠指标之一，与乙型肝炎“两对半”联合检测可更准确反映乙型肝炎病毒感染复制状况。     

乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析

目的评估乙型肝炎病毒血清标志物（HBV—M）胶体金免疫层析法（GICA）的分析性能。方法收集雅培i1000免疫检测系统检测的HBV—M阳性标本653例、阴性标本103例和HBV—M标准品,以化学发光免疫测定法（CLIA）检测结果为标准,分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂和5种GICA试剂检测,统计分析检测结果。结果检测HBV—M敏感性：ELISA和GICA检测HBV—M的最低检测限分别为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）0．5IU／mL和4～8IU／mL、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）10mlU／mL和15～30mlU／mL、乙型肝炎e抗原（HBeAg）1NCU／mL和2～4NCU／mL、乙型肝炎e抗体（抗HBe）2NCU／mL和64～256NCU／mL、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）2IU／mL．和32—256IU／mL。检测标本HBV—M的符合率：ELISA分别为87．4％、99．0％、87．7％、96．6％、100．0％,GICA分别为69．6％～71．7％、69．0％～72．0％、70．5％～73．9％、42．2％～49．1％、50．0％～60．0％。检测HBV—M特异性：除GICA柃测抗HBs的特异性略差外,其余各HBV—M的检测特异性均是可接受。,结论GICA检测HBV—M低浓度的标本,漏检率很高,只能用于GICA检测线性范围里HBsAg的筛查,不能作为临床诊断乙型肝炎和疗效考核的依据。     

光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的性能评价

目的评价光激化学发光法（LICA）对乙型肝炎病毒（HBV）感染血清学标志的检测性能。方法用乙型肝炎表面抗原（HBsAg）定值血清和质控品对LICA检测HBV感染血清学标志的试验性能进行评价;以化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）为比较对象,对LICA检测453例临床样本HBV感染5项血清学标志的结果进行分析。结果 LICA对HBsAg的检测下限（LLD）为0.23 ng/mL,批内的总变异系数（CV）〈5%,平均回收率为99.88%。LICA与CMIA检测HBsAg、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（抗HBe）的阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）,2种方法的符合率〉95%,而LICA检测乙型肝炎核心抗体（抗HBc）阳性率低于CMIA,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 LICA检测HBV感染HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe 4项血清学标志具有良好的检测性能,与CMIA有很高的符合率。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立高灵敏的抗弓形虫（TOX）IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数（CV）分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4-200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量（ED20、ED50和ED80）分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为（5.3±2.3）U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

An automated screening test for antibodies to human immunodeficiency virus-1

An automated pretransfusion testing system was applied to HIV antibody screening by a gelatin particle agglutination (HIV-PA) test. The test conditions for the test, such as diluent, plate shape, and incubation time, were applicable not only for the HIV-PA test but also for other routine tests, including those for hepatitis B surface antigen and HTLV-1 antibodies. After a 60-minute incubation, the plates were read automatically and then were assessed visually. Tests with seropositive samples obtained from hemophiliacs and an HIV enzyme immunoassay (EIA) familiarization panel showed that the automated HIV-PA test was more sensitive than the EIA and did not show a false-negative result. Of 11,300 blood donors, 44 were positive by the automated test, and 51 were positive by the EIA. None of the blood donors was confirmed to be seropositive. Using the automated test, a large number of samples could be screened in a relatively short time without a significant increase of nonspecific reactions.     

乙型肝炎两对半和HBV DNA定量检测的临床应用

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）免疫标志物（HBV-M）与HBVDNA之间的相互关系,为临床诊断、治疗乙型肝炎提供有价值的判断标准。方法用时间分辨荧光免疫法（TRFIA）定量检测HBV-M,并与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相比较。结果105例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗—HBc）均为阳性;85例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性;34例乙型肝炎病毒抗体（抗-HBs）、抗-HBe、抗HBc阳性组中HBVDNA的检出率分别为65．7％、95．5％和11．7％。以HBsAg含量为100ng／mL作为HBV复制的诊断限,其特异性和敏感性分别是70．0％和84．0％。结论TRFIA定量检测HBV-M灵敏度高、特异性强、操作简便,无放射性污染,是一种较好的HBV-M测定方法,在实验室不具备HBVDNA定量测定的条件下,选择TRFIA进行乙型肝炎两对半定量检测也是一种较好的方法。