人参皂苷Rg3通过Ca 2+ /CaM信号系统抑制胃癌BGC-823细胞增殖及其可能的机制

目的:研究人参皂苷Rg3是否是通过降低钙调蛋白(calmodulin,Ca M)的表达来促进胃癌BGC-823细胞的凋亡及其可能的机制。方法:按加药的不同将BGC-823细胞,分为正常对照组、Rg3(50μg/ml)组、Ad-Ca M组和Rg3(50μg/ml)+Ad-Ca M组。MTT法检测Rg3和/或Ad-Ca M对BGC-823细胞增殖的影响,流式细胞术检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响,Transwell实验检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响,Western blotting检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞内Ca M、IκB、Ca MKⅡ和NF-κB表达的影响。结果:Rg3组可以明显促进胃癌BGC-823细胞的凋亡和抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和侵袭,而Ad-Ca M组和Rg3+Ad-Ca M组明显抑制胃癌BGC-823细胞的凋亡和促进胃癌BGC-823细胞的生长和侵袭。Rg3组BGC-823细胞内NF-κB和Ca MKⅡ的表达均明显抑制,而IκB的表达明显增强;Ad-Ca M组和Rg3+Ad-Ca M组BGC-823细胞内NF-κB和Ca MKⅡ的表达均明显增强,而IκB的表达均明显抑制。结论:Rg3可能是通过降低Ca M的表达来抑制NF-κB信号通路的活性,进而抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和侵袭、促进其凋亡。     

胃癌细胞中COX-2通过NF-κB/Snail调控E-cadherin表达的机制

目的 探讨COX-2调控E-cadherin表达的相关信号通路及分子机制,揭示COX-2与胃癌侵袭转移的关系及作用机制.方法 采用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,应用实时荧光定量RT-PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞中COX-2、NF-κB、Snail及E-cadherin mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着塞来昔布作用剂量的增大和干预时间的延长,COX-2、NF-κB和Snail mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性降低;E-cadherin mRNA及蛋白的表达量上升(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性升高.采用Spearman相关分析,显示COX-2与NF-κB及COX-2与Snail蛋白表达呈正相关性(r =0.881,P＜0.01;r =0.839,P＜0.01);COX-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.814,P＜0.01).结论 COX-2可能通过NF-κB/Snail信号通路调控E-cadherin的表达,进而参与胃癌的浸润转移过程.     

舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901 细胞增殖及COX-2 、NF-κB 表达的抑制作用

 目的 探讨舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响. 方法 对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT法检测不同浓度舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用,免疫组化、western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响. 结果 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48h后尼美舒利100、200μmol/L组,舒林酸0.6、1.2mmol/L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P＜0.05）,COX-2、NF-κB之间正相关（P＜0.05）. 结论 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制NF-κB, COX-2的蛋白表达在二者抑制肿瘤机制中可能具有一定作用.     

舒林酸对胃癌细胞生长抑制作用的体外观察

背景与目的:体外研究舒林酸对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用,探讨其作用机制。材料与方法:将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞,并设置不同的作用浓度和作用时间。以体外药物敏感实验(单核细胞直接细胞毒测定Mono-nuclearcelldireccytotoxicityassay,MTT)检测舒林酸在不同浓度及不同作用时间下对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制效应;流式细胞仪检测胃癌细胞周期分布;透射电镜观察药物作用后细胞凋亡的形态学改变;免疫组化检测细胞增殖(ki-67)、凋亡抑制基因(bcl-2)及还氧合酶(COX-2)蛋白的表达。结果:舒林酸对人胃癌BGC-823细胞有生长抑制作用,使G0/G1期比例增高,S期比例降低;透射电镜观察到细胞凋亡的形态特征及凋亡小体,而ki-67、bcl-2及COX-2蛋白表达阳性率显著降低;上述作用均呈时间和剂量依赖性。结论:舒林酸在体外具有良好的抑制胃癌BGC-823细胞生长的作用,其机制涉及影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡及抑制COX-2、ki-67及bcl-2蛋白的表达。     

舒林酸抗胃癌细胞体外生长的实验研究

目的观察舒林酸对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡的影响,探讨其作用机制。方法将不同浓度的舒林酸体外作用于人胃癌BGC-823细胞,采用倒置显微镜观察BGC-823细胞形态改变,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测胃癌细胞增殖,流式细胞仪检测胃癌细胞周期分布及凋亡,透射电镜观察凋亡,免疫组化检测ki-67、bcl-2及环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达。结果舒林酸作用后,细胞伪足回缩,变小、变圆,排列松散或聚集成团,出现悬浮现象,瘤巨细胞减少或不见瘤巨细胞。舒林酸可抑制BGC-823细胞增殖,使G0／G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低。1．2mmol／L舒林酸作用48h,G0／G1期细胞增至93．8％,S期细胞比例降至3．4％。舒林酸作用后,细胞凋亡率显著上升,1．2mmol／L舒林酸作用48h,细胞凋亡率升至54．9％,而ki-67、bcl-2及COX-2蛋白表达阳性率显著降低;透射电镜可观察到细胞凋亡的形态特征及凋亡小体。上述作用均呈时间和剂量依赖性。结论舒林酸可抑制胃癌BGC--823细胞体外生长,其机制涉及影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡及抑制ki-67、bcl-2及COX-2蛋白的表达。     

尼美舒利对胃癌细胞BGC823 COX-2、VEGF表达的影响

目的 研究尼美舒利（Nimesulide）对人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的干预作用，揭示其抗癌机制。方法 采用MTT法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期和凋亡率以及细胞的形态学改变，同时检测尼美舒利对胃癌细胞COX-2、VEGF表达的影响。结果 尼美舒利抑制胃癌细胞的IC50μM／L。增殖抑制率达到80．31％，流式细胞仪分析发现100-200μM／L的尼美舒利作用48h后，细胞被阻滞于S期，凋亡率分别为5．69％，10．58％；光学显微镜观察到凋亡典型的形态学特征；免疫细胞化学结果显示尼美舒利作用后能降低COX2、VEGF蛋白表达，与对照组比较，具有非常显著性差异（P〈0．01）。结论 尼美舒利能显著抑制人胃癌细胞株BGC-823的生长，此作用可能与降低COX2、VEGF蛋白表达有关。     

NRP-1mAb对胃癌细胞BGC 823增殖的影响

目的 观察自主研发的抗NRP-1 b1／b2 IgG单克隆抗体（NRP 1mAb）对胃癌BGC 823细胞生长的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法 实验室制备NRP-1mAb,采用SDS-PAGE检测纯度。采用0、25、100、200、400 μg／ml NRP-1 mAb培养胃癌BGC-823细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化;采用MTT法、集落形成实验、流式细胞术观察胃癌细胞BGC-823的增殖、集落形成和凋亡的情况;Western blotting法检测NRP 1mAb作用后Akt、p38、ERK、JNK信号蛋白磷酸化情况。结果 SDS-PAGE检测显示,NRP-1mAb的纯度在95％以上。光学显微镜观察显示,NRP-1mAb作用后,BGC-823细胞形态呈凋亡改变。MTT实验显示,NRP-1mAb抑制BGC-823细胞的增殖作用呈浓度和时间依赖性（P＜0.01）。集落形成实验显示,不同浓度NRP-1mAb均能显著抑制BGC-823细胞的集落形成,其抑制率呈浓度依赖性（P＜0.01）。流式细胞术检测显示,不同浓度NRP-1mAb均明显促进BGC-823细胞凋亡,且大部分集中在早期凋亡。Western blotting检测显示,BGC-823细胞的Akt磷酸化受到抑制, ERK、p38、JNK的磷酸化水平无明显变化。结论NRP-1mAb能抑制胃癌细胞BGC-823的生长、促进凋亡,可能与抑制Akt磷酸化有关。     

白杨素对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响

 目的 探讨白杨素（Chrysin,ChR）诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的作用及机制。方法 分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC-790148h,采用MTT比色法检测ChR对SGC-7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙（AO）染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC-7901细胞凋亡的发生;应用Western-blot法检测凋亡相关基因NF-κB、Bcl-2、Bax的蛋白表达,并用计算机图像分析软件进行半定量分析。结果 MTT比色法显示的10～80μM的ChR在体外对人胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制率为：9.71%～53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,出现早期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞术检测结果显示：ChR呈浓度依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率为2.35%-20.8%;Western-blot检测结果显示：凋亡相关基因Bcl-2、NF-κB蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论 ChR对体外培养人胃癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,呈浓度依赖性。ChR对人胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用机制可能与其抑制NF-κB活化、下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达相关。     

干涉Cul1蛋白对胃癌细胞增殖抑制机制的探讨

目的:应用siRNA干涉胃癌细胞中Cul1蛋白表达,观察Cul1蛋白沉默对胃癌细胞增殖的影响,并探计其相关机制.方法:将siRNA转染胃癌细胞BGC-823和SGC-7901,设空白对照组和干涉组,采用蛋白质印迹法检测胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1及PCNA蛋白表达差异.采用CCK8法检测胃癌细胞的增殖活性;流式细胞术(FCM)观察胃癌细胞周期变化.结果:利用siRNA干涉Cul1蛋白表达后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1表达水平明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01;干涉Cul1蛋白后,其下游相关蛋白-增殖细胞核抗原PCNA表达也明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01.CCK8法检测胃癌细胞增殖活性显著降低,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义,P＜0.01.流式细胞术观察胃癌细胞周期变化,Cul1蛋白干涉后G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,BGC-823细胞增殖指数(PI)31.68±1.57,干涉Cul1蛋白后PI值为23.74±2.14;SGC-7901 PI值36.04士2.75,干涉Cul1蛋白后PI值为27.29±1.25;两组比较均具有统计学意义,P＜0.05.结论:利用siRNA干涉人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中Cul1蛋白后,胃癌细胞增殖受到明显抑制,其机制可能是通过抑制其下游蛋白PCNA表达.     

幽门螺杆菌L型抑制胃癌细胞凋亡的实验研究

背景与目的： 研究幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)抑制胃癌细胞BGC-823凋亡的作用及其作用机制。 材料与方法： 将BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例(1∶20、1∶100、1∶500)共培养,以不加Hp-L型为对照组,在不同时段进行以下实验：倒置显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞凋亡及超微结构变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化(SP法)检测细胞中凋亡抑制基因Livin、bcl-2及抑癌基因p53的表达情况。 结果： 与对照组相比,Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到BGC-823细胞增殖旺盛,瘤巨细胞增多,并出现明显的凋亡抑制现象;电镜观察到BGC-823细胞凋亡形态特征及凋亡数目减少;流式细胞仪检测结果显示Hp-L型可降低BGC-823细胞的凋亡率(P<0.05);免疫组化结果发现BGC-823细胞中Livin、bcl-2和p53蛋白表达阳性率逐渐增加(P<0.05);以上作用均呈细菌浓度和作用时间依赖性(P均<0.05)。 结论： Hp-L型可抑制胃癌细胞BGC-823凋亡,其机制与上调Livin、bcl-2、p53蛋白的表达有关。     

Antitumor and anti-metastatic effects of cyclooxygenase-2 inhibition by celecoxib on human colorectal carcinoma xenografts in nude mouse rectum

We examined the effects of the preferential cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor celecoxib on tumorigenesis, angiogenesis, apoptosis, vascular endothelial growth factor (VEGF) protein expression and metastasis in HT-29 human colorectal carcinoma cell xenografts in nude mouse rectum. COX-2 mRNA expression was examined in the xenograft and metastatic sites. The antitumor effect of celecoxib in the xenografts was evaluated by measuring the weight of the peri-ano-rectal tumor. The anti-metastatic effect of celecoxib was assessed by quantification of lymph node and lung metastases by amplification of a cancer-related human DNA by TaqMan PCR. The effects of celecoxib on angiogenesis, apoptosis, prostaglandin E2 (PGE2) production and VEGF protein expression in the xenografts were evaluated by means of microvessel density (MVD) counting, terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling assay, quantitative enzyme-linked immunosorbent assay and western blotting, respectively. The rectal xenograft model showed lymph node and lung metastases with enhanced expression of COX-2 mRNA in each organ. Celecoxib inhibited rectal xenograft growth in a dose-dependent manner as follows: 150?ppm, 33.0% (p=0.000220); 750?ppm, 46.4% (p=0.0000292); 1500?ppm, 63.4% (p=0.0000109). Celecoxib inhibited lymph node metastasis in a dose-dependent manner as follows: 150?ppm, 86.7% (p=0.0263); 750?ppm, 90.3% (p=0.00638); 1500?ppm, 96.0% (p=0.000894). Celecoxib also inhibited lung metastasis as follows: 750?ppm, 53.3% (p=0.0107); 1500?ppm, 78.3% (p=0.00022). Celecoxib (1500?ppm) significantly inhibited PGE2 production by 68.4% (p=0.000157) and MVD counting by 48.2% (p=1.3x10-12) and induced apoptosis 2.5-fold (p=3.0x10-14) in the rectal xenograft. Celecoxib suppressed VEGF protein expression in the rectal xenograft. These studies demonstrate that celecoxib reduces the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice through COX-2 inhibition, anti-angiogenesis and apoptosis induction. The studies using HT-29 human colorectal carcinoma cell xenografts in nude mouse rectum also provide important information that supports that the COX-2 inhibitor celecoxib has a high potential for use as a clinical agent for inhibition of hematological and lymphatic metastases of colorectal cancer.     

胃癌中B7-H4和B7-H3的表达及薏苡仁酯对表达的影响

目的：探讨共刺激分子B7-H4和B7-H3在胃癌中的表达,以及薏苡仁酯对这两种分子表达的影响。方法：应用免疫组织化学染色检测胃癌组织中B7-H4蛋白的表达,MTT法检测薏苡仁酯对胃癌细胞株BGC-823的生长抑制效应,RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞株BGC-823中B7-H4mRNA及B7-H3mRNA的表达,Western Blot检测细胞的B7-H4蛋白及B7-H3蛋白的表达。结果：B7-H4蛋白在80例胃癌组织中有60例阳性表达,阳性率75%。B7-H4蛋白的表达与患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分期、浸润深度无关（P〉0.05）。在20例胃癌组织中,B7-H4mRNA表达明显高于癌旁正常组织,B7-H3mRNA表达明显低于癌旁正常组织（P〈0.01）。薏苡仁酯可抑制胃癌细胞株BGC-823的生长,呈时间-剂量依赖性,并下调B7-H4 mRNA及蛋白的表达,上调B7-H3mRNA及蛋白的表达（P〈0.01）。结论：B7-H4和B7-H3在胃癌异常的表达,可能是肿瘤免疫逃逸的原因之一;薏苡仁酯可影响胃癌细胞B7-H4、B7-H3的表达。     

人参皂苷Rg3 通过PI3K/AKT 信号系统调控CaM 基因表达促进胃癌BGC-823 细胞的凋亡

[摘要] 目的：探讨人参皂甙Rg3 通过PI3K/AKT信号通路干扰CaM基因的表达及对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。方法:胃癌BGC-823 细胞的培养与传代完成后,Western blotting 检测胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1,IGF-1)和/或Rg3分别作用胃癌BGC-823 细胞后p-AKT和CaM 蛋白表达水平,MTT法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞增殖的影响,Transwell 法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞侵袭的影响,流式细胞术检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。结果：随着IGF-1 作用时间延长,胃癌BGC-823 细胞中p-AKT蛋白和CaM蛋白的表达水平均明显提高（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞增殖,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞增殖（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显降低胃癌BGC-823 细胞侵袭,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞侵袭能力（均P<0.05）;流式细胞术检测显示,与空白对照组比较,Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞凋亡,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞凋亡（均P<0.05）。结论:人参皂甙Rg3 通过阻断PI3K/AKT信号通路来抑制CaM的表达,进而促进胃癌BGC-823细胞的凋亡。     

Sinomenine inhibits proliferation of SGC-7901 gastric adenocarcinoma cells via suppression of cyclooxygenase-2 expression

Sinomenine (SIN) is a bioactive alkaloid extracted from the Chinese medicinal plant Sinomenium acutum. Results of studies have shown that the anti-inflammatory, immunosuppressive and anti-arthritic effects of SIN are partially attributed to the inhibition of cyclooxygenase-2 (COX-2) expression. COX-2 overexpression is associated with enhanced proliferation and angiogenesis of gastric cancer (GC). SGC-7901 cells were treated with different concentrations of SIN in order to observe its effect on the proliferation of human gastric adenocarcinoma cells and to explore the potential underlying molecular mechanism via the detection of COX-2 expression. Celecoxib was used as the positive control. Morphological alterations of the cells were observed microscopically. Cell proliferation was evaluated using MTT assay. COX-2 expression was detected using semi-quantitative RT-PCR and Western blotting. The results showed that SIN inhibited the proliferation of SGC-7901 cells in a time- and dose-dependent manner. In the presence of SIN or celecoxib, SGC-7901 cells became round and detached morphologically, indicating cell apoptosis. The expression of COX-2 was inhibited by SIN in a dose-dependent manner at both the mRNA and protein levels. Our findings indicate that the protective effects of SIN are mediated through the inhibition of COX-2 expression. These findings suggest a novel therapy to treat inflammation-mediated gastric adenocarcinomata.     

姜黄素对人胃腺癌细胞株BGC-823生长抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨姜黄素对人胃腺癌细胞BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用。方法MTT法检测不同浓度姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制作用,计算半数抑制浓度（IC₅₀）;将1.2μmol／L姜黄素作用于BGC-823细胞24、48、72h,用DAPI染色检测细胞凋亡;用RT-PCR、Western blotting法分别检测姜黄素对Bax、Bcl-2基因以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的影响。结果 不同浓度的姜黄素作用于BGC-823细胞0～72h后,细胞呈不同程度的抑制作用,随着药物浓度的增加,抑制率明显上升,作用48h的IC₅₀为1.2μmol／L。DAPI染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。RT-PCR、Western blotting结果显示1.2μmol/L姜黄素可以增加Bax表达、减少Bcl-2表达和激活caspase-3。结论 姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用,这可能与增加Bax表达、减少Bcl-2表达、激活caspase-3有关。     

裙带菜多糖对胃癌细胞BGC-823的影响

目的探讨裙带菜多糖(polysaccharides from the Undaria Pinnatifida,PUP)对胃癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法MTT法分析裙带菜多糖（25、50、100 μg/ml）分别作用24、48、72 h后,对BGC 823细胞增殖的抑制作用;用透射电子显微镜观察不同浓度（25、50、100 μg/ml）裙带菜多糖作用24 h、48 h、72 h后凋亡细胞的结构变化;不同浓度裙带菜多糖（25、50、100 μg/ml）作用48 h后,用流式细胞术分析BGC-823细胞的凋亡率,RT-PCR法检测survivin 基因的表达水平。结果不同浓度的裙带菜多糖均可明显抑制胃癌细胞的增殖（P均<0.05）,作用24 h后的IC50为38.13 μg/ml。不同浓度裙带菜多糖作用48h后,均可诱导BGC-823细胞凋亡,100 μg/ml的裙带菜多糖可诱导BGC-823细胞凋亡,凋亡率达69.91%,导致BGC 823细胞发生凋亡特征性超微结构改变,并使BGC-823细胞survivin mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论裙带菜多糖可抑制BGC 823细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,该作用与下调细胞survivin基因表达有关。     

胃癌组织中高表达的miR-504通过TP53INP1调控胃癌细胞BGC-823的生物学行为

目的:探究微小RNA-504(miRNA-504)在胃癌(GC)组织中的表达水平及其对GC细胞生物学行为的调控机制.方法:收集2020年6月至2020年12月期间三亚中心医院外科收治的48例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qPCR检测组织中miR-504、肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(tumor protein 53-...