乳腺癌中p16,Cyclin D1基因蛋白的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控因子p16及Cyclin D1蛋白的表达与乳腺癌发生发展的关系。方法：采用免疫组织化学染色检测49例乳腺癌及14例癌旁组织中p16及CyclinD1蛋白表达。结果：Cyclin D1在乳腺癌中有较高表达，过表达率为49％（24／49），明显高于癌旁正常组织（P＜0．05）；p16在乳腺癌中过表达率（40．8％）低于癌旁正常组织（阳性率为92．8％，P＜0．05）；淋巴结转移组的p16蛋白表达明显低于淋巴结无转移组（P＜0．05）；p16的低表达与CyclinD1的高表达有关。结论：Cyclin D1过表达及p16蛋白的失表达参与乳腺癌的发生；p16蛋白的表达异常可能参与乳腺癌的转移。     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

胃癌中p16、Rb基因蛋白的表达及意义

目的 探讨p16、Rb基因蛋白的表达与胃癌的发生及临床病理参数的关系。方法 采用S－P免疫组化方法检测了80例胃癌及28例癌旁正常胃粘膜组织中p16和Rb蛋白的表达。结果 胃癌中p16、Rb蛋白表达阳性率（分别为58．8％和55．0％）显著低于癌旁正常胃粘膜（100％）（P＜0．01）,Rb蛋白中度阳性或强阳性胃癌p16蛋白中度阳性或强阳性表达率明显低于Rb蛋白阴性或弱阳性胃癌（P＜0．01）。p16蛋白在胃癌中的表达与肿瘤细胞分化程度、Lauren分型和淋巴结转移密切相关。结论 16、Rb蛋白表达的缺失与胃癌的发生密切相关,p16蛋白的表达可用于判断胃癌患者的预后,p16和Rb蛋白的表达相互抑制,呈明显的负相关。     

p16基因甲基化及P16、Cyclin D1、pRb与皮肤鳞状细胞癌相关性研究

目的 探讨P16、CyclinD1和pRb蛋白在皮肤鳞状细胞癌（简称皮肤鳞癌）中的表达及他们的相互关系和意义；研究p16基因甲基化是否与原发性皮肤鳞癌的发生有关。方法 采用PCR为基础的限制性内切酶甲基化法及免疫组化S-P法检测40例原发性皮肤鳞癌组织中p16基因甲基化状态及P16、Cyclin D1和pRb蛋白的表达，并以10例正常皮肤组织作对照。结果 皮肤鳞癌组织P16蛋白iCyclin D1阳性表达率分别为37．5％和57．5％；P16蛋白表达与CyclinD1的表达呈显著负相关（r=-0．3162，P=0．008）。皮肤鳞癌中P16蛋白和pRb表达呈显著负相关（r=-0．4007，P〈0．05）。p16基因的甲基化阳性率为42．5％。2级皮肤鳞癌组织中P16蛋白及p16基因甲基化阳性表达率比1级鳞癌组织显著增高（P〈0．05），而Cyclin D1和pRb阳性率表达则显著降低（P〈0．05）。在有淋巴结转移组中P16蛋白及p16基因甲基化阳性率与元淋巴结转移组相比显著降低（P〈0．05），而Cyclin D1和pRb阳性率则显著增加（P〈0．05）。结论 在原发性皮肤鳞状细胞癌中存在P16蛋白低表达、Cyclin D1高表达的异常表达现象，两者的表达相互抑制，呈显著负相关；P16蛋白和pRb蛋白的表达呈负相关；p16基因甲基化与皮肤鳞癌病理分级、淋巴结转移之间有显著关系。提示p16基因甲基化在皮肤鳞癌的发生发展过程中起重要作用。     

胰腺癌P53蛋白的表达与肿瘤生物学行为及预后的关系

目的：探讨胰腺癌组织P53蛋白的过度．表达与肿瘤生物学行为及预后的关系。方法：应用单克隆抗P53抗体对28例胰腺癌组织石蜡标本进行免疫组织化学染色,结果：P53蛋白阳性物质位于肿瘤细胞核内,28例胰腺癌病例中有16例P53表达阳性（57．1％）,与正常胰腺和癌旁组织比较,差异有显著性（P＜0．05）,且阳性率随分化程度的降低而升高（P＜0．05）,淋巴结转移阳性组表达率高于淋巴结转移阴性组（P＜0．05）,与术后存活情况有关（P＜0．05）,结论：P53基因的异常表达在胰腺癌的发展过程中起重要作用,对胰腺癌病人的预后判断有一定意义。     

胰腺癌组织芯片p53、p16及环氧化酶2表达的相关性分析

目的 用高通量的组织芯片技术,对胰腺癌组织、癌旁组织及正常组织的p53、p16和环氧化酶-2（COX-2）蛋白异常表达进行分析,探讨其相关性及临床意义。方法利用组织芯片技术结合免疫组化法检测104例胰腺癌组织、癌旁组织和正常组织中p53、p16和COX-2蛋白的表达。结果胰腺癌组织中p53、p16、COX-2的阳性表达率均显著高于非癌组织（均P〈0．05）。pSS与p16蛋白表达不存在相关性（P〉0．05）,pSS与COX-2、p16与COX-2蛋白表达均存在相关性（均P〈0．05）。p53和COX-2的交互作用对于胰腺癌的发病率影响具有统计学意义（OR=19．686）。结论组织芯片技术是大规模平行检测多基因蛋白表达的一种有效方法;胰腺癌的发生与p53、p16和COX-2等有关,尤其后者的交互作用可能起了更重要的作用。     

核因子-kB p65和VEGF在胰腺癌中的表达及意义

目的探讨核因子-kB p65（NF-kB p65）和血管内皮生长因子（VEGF）在胰腺癌组织中表达的意义及其意义。方法应用免疫组织化学法，检测正常胰腺组织和癌旁不典型增生组织及胰腺癌组织NF—kB p65和VEGF的表达，并分析其与胰腺癌的临床病理关系。结果NF-kB p65和VEGF在胰腺癌中的表达率分别为63.46％和71．15％，显著高于正常胰腺组织和癌旁不典型增生组织（P〈0．01、P〈0．05），NF-kB p65的表达与肿瘤直径、淋巴结转移和TNM分期有关（P〈0.05），VEGF的表达与淋巴结转移和TNM分期有关（P〈0．05，P〈0．01），NF-kB p65和VEGF的表达呈正相关（r=040，P〈0．01）。结论NF-kB p65可能通过正向调节VEGF的表达，促进胰腺癌的发生和发展。     

胰腺癌微血管密度和p14蛋白表达及其发生、发展的相关实验研究

目的：探讨胰腺癌组织微血管密度、p14^ARF表达对胰腺癌发生、发展的影响。方法：用免疫组织化学Envision改良法检测10例正常胰腺组织、42例胰腺癌组织中p14^ARF蛋白的表达；以Ⅶ因子相关抗原(FVⅢ—RAg)标记血管内皮细胞，采用ABC免疫组化法检测10例正常胰腺组织、42例胰腺癌组织中微血管密度。结果：正常胰腺组织中p14^ARF的表达率为90％，胰腺癌组织中为35．7％(P＜0．01)；胰腺癌组织的平均微血管密度与正常对照组之间差异有显著性(P＜0．01)；胰腺癌临床Ⅲ、Ⅳ期的平均微血管密度明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0．05)：淋巴结有转移的胰腺癌平均测血管密度明显高于淋巴结无转移组(P＜0．05)；胰腺癌组织中p14^ARF蛋白阳性表达的平均微血管密度低于p14^ARF蛋白阴性表达的胰腺癌组织，差异有显著性(P＜0．05)，胰腺癌组织的平均微血管密度与组织学分级、癌的浸润范围及肿块大小无关(P＞0．05)。结论：微血管密度、p14^ARF与胰腺癌的发生、发展存在着密切关系。     

p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法收集HCC组织及其相应癌旁组织60例（其中32例伴有肝硬化组织）、正常肝组织30例,采用免疫组化法检测HCC、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织组织中p28GANK蛋白的表达,分析p28GANK蛋白表达水平与HCC患者临床病理特征关系。结果 p28GANK蛋白在HCC、癌旁肝组织、肝硬化组织性、正常肝组织阳性表达率分别为71．7％、10．0％、12．5％、6．7％,HCC中p28GANK蛋白的阳性表达率高于其他组织（P＜0．05）。 HCC患者中,低分化（Ⅲ～Ⅳ级）、淋巴结和（或）远处转移及TNM分期Ⅲ＋Ⅳ者p28GANK蛋白表达阳性率分别高于高分化（Ⅰ～Ⅱ级）、无淋巴结和（或）远处转移、TNM分期Ⅰ＋Ⅱ者（P＜0．05）。结论 p28GANK蛋白表达可能与HCC的发生发展有关,p28GANK可作为HCC诊断的分子标志物。     

p16蛋白在大肠癌中的表达及意义

目的：研究p16蛋白在大肠癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化ABC法，在70例原发性大肠癌和25例正常大肠黏膜组织中检测p16蛋白的表达。结果：p16蛋白的表达。结果：p16蛋白在癌组织中表达缺失率为62．9％（44／70），在正常组织为16％（16／21），p16蛋白表达随着Duke分期级别升高，缺失率越来越高，且有显著性差异。38例淋巴结转移的大肠癌中，有25例p16蛋白表达缺失，缺失率为72％，而32例无转移者有19例p16蛋白表达缺失53．2％，两组的缺失率表达有显著性差异。结论：大肠癌发生过程中，存在p16蛋白表达的异常，且p16蛋白表达缺失与Duke分期和大肠癌淋巴结转移有关。     

胰腺癌MTS1／p16基因纯合性缺失和突变的研究

目的：研究人胰腺癌组织及正常胰腺组织中p16基因第1外显子和第2外显子的纯合性缺失和突变情况。探讨p16基因异常与胰腺癌的关系。方法：应用聚合酶链式反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）技术检测51例胰腺癌组织中p16基因第1外显子和第2外显子的纯合性缺失和突变频率,以正常胰腺组织15例为对照。结果：全部被检胰腺癌组织中有23例发生p16基因第2外显子缺失,缺失率45％,有1例发生第1外显子的突变,未发现第1外显子缺失和第2外显子突变。正常胰腺组织中均未发生第1外显子和第2外显子的缺失及突变。结论：p16基因缺失与胰腺癌的发生关系密切,p16基因的突变可能与胰腺癌的发生关系不大。     

抑癌基因p16突变与鼻咽癌的相关研究

目的研究鼻咽癌p16基因的状态.方法采用多重PCR分析法,单链构像多态性分析法(SSCP)对48例鼻咽癌标本与相应的癌旁组织中p16基因突变情况进行了检测.结果48例鼻咽癌标本中16例p16基因第2外显子缺失,相应的癌旁组织未检出.结论p16基因在鼻咽癌中存在高频率缺失,其改变与鼻咽癌发生发展有密切关系.     

卵巢癌p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常的研究

目的：研究p16基因的纯合性缺失，突变及表达异常与卵巢癌的发生是否存在相关关系。方法：采用PCR-SSCP检测卵巢癌p16基因的纯合性缺失和突变；采用RP-PCR定性及半定量分析p16基因；采用免疫组化技术检测p16蛋白。结果：32例卵巢癌中检测到1例外显子1突变，未检测到p16基因的纯合性缺失；RT-PCR分析卵巢癌中p16基因mRNA均有表达，半定量分析卵巢癌与正常卵巢组织中p16基因mRNA表达水平无差别；免疫组化检测9例卵巢癌中的p16蛋白为阴性（28.2%)。结论：卵巢癌的发生与p16基因的纯合性缺失和突变无相关关系，与p16基因异常表达有相关关系。     

Relationship between alterations of p16INK4a and p14ARF genes of CDKN2A locus and gastric carcinogenesis

Objective To investigate the relationship between alterations of p16INK4a and p14ARF genes and gastric carcinogenesis. Methods The tumors and neighboring gastric tissues from 48 patients with gastric cancer were studied. The homozygous deletion, mutation, methylation of the CpG islands, and mRNA expression of p16INK4a and p14ARF genes were assessed by PCR, PCR-SSCP, PCR based methylation assay, and RT-PCR. Results ① The homozygous deletion rate of p16INK4a and p14ARF was 35.4% （17/48）, and no homozygous deletion was examined in any gastric tissue neighboring the tumor. ② There was no point mutation of p16INK4a and p14ARF in 31 gastric cancers without homozygous deletion or in the matched gastric tissues adjacent to the tumor. ③ Methylation of the CpG islands of p16INK4a and p14ARF was detected in 47.9% (23/48) of gastric cancers, while methylation was observed only in 2 of 48 gastric tissues neighboring the cancer with a significant difference (P<0.01). ④ The loss rate of p16INK4a mRNA was 47.9% (23/48) in gastric cancer, and the patients of the combined methylation of exons 1α and 2 had a higher loss rate (100%, 6/6) of p16INK4a mRNA than those of the methylation of the other exons (11.8%, 2/17, P<0.01); the loss rate of p14ARF mRNA was 45.8%(22/48) in gastric cancer, and patients with the combined methylation of exons 1β and 2 had a higher loss rate (100%, 3/3) of p14ARF mRNA than those of the methylation of the other exons (15%, 3/20, P<0.05). ⑤ The combined loss of p16INK4a and p14ARF mRNAs was examined in 1 (5.6%) of 18 patients of well and moderately-differentiated carcinomas, and 11 (36.7%) of 30 patients of poorly and not-differentiated carcinomas with a significant difference (P<0.05). Conclusion p16INK4a and p14ARF genes are frequently inactivated by homozygous deletion and methylation of the 5’CpG islands in gastric cancer, which may play an important role in the carcinogenesis of gastric cancer.     

Mutations and altered expression of p16~(INK4a) in human pancreatic carcinoma cell lines with different potential of metastasis

Objective:To analyze the p16INK4a genomic alteration and expression status in 3 human pancreatic carcinoma cell lines with different potential of metastasis. Methods:Using PCR-SSCP, Dot-blot and immunohistochemistry, the p16INK4a genomic mutation and expression were analyzed on DNA, mRNA and protein levels in 3 human pancreatic carcinoma cell lines Patu8902, Patu8988 and SW1990, which had different potential of metastasis. Results: (1) On DNA level: there was no deletion of p16INK4a Exon Ⅰ in 3cell lines; p16INK4a Exon Ⅱ was only deleted in Patu8902 while no deletion in Patu8988 and SW1990. No insertion, microdeletion and point mutation were found in the 3 cell lines. (2) On RNA level: the expression of p16INK4a protein was negative in Patu8902, low expressed in SW1990, but highly expressed in Patu8988.(3) On protein level: P16 protein was strongly stained in Patu8988, much lower in SW1990, but not stained in Patu8902. Conclusion:The genomic type and expression of p16INK4a are quite different in 3 pancreatic carcinoma cell lines which have different potential of metastasis. It is suggested that genomic homozygous deletion and low expression of mRNA might relate to the potential of metastasis of pancreatic cell lines. In other words, dysfunction of p16INK4a might be an important mechanism in the metastasis of pancreatic carcinoma.     

鼻咽癌中p16蛋白表达缺失与EB病毒感染的关系

目的　探讨鼻咽癌组织中p16蛋白表达缺失情况及与EB病毒在鼻咽癌发生中的关系。方法　用免疫组化方法检测p16蛋白表达,EBER-1核酸原位杂交法检测EB病毒感染。结果　42例鼻咽癌组织中,34例p16蛋白表达缺失（81%）,28例EBER-1阳性（67%）。p16蛋白表达缺失与EBER-1阳性无明显关系（P＞0.05）。结论　p16基因功能失活与鼻咽癌发生关系密切,但与EB病毒感染关系不明显。     

p16基因结构及表达异常与周围型肺癌CT征象的关系

目的：探讨p16基因结构及表达异常与周围型肺癌CT征象的相关性。方法：利用免疫组织化学、聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）方法检测52例周围型肺癌患者癌肺组织和癌旁肺组织中p16基因的表达水平及第2外显子突变,并与其CT征象进行相关性研究。结果：52例肺癌患者癌组织中p16基因蛋白丢失率为53.8％（28／52）,第2外显子缺失/突变率为23.1％（12/52）;p16基因的缺失和蛋白的丢失率在不同临床分期的各组间的差异有统计学意义（P<0.05）,但在不同病理类型、分化程度的各组间差异无统计学意义（P>0.05)。有细毛刺、棘突、胸膜凹陷及淋巴结转移等CT征象的肺癌患者,p16基因的缺失和蛋白的丢失率明显高于无以上征象者（P<0.05）;而在不同肿瘤大小、有无分叶、有无空洞、不同增强值方面,各组的p16基因的缺失和蛋白的丢失率差异无统计学意义（P>0.05)。结论：p16基因突变及表达异常可能在肺癌的发生、发展中起重要作用,并与肺癌患者CT征象有关。 p16基因可作为临床诊断及预后评估的检测指标。     

食管鳞癌组织中抑癌基因p16突变的检测

应用ＰＣＲＳＳＣＰ银染技术检测了４０例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中ｐ１６基因的突变情况。结果：１１例（２７．５％）癌组织中有ｐ１６基因突变，其中９例发生在第２外显子，突变率随癌分化程度减低及浆膜浸润和淋巴转移有增高趋势。癌旁粘膜中未发现ｐ１６基因突变。提示：食管鳞癌中存在ｐ１６基因突变，是食管癌发生中的晚期事件，并可能与食管癌的进展与转移有关。     

胃癌中p16基因缺失的研究

目的　调查胃癌患者ｐ１６基因的改变。方法采用ＰＣＲ方法,对２３例胃癌患者肿瘤组织标本进行ｐｌ６基因外显子３的缺失研究。结果发现２例弥漫型胃癌有 ｐ１６基因的纯合缺失,缺失频率为８．７０％。结论证明ｐ１６基因的改变与胃癌的发生和发展有一定的联系。     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

作者分别采用多重PCR、SSCP以及以PCR为基础的甲基化分析法,对２５例原发性HCC标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中p16基因的缺失、点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化SLAB法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性HCC肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中P16蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性HCC肿瘤标本中,３例有p16基因缺失,无p16基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有p16基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为24%（6/25）,而全部非肿瘤组织均未出现p16基因甲基化。在３５例HCC肿瘤标本中共发现P16蛋白表达缺失16例(45.7%),而全部非瘤组织P16蛋白均表达阳性。由此提示,p16基因的失活与P16蛋白表达的丧失与原发性肝细胞性肝癌的发生及发展有关。