冬凌草乙素对白血病NB4细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的:探讨冬凌草乙素(PON)对急性白血病NB4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的PON(0～50 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡时的形态学变化.应用免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对凋亡调节蛋白Bax、Bd-2、Bak、Bad及Survivin的表达水平进行检测.结果:>20 μmol/L的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,>20 μmol/L的PON作用48 h后,凋亡细胞逐渐增多,在Hoechst染色后可见典型的细胞凋亡现象.蛋白质印迹法检测结果表明,药物作用48 h后Caspase-3被活化出现17×103的亚单位,同时PARP被裂解出现89×103的亚单位片段.蛋白质印迹法检测结果显示,凋亡抑制蛋白Survivin的表达水平明显降低,促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高,而其他凋亡调节基因Bcl-2、Bak、Bad则无明显变化.结论:PON可以通过诱导白血病NB4细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,降低Survivin以及升高Bax的表达水平可能是PON诱导白血病细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对Nalm-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin, ORI)对淋巴细胞白血病Nalm-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的ORI(0～48 μmol/L)作用于体外培养的Nalm-6细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带,应用透射电镜观察细胞形态学的变化,用蛋白质印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose) polymerase)]表达水平的变化,并对凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2的表达水平进行检测.结果: ＞16 μmol/L的ORI可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,药物作用48 h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带.蛋白质印迹法检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量20×103的亚单位,同时PARP被裂解出现相对分子质量89×103的亚单位片段.同时,药物作用48 h后凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高.结论:ORI能显著抑制Nalm-6细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3以及降低Bcl-2、升高Bax的表达水平是ORI诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这些结果表明ORI是一种潜在的抗白血病药物.     

冬凌草甲素对NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞,应用MTF法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 8μmol／L以上的冬凌草甲素可显著降低NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。药物(16μmol／L)作用48～60h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论 冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据。     

冬凌草甲素对NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制(英文)

目的探讨冬凌草甲素对白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Ho-echst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 8μmoL/L 以上的冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。药物(16μmol/L)作用48～60h 在 Hoechst 染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用。方法:以8、16、24和32μmol/L不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。结果:16~32μmol/L的冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。结论:冬凌草甲素能通过诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长而发挥抗增殖作用。     

γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响

[目的] 研究γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响。[方法] 以浓度1000U／ml的γ-干扰素与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。[结果] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并降低K562细胞端粒酶活性，其作用呈现出明显的量-效与时-效关系。[结论] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用对白血病K562细胞具有明显的增殖抑制作用，降低细胞端粒酶活性足诱导细胞发生凋亡。可能是其重要作用机制之一。     

紫草素诱导人绒毛膜癌JEG-3细胞凋亡机制的研究

背景与目的：研究紫草素（shikonin）诱导人绒毛膜癌JEG-3细胞的凋亡作用及其机制。材料与方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定紫草素对JEG-3细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和流式细胞术（FCM）检测紫草素处理JEG-3细胞后发生凋亡的形态变化;Western blot检测凋亡相关蛋白的活化。结果：MTT分析表明,紫草素抑制JEG-3细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性（P〈0．01）,其半数有效抑制浓度（IC50）为（6．3±0．6）μmol／L;紫草素处理JEG-3细胞后,Hoechst33258染色出现典型的凋亡特征,且FCM检测出现明显的亚二倍体峰,Annexin V／P1双染出现早期凋亡细胞;Western blot检测结果显示经紫草素处理后JEG-3细胞的Caspase-3、ERK、JNK蛋白均被激活,而PARP蛋白被剪切成cleaved PARP（85KD）。结论：紫草素可能经Caspase-3途径诱导人绒毛膜癌细胞JEG-3凋亡,并且MAPK通路的活化、抑制对细胞的凋亡有一定的影响。     

γ-干扰素联合冬凌草甲素对白血病U937细胞的增生抑制作用

目的 :研究干扰素联合冬凌草甲素对白血病 U 937细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法 :以浓度 2× 1 0 6 U / L的γ-干扰素与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 U 937细胞 ,观察细胞生长状态的变化。 MTT法检测细胞生长抑制率 ,应用流式细胞仪、锥虫蓝染色及 Hoechst332 5 8荧光染色法观察细胞凋亡 ,TRAP- PCR- EL ISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 :γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用可显著抑制 U937细胞的生长 ,诱导细胞发生凋亡 ,并降低 U937细胞端粒酶活性 ,其作用呈现出明显的量—效与时—效关系。结论 :γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用对白血病 U937细胞具有明显的增生抑制作用 ,降低细胞端粒酶活性及诱导细胞发生凋亡 ,可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素上调p53转录活性促进胶质瘤细胞凋亡的作用与分子机制探讨

目的:探讨冬凌草甲素抑制胶质瘤细胞U-87 MG、A-172活性的分子机制。方法:CCK8法检测不同浓度的冬凌草甲素对胶质瘤细胞U-87 MG、A-172活力的影响。选择20 μmol/L的冬凌草甲素分别处理胶质瘤细胞U-87 MG、A-172 0、6、12 h后,Western blotting法检测p53及其下游p21、Bax蛋白的表达情况,同时检测Cleaved PARP、Cleaved Caspase3的表达情况,实时荧光定量PCR法检测p53 mRNA水平的改变。应用p53转录活性抑制剂Pifithrin-α（PFT-α)预处理胶质瘤细胞U-87 MG 24 h后,Western blotting法检测冬凌草甲素对p53及其下游蛋白、Cleaved PARP、Cleaved Caspase3表达情况的影响。结果:冬凌草甲素对U-87 MG、A-172细胞的活性具有明显的抑制作用,冬凌草甲素作用24 h对胶质瘤细胞U-87 MG、A-172的IC50均介于20~30 μmol/L。冬凌草甲素可以上调p53及其下游p21、Bax蛋白并具有时间依赖性,而不改变p53的mRNA水平。此外,冬凌草甲素可以诱导胶质瘤细胞U-87 MG、A-172凋亡。p53转录活性抑制剂可以废除冬凌草甲素对p53及其下游p21、Bax蛋白的上调作用,同时也减弱了冬凌草甲素对胶质瘤细胞U-87 MG的促凋亡作用。结论:冬凌草甲素可能通过上调p53蛋白表达、增强其转录活性,促进胶质瘤细胞凋亡,而对胶质瘤细胞活性产生抑制效应。     

冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制

目的：研究冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，检测细胞生长抑制率．观察细胞凋亡时的形态学变化．对细胞凋亡前后的端粒酶活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著降低K562细胞的端粒酶活性．抑翻细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生凋亡．降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素联合丙戊酸钠对HL-60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用研究

目的 研究中药单体冬凌草甲素(ORI)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡,探讨其应用于临床的可行性.方法 在对数生长期的HL-60细胞中分别加入6～12 la,mol/L的ORI和0.5~1 mmol/L的VPA,采用细胞计数法测定ORI和VPA单独和联合应用时对细胞的...     

亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用。方法:MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst33258染色观察细胞染色质固缩情况,碘化丙啶PI单染法检测细胞周期,Western blot检测p-GSK3β、GSK3β及凋亡相关蛋白 PARP、bcl-2的表达。结果:不同浓度的亚砷酸钠或粉防己碱单用均可抑制MDA-MB-231细胞增殖（P＜0.01）;与单独用药相比,两药联合使用可显著增强细胞增殖抑制效果（P＜0.000 1）。两药联用可显著诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P＜0.01）,细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增,并出现细胞核染色质固缩。联合用药浓度为亚砷酸钠10 μmol/L+粉防己碱4 μg/ml时,S期细胞所占百分比显著增高（P＜0.05）;联合用药浓度为亚砷酸钠15 μmol/L+粉防己碱4.5 μg/ml时,G2/M期细胞所占百分比显著增高（P＜0.001）。联合用药后,凋亡相关蛋白PARP的表达显著上调（P＜0.000 1）;bcl-2的表达显著下调（P＜0.05）;p-GSK3β、GSK3β蛋白表达均显著上调（P＜0.000 1）。 结论:亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,其机制与诱导细胞周期 S期、G2/M期阻滞、GSK3β蛋白水平上调及促进细胞凋亡有关,促凋亡作用与bcl-2蛋白水平下调、PARP蛋白水平上调有关。     

白桦脂酸对HeLa细胞的抑制作用及其机制研究

背景与目的:白桦脂酸(betulinic acid)是一类白桦树皮中提取的天然五环三萜类化合物,具有广泛的药理活性,有研究表明白桦脂酸能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料。本研究旨在探讨白桦脂酸体外对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白桦脂酸对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测白桦脂酸处理HeLa细胞后发生凋亡的形态变化;采用流式细胞术(flow cetemotry,FCM)检测白桦脂酸处理HeLa细胞后诱导凋亡作用及凋亡率;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测caspase-3、细胞色素C(Cyto C)等凋亡相关蛋白的表达。结果:MTT分析表明,白桦脂酸抑制HeLa细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01),其24、48和72 h的半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)分别为20.36、15.45和12.02μg/mL;白桦脂酸处理HeLa细胞后,Hoechst33258染色出现典型的凋亡特征,且流式细胞术检测Annexin-Ⅴ/PI双染出现早期凋亡细胞;Westernblot检测结果显示经白桦脂酸处理后HeLa细胞的caspase-3、Cyto C蛋白表达均上调。结论:白桦脂酸可显著抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,并可能通过上调caspase-3、Cyto C蛋白的表达诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

反义MLL-AF9基因对THP-1细胞增生和凋亡的影响

 目的　研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸（ASODN）对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响。方法　选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸（SODN）,应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表达量,改良MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察ASODN作用于THP-1后细胞出现凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果　与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中MLL-AF9表达明显降低（P <0.01）,相对应MLL-AF9蛋白水平亦明显下降,同时细胞生长受到抑制,被诱导凋亡产生凋亡小体。ASODN转染THP-1细胞0、24和48 h后,ASODN组凋亡率分别为（10.4±3.0）%、（22.8±2.5）%和（24.7±3.1）%,与对照组相比凋亡率显著增加（P <0.01）且呈时间依赖性。结论　利用ASODN靶向沉默MLL-AF9融合基因的表达能有效抑制THP-1细胞增生并促进其凋亡。     

冬凌草甲素抑制多发性骨髓瘤细胞H929增殖和诱导凋亡的分子机制

目的:研究不同浓度的冬凌草甲素对多发性骨髓瘤细胞H929增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法:使用不同浓度的冬凌草甲素处理多发性骨髓瘤细胞H929；利用CCK-8法检测细胞增殖抑制率；利用Annexin-FITC/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡能力；利用蛋白印迹实验检测凋亡通路中BCL-2家族蛋白及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示冬凌草甲素显著抑制了多发性骨髓瘤H929细胞的增殖，且呈浓度和时间依赖性；细胞凋亡实验结果显示冬凌草甲素显著促进了多发性骨髓瘤H929细胞的凋亡，呈浓度和时间依赖性递增；蛋白印迹实验结果显示，随着冬凌草甲素浓度的增加，多发性骨髓瘤H929细胞中BCL-2蛋白、p-PI3K蛋白和p-Akt蛋白表达量递减，Bax蛋白表达量递增。结论:冬凌草甲素能有效抑制骨髓瘤H929细胞增殖，诱导细胞发生凋亡，其机制可能与PI3K/Akt信号通路的受抑及凋亡通路的活化有关。     

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的 研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法 对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果 与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论 PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。     

醉茄素A对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨醉茄素A（WFA） 对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 采用0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA 处理A549细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测上述浓度处理24、48、72和96h的细胞增殖抑制率,Hoechst染色和磷酯酰丝氨酸结合蛋白 异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin V-FITC／PI）检测各浓度组48h的细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各浓度组48h的细胞周期分布情况,免疫印迹检测各浓度组48h凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）和PI3K／Akt信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 WFA 可抑制细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA作用48h后A549细胞的凋亡指数分别为2.75±0.64、4.61±1.36、9.75±2.78、12.92±3.42和18.68±4.31,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。除2.5μmol／L外,其余浓度组的早、晚期凋亡率、凋亡促进基因（Bax和Cleaved caspase-3）水平及G0／G1期细胞比例均高于0μmol／L,凋亡抑制基因Bcl-2水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）; 2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着浓度升高,p-Akt／Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 WFA能够抑制A549细胞的增殖及凋亡,可能通过抑制PI3K／Akt通路激活实现。