中国部分地区结核分支杆菌耐利福平、异烟肼和链酶素耐药基因的检测

目的研究我国部分地区耐利福平（RFP）、异烟肼（硼）和链酶素（SM）结核分支杆菌临床分离株rpoB基因、KatG、rpsL基因突变情况，评价其耐药分子机制。方法采用PCR和聚合酶链反应．单链构象多态性（PCR-SSCP）对373株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株148株，耐RFP、INH、SM株共225株）rpoB基因、KatG和砒基因进行检测。并对其中19株SSCP阴性的耐RFP株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果安徽省、北京市、上海市、河北省、河南省、辽宁省、吉林省结核分支杆菌耐RFP临床分离株rpoB基因突变率分别为90％、91％、90％、91％、90％、93％、91％；KatG基因突变率分别为69％、63％、71％、68％、67％、68％、65％，rpsL基因突变率71％、69％、74％、68％、70％、61％、76％，分别为经统计学处理不同地区间无显著性差异（X^2=0．46，P＞0．05）。同时rpoB基因敏感株均无突变，特异性为100％；KatG基因有3株发生突变，特异性为98％。19株SSCP阴性耐药株中经测序6株在531位密码子TCG→TIE，1株526位密码子CAC→TAC，7株发生在516位密码子GAC→GTC，5株未改变。结论我国不同地区耐利福平、异烟肼和链霉素的rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变率大致相同，rpoB基因、KatG和rpsL基因突变分别是耐RFP、INH和SM结核分支杆菌耐药性产生的主要分子机制，PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP、INH和SM耐药性。     

基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平基因突变的研究

目的建立基因芯片检测结核分支杆菌耐利福平基因突变，结合基因测序和常规药物敏感性试验进行比较，探讨其实用价值。方法根据结核菌rpoβ基因突变特点，设计不同的寡核苷酸探针，点样制备可检测rpoβ基因突变的芯片，检测利福平（Rifompicin，RFP）株的rpoβ变异情况。结果137株临床分离结核菌，49株耐RFP，占35．8％，平均MIC为179．6±135．0ug／mL。Rpop突变率为95．7％（47／49），主要为点突变。突变点依次为531 Ser（TCG）→Leu（TTG）（40．8％）、531 Ser（TCG）→Trp（TGG）（12．2％）、526 His（CAC）→Tyr（TAC）（6．1％）、526His（CAC）→Asp（GAC）（6．1％）。526 His（CAC）→Asn（AAC）（6．1％）、526 His（CAC）→Pro（CCC）（8．2％）、516Asp（GAC）→Val（GTC）（12．2％）、533 Leu（CTG）→Arg（CGG）（4．1％）和513 GIn（CAA）→Pro（CCA）（2．1％）。结论本研究建立的检测结核菌rpoβ基因突变的基因芯片技术敏感性高，特异性强，可应用于结核菌耐RFP基因的检测。     

突变受阻性扩增系统快速检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的初步研究

利福平 (RFP)是结核化疗方案中的一个关键药物 ,它的应用可明显缩短结核病的疗程。因此 ,创建快速、简便的检测方法一直是基础研究中的一个重要课题。突变受阻性扩增系统 (amplificationrefractorymutationsystem ,ARMS) [1] 是一种可以检测任何已知点突变或小基因片段缺失的扩增技术 ,简便、可靠、无放射性核污染。我们选择与结核分枝杆菌 (结核菌 )RFP耐药相关的rpoB基因中突变频率最高的 3种突变形式 :5 31TCG→TTG ,5 2 6CAC→TAC ,5 16GAC→GTC来设计ARMS特异性突变引物 ,ARMS 聚合酶链反应 (PCR)扩增后结合微孔板探针…     

PCR-探针熔解分析法检测结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药基因突变的临床应用评价

目的评价PCR-探针熔解分析法(PMAA)检测结核分枝杆菌(MTB)氟喹诺酮(FQ)药物耐药性的临床应用价值。方法采用常规比例法和PCR-PMAA对509株MTB临床分离株进行FQ药物敏感性试验。对69株比例法和(或)PCR-PMAA法检测耐药以及440株两法检测均敏感的MTB菌株中抽取的55株菌株,进行FQ药物耐药相关基因gyrA和gyrBPCR-DNA测序。结果以常规比例法为标准,PCR-PMAA检测FQ药物耐药性的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值、符合率及约登指数分别为97.01%、99.55%、97.01%、99.55%、99.21%及0.97。比例法和(或)PCR-PMAA检测耐药的69株中,经DNA测序证实44株gyrA94位密码子GAC→AAC(D→N)或CAC(H)或GGC(G)或GCC(A)突变;4株gyrA91位密码子TCG→CCG(S→P)突变;19株gyrA90位密码子GCG→GTG(A→V)或AAG(K)突变;1株gyrB500位GAC→AAC(D→N)突变;1株在测序范围未见突变。55株两法检测均敏感样品DNA测序结果证实,gyrA和gyrB基因均未见耐药相关的基因位点突变。结论 ...     

基因芯片法用于检测长沙地区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解长沙市中心医院2013年1月1日至2014年9月30日临床分离的1 031株结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。方法将结核分枝杆菌培养阳性,并经鉴定为结核分枝杆菌的1 031株菌株,采用绝对浓度法进行常规药敏检测,同时应用基因芯片技术检测利福平和异烟肼耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上的位点突变,并对2种结果进行比较。结果基因芯片法检测利福平耐药性中,其敏感株896株,耐药株135株;检测异烟肼耐药性为敏感株901株,耐药株130株。与绝对浓度法比较,基因芯片检测利福平耐药结果与其一致的菌株共1 011株(包含敏感株894株,耐药株117株),符合率为98.00%;基因芯片检测异烟肼耐药结果与其一致的菌株共1 005株(包含敏感株890株,耐药株115株),符合率为97.48%。与利福平耐药相关的rpoB基因的突变位点最常见的为531TCG→TTG突变,占耐药株的51.11%;其次为526CAC→TAC突变耐药株的10.37%;526CAC→GAC共11株菌株突变,占耐药菌株的8.15%。异烟肼耐药主要是由katG315AGC→ACC位突变引起,占耐药株的83.85%,inhA-15C→T突变仅占12.30%。结论基因芯片法与绝对浓度法结果高度一致,可成为筛查利福平和异烟肼耐药性的快速有效方法,长沙地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药以rpoB531,526及katG315突变位点为主。     

快速检测耐异烟肼结核分支杆菌方法的研究

目的 应用多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析（multiple—Polymerase Chain Reaction—Single Strand Conformation Polymorphism,multi—PCR—SSCP）方法,快速、特异地同时检出耐异烟肼（isoniazid,INH）结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况,并与直接测序（derictsequencing,DS）结果相比较,参照药敏试验,探讨该方法的可行性。 方法 根据结核分支杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用multi—PCR-SSCP技术,同时检测对结核分支杆菌耐INH起作用的这三个基因的突变情况;同时进行耐药株的测序分析。 结果 对H37Rv标准株、临床分离INH敏感株（23株）及INH耐药株（35株）进行multi—PCR—SSCP分析,突变检出率82．9％（29／35）;耐药株测序分析突变检出率为85．7（30／35）。两种方法的符合率为97．1％E（29＋5／）／35]。 结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,multi—PCR—SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG三个INH耐药基因的突变,提高检验效率,有望成为临床指导用药的好方法。     

阿奇霉素耐药及头孢曲松低敏淋球菌基因分型与多态性研究

目的分析广州地区阿奇霉素耐药及广谱头孢菌素低敏淋球菌基因分型和基因多态性特征。方法检测阿奇霉素(AZM)和头孢曲松(CRO)最小抑菌浓度(MIC)。检测AZM耐药(AZM-R)淋球菌23SrRNA、多重可传递耐药调节(mtrR)基因和青霉素结合蛋白2(PBP2)编码基因(penA)突变类型。采用淋球菌多抗原序列分型法(NG-MAST)检测菌株基因型。结果共检测淋球菌485株,包括AZM-R菌株(MIC≥1mg/L)77株(15.9%),其中AZM低度耐药(AZM-LLR,MIC=1mg/L)菌株33株(6.8%)、AZM中度耐药(AZM-MLR,MIC≥2mg/L)菌株44株(9.1%)。AZM-MLR菌株中CRO低敏(MIC≥0.125mg/L)菌株19株(占43.2%),构成比高于AZM-LLR菌株中的CRO低敏株(18.2%,P0.05)。各类菌株间23SrRNA、mtrR、penA基因突变或联合突变检出率比较差异无统计学意义(P0.05)。AZM-LLR与CRO低敏菌株,以及AZM-MLR与CRO低敏菌株间各类突变检出率比较差异无统计学意义(P0.05)。未检出A2059G突变及AZM高度耐药株(MIC≥256 mg/L)。77株AZM-R菌株经NG-MAST检测,检出67株序列类型,其中30株有异常。多数序列类型表现为单一表型。结论该地区出现的AZM耐药及CRO低敏淋球菌值得持续监测和进一步研究,以明确其耐药机制。     

301株肠球菌的分布和药敏分析

[目的]探论301株肠球菌标本的分布，了解其对12种抗生素的药敏情况。[方法]选取2004年报月-2005年12月院内感染患者分离标本，采用杭州天和公司的生化管鉴定，采用天津高达公司的药敏板进行药敏实验。[结果]301株肠球菌中粪肠菌237株（78．7％），屎肠菌61株（20．3％），其它3株（1．0％）粪肠球菌对12种抗生素呈多重耐药，61株对12种抗生素呈多重耐药，较粪肠球菌更为严重，未发现耐万古霉素肠球菌。[结论]肠球菌是重要的院内感染病原菌，由于其多重耐药越来越来成为临床治疗的难题，需要引起我们的重视。     

鲍氏不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制及菌株同源性分析

目的探讨鲍氏不动杆菌对喹诺酮类药物耐药机制及菌株同源性分析。方法收集临床分离的喹诺酮类耐药鲍氏不动杆菌25株,采用纸片扩散法（K-B）检测其对常规药物的敏感性;采用聚合酶链反应（PCR）检测喹诺酮类耐药相关基因gyrA和parC基因,并经限制性内切酶酶切及测序方法验证;基因外重复回文序列（REP）-PCR分析菌株同源性。结果 25株鲍氏不动杆菌对12种抗菌药物呈现出多重耐药,仅对米诺环素和阿米卡星敏感,敏感率分别为48.0%和32.0%,对多黏菌素B全部敏感[最低抑菌浓度（MIC）≤2μg/mL];所有菌株检出gyrA和parC基因,25株菌株均存在gyrA基因第83位密码子TCA→TTA突变（Ser→Leu）,23株菌株存在parC基因第80位密码子TCG→TTG突变（Ser→Leu）,2株菌株存在parC基因第84位GAA→GGA突变（Glu→Gly）;REP-PCR显示,所测菌株具有很高的同源性。结论耐喹诺酮类鲍氏不动杆菌具有很高的同源性,存在gyrA和parC基因突变位点。     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。     

脓毒症大鼠小肠功能变化的研究

目的　探讨脓毒症大鼠小肠屏障、吸收、通透及其蠕动功能的变化。方法　以 Wistar大鼠缺血再灌注复合内毒素血症制备动物模型。将动物随机分为正常对照 ( N)、肠系膜上动脉夹闭 1h后再灌注 1h( I/ R1)、2 h( I/ R2 )和 4 h( I/ R4 )以及再灌注 2 h后复合内毒素 2 h( I/ RL)共 5个组。分别测定各组动物血或小肠组织二胺氧化酶 ( DAO)、D 乳酸、D 木糖水平及肠蠕动 ,同时进行小肠普通光镜检查。结果　 I/ R1、I/ R4和 I/ RL组血浆 DAO活性均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ,小肠组织 DAO在 I/ R2和 I/ RL 组均显著降低( P均 <0 .0 5 ) ,从 N、I/ R1、I/ R2、I/ R4到 I/ RL,各组血浆 DAO和小肠 DAO的相关分析可见呈高度负相关( r= 0 .90 9,P<0 .0 0 1) ;I/ R 1、I/ R 2和 I/ RL组血浆 D乳酸均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ;与 N组比较各组肠传输速度显著加快 ( P均 <0 .0 5 ) ;I/ R 1和 I/ RL组血中 D木糖浓度较 N组高 ,3h后仍高于 N组 ;血 DAO浓度与血 D乳酸浓度变化相关 ( r=0 .5 5 9,P<0 .0 5 )。结论　缺血再灌注后小肠的屏障、吸收、通透和蠕动功能均有不同程度的改变 ;缺血再灌注复合内毒素血症时再次加速或加重了小肠屏障、吸收、通透和传输功能的变化     

浙江省岱山县居民死因分析

目的 为掌握浙江省岱山县海岛地区居民健康状况和主要疾病死亡原因,评价居民健康水平,为政府和相关部门制定疾病预防控制策略提供参考依据.方法 对岱山县1986 -1988年和2009-2010年两个时期居民死亡资料进行比较分析,采用国际疾病分类法进行编码,以2000年全国标准人口构成比进行死亡率标化.结果 岱山县两个...     

2018年中国卒中管理及研究进展

中国是世界上最大的卒中负担国。随着卒中医疗质量的进步,我国卒中死亡率呈下降趋势,但卒中发生率仍呈上升趋势。近年来,中国在卒中教育、研究和护理方面均取得了巨大成就。本文回顾了近年来有影响力的学术成就,对中国卒中医疗质量提升、溶栓及新的治疗方法探索、中国卒中建设发展等最新进展进行了总结和评价,并展望了中国卒中管理的未来。     

2010年云南省大理州祥云县居民死亡原因分析

目的 了解云南省祥云县当地居民死亡的主要原因,为制定当地疾病预防控制工作策略提供参考依据。 方法 分析祥云县死因登记报告系统中导出的2010年数据信息,用SPSS 16.0软件进行统计分析。 结果 祥云县2010年共报告死亡2759例,报告年平均死亡率为6.02,男性1648例,年死亡率为7.05,女性1111例,年死亡率为4.94。男性死亡率是女性的1.4倍,差异有统计学意义(P0.05);60岁组死亡2001例,占总死亡例数的72.53%;前4位死因顺位分别是循环系统疾病、呼吸系统疾病、伤害、恶性肿瘤,共死亡2384例,占总死亡例数86.41%。 结论 慢性非传染性疾病是危害当地居民健康的主要因素。     

医院门诊患者幽门螺杆菌感染及治疗现状

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）的感染率、抗Hp治疗的效果及影响疗效的相关因素。方法：454例用14C尿素呼气试验（14C-UBT）检测Hp的患者,记录其年龄、性别、Hp治疗方案1、4C-UBT结果等,分析其感染率及治疗效果。对调查数据行统计学分析。结果：在未抗Hp的患者中14C-UBT阳性率为53.7%,经抗Hp的患者中14C-UBT的阳性率为25.9%（P〈0.001）。在70例患者的具体治疗方案中常用的抗生素包括克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林。14例（20%）患者经过2次或2次以上抗Hp治疗,治疗方案以含质子泵抑制剂（PPI）的三联治疗为主。4周后随访,77.1%患者14C-UBT转阴,其中19例患者在8周以后复查,其阳性率较低（15.8%）。7例四联治疗患者Hp全部根除。Logistic回归分析显示,14C-UBT的结果与抗Hp的次数和处方医师是否是消化科医师显著相关（P〈0.05）。29.6%的患者有不良反应。结论：常用的抗Hp治疗方案的有效率在77.1%左右,含铋剂的四联治疗方案有较高的根除率;患者的再感染率较低。     

2006年湖南省霍乱监测结果分析

目的 监测人群中霍乱病例和被霍乱弧菌污染的水体及食物,以便尽早采取预防控制措施,防止疫情扩散.方法 全省范围开展腹泻患者及外环境、食品监测,选择重点地区开展甲鱼霍乱弧菌污染状况专项监测.结果 2006年湖南省共登记腹泻患者111 526例,检测霍乱弧菌89 661例,检测率为80.39%,检出阳性4例,均为0139群霍乱弧菌感染;检测环境和食品样44 533份,其中水体35 113份,全部为阴性,水产品5377份,阳性16份,阳性率为0.30%,阳性标本为甲鱼和牛蛙,其他食品4043份,均为阴性;甲鱼专项监测2323份,检出阳性33份,阳性率为1.42%;霍乱毒素基因检测34株菌,20株为产毒株,占58.80%;药敏试验28株菌,均对诺氟沙星、环丙沙星、丁胺卡那霉素100%敏感,对强力霉素、复方新诺明的敏感率为92.86%.结论 甲鱼、牛蛙等水产品是湖南省发生霍乱的主要因素,应加强水产品的监测和卫生管理.     

上海市嘉定区社区卫生服务中心就诊伤害病例分析

目的 了解上海市嘉定区社区卫生服务中心门/急诊伤害发生状况,为伤害干预提供参考依据。 方法 以上海市嘉定区13家社区卫生服务中心作为伤害监测点医院,对2008年10月1日至2009年9月30 日到医院门诊就诊并被诊断为伤害的首诊患者作为研究对象。 结果 共报告伤害病例17 391例,男女性别比为2.27 ∶ 1;伤害病例以15~39岁年龄组最多(50.55%);本区户籍占44.67%,外地户籍占55.33%;7月发生的伤害人数最多(12.12%),发生时间多在08:11-16:37;以非故意伤害和轻度伤害为主;前5位伤害发生原因是物体/器具的机械性作用(66.28%)、跌倒/坠落(22.07%)、非机动车交通事故(6.47%)、机动车交通事故(1.86%)、烫伤(1.59%)。 结论 物体/器具的机械性作用、跌倒/坠落、交通事故为优先防治的伤害种类,应重视外来人口的伤害干预。