用单克隆抗体显示小鼠胚胸腺上皮细胞的分化

以小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体ＭＴＳ６、５、２０、３３，用免疫酶法观察了小鼠胚（１２～１９ｄ）胸腺上皮细胞的不同亚类和分化。第１２天胚胸腺原基中有少数细胞开始显示ＭＴＳ６弱阳性反应。第１３ｄ胚胸腺皮质中有些胸腺上皮细胞显示ＭＴＳ５阳性。第１５ｄ胸腺皮质和髓质中有些胸腺上皮细胞开始呈ＭＴＳ２０阳性反应。第１７ｄ胚髓质中可见少数胸腺上皮细胞开始呈ＭＴＳ３３阳性反应。第１９ｄ胚ＭＴＳ５、６阳性反应的胸腺上皮细胞分布于皮质和髓质，并相连成网状，ＭＴＳ２０显示出皮质、髓质中一些散在的胸腺上皮细胞呈阳性反应，而ＭＴＳ３３仅在髓质中显示出少数体积较大的胸腺上皮细胞。第１２～１９ｄ胚ＭＴＳ６、５、２０阳性细胞反应逐渐增强，ＭＴＳ３３阳性细胞反应稍有增强。本研究显示，在鼠胚胸腺发育不同阶段，胸腺上皮细胞的不同亚类的分化有所差异，并提示胸腺上皮细胞的早期分化与Ｔ细胞的分化和发育有密切关系。     

人胸腺内Ghrelin的免疫组织化学定位

目的:观察Ghrelin在人胸腺的定位与分布,为深入探讨胸腺内Ghrelin的功能意义提供实验依据。方法:采用特异性抗Ghrelin血清,用免疫组织化学ABC法观察人胸腺内Ghrelin的定位与分布。结果:Ghrelin免疫反应阳性细胞在胸腺内分布广泛。胸腺皮质浅层的Ghrelin阳性细胞呈巨噬细胞形态特点;而皮髓质交界区有大量上皮性网状细胞呈Ghrelin免疫反应阳性;胸腺髓质内Ghrelin阳性信号主要定位于树突状细胞和上皮性网状细胞;胸腺小体呈Ghrelin免疫反应强阳性。结论:胸腺内Ghrelin分布广泛,定位于胸腺巨噬细胞、上皮性网状细胞、树突状细胞和胸腺小体。Ghrelin可能参与胸腺细胞分化和成熟的调节。     

胸腺小体在胸腺发育中的形态发生及其功能探讨

用组织化学与免疫组织化学技术对8例人胎(胎龄16～32周)的胸腺进行研究,观察在其发育过程中胸腺小体的形态变化及增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)、花生凝集素(Peanut Aggulutinin,PNA)和细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)等的表达特征.结果显示:胸腺小体是在胸腺发育阶段由胸腺上皮细胞呈同心圆状排列而成,且胎儿胸腺中单个和融合状的胸腺小体都较成体胸腺中明显增多.围成胸腺小体的上皮细胞从周边向中央,角蛋白含量明显减少,增殖能力逐渐减弱,表现为逐渐退化的过程.证实胸腺小体是处理退变的上皮细胞的场所.另外,在胸腺小体的上皮细胞膜有PNA受体的表达,这提示在胸腺的发育成熟过程中,胸腺小体上皮细胞与胸腺细胞之间可能存在着相互识别相互诱导的作用.     

胸腺小体在胸腺发育中的形态发生及其功能探讨

用组织化学与免疫组织化学技术对８例人胎的胸腺进行研究，观察在其发育过程中胸腺小体的形态变化有增殖细胞核抗原，花生凝集素和细胞角蛋白等的表达特征。结果显示：胸腺小体是在胸腺发育阶段由胸腺上皮细胞呈同心圆状排列而成，且胎儿胸中单个和融合状的胸腺小体部较成体胸明显增多。围成胸腺小体的上皮细胞从周边中央，角蛋白明显减少，增殖能力逐渐减弱，表现为逐渐退化的过程。证实胸腺小体是处理退变的上皮细胞的场所。另外，     

mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布

目的 研究mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布.方法 RT-PCR法检测mLAIR-1基因在正常小鼠胸腺细胞的表达,通过流式细胞术分析mLAIR-1在胸腺细胞发育不同阶段表达的变化,并采用免疫组织化学染色从形态学上观察mLAIR-1在胸腺的分布.结果 RT-PCR和流式细胞术的结果表明mLAIR-1在小鼠胸腺中有表达,尤其是在CD4-CD8-双阴性和CD4-CD8 单阳性阶段表达水平较高.免疫组化的结果显示该分子在胸腺的皮质区和髓质区均有表达,在皮髓质交界处以及髓质区表达更为明显.结论 mLAIR-1在小鼠胸腺细胞上有着明确的分布,并且在胸腺细胞分化发育的不同阶段具有不同的表达格局,提示该分子在胸腺的发育过程中可能有比较重要的作用.     

用显示非特异性酯酶的半透膜技术对小鼠胸腺基质细胞的观察

成年BALB/c小鼠胸腺,新鲜组织恒冷箱切片,用半透膜技术显示非特异性酯酶。由于该技术能保存全部酶活性,故可显示各类基质细胞及其分布。上皮网状细胞、胸腺哺育细胞及交错突细胞的酶活性呈弱阳性,巨噬细胞呈强阳性。胸腺T细胞呈微弱阳性或阴性。皮质的上皮网状细胞形成海绵状支架;髓质上皮网状细胞可分为低酶活性和高酶活性细胞两种类型,后者可呈灶状分布。皮、髓质内均可见巨噬细胞,皮-髓交界区尤多,并可见与胸腺T细胞形成玫瑰花环状。同时用大鼠抗小鼠基质细胞的单克隆抗体进行了免疫组织化学观察。本文结果有助于在光镜下研究胸腺微环境的结构和功能。     

化生性胸腺瘤临床病理分析

目的探讨化生性胸腺瘤的临床病理特点。方法应用光镜、免疫组织化学(EnVision法)染色[单克隆抗体选用AE1/AE3、波形蛋白、上皮膜抗原(EMA)、CD3、CD5、CD20、CD34、CD57、CD99、末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、HMBE-1、calretinin、p53和Ki-67]和透射电镜观察3例化生性胸腺瘤的组织学特点、免疫学表型和超微结构。结果3例化生性胸腺瘤均为女性,年龄为33、58和45岁。组织学表现为双相分化特征,上皮细胞区域与梭形细胞区域交错分布并相互移行。上皮细胞区域的细胞轻度异型,有核沟和核内假包涵体,核分裂象罕见,呈岛状和条索状排列并相互吻合;梭形区域细胞形态温和,未见核分裂象,排列成束状或席纹状结构。免疫组织化学染色:上皮细胞区域AE1/AE3强阳性表达,不表达波形蛋白和CD5,Ki-67指数3%~5%;梭形细胞区域波形蛋白弥漫表达,EMA阳性,不表达CD5和CD20;间质淋巴细胞CD3阳性,不表达TdT和CD99。超微结构示上皮细胞区域细胞间有桥粒和半桥粒结构,而梭形细胞区域缺乏。结论化生性胸腺瘤是一类罕见的具有独特临床病理特征的良性或低度恶性胸腺上皮来源肿瘤。     

胸腺瘤中β5t、p63和CD20的表达及其意义

目的探讨β5t、p63和CD20在胸腺瘤中的表达及其意义。方法观察34例胸腺瘤手术切除标本的组织学形态,采用免疫组化En Vision法检测β5t、p63和CD20在胸腺瘤中的表达,并复习相关文献。结果 (1)β5t在A型胸腺瘤中上皮细胞呈胞质并核旁点状加强阳性(4/4);在B型胸腺瘤中呈核质阳性(20/20),其中在B1型强阳性(10/10),B2型中等阳性(4/6)、弱阳性(2/6),B3中等阳性(1/2)、弱阳性(1/2),在B1型与B2、B3型中阳性强度呈逐渐下降趋势(P0.001);在AB型胸腺瘤中呈上述两种形态(9/9)。(2)p63在胸腺瘤上皮细胞中阳性率为60%~100%,在A型胸腺瘤中呈大片状分布(4/4),在B1、B2、B3型胸腺瘤中分别呈散在分布(10/10)、簇状或小片状分布(6/6)、大片状分布(2/2)。(3)CD20在A和AB型胸腺瘤上皮中呈局灶阳性(4/4、8/9),在B型胸腺瘤中呈阴性。结论β5t、p63和CD20三者联合检测可以更好地对胸腺瘤进行分型,且β5t与p63相对应可有助于对B型胸腺瘤进行分型。     

化生性胸腺瘤2例临床病理分析

目的：探讨化生性胸腺瘤的临床及病理学特征。方法：应用光镜及免疫组织化学方法观察2例化生性胸腺瘤的组织学特点及免疫学表型,并复习相关文献。结果：2例均为男性,年龄55岁及56岁。组织学肿瘤显示双相分化特点,上皮细胞区域与梭形细胞区域交错分布并相互移行。上皮细胞呈相互吻合的束状、岛状及宽大的梁状排列,细胞轻度异型,可见核沟及核内假包涵体,偶见核分裂像;梭形细胞呈短束状或席纹状排列,细胞温和,未见核分裂像。免疫表型：上皮细胞区域CK19和AE1/AE3呈强阳性表达,上皮膜抗原（epithelial membrane antigen,EMA）弱阳性;梭形细胞区域表达Vimentin、Bcl-2及CD99,AE1/AE3局灶阳性,EMA弱阳性。两种区域中Ki67指数均〈5%。间质淋巴细胞CD3、CD5、CD20阳性,不表达Td T和CD99。结论：化生性胸腺瘤是一种罕见的良性或低度恶性胸腺肿瘤,诊断依靠病理组织学和免疫组织化学标记,完整切除预后良好。     

实验性糖尿病大鼠胸腺的免疫组化研究

<正> 胰岛素依赖型糖尿病的发病与胸腺T细胞亚群分化异常有关,但对其在发病过程中的分化规律和作用机理尚未完全清楚.本实验给予SD大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65mg/kg)以诱导实验性糖尿病,做常规形态学及免疫组织化学染色观察实验性糖尿病状态下大鼠胸腺的形态结构、胸腺上皮细胞角蛋白(CK)表达及胸腺细胞表面CD4、CD8分子表达的变化.结果表明:本实验所诱导的实验性糖尿病大鼠均均出现典型的糖尿病症状,血糖值均在20.25mmol/L以上,远高于糖尿病大鼠的血糖标准值16.0mmol/L,说明本实验所用的建模方法效果较好.糖尿病大鼠胸腺发生病理性萎缩,CK8+的胸腺皮质上皮细胞相互联结构成的网中存在空洞状缺失,胸腺细胞表面的CD4、CD8表达呈区域状分布,主要分布于胸腺皮质部,髓质部较少见阳性反应细胞.结论:STZ诱导的实验性糖尿病大鼠伴有胸腺萎缩、胸腺皮质上皮缺失及胸腺细胞表面CD4、CD8的表     

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产孕小鼠子宫组织中CD4+/CD8+ T细胞的影响

目的 探讨小鼠子宫组织中CD4⁺ 和CD8⁺ T细胞在早期胚胎丢失中的意义，研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖（LPS）诱导流产小鼠的保胎效果和对母胎界面免疫平衡的调节作用。 方法 采用LPS尾静脉注射，制造小鼠流产模型，孕4～7d分别口服不同保胎药物，用药前后检测各组（n=10）小鼠子宫组织CD4⁺/CD8⁺T细胞亚群的变化。 结果 LPS促流产后，小鼠子宫壁CD4+T细胞数量显著增多（P<0.01），CD8⁺ T细胞无明显变化（P>0.05），CD4⁺/CD8⁺比值显著升高（P<0.01）。预先口服保胎药物能不同程度抑制LPS的作用。其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显，CD4^+/CD8⁺比值下降，较LPS流产模型组差异极显著（P<0.01）。 结论 小鼠子宫组织CD4^+/CD8⁺比值升高与早期胚胎丢失关系密切，槲皮素和乙酸龙脑酯能够调节小鼠子宫局部的免疫微环境，从而起到一定的促孕保胎作用。     

人胎盘CD133+细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的 通过对人胎盘CD133⁺细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析，证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞（HSPC）。 方法 采用机械法制备人胎盘组织（PT）单细胞悬液，用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC)，经磁式分选（MACS）富集CD133⁺细胞，培养28 d后观察HPP-CFC集落形成能力，用流式细胞仪（FCM）对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析，实验全程用脐带血（UCB）作平行比较分析。 结果 培养28 d后，PT-CD133⁺与UCB-CD133⁺细胞组份分别扩增了266和362倍，前者低于后者（P<0.01）；PT-CD133⁺与UCB-CD133⁺细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×10³、(17. 7±5.7)/5×10³，前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者（P<0.01）；PT-CD133⁺、UCB-CD133⁺细胞培养至28 d时，除UCB-CD133⁺组的CD133⁺CD34^-亚群比例无明显改变外，CD133⁺CD34⁺、CD133^-CD34⁺和CD133⁺CD34^-（PT-CD133⁺组）亚型均比培养前减少。 结论 人胎盘组织CD133⁺细胞中存在HPP-CFC，说明胎盘CD133⁺细胞群中存在早期HSPC。     

In vitro generation of cytotoxic and regulatory T cells by fusions of human dendritic cells and hepatocellular carcinoma cells

Background

Human hepatocellular carcinoma (HCC) cells express WT1 and/or carcinoembryonic antigen (CEA) as potential targets for the induction of antitumor immunity. In this study, generation of cytotoxic T lymphocytes (CTL) and regulatory T cells (Treg) by fusions of dendritic cells (DCs) and HCC cells was examined.

Methods

HCC cells were fused to DCs either from healthy donors or the HCC patient and investigated whether supernatants derived from the HCC cell culture (HCCsp) influenced on the function of DCs/HCC fusion cells (FCs) and generation of CTL and Treg.

Results

FCs coexpressed the HCC cells-derived WT1 and CEA antigens and DCs-derived MHC class II and costimulatory molecules. In addition, FCs were effective in activating CD4⁺ and CD8⁺ T cells able to produce IFN-γ and inducing cytolysis of autologous tumor or semiallogeneic targets by a MHC class I-restricted mechanism. However, HCCsp induced functional impairment of DCs as demonstrated by the down-regulation of MHC class I and II, CD80, CD86, and CD83 molecules. Moreover, the HCCsp-exposed DCs failed to undergo full maturation upon stimulation with the Toll-like receptor 4 agonist penicillin-inactivated Streptococcus pyogenes. Interestingly, fusions of immature DCs generated in the presence of HCCsp and allogeneic HCC cells promoted the generation of CD4⁺ CD25^high Foxp3⁺ Treg and inhibited CTL induction in the presence of HCCsp. Importantly, up-regulation of MHC class II, CD80, and CD83 on DCs was observed in the patient with advanced HCC after vaccination with autologous FCs. In addition, the FCs induced WT1- and CEA-specific CTL that were able to produce high levels of IFN-γ.

Conclusion

The current study is one of the first demonstrating the induction of antigen-specific CTL and the generation of Treg by fusions of DCs and HCC cells. The local tumor-related factors may favor the generation of Treg through the inhibition of DCs maturation; however, fusion cell vaccination results in recovery of the DCs function and induction of antigen-specific CTL responses in vitro. The present study may shed new light about the mechanisms responsible for the generation of CTL and Treg by FCs.     

老龄小鼠性腺摘除后胸腺的形态学变化

本文观察了15月龄雌雄ICR小鼠于性腺摘除后第25天胸腺的变化。与对照组相比,胸腺增大,重量增加,皮质增厚且皮髓质分界明显,细胞密度显著增大;皮质/髓质立体计量数值、细胞总数、胸腺细胞数/mm~2及ANAE阳性细胞、非淋巴细胞(NLC)、巨噬细胞(Mφ)一胸腺细胞花环的百分率均增高;电镜下胸腺细胞与明型上皮性网状细胞或Mφ形成的花环更多见。外周血ANAE阳性淋巴细胞明显增多。以上结果表明,老龄小鼠于性腺摘除后,胸腺呈现明显的形态学逆转变化。     

Inhibitory effects of suplatast tosilate on the differentiation and function of monocyte-derived dendritic cells from patients with asthma

Background Dendritic cells (DCs) are antigen‐presenting cells that efficiently activate T cells. Objective We examined the effects of suplatast tosilate, which prevents T‐helper type 2 responses, on the differentiation and function of monocyte‐derived DCs (moDCs). Methods DCs were differentiated in vitro from peripheral monocytes from patients with asthma by the addition of granulocyte macrophage colony‐stimulating factor and IL‐4 in the presence or absence of suplatast tosilate. Cell surface molecules (CD1a, CD14, CD80, CD83, CD86, HLA‐DR) on immature and mature DCs were analysed with flow cytometry, and the secretion of CC chemokine ligand (CCL)17 (thymus and activation‐regulated chemokine), IL‐12p70, IL‐12p40, and IL‐10 was measured with an ELISA. We also studied the proliferative responses of allogeneic CD4⁺ T cells from healthy subjects to DCs differentiated in the presence of suplatast tosilate. In addition, the production of IFN‐γ and IL‐5 by CD4⁺ T cells after coculture with untreated DCs or suplatast tosilate‐treated DCs was measured with ELISA. Results Suplatast tosilate significantly inhibited the expression of CD1a, CD80, and CD86 on immature DCs and of CD1a, CD80, CD83, and CD86 on mature DCs. Suplatast tosilate also significantly inhibited the secretion of CCL17, IL‐12p70, and IL‐12p40; however, the secretion of IL‐10 was not affected. The proliferative responses of allogeneic CD4⁺ T cells to suplatast tosilate‐treated DCs were suppressed. Moreover, suplatast tosilate‐treated DCs had an impaired capacity to stimulate CD4⁺ T cells to produce IFN‐γ and IL‐5. Conclusion Suplatast tosilate inhibits the differentiation, maturation, and function of moDCs.     

SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立

目的 构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型.方法 从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H -K ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR检测基因的表达情况.结果 将422枚注射过的受精卵移植给16只假孕雌鼠,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%.在出生的77只仔鼠中,2#、4#、8#、16#、24#、51#、57#、61#、68#、73#经PCR检测为阳性首建鼠.除68#不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只F1代鼠.8#品系23只F1代尚未发现阳性鼠,另8个品系F1代经PCR和Southern blotting检测发现31只阳性鼠,阳性率为40.8%(31/76).RT-PCR检测F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均不表达.不育首建鼠处死解剖发现胃组织有肿瘤存在.结论 建立了胃壁细胞定位表达SV40T基因的转基因小鼠动物模型.     

DNA vaccine expressing repeated carcinoembryonic antigen (CEA)(625-667) induces strong immunity in mice

The efficacy of immunization with DNA plasmids for single truncated carcinoembryonic antigen (CEA) peptide or triple repeated CEA peptides in mice was evaluated. A DNA fragment the truncated CEA gene (nucleotide 625-667) encoding two helper T lymphocyte (HTL) epitopes was amplified by PCR and cloned for generating recombinant plasmids for single CEA(625-667) (pcDNA-CEA(625-667)) or triple CEA(625-667) (pcDNA-triCEA(625-667)), respectively. Subsequently, groups of BALB/c female mice were intramuscularly injected with pcDNA-CEA(625-667,) pcDNA-triCEA(625-667) or control pcDNA3.0 vector, respectively. Ten days after the last immunization, the frequency of splenic CD4(+) and CD8(+) T cells in the mice was determined by flow cytometry. The antigen-specific proliferation of splenic T cells and cytokine production ex vivo were analyzed by (3)H-TdR uptake and cytokine ELISA, respectively. The levels of serum antibodies against CEA in the mice were detected by Western blot and ELISA. Although immunization with plasmid for the CEA(625-667) peptide(s) did not alter the frequency of CD4(+) and CD8(+) T cells in mice, vaccination with plasmid for CEA peptide induced strong antigen-specific T cell proliferation, particularly for the plasmid encoding the triple-repeated CEA peptides, accompanied by significantly elevated levels of IFN-γ secreted by T cells from the mice immunized with triple-repeated peptides. Furthermore, immunization with the plasmid for CEA peptide stimulated higher levels of antigen-specific antibody responses in mice. Vaccination with the plasmid for the triple repeated CEA peptides induced stronger Th1 responses. Our findings may be useful for the development of effective DNA vaccine for the immunotherapy of cancer.     

人乳腺癌组织中CD1C+树突状细胞免疫组化研究

目的观察树突状细胞在人乳腺癌组织中的形态学变化。方法利用CD1C+作为树突状细胞(dendriticcell,DC)的特征性标志分子,用免疫组织化学方法观察20例人乳腺癌组织及癌旁相对正常组织中树突状细胞的分布和形态学变化,同时检测p53蛋白的表达。结果乳癌组织中树突状细胞CD1C+阳性面数密度(4.55±1.32)和平均光密度值(0.13±0.03)明显低正常乳腺组织面数密度(11.16±5.32)和平均光密度值(0.27±0.07,P<0.05);乳癌组织DC数量较正常乳腺组织明显减少(P<0.05)。20例乳腺癌中,p53蛋白阳性表达率为60%;正常组织为阴性。结论树突状细胞及其表达的p53蛋白可能参与肿瘤免疫调节作用。     

利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞

目的 利用亮甲酚蓝(BCB)染色提高猪体外胚胎培养体系的效率.方法 对猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析. 结果 着色组(BCB+)猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ(MⅡ)期的比率(91.6%)显著高于未着色组(BCB-)(64.0%)和对照组猪卵母细胞(77.5%)(P<0.05);BCB+孤雌猪胚胎的囊胚率(34.9%)显著高于BCB-(9.5%)和对照组(23.1%)(P<0.05);BCB+核移植猪胚胎的囊胚率(23.0%)显著高于BCB-(5.0%)和对照组(14.1%)(P<0.05).结论 BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法.     

重组质粒pcDNA3.1-IL-15转染对小鼠骨髓DC上表面分子的表达及功能的影响

目的: 探讨重组质粒pcDNA3. 1 IL- 15对小鼠骨髓树突状细胞(DC)表面共刺激分子的表达及免疫功能的影响。方法: 构建真核表达质粒pcDNA3. 1 IL- 15, 以其转染小鼠骨髓DC。用流式细胞仪检测转染的DC表面CD40、CD80及CD86的表达, 并分析转染的DC刺激脾淋巴细胞中CD4 、CD8 T细胞亚群的变化。用MTT比色法检测转染的DC刺激T细胞增殖的作用。用ELISA法检测T细胞产生IFN- γ的水平。结果: pcDNA3. 1- IL- 15转染的DC表面CD40、CD80及CD86的表达均有不同程度的升高。重组质粒转染的DC可诱导小鼠脾淋巴细胞中CD4 、CD8 T细胞增殖, 但CD4 /CD8 T细胞的比值降低。结论: 重组质粒pcDNA3. 1 -IL- 15转染可提高DC表面共刺激分子的表达并增强其免疫功能。