cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年SD大鼠50只,体重300-350g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型后随机分为5组(n=10):缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)、H89组、脯氨酸二硫氨基甲酸组(PDTC组)和双丁酰环磷酸腺苷组(db-cAMP组).K-H液平衡灌注10 min后,R组K-H液继续灌注30 min后停灌1 h,再灌注30 min;IPC组停灌5 min,再灌注5 min.反复3次,停灌1 h再灌注30 min;PDTC和H89组停灌5 min,分别用含有PDTC 100μmol/L和含有H89 10 μmol/L的K-H液再灌注5 min,反复3次,余同IPC组;db-cAMP组用含db-cAMP 200 μmollL的K-H液灌注30 min,停灌1 h再灌注30 min.于平衡灌注10 min、再灌注10、20和30 min时记录左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax)和左心室发展压(LVDP).于平衡灌注10 min和再灌注30 min时记录冠脉流出量(CF);测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CK)活性.于再灌注30 min时取心肌组织,采用EMSA法检测NF-κB-DNA结合活性,采用RT-PCR法检测TNF-α mRNA表达,采用Western blot法检测磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(p-CREB)(Serl33)表达.结果 与IR组比较,IPC组和db-cAMP组NF-κB-DNA结合活性和TNF-α-mRNA表达降低,±dp/dt和CF升高,CK和LDH活性降低,WC组、PDTC组和db-cAMP组p-CREB(Ser133)表达升高(P<0.05或0.01);与IPC组比较,H89组和PDTC组NF-κB-DNA结合活性和TNF-αmRNA表达升高,±dp/dt、LVDP和CF降低,CK和LDH活性升高.H89组p-CREB(Serl33)表达降低(P<0.05或0.01).结论 缺血预处理通过激活cAMP-PKA信号转导通路抑制NF-κB-DNA结合活性,减少炎性因子的基因转录.从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

环腺苷酸-蛋白激酶A在大鼠内毒素性急性肺损伤时血红素加氧酶-1表达上调中的作用

目的 探讨环腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)在大鼠内毒素性急性肺损伤时血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 健康清洁级雄性SD大鼠48只,体重180 ～ 220 g,2.5 ～ 3.0月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=12)∶正常对照组(C组)股静脉注射生理盐水(LPS溶媒)0.5 ml,2h后皮下注射生理盐水(H89溶媒)0.5 ml;内毒素性急性肺损伤组(ALI组)股静脉注射10 mg/kg LPS 0.5 ml,2h后皮下注射生理盐水0.5 ml; H89+内毒素性急性肺损伤组(H+ALI组),股静脉注射10 mg/kg LPS 0.5 ml,2h后皮下注射5 mg/kg H89 0.5 ml; H89组(H组)股静脉注射生理盐水0.5 ml,2h后皮下注射5 mg/kg H89 0.5 ml.静脉注射LPS后6h时处死大鼠,取肺组织,行病理学评分,测定肺组织含水量;采用Western blot法测定HO-1和PKA表达;采用荧光定量PCR法测定HO-1mRNA表达.结果 与C组比较,ALI组和H+ALI组肺组织含水量和病理学评分升高,肺组织PKA、HO-1和HO-1 mRNA表达上调(P＜0.05),H组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与ALI组比较,H+ALI组肺组织含水量和病理学评分升高,肺组织PKA、HO-1和HO-1 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 大鼠内毒素性急性肺损伤时HO-1表达上调的机制与cAMP-PKA信号通路活化有一定关系.     

异氟醚对大鼠海马蛋白激酶A和蛋白激酶C水平的影响

目的 评价异氟醚对大鼠海马蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)水平的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,月龄3月,体重180～220g,随机分为3组(n=12),Ⅰ组不给予任何处理,直接进行认知功能测试;Ⅱ组吸入1.2%异氟醚4 h,2 d后进行认知功能测试;Ⅲ组吸入1.2%异氟醚4 h,2周后进行认知功能测试.采用Morris水迷宫进行大鼠认知功能测试,记录逃避潜伏期.认知功能测试完毕后,处死大鼠,取海马,测定PKA和PKC的表达和活性.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组逃避潜伏期差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组逃避潜伏期延长,Ⅱ组和Ⅲ组海马PKA和PKC的表达下调,活性降低(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组逃避潜伏期延长(P＜0.05),海马PKA和PKC的表达和活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吸入1.2%异氟醚4 h可抑制海马PKA和PKC的水平,从而导致大鼠认知功能障碍.     

AQP-1蛋白在重症胰腺炎急性肺损伤中的表达

本实验就水通道蛋白AQP-1在重症急性胰腺炎（SAP）急性肺损伤中的作用进行研究,现报告如下.     

相关细胞因子在重症急性胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的总结重症急性胰腺炎相关肺损伤时细胞因子的变化及相互作用。方法查阅近年来重症急性胰腺炎相关肺损伤的相关文献并进行综述。结果重症急性胰腺炎相关肺损伤时,各细胞因子连锁效应、相互影响。结论相关细胞因子在重症急性胰腺炎引起肺损伤的过程中发挥了重要作用,通过对相关细胞因子的研究将有助于重症急性胰腺炎相关肺损作的诊断及治疗。     

L-精氨酸在重症胰腺炎并发急性肺损伤中的作用

目的 探讨L-精氨酸在重症胰腺炎并发急性肺损伤中的作用。方法 经大鼠胰管注射牛磺胆酸钠制备实验性胰腺炎并发急性肺损伤模型,分别注射L-精氨酸、山莨菪碱、生理盐水。测定肺湿重,血清淀粉酶、丙二醛、肿瘤坏死因子及观察胰、肺病理变化。结果 L-精氨酸、山莨菪碱对急性胰腺炎并发肺损伤均有一定的治疗效果(血淀粉酶下降、肺湿重减轻、胰腺和肺的病理变化减轻),L-精氨酸的作用明显强于山莨菪碱。结论 L-精氨酸及其生成物NO生物活性广泛,在急性胰腺炎并发肺损伤实验鼠中应用时,能明显减轻胰、肺的病变,对急性胰腺炎并发肺损伤具有一定的治疗作用。     

p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重180～230 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(ALI组,n=24)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580+ALI组(SB+ALI组,n=24)和SB203580组(SB组,n=6).ALI组尾静脉注射内毒素5 mg/kg制备大鼠急性肺损伤模型,C组给予等容量生理盐水,SB+ALI组于注射内毒素前30 min经尾静脉注射SB20358010 mg/kg.ALI组和SB+ALI组于注射内毒素后1、3、6 h(T1-3)时随机取8只大鼠,C组和SB组分别于给予生理盐水、SB203580后1 h处死取肺组织,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.T3时回收支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度.计算细胞凋亡指数,观察肺组织病理学结果.另取32只大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):ALI组和SB+ALI组,观察48 h内大鼠生存情况.结果 与C组相比,ALI组和SB+ALI组BALF中蛋白浓度、细胞凋亡指数、肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平升高(P＜0.05);与ALI组相比,SB+ALI组上述指标降低(P＜0.05).SB+ALI组病理学损伤程度较ALI组明显减轻.ALI组大鼠生存率较SB+ALI组降低(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路参与了大鼠内毒素性急性肺损伤的发生和发展,可能与肺组织细胞凋亡有关.

Abstract：

Objective To investigate the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal transduction pathway in lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI).Methods Sixty male SD rats weighing 180-230 g were randomly divided into 4 groups: control group (group C, n = 6), ALI group ( n = 24),p38MAPK specific inhibitor SB203580 + ALI group (group SB + ALI, n = 24), SB203580 group (group SB,n =6). LPS 5 mg/kg was injected intravenously via tail vein in group ALI and SB + ALI, while the equal volume of normal saline was given instead in group C. Group SB + ALI received iv injection of SB203580 10 mg/kg via tail vein 30 min before LPS administration. Group SB received injection of SB203580. The rats were sacrificed at 1, 3 and6 h agter LPS administration (T1-3) in group ALI and SB + ALI (8 rats at each time point) andat 1 h after administration in C and SB groups. The lungs were immediately removed for microscopic examination and determination of phosphorylated p38MAPK (p-p38MAPK) expression, the concentration of protein in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and apoptotic index (AI). Another 32 rats were selected and randomly divided into 2 groups for survival study: ALI group and SB + ALI group ( n = 16 each), and then they were treated as mentioned above and observed for 48 h. Results The concentration of protein in BALF, AI and p-p38MAPK expression were significantly increased in group ALI and SB + ALI compared with group C, while decreased in group SB + ALI compared with group ALI ( P ＜ 0. 05 ). LPS-induced pulmonary histological changes were significantly attenuated in group SB + ALI compared with group ALI. The survival rate was significantly decreased in group ALI compgred with group SB + ALI ( P ＜ 0.01 ). Conclusion p38 MAPK signal transduction pathway is involved in LPS-induced ALI, which may be related to the apoptosis in the cells in the lung.     

丝裂原蛋白激酶信号转导通路在机械通气相关性肺损伤中的作用

目的观察机械通气介导肺损伤（VILI）过程中丝裂原蛋白激酶（MAPK）的活性变化以及对细胞因子的影响，从中探讨VILI发生机制和MAPK的作用。方法72只SD大鼠随机分为未处理的对照组（不行机械通气）、正常通气组、过度通气组和采用MAPK抑制剂SP600125（JNK）、SB203580（p38）、PD98059（ERK）分别预处理上述3组。机械通气4h后取大鼠肺组织采用Western blot方法测定各组的总JNK、ERK、p-38蛋白激酶的表达及其磷酸化水平变化。同时以酶联免疫吸附试验（EUSA）方法测定大鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液（BALF）和血浆中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）浓度。结果正常和过度机械通气4h后均能激活JNK、ERK、p38激酶，但以过度通气组为著（P〈0．01）。过度通气组大鼠肺组织、BALF、血浆中的TNF-α、MIP-2含量显著高于其他组（P〈0．01）。JNK、ERK、p38抑制剂显著降低肺组织、BALF中的TNF-α、MIP-2含量（P〈0．05或0．01），且JNK和ERK抑制剂作用强于p38抑制剂。结论过度机械通气激活了肺细胞中的JNK、ERK、p38激酶，且JNK、ERK、p38参与了VILI细胞因子的产生，即MAPK信号转导通路的激活可能是VILI发生机制之一。     

p38MAPK信号传导通路与重症急性胰腺炎

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路是细胞外信号引起细胞反应的共同通路,其中p38MAPK在介导炎症、应激等细胞反应中最为引人注目.本文综述了p38MAPK这一信号传导通路的结构特征、激活与生物学效应,及其在重症急性胰腺炎发病机制中的作用,旨在为重症急性胰腺炎的诊治研究提供新的思路.     

IL-10、IL-18在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）中IL-10及IL-18的表达及其与SAP肺损伤的关系。方法将48只SD大鼠按随机数字表法均分为对照组和SAP组，动态定量测定肺湿重系数、腹水量、血清淀粉酶、血清IL-10及IL-18的变化和半定量RT—PCR检测肺组织中IL-10 mRNA及IL-18 mRNA的表达，并在光镜下观察胰腺及肺组织病理学改变。结果各时相SAP组肺湿重系数、腹水量、血清淀粉酶、血清IL-10及IL-18水平和肺组织中IL-10 mRNA及IL-18 mRNA的表达与对照组相比均明显增高（P〈0．05，P〈0．01）。SAP组大鼠血清中IL-18水平和肺组织IL-18 mRNA表达水平均与肺湿重系数（r=0．68，P〈0．01；r=0．72，P〈0．01）及肺损伤病理评分（r=0．74，P〈0．01；r=0．79，P〈0．01）呈正相关，而血清中IL-10水平和肺组织IL-10 mRNA表达水平均与肺湿重系数（r=O．62，P〈0．01；r==0．69，P〈0．01）及肺损伤病理评分（r=-0．66，P〈0．01；r=-0．60，P〈0．01）呈负相关。结论IL-18参与了SAP并发肺损伤的病理过程，而IL-10对肺损伤有保护作用。     

胱天蛋白酶募集域蛋白9在大鼠急性胰腺炎相关肺损伤中的作用及其机制

目的:探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在大鼠急性胰腺炎相关性肺损伤(APALI)中的作用及机制。方法:30只雄性Sprague Dawley大鼠采用随机数字表法分成对照组(6只)、APALI组(12只)、腺病毒干扰组(12只)。通过胰管注射牛磺胆酸钠建立重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型,造模后3、6 h处死动物...     

当归对大鼠心肌缺血/再灌注损伤蛋白激酶C的影响

目的 目的研究当归抗心肌缺血／再灌注损伤的分子生物学机制。方法 结扎／开放左冠状动脉前降支结扎４０ｍｉｎ／开放１２０ｍｉｎ建立心肌缺血／再灌注模型。选用ＳＤ大鼠４０只,随机分成三组：对照组（Ａ组,ｎ＝１０只）,丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎;缺血／再灌注组（Ｂ组,ｎ－１５只）,缺血／再灌注前舌静脉注射生理盐水０．８ｍｌ／１００ｇ。采用免疫组化ＳＰ法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）含量和同位素标记法测定ＰＫ     

烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶通路的变化

目的 了解烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及炎性细胞因子含量的变化,探讨其损伤机制. 方法建立密闭舱内烟雾吸入性损伤模型,将30只SD大鼠分为烟雾吸入性损伤后1、6、24、72 h及7 d组,另设正常对照组(6只).取各组大鼠肺组织行病理学观察,检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,用蛋白质印迹法检测肺组织p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及各酶磷酸化水平.收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),检测TNF-α、MIP-2、IL-1β含量并行粒细胞分类、计数. 结果烟雾吸入使大鼠产生急性肺损伤样病理改变.伤后1 h组大鼠肺组织及BALF中TNF-α和IL-1β含量均高于正常对照组(P<0.01).各组肺组织MIP-2水平与正常对照组接近(P>0.05),伤后1 h组BALF中MIP-2水平高于正常对照组(P<0.01).各致伤组p38MAPK、ERK1/2、JNK水平接近正常对照组,但此3种酶的磷酸化水平在伤后不同时相组有高表达.伤后1 h组大鼠BALF粒细胞总数为(0.36±0.08)×106个/L,较正常对照组(0.61±0.09)×106个/L明显减少(P<0.05),伤后7 d组粒细胞总数[(1.71±0.67)×106个/L]却高于正常对照组(P<0.05).伤后6 h～7 d组中性粒细胞数多于正常对照组(P<0.05).伤后1 h组巨噬细胞数少于正常对照组(P<0.05),但6 h～7 d组逐渐增多.各组大鼠淋巴细胞数量接近(P>0.05).结论 密闭舱室内非金属材料燃烧释放的毒性气体能诱导肺组织产生明显的炎性反应,激活细胞MAPK通路中重要激酶的表达,这可能是毒性混合气体导致肺损伤的重要机制之一.     

MLK3-MKK3/6-p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 探讨MLK3-MKK3/6-p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠78只,体重200～250 g,随机分为4组:对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(ALI组,n=24)、MLK3抑制剂K252a组(MK组,n=24)和p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(MS组,n=24).ALI组尾静脉注射内毒素5 mg/kg制备大鼠急性肺损伤模型,C组给予等容量生理盐水,MK组和MS组于注射内毒素前30 min经尾静脉分别注射K252a 75μg/kg、SB203580 10 mg/kg.ALI组、MK组和MS组于注射内毒素后1、3、6、12 h(1-4)时各组随机取6只大鼠,C组于给予生理盐水后即刻处死取肺,采用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中TNF-α浓度,称重后计算肺湿干重比,采用Western b1ot法测定p-MLK3、p-MKK3/6及p-p38MAPK的表达,观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,ALI组、MK组和MS组各时点支气管肺泡灌洗液中TNF-α浓度、肺湿干重比、p-MLK3、p-MKK3/6及p-p38MAPK的表达水平升高(P＜0.01);与ALI组比较,MK组上述指标降低,MS组支气管肺泡灌洗液中TNF-α浓度、肺湿干重比、p-p38MAPK表达水平降低(P＜0.05).病理学结果显示:MK组和MS组肺组织损伤较ALI组减轻.结论 MLK3-MKK3/6-p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中起重要作用.     

氢饱和生理盐水在重症急性胰腺炎肝损伤中的抗氧化应激作用及对丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的 观察氢饱和生理盐水(HRS)对于急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肝脏活性氧自由基(ROS)激活的丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路的影响,并探讨其对于ANP大鼠肝脏的保护作用.方法 90只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(SO)组、ANP组和HRS组,每组分为3、12、24h3个亚组(n=10).逆行胆胰管注射5％牛磺胆酸钠制备ANP模型,SO组仅开腹翻动胰十二指肠后关腹.HRS组术后尾静脉补充HRS 6 ml/kg,同时皮下注射HRS 20 ml/kg,其余各组同等剂量给予生理盐水.术后分组剖杀,检测血清血淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST).取胰头及肝组织固定切片,观察病理改变并评分或分级,免疫组织化学检测肝脏组织中磷酸化c-jun氨基端激酶(p-JNK)、p-p38及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达.检测新鲜肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平.结果 各时间点ANP大鼠血清AMY(U/L)(5 385±572比1 146±121)、LIP(U/L)(1 924.9±105.4比86.5±8.9)、ALT (U/L)(156.9±15.8比56.1±5.4)、AST (U/L)(448.5±53.0比124.6±14.7)以及胰腺肝脏病理评分[(13.79±1.36)比(0.38±0.53)分]较SO组均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);HRS组AMY(U/L)(5 567±512比5 385 ±572)、LIP (U/L)(1 856.8±149.3比1 924.9±105.4)较ANP组下降,但差异无统计学意义(P＞0.05).HRS组ALT(U/L)(134.8±11.8比156.9±15.8)、AST(U/L)(326.6±20.5比448.5±53.0)及肝脏的病理分级(17.1比23.1)较ANP组有显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);ANP组肝脏组织SOD(U/mg)(127.2±11.6比267.4±33.2)活性水平较SO组有明显降低,MDA (nmol/mg)(12.6±3.1比3.9±1.7)水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),HRS组肝脏组织中SOD (U/mg)(177.4±12.5比127.2±11.6)活性较ANP组有显著升高,MDA(nmoL/mg)(9.7±2.3比12.6±3.1)含量显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).ANP组肝脏组织中p-JNK(121.40±10.70比2.60±0.45),p-p38(63.1±6.9比16.2±1.7),p-ERK(7.10±1.40比0.90±0.04)水平比较于SO组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),HRS组p-JNK(51.30±9.70比121.40±10.70)及p-p38(16.2±1.7比63.1±7.0)水平比较于ANP组有显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),但p-ERK(6.70±1.30比7.10±1.40)表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HRS可有有效的降低ANP大鼠肝脏氧化应激,从而减少ROS对JNK及p38通路的激活,从而对ANP大鼠肝脏起到保护作用.     

磷脂酶A2在重症胰腺炎肾上腺损伤中的作用

目的 观察ⅡA型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-Ⅱ A)在重症胰腺炎肾上腺损伤的作用.方法 将90只雄性Wistar大鼠分为假手术组、模型组和sPLA2抑制剂预处理组,分别设立0、3、6、12、24 h时间点,各时间点6只.sPLA2抑制剂预处理组,重症胰腺炎造模前30min由股静脉给予sPLA2抑制剂.观察肾上腺病理及血清皮质酮变化,检测肾上腺sPLA-Ⅱ A蛋白表达和sPLA2活性.结果 重症胰腺炎造模后肾上腺损伤进行性加重,肾上腺sPLA2活性显著增加(P<0.05),至6 h达峰值(P<0.05).与模型组比较,sPLA2抑制剂预处理缓解了肾上腺损伤,增加了24 h血清皮质酮值(P<0.05),并降低了肾上腺sPLA2-Ⅱ A表达及sPLA2活性(P<0.05).结论 sPLA2-Ⅱ A在重症胰腺炎肾上腺损伤中发挥重要作用.