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相似文献
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1.
脐血造血祖细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
采用甲基纤维素半固体体外培养法对脐带血造血祖细胞进行研究。人脐带血粒单祖细胞集落(CFU-GM),红系爆式集落(BFU-E)含量显著高于成人外周血,也高于骨髓(CFU-GM,P<0.05;BFU-E,P<0.01)。脐血造血祖细胞的出现晚于骨髓,但存活时间较长。在不外加促红细胞生成素时,脐血中有少量BFU-E生成。将两份不同胎儿的脐血细胞混合后培养并与单个胎儿脐血细胞培养相比较,两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。采用单克隆抗体技术检测脐血中OKT_3,OKT_4,OKT_8阳性率,与成人相比,OKT_3 ̄+降低,而OKT_4 ̄+,OKT_8 ̄+和OKT_4 ̄+/OKT_8 ̄+与成人相似。  相似文献   

2.
人脐血造血干,祖细胞体外培养的实验研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用体外细胞培养的方法,检测了脐血、骨髓、外周血CFU-GM,BFU-E。结果表明脐血中CFU-GM,BFU-E数量高于成人外周血,同骨髓相比,CFU-GM数量无显著差异,BFU-E低于骨髓。同时观察到脐血中CFU-GM大集落比例明显高于骨髓;CFU-GM集落产率时间曲线较骨髓延迟3~4天;S期GM-CFC所占比例明显低于骨髓,可能提示脐血造血细胞中早期造血细胞比例高于骨髓。实验中还发现脐血红系集落生长同骨髓十分相似,二者均含CFU-E和BFUE集落,而外周血中只含BFU-E集落。我们统计了27份脐血血量及所含有核细胞数。根据骨髓移植的有核细胞数标准(2×10 ̄8/kg),一份脐血的有核细胞数很难达到此要求,但已达到目前国外小儿异体脐血移植成功病例的有核细胞数值。  相似文献   

3.
用两种单克隆抗体(单抗)标记脐血造血祖细胞表面抗原(HPCA,CD_(34))用流式细胞仪分析,并比较两种单抗标记的细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位(CFU-GM),红系爆式集落形成单位(BFU-E)和混合集落形成单位的相关性,结果表明脐血有核细胞中,抗HPCA-2-FITC阳性的细胞占1.0510.72%,Tuk3(纯抗体)阳性细胞占2.06±1.25%,差别显著(P<0.05),每μl脐血两种单抗标记的细胞分别为96.56±56.64和231.40±163.93(P<0.05),变异系数依次为58.47%和68.43%。尽管抗HPCA-2-FITC阳性细胞与阳性细胞数量呈显著正相关,但前者与CFU-GM,BFU-E,CFU-Mix以及CFUs(CFU-GM+BFU-E+CFU-Mix)均呈正相关,而后者仅与CFU-GM,CFUs呈正相关。研究结果提示在检测造血祖细胞时,用抗HPCA-2-FITC代替可降低假阳性,获得较好的细胞与CFU间的线性关系。  相似文献   

4.
脐血造血干/祖细胞集落产率的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
对31例脐血及31例正常成人骨髓细胞进行体外培养,分别检测其CFU-GM,BFU-E,巨核细胞集落形成单位(CFU-Meg),粒、红、巨噬细胞集落形成单位(CFU-GEM),粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位(CFU-GEMM)及初始造血祖细胞——粘附于基质的原始细胞集落形成单位(sCFU-Bl),对比分析其造血细胞的层次结构。发现脐血晚期祖细胞含量接近骨髓,早期祖细胞含量则高于骨髓。经推算21天时sCFU-Bl含量可达骨髓的10倍左右。提示脐血长期重建造血的能力优于骨髓,一份脐血重建成人造血理论上是可能的。  相似文献   

5.
为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干/祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较,用人胎盘无细胞悬液及IL-3,GM-CSF,IL-3+IL-6+GM-CSF+FPO作为刺激因子,并应用甲基纤维素半固体培养体 对骨髓GM-CFU,GM-GEMM和BFU-E进行了培养和比较,研究结果表明,人胎盘无细胞悬液对骨髓CFU-GM,CFU-GEMM和BFU-E体外扩增最适蛋白浓度是200-300μg/L,人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓血干/祖细胞的体外扩增效果优于单独IL-3,单独GM-CSF和IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO组。结论提示,人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子,用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干/祖细胞细胸具有有效而价廉的特点。  相似文献   

6.
目的:探讨白细胞介素6(IL-6)基因转染的骨髓基质细胞系QXMSC1IL-6对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法:将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠,建立骨髓移植(BMT)模型。小鼠的造血功能用脾结节(CFU-S)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)测定及外周血各项血液学指标来确定。结果:WXMSC1IL-6转基因骨髓基质细胞可明显增强BM  相似文献   

7.
目的:研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者的T淋巴细胞对造血祖细胞的影响。方法:将PNH患者外周血制备的植物血凝素刺激的T淋巴细胞条件培养液(PHATCM)加入造血祖细胞的培养基中,用于PNH患者和正常人骨髓的粒巨噬细胞系集落形成单位(CFUGM)和红系爆式集落形成单位(BFUE)的培养。结果:在含有初发PNH患者的PHATCM培养条件下,PNH患者和正常人骨髓CFUGM和BFUE数明显低于含有正常人PHATCM培养条件下的集落数;在含有好转和治愈的PNH患者的PHATCM培养条件下,正常人骨髓CFUGM和BFUE数增加和恢复到正常范围。结论:初发PNH患者的T淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用减弱,治愈的PNH患者的T淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用恢复正常  相似文献   

8.
目的:进一步阐明免疫紊乱在严重型再生障碍性贫血(SAA)发病中的作用。方法:对13例初诊SAA、7例抗淋巴细胞球蛋白(ALG)治疗后恢复期SAA(rSAA)患者骨髓和外周血及对照组(包括9名骨髓对照和11名外周血对照)的HLA-DR+T细胞进行检测,并对部分患者和对照组刺激的外周血去单核细胞的单个核细胞培养上清液(PHA-LYCMs)的造血活性进行检测。结果:初诊SAA患者骨髓及外周血HLA-DR+T细胞显著高于对照组(P<0.001);ALG治疗后rSAA患者骨髓和外周血HLA-DR+T细胞较初诊SAA下降,但仍高于对照组(P<0.001);SAA患者骨髓内HLA-DR+T细胞显著高于外周血(P<0.001);与对照组比较,初诊的SAA患者外周血PHA-LYCMs对正常骨髓BFU-E和CFU-GM具有显著的抑制作用(P<0.001),而ALG治疗后rSAA患者PHA-LYCMs对正常骨髓BFU-E和CFU-GM的抑制作用明显减弱。结论:HLA-DR+T细胞在SAA的发病中可能发挥重要的作用。  相似文献   

9.
为深入研究造血干细胞(HSC)的生物学功能,根据表面标志,采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的HSC亚群c-kit+Sca-1+和c-kit+Sca-1-细胞。体外集落培养表明c-kit+Sca-1+细胞对IL-3或GM-CSF单独刺激无反应,而c-kit+Sca-1-细胞则可形成大小不等的细胞集落。多种造血生长因子[IL-3+IL-6+GM-CSF+G-CSF+Epo+干细胞生长因子(SCF)]联合可诱导c-kit+Sca-1+细胞形成大的细胞集落,但在培养12天时尚无BFU-E和粒、单核、红和巨核系细胞集落(CFU-GEMM)形成;而同样条件下,c-kit+Sca-1-细胞可形成BFU-E和CFU-GEMM以及其它各类集落。体内实验表明c-kit+Sca-1+细胞在培养8天时无脾集落(CFU-S)形成,与c-kit+Sca-1-细胞显著不同(P<0.01)。相反,c-kit+Sca-1+细胞包含了骨髓造血重建活性细胞,而c-kit+Sca-1-细胞则缺乏。结果提示c-kit+Sca-1+细胞为早期的具重建长期造血功能的干细胞,而c-kit+Sca-1-细胞则为相对分化后期的造血祖细胞。  相似文献   

10.
紫外线波段B对脐血免疫活性和造血活性抑制的体外研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨紫外线波段B(UVB)对脐血淋巴细胞和造血细胞的作用差别。方法:选择0,5,10,20,50mJ/cm2等不同剂量UVB照射脐血单个核细胞(MNC),分别进行活力检测,混合淋巴细胞培养(MLC),粒-单系祖细胞集落(CFU-GM)培养和CD34+细胞比率检测。结果:脐血细胞MLC的免疫增殖反应活性、免疫激活能力及CFU-GM数均呈照射剂量依赖性下降(P<0.01),但在10mJ/cm2照射范围内脐血免疫活性下降幅度显著高于CFU-GM。在脐血MNC悬液内加入20%小牛血清后不仅使UVB的作用减弱,还加大了UVB对脐血淋巴细胞和造血细胞失活作用的差别。UVB照射前后CD34+细胞比率无明显变化。结论:小剂量UVB照射可选择性降低脐血淋巴细胞的增殖反应活性,而对造血细胞活性影响少,提示运用UVB预防脐血移植引起的移植物抗宿主病是可能的。  相似文献   

11.
本文应用造血细胞体外无血清培养技术,对脐血中的CFU-GM,CFU-GEMM,BFU-E进行培养,并与成人骨髓、外周血对照。结果显示:脐血中的CFU-GEMM为成人外周血中的5~8倍,相当于骨髓的70%左右。本文同时用白细胞介素-3(IL-3)将骨髓、外周血和脐血中的单个核细胞孵育3天后,再测定CFU-GEMM,以比较不同来源的祖细胞增殖能力,结果表明,脐血中的多向祖细胞增殖能力最强。  相似文献   

12.
采用单层琼脂法对30例足月新生儿脐带血造血祖细胞(CFU-GM)进行了培养,并比较了脐血、成人骨髓和外周血 CFU-GM 的数量和性质。结果表明:①新生儿脐血中 CFU-GM 分裂快,集落形成时间早,集落体积大,子代细胞含量多,表现为活跃的增殖状态。②足月新生几脐血 CFU-GM 和Cluster 的产率介于成人骨髓和外周血之间,但个体差异较大;13.3%的脐血样本,CFU-GM 产率高于同时培养的骨髓。此外,脐血、成人骨髓、外周血中 CFU-GM 集落类型不同,提示脐血 CFU-GM 可能是一种不同的亚型。  相似文献   

13.
In order to study the three regulator enzymes of glycolysis, hexokinase (HK). phosphofructokinase (PFK) and pyruvate kinase (PK), in relation to lymphocyte maturation, lymphocytes of different origin were investigated. Lymphocytes from bone marrow, thymus, cord blood, adult peripheral blood and mitogen-stimulated lymphocytes were investigated. The enzyme activities were determined and the isozyme patterns were studied by means of electrophoresis, kinetic measurements and immunoprecipitation.The young lymphocytes from bone marrow and the mitogen-stimulated lymphocytes could be distinguished from the other lymphocytes by a higher residual HK activity in the presence of the inhibitor glucose-1,6-diphosphate.Peripheral blood T lymphocytes differed from non-T lymphocytes in the PK isozymes distribution. All the cells contained PK type K4 and the hybrid K3M. In T cells a smaller amount of the K isozyme was seen than in non-T cells. The PK residual activity in the presence of alanine was significantly higher in peripheral blood T cells than in non-T cells.Thymocytes are characterised by a larger amount of PFK M-subunits than peripheral blood T and non-T lymphocytes. The stimulation of PFK by the positive effector glucose-1,6-diphosphate was higher in thymocytes than in the peripheral blood lymphocytes.  相似文献   

14.
目的探讨正常人骨髓、脐血及动员后外周血CD34+细胞粘附分子的表达及外周血干细胞动员的可能机制.方法采用CD34+MultiSortKit免疫磁珠分离系统,分离纯化出正常人骨髓、脐血及动员后外周血CD34+细胞,流式细胞术检测其纯度,选择与CD34+细胞相关的粘附分子CD44、CD11a、CD18、CD49d、CD54、CD58及CD62L,进行免疫荧光标记及短期液体培养后再行免疫荧光标记,流式细胞术检测.结果动员后外周血CD34+细胞粘附分子表达CD44为(92.7±2.2)%[骨髓(93.1±2.3)%]、CD11a为(56.3±6.0)%[骨髓(61.8±7.8)%]、CD18为(65.2±6.0)%[骨髓(70.6±7.5)%]、CD49d为(39.4±7.2)%[骨髓(66.9±5.1)%]、CD54为(20.9±4.1)%[骨髓(24.1±3.8)%]、CD58为(77.9±5.8)%[骨髓(81.9±5.6)%]及CD62L为(45.9±5.6)%[骨髓(63.9±4.3)%],其表达均较骨髓为低,尤以CD49d和CD62L为著.脐血CD34+细胞CD11a为(55.5±6.5)%、CD18为(66.7±7.5)%、CD44为(90.3±4.0)%、CD49d为(63.7±6.7)%、CD62L为(50.8±5.9)%,其表达亦较骨髓为低,尤以CD62L为著,但脐血CD54的表达[(29.1±4.9)%]较骨髓及动员后外周血为高,尤较动员后外周血为著.结论不同来源CD34+细胞粘附分子表达存在差异,外周血细胞动员的机制可能与粘附分子的表达下调有关.  相似文献   

15.
脐血CD34+细胞扩增和改善其移植效率的实验研究   总被引:25,自引:2,他引:25  
目的:探讨脐血CD34+细胞对造血生长因子的扩增效应及其植入成人骨髓基质的能力。方法:利用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞,在液体培养体系中对其进行体外扩增,并利用铺展贴壁实验研究其移植效率。结果:脐血CD34+CD38-细胞亚群的比例明显高于骨髓和外周血;在干细胞因子、白细胞介素(IL)-3、IL-6、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素存在的情况下,10~14天造血祖细胞可扩增近100倍,细胞总数超过500倍;但经2小时铺展贴壁后,仅有36%的脐血CD34+细胞植入经照射预处理的成人骨髓基质,若经粒-巨噬系集落刺激因子和IL-3预处理6~8小时后则有68.0%~89.6%的CD34+细胞植入基质。结论:细胞因子有可能在体外扩增脐血CD34+细胞数量,改善其移植效率,使脐血祖细胞在“质”和“量”上满足临床移植的需要。  相似文献   

16.
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)改善脐血CD34 + 细胞植入经大剂量化疗预处理的成人骨髓基质细胞 (hBMSC)的能力 (移植效率 )及其作用机制。方法 采用hBMSC体外长期培养 ,光镜和电镜及流式细胞术等技术 ,观察 5 氟尿嘧啶 (5 FU)对hBMSC的损伤及损伤后加入bFGF对hBMSC动力学的影响 ,以及bFGF改善脐血CD34 + 细胞对受损hBMSC的粘附能力。结果  5 FU作用hBMSC 3h后 ,细胞形态及DNA周期时相发生显著改变 ,电镜表现为细胞核裂解 ,伪足形态改变 ,流式细胞仪显示基质细胞G0 /G1期前出现明显的亚二倍体峰 ,G0 /G1期和G2 /M期显著低于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,而S期则明显高于正常对照组。 (P <0 0 5 )植入脐血CD34 + 细胞 2h后 ,加入bFGF的干预组与损伤组比 ,脐血CD34 + 细胞在基质细胞粘附层的比例有明显提高 ,分别为 12 %和 2 9% ,但仍未达到正常对照组的比例 (36 % )。结论  5 FU可使体外培养的hBMSC形态和DNA合成受损 ;bFGF在短期内具有对受损hBMSC的修复和明显改善人脐血CD34 + 细胞与hBMSC粘附能力的作用  相似文献   

17.
背景:为避免骨髓间充质干细胞培养过程中应用异种血清的排斥以及提高骨髓间充质干细胞培养效率,制备脐带血清体外扩增培养骨髓间充质干细胞是目前的研究热点.目的:比较脐带血清和成人自体血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性.设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2008-06在中南大学湘雅二医院细胞生物实验室完成.材料:16份骨髓标本由中南大学湘雅二医院和湖南省湘潭市中心医院提供.方法:采用Ficoll Paque细胞分离液从16例新鲜成人骨髓穿刺液中分离骨髓间充质干细胞,分别用含体积分数为10%脐带血清、成人自体血清的DMEM/F12培养基培养,取第4代细胞进行实验.流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系及脂肪诱导体系分别诱导各组骨髓间充质干细胞定向分化.通过细胞形态观察、免疫表型及免疫化学染色进行鉴定.主要观察指标:①细胞形态.②骨髓间充质干细胞计数和细胞周期.③表面标志物的鉴定.④免疫组织化学染色观察骨髓间充质干细胞诱导成骨、成脂情况.结果:①脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞在增殖数量和速度上优于成人自体血清组(P<0.05).两种血清培养条件下,只有少数细胞处于活跃的增殖期,脐带血清组S期细胞多于成人自体血清组(P<0.05).②脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞表达CD29、CD73、CD105的阳性率均在90%以上,高于成人自体血清组(P<0.05);而CD31、CD34、CD45的阳性率均在2%以下,CD31阳性率低于成人自体血清组(P<0.05).③脐带血清培养的骨髓间充质干细胞诱导为成骨细胞阳性率和脂肪细胞阳性率均高于自体血清组(P<0.05).结论:脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞的纯度和体外诱导分化能力比成人自体血清组高,更适合临床应用.  相似文献   

18.
2450 MHz微波对受照小鼠粒系造血相关指标的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的观察2450MHz微波对小鼠外周血白细胞数和骨髓粒系造血的影响。方法选用频率为2450MHz、功率密度为10mW/cm2的微波对BALB/c小鼠进行全身辐照,于辐照后不同时间活杀,分别测定脾指数、外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、细胞周期和粒细胞-巨细胞集落形成单位(GM-CFU)形成能力的变化。结果随着微波辐照时间的延长,外周血白细胞数先升高后降低;微波辐照后骨髓有核细胞数呈持续性降低,而骨髓细胞GM-CFU生成能力却增强;2450MHz10mW/cm2微波辐照可加速骨髓有核细胞从G1期进入G2期和S期。结论低功率密度的2450MHz微波短期辐照对粒系造血具有明显刺激作用,但随辐照时间的延长,有核细胞数减少。  相似文献   

19.
目的:探讨人脐带间充质干细胞(UCMSCs)与骨髓间充质干细胞(BMMSCs)在体外对造血干细胞的支持作用。方法分别从人脐带和骨髓中分离、培养间充质干细胞,通过免疫细胞化学染色等方法对其进行表型鉴定;采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞的周期分布,采用甲基纤维素法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位(CFU-Mix),比较 UCMSCs和BMMSCs对脐血单个核细胞细胞周期、CFU-Mix形成能力的影响。结果成功培养获得 UCMSCs和BMMSCs,鉴定结果符合预期;与非共培养组细胞相比,UCMSCs和 BMMSCs共培养均能促进脐血单个核细胞进入增殖周期,并增加其形成CFU-Mix的能力(P<0.05),但UCMSCs和BMMSCs共培养组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功从人脐带和骨髓组织中培养获得间充质干细胞,两种来源的间充质干细胞均能提高脐血单个核细胞的体外增殖能力及 CFU-Mix形成能力,均具有造血支持作用。  相似文献   

20.
应用流式细胞仪(FCM)对94例急性白血病(AL)骨髓单个核细胞(MNC)进行了DNA含量测定。在47例初诊/复发AL中,50%(17/34)的急性淋巴细胞白血病(ALL)及38.5%(5/13)的急性非淋巴细胞白血病(AVLL)检出DNA异倍体;47例AL完全缓解(CR)期患儿异倍体检出率为10.6%。14例非白血病患儿无异倍体检出。AL初诊病例的C_0/G_1%高于CR及对照组,S%及(S+G_2)/M%低于CR及对照组;复发病例(S+G_2)/M%高于初诊组;在AL-CR组,S%和(S+G_2)/M%均与对照组无显著性差异。20例AL的自身对照发现,11例初诊、复发时的异倍体在CR期消失。  相似文献   

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