RT／PCR检测CMLbcr／abl mRNA及α－干扰素治疗后残留病灶观察

应用逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）及双扩增ＰＣＲ方法检测了４４例慢性期、缓解期及加速（或）急变期慢性粒细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ，所有患者均为阳性。各期患者均以表达ｂ＿３ａ＿２融合方式为主。１４例患者单用α－２ｂ干扰素或合用小剂量羟基脲治疗后，１３例患者ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ仍阳性，有３例单次扩增结果阴性，提示白血病细胞负荷较低，１例孤立性骨髓外粒细胞白血肉瘤患者经治疗后复查ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ转阴。但按作者应用的剂量及疗程对大多数患者尚难彻底清除残留病灶。     

筑巢式PCR检测bcr／abl基因在慢性粒细胞白血病中的应用

her／abl基因重排是慢性技细胞白血病（但拉）最重要的分子学标志，近年来国内外学者对该基因的研究多用过转录／聚合自键反应（RT／PCR）方法，而筑巢式peR比RT／PCR更为四感，为此我们用患者外周血或骨白细胞提取IDRNA，用筑巢式PCR对侵位疾病患者做了bort。hi＄因拉日，为临床提供诊断、鉴别诊断依据，并可观且该基因与预后的关系，有很大的临床实用价值．l材料与方法1．亚病例为本院1996年7月至1997年3月病人，男性23例，女性8例，年仅在20～60y，平均41·6y，按文献标准诊断”’。漫位27例，其中慢性期23例，急变期毛例，骨田…     

RT／PCR检测CMLbcr／abl mRNA及α—干扰素治疗后残留病灶观察

应用逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）及双扩增ＰＣＲ方法检测了４４例慢性期，缓解期及加速（或）急变期慢性粒细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＡＮ，所有患者均为阳性。各期患者均以表达ｂ３ａ２融合方式为主。１４例患者单用α－２ｂ干扰素或合用小剂量羟基脲治疗后，１３例患者ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ仍阳性，有３例单次扩增结果阴性，提示白血病细胞负荷较低，１例孤立性骨髓外粒细胞白肉瘤患者治疗后复查ｂｃｒ／     

PCR技术检测骨髓增殖性疾病bcr／ablmRNA表达

慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症及原发性骨髓纤维化均为造血多能干细胞缺陷的骨髓增殖性疾病,有时可互相伴随及转化。90％以上的慢粒患者存存Ph′染色体,其分子生物学基础是22号染色体上的断裂点簇区域(bcr)基因片段与9号染色体上的abl基因异位融合所致。近年来应用RT/PCR技术检测bcr/abl mRNA,其     

筑巢式PCR检测22例慢性粒细胞白血病患者bcr/abl融合基因结果分析

目的：探讨bcl/abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CGL）的诊断、治疗和预后判断的价值。方法：对22例CGL患者作筑巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测bcr/abl融合基因。结果：22例CGL患者中21例bcr/abl融合基因阳性，阳性率为95．5％。结论：筑巢式KPCR是一种快速、敏感而准确的检测方法。     

RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ一步法检测了４２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，均显示ｂｃｒ／ａｂｌ基因阳性，其中２１例为１６８ｂｐ扩增带，１８例为９３ｂｐ扩增带，３例同时具有１６８ｂｐ和９３ｂｐ二条扩增带。ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，对ＣＭＬ的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。ＲＴ－ＰＣＲ一步法特异性好，敏感性高，简单快速，可节省试剂，值得推广应用。     

自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

目的利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法，为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病（MRD）的监测提供有效手段。方法用逆转录PCR方法（RT—PCR）扩增K562细胞的bcr／abl融合基因，A-T克隆法构建定量标准模板；设计自身淬灭荧光引物（探针），建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法（FQ—RT—PCR），并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测；然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr／abl mRNA。结果建立的FQ—RT—PCR方法可检测10copies／μl的bcr／abl重组质粒，并能从10^5个正常细胞中检出1个白血病细胞，该方法的批内、批间变异系数（CV）分别为2．1％、6．1％，线性检测范围为10^2-10^9copies／μl。25例CML患者bcr／abl融合基因mRNA表达量中位数为4．50×10^4[（0．45—89．00）×10^4]copies／μg RNA，其中11例慢性期初诊患者bcr／abl mRNA表达量中位数为5．45×10^4[（2．95—19．30）×10^4]copies／μg RNA，6例急变期患者bcr／abl mRNA表达量中位数为13．00×10^4[（4．10～89．00）×10^4]copies／μg RNA，8例慢性期治疗后复查患者bcr／abl mRNA表达量中位数为2．35×10^4[（0．45—5．12）×10^4]copies／μg RNA，CML急变期患者bcr／abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义（q=3．41，P〈0．05）。PCR产物经电泳分析，其中21例CML患者为b3a2型，4例CML患者为b2a2型；3例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中，1例有bcr／abl mRNA表达，为b2a2型。结论所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好，结果用拷贝数表示，准确可靠，利于标准统一。可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测。     

PCR检测17例急性早幼粒细胞白血病缓解后微量残留白血病

采用逆转录聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病缓解患者的残留早幼粒白血病－α维甲酸受体融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα）。缓解期在３年之内的１０例中９例阳性，１例阴性，缓解期在３年以上者７例，４例阴性，３例阳性，两组阳性率相差显著，Ｐ＜０．０５。在ＰＭＬ－ＲＡＲα表达阳性的患者中已有３例复发，１例复发趋势，５例ＰＭＬ－ＲＡＲα阴性患者已随访１１±４月均无复发迹象。对阴性患者放松治疗，对阳性患者继续治疗，４例原已停止治疗的患者结果阳性，继续治疗后目前随访１２个月（中数），尚无复发证据。     

应用荧光原位杂交技术筛选bcr基因探针及分析微小残留病

目的 定量检测慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）造血干细胞移植（ＨＳＣＴ）后ｂｃｒ基因重排。方法 应用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术,从ＣＥＰＨ酵母人工染色体（ＹＡＣ）文库的３个ｂｃｒ相关候选克隆中筛选探针,并对７例造血干细胞移植后病人进行检测,同时进行细胞遗传学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析。     

献血员中巨细胞病毒感染的PCR检测

采用快速、敏感和特异性的聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１０８名献血员进行了人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果表明，有８４例表现为ＨＣＭＶ阳性，占被检测对象的７７．８％。说明人群中ＨＣＭＶ的感染率是较高的。同时，从本文的ＨＣＭＶ的ＰＣＲ敏感性和待异性试验表明，ＰＣＲ技术可以检测样品中少到２０个拷贝的ＨＣＭＶ模板ＤＮＡ。因此，ＰＣＲ技术是可以替代或弥补目前繁琐的细胞培养技术及血清学方法而用于临床检测的。     

应用筑巢式RT—PCR检测BCR—ABL融合基因的探讨

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。     

BCR/ABL探针在骨髓增殖性疾病中的临床运用

本研究通过回顾分析荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因结果,探讨其在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)和Ph+急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的鉴别诊断及治疗后微小残留病(MRD)动态监测中的运用价值。初诊和治疗后病例分别使用BCR/ABL(ES)和BCR/ABL(DF)探针检测BCR/ABL融合基因。结果表明:初诊CMPD 49例,形态学符合CML骨髓象28例,确诊CML 23例,形态符合率23/28(82.1%),BCR/ABL阳性23/23,敏感度、特异度均为100%。确诊病例BCR/ABL阳性细胞率为81.3%±17.7%;allo-HSCT 13例,9例长期无病生存,4例复发,经供者淋巴细胞输注(DLI)、伊马替尼或allo-HSCT治疗后多次监测BCR/ABL阴性;伊马替尼治疗16例,其中11例于1年后多次监测BCR/ABL阴性,5例分别于6、7、10年后监测BCR/ABL阳性,其中1例经allo-HSCT成功,BCR/ABL转阴。结论:FISH技术是一项敏感、特异的诊断技术,针对初诊和治疗后病例分别运用两种不同的探针检测BCR/ABL融合基因,有助于准确、快速鉴别诊断CML、Ph+ALL,动态监测酪氨酸激酶抑制剂治疗和allo-HSCT后MRD。     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用

本研究探讨应用荧光原位杂交技术( FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值.对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因.结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100％),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4％ (19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100％),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用HSH法检测BCR/ ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5％及1.2％).结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义.     

急性淋巴细胞白血病bcr/abl融合基因表达及其与免疫表型的关系

采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了M-bcr/abl和m-bcr/abl两种类型融合基因在48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达,并且绝大多数病例同时进行了免疫表型和DNA倍体的流式细胞术分析。结果表明,25%(12/48)的病例M-bcr/abl或m-bcr/abl融合基因阳性,m-bcr/abl阳性率略高。分析bcr/abl阳性病例的免疫表型,发现大多数病例为B系标志阳性,但部分T系标志阳性的病例也检测出M-bcr/abl或m-bcr/abl,说明bcr/abl阳性ALL病例以B系标志阳性者居多,T系标志阳性的ALL病例也可为bcr/abl阳性。     

EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病中表达及其临床意义

目的观察驱动蛋白EG5 mRNA在正常人外周血和骨髓中的表达情况,探讨其在各期慢性粒细胞白血病（CML）中的表达及与BCR/ABL mRNA表达的相关性,评估EG5 mRNA在CML诊断和预后分析中的应用价值。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测EG5 mRNA和筑巢式逆转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR）检测BCR/ABL mR-NA,分别对8例正常人外周血及骨髓样本和62例CML患者的外周血样本进行检测。结果正常外周血标本中未检测到EG5的表达,正常骨髓标本中可见EG5的低丰度表达;EG5辅助诊断CML的敏感度和特异性分别为89.6%（26/29）和84.8%（28/33）;BCR/ABL融合基因诊断CML的敏感度和特异性分别为96.5%（28/29）和90.9%（30/33）;CML中EG5和BCR/ABL表达的差异无统计学意义,且两者之间呈高度正相关。结论EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病疾病进展中的表达情况基本一致,EG5和BCR/ABL的联合检测及动态观察,可作为CML临床辅助诊断、疗效和预后判断的指标之一。     

用套式PCR检测幽门螺杆菌

用互补于幽门螺杆菌（ＨＰ）脲酶Ｃ基因序列的两组寡核苷酸引物，建立了检测ＨＰ的套式聚合酶链反应方法，两轮ＰＣＲ扩增分别在产生６６４ｂｐ和３０１ｂｐ的特异ＤＮＡ片段，灵敏度分别可达１００ｆｇ和１ｆｇ细菌ＤＮＡ，此方法可快速，灵敏，特异地检出各种临床样品中的ＨＰ，是一种非常有用的分子流行病学研究工具。     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Ph染色体和bcr／abl融合基因表达影响

目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr／abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RTPCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr／abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3～24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30％;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70％;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60％。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr／abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性（t=3．77、5．13,P〈0．01）,随着用药时间的延长bcr／abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。     

急性髓细胞白血病M_（2b）型AML_1－ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ＿（２ｂ）患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ＿１－Ｍ＿（２ｂ）其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ＿（２ａ）２例，Ｍ＿４２例，Ｍ＿３１例，均未检出上述融合基因转录本。我们的初步结果提示ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因可以作为ＡＭＬ－Ｍ＿（２ｂ）的基因标志。